两种糖尿病大鼠模型血-视网膜屏障对EB通透性的比较

目的 探讨2种糖尿病大鼠模型血-视网膜屏障对伊凡思蓝(Evans-Blue,EB)通透性的改变.方法 对照组及1周、4周和16周时Sprague-Dawley(SD)和Brown-Norway(BN)糖尿病大鼠,EB 45 mg·lg-1颈静脉注入,分别检测视网膜中EB含量.结果 对照组及1周、4周和16周时SD和BN糖尿病大鼠视网膜标准化EB含量分别为(12.24±3.11)ng·mg-1、(21.68±4.41)ng·mg-1、(21.78±3.17)ng·mg-1、(23.56±4.05)ng·mg1和(13.22±3.59)ng·mg-1、(23.41±4.47)ng·mg1、(26.40±5.00)ng·mg-1、(31.01±4.46)ng·mg-1,糖尿病大鼠视网膜标准化EB含量明显高于对照组,其差异均有显著性(P＜0.05).2种不同种系大鼠相比,BN糖尿病大鼠1周、4周和16周时视网膜标准化EB含量均显著高于SD大鼠(P＜0.05),而对照组差异无显著性(P＞0.05).结论 通过检测视网膜内EB含量,可以比较精确的发现早期糖尿病大鼠视网膜病变中血-视网膜通透性的改变.不同大鼠种系的差异性决定了其对STZ诱导的糖尿病大鼠视网膜通透性改变的不同.     

糖尿病大鼠视网膜氧化应激损伤及葛根素的干预作用

目的研究糖尿病大鼠视网膜氧化应激指标的变化及葛根素对其的干预作用。方法 40只清结级雄性SD大鼠,其中构建糖尿病大鼠模型30只,随机分为糖尿病模型组、葛根素低剂量组和葛根素高剂量组,每组10只;另设一正常对照组(10只鼠)。造模成功后,葛根素低剂量组与葛根素高剂量组分别给予葛根素250mg·kg-1·d-1和500mg·kg-1·d-1,正常对照组与糖尿病模型组每日给予3mL灭菌生理盐水。均经食道灌胃给药,每日1次,连续4周。4周后测定各组鼠血清及视网膜中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(maleic dialdehyde,MDA)、总抗氧化能力(total antioxidant capability,T-AOC)的变化,免疫组织化学法检测视网膜组织8-羟-2’-脱氧鸟苷(8-hydroxy-2’-deoxyguanosine,8-OHdG)和聚腺苷二磷酸核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]活性,Western blot法检测p38MAPK蛋白表达。结果造模后4周,与正常对照组相比,糖尿病模型组大鼠血清与视网膜组织中SOD活性明显下降,分别为(83.20±5.51)U·mL-1、(122.96±10.98)U·mg-1;MDA含量显著增高,分别为(29.58±0.41)μmol·L-1、(8.87±0.49)μmol·g-1;视网膜中T-AOC含量明显下降,为(1.72±0.31)U·mg-1(均为P<0.05)。gn糖尿病模型组相比,葛根素低剂量组血清SOD活性升高,为(97.80±1.75)U·mL-1(P<0.05),但其他指标变化不大(均为P>0.05)。与糖尿病模型组相比,葛根素高剂量组血清与视网膜组织中SOD活性升高,分别为(114.17±4.02)U·mL-1、(146.48±8.04)U·mg-1;视网膜TAOC含量升高,为(2.12±0.37)U·mg-1;血清和视网膜MDA含量降低,分别为(20.73±1.51)μmol·L-1、(5.73±0.76)μmol·g-1(均为P<0.05)。正常对照组大鼠视网膜中8-OHdG、PARP阳性细胞极少,糖尿病模型组表达较正常对照组明显增加,葛根素干预后表达明显减弱,葛根素高剂量组作用更显著。Western blot结果显示:各组大鼠视网膜中总p38MAPK表达无明显差异(P>0.05),但糖尿病模型组视网膜p38MAPK的磷酸化程度较正常对照组显著增强,高剂量葛根素干预后p38MAPK的磷酸化程度明显下降(P<0.05)。结论糖尿病大鼠存在视网膜的氧化应激损伤,葛根素可减轻该损伤作用,其机制可能与p38MAPK信号途径有关。     

糖尿病视网膜病变大鼠视网膜动脉平滑肌细胞中钙离子浓度的变化

目的 探讨糖尿病视网膜病变SD大鼠视网膜动脉平滑肌细胞中钙离子浓度的变化。方法 取40只正常雄性SD大鼠,采用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)100 mg·kg-1腹腔内注射建立糖尿病大鼠模型,持续6个月后经眼底荧光血管造影证实各大鼠出现糖尿病视网膜病变,作为糖尿病视网膜病变组。同时选择正常SD大鼠40只及单纯形成糖尿病的大鼠40只分别用作正常对照组及单纯糖尿病组。酶消化法分离出视网膜动脉平滑肌细胞,荧光测定仪测定三组大鼠视网膜动脉平滑肌细胞内钙离子浓度,SPSS17.0软件进行分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果 造模8周后,测得正常对照组和单纯糖尿病组大鼠血糖水平分别为(6.77±0.18)mmol·L-1和(31.14±0.75)mmol·L-1,符合成模条件,6个月后糖尿病视网膜病变组大鼠眼底荧光血管造影确定为糖尿病视网膜病变SD大鼠模型。糖尿病视网膜病变大鼠视网膜动脉平滑肌细胞内钙离子浓度(255±10)nmol·L-1较正常对照组(123±11)nmol·L-1和单纯糖尿病组(152±23)nmol·L-1明显增高,三组之间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 糖尿病视网膜病变视网膜动脉平滑肌细胞内钙离子浓度升高可能成为糖尿病视网膜动脉异常收缩及功能异常的重要原因。     

糖尿病大鼠早期玻璃体中IRBP含量的变化

目的观察糖尿病大鼠早期玻璃体中感光细胞间维生素A类结合蛋白(interphotoreceptor retinoid-binding protein,IRBP)含量的变化。方法 SD雄性大鼠40只,分为正常对照组和糖尿病组,每组20只,糖尿病模型通过链脲佐菌素(streptozocin,STZ)60mg.kg-1左下腹腔一次性注射诱导,模型成功后饲养4周,正常对照组和糖尿病组分别随机选取10只(20眼)处死摘除眼球,取玻璃体ELISA法检测IRBP的含量,选取5只(10眼)做石蜡切片观察视网膜大体结构,另5只(10眼)做电镜标本观察超微结构。结果正常对照组玻璃体中IRBP含量为(122.16±7.88)pg.L-1,糖尿病组为(90.53±7.60)pg.L-1,2组间差异有统计学意义(t=12.92,P<0.05)。光镜下2组视网膜结构无明显变化,电镜下观察发现糖尿病组部分视细胞外节膜盘模糊不清,结构紊乱,间隙略有扩大。结论糖尿病大鼠玻璃体中IRBP含量降低,可能影响其在视觉周期中发挥作用,从而可能在糖尿病视网膜病变的发生发展中起一定的作用。     

辛伐他汀对糖尿病大鼠视网膜β-连环蛋白的影响

目的 探讨链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的糖尿病(diabetes mellims,DM)视网膜β-连环蛋白(β-catenin)的表达,观察辛伐他汀(simvastatin,Sim)对β-catenin表达的影响,探索他汀类药物可能的非调脂性治疗作用.方法 SD大鼠72只,随机分为正常对照组、Sim治疗组(Sim组)、DM生理盐水组(DM组).腹腔注射STZ建立DM模型,成模后Sim组予以Sim灌胃(20 mg·kg-1·d-1),DM组等量生理盐水灌胃,2周、5周、8周处死动物.用伊凡思蓝方法 检测视网膜血管渗透性;用免疫组织化学染色和Western blotting检测各组大鼠视网膜β-catenin的表达情况.结果造模后2周、5周和8周大鼠视网膜血管渗透性增加,DM组伊凡思蓝含量分别为(21.68±3.70)μg·g-1、(25.34±4.40)μg·g-1、(29.78±4.30)μg·g-1,Sim能够改变这种变化,Sim组伊凡思蓝含量分别为(16.45±5.20)μg·g-1、(19.28±4.10)μg·g-1、(23.23±4.60)μg·g-1.免疫组织化学分析证实视网膜β-catenin主要表达在视网膜外界膜、外核层、外网状层、内网状层、内界膜.Western blotting分析证明随着糖尿病视网膜病变的发生发展,STZ诱导的DM大鼠视网膜β-catenin表达量显著增加,DM组与正常对照组和Sim组差异均有统计学意义(P<0.05).结论 STZ诱导的DM大鼠β-catenin表达量增加,Sim可显著抑制这种改变,改善DM大鼠视网膜微循环.     

VEGF诱导的大鼠视网膜白细胞聚集与血-视网膜通透性改变的相关性研究

目的 探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)诱导的大鼠视网膜白细胞聚集及其与血-视网膜通透性改变的关系.方法 12只Brown-Norway大鼠分为对照组及VEGF注射组,吖啶橙(5 mg·kg-1)和伊凡思蓝(45 mg·kg-1)经颈静脉注入,分别检测视网膜中白细胞密度和伊凡思蓝含量.结果 VEGF注射24 h后,对照组和VEGF注射组大鼠视网膜白细胞密度分别为(1.90±0.03)×10-6 μm-2和(9.10±0.08)×10-6 μm-2;视网膜标准化伊凡思蓝含量分别为(14.78±3.27)ng·mg-1和(51.72±6.77)ng·mg-1,VEGF注射组与对照组比较差异均有显著统计学意义(P＜0.01).结论 VEGF注射后视网膜白细胞聚集和血管通透性显著增加,可以通过吖啶橙造影和伊凡思蓝定量检测.     

叔丁基对苯二酚对2型糖尿病大鼠视网膜细胞的保护作用及其机制

背景 细胞凋亡是糖尿病视网膜病变(DR)中的重要机制之一,氧化应激、高糖等可启动细胞凋亡通路,从而造成细胞损伤.叔丁基对苯二酚(tBHQ)是一种抗氧化应激药物,但其在DR的发生和发展过程中是否发挥视网膜细胞的保护作用尚不明确. 目的 观察tBHQ对2型糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长因子(VEGF)及Bcl-2表达的影响,探讨tBHQ通过核因子-E2相关因子2/抗氧化反应元件(Nrf2/ARE)信号通路对2型糖尿病大鼠视网膜可能的保护机制.方法 选取50只清洁级健康雄性SD大鼠.应用随机数字表法随机选取其中10只大鼠为正常对照组,以正常饲料喂养;其余40只大鼠采用高脂高糖饲料喂养4周后空腹12h,然后大鼠腹腔内注射链脲佐菌素(STZ)诱导2型糖尿病模型.造模成功大鼠均衡分组,模型对照组大鼠继续给予高脂高糖饮食,tBHQ干预组大鼠于造模后1周在高脂高糖饲料中添加质量分数1％ tBHQ进行干预,各组大鼠分别于造模后4周和12周收集大鼠心脏全血,检测各组大鼠空腹血糖(FPG),血浆总胆固醇(TC)、总三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量;采用放射免疫分析法检测各组大鼠空腹血清胰岛素(FINs)含量.采用免疫组织化学法检测各组大鼠视网膜中VEGF、bcl-2蛋白的表达分布;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法定量检测各组大鼠视网膜中Bcl-2 mRNA和VEGF mRNA的相对表达量. 结果 35只大鼠成功建立2型糖尿病模型.各组大鼠造模后不同时间点FINs含量总体比较差异均有统计学意义(F分组=22.480,P=0.000;F时间=7.636,P=0.008).各组间大鼠血浆FPG、TC、TG和LDL-C含量总体比较差异均有统计学意义(FPG:F分组=78.531,P=0.000;TC:F分组=28.049,P=0.000;TG:F分组=13.108,P=0.000;LDL-C:F分组=6.804,P＜0.05).免疫组织化学检测显示,Bcl-2和VEGF蛋白主要表达于视网膜各层的血管、视网膜神经节细胞(RGCs)层、内核层和外核层.各组间大鼠视网膜中VEGF和bcl-2蛋白的相对表达量总体比较差异均有统计学意义(VEGF:F分组=11.805,P=0.000;bcl-2:F分组=22.943,P=0.000);tBHQ干预组大鼠造模后12周视网膜中bcl-2蛋白的相对表达量明显高于造模后4周,差异有统计学意义(P＜0.05).各组大鼠造模后不同时间点视网膜中VEGF和Bcl-2 mRNA相对表达量总体比较差异均有统计学意义(VEGF:F分组=79.220,P=0.000;F时间=6.090,P＜0.05;Bcl-2:F分组=105.000,P=0.000;F时间=13.170,P=0.001).其中造模后4周和12周模型对照组和tBHQ干预组大鼠视网膜中VEGF和Bcl-2 mRNA相对表达量明显高于正常对照组,tBHQ干预组大鼠视网膜中Bcl-2 mRNA相对表达量明显高于模型对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05);tBHQ干预组大鼠造模后12周视网膜中VEGF和Bcl-2 mRNA相对表达量明显高于造模后4周,差异均统计学意义(均P＜0.05). 结论 tBHQ可通过下调视网膜中VEGF的表达和上调bcl-2的表达对DR发挥抗氧化损伤和抗凋亡作用.此外,tBHQ对糖尿病大鼠可能有降血糖、调节胰岛素、降血脂的作用.     

2型糖尿病患者房水中VEGF、IL-6、Leptin水平测定的临床意义

目的 检测2型糖尿病患者眼房水中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和瘦素(Leptin)的含量,并探讨其临床意义.方法 对70例70眼2型糖尿病患者房水中VEGF和IL-6的含量采用双抗体夹心ELISA法检测,Leptin含量采用放射免疫法检测.根据散瞳眼底检查和眼底荧光素血管造影检查,将实验组分为无糖尿病性视网膜病变组22例22眼、单纯型糖尿病性视网膜病变组28例28眼、增生型糖尿病性视网膜病变组20例20眼,对照组为健康的老年性白内障患者20例20眼.结果 3组实验组房水VEGF的含量分别为(250.32±26.77) ng·L-1、(300.11±58.89) ng·L-1、(496.23±91.06) ng·L-1,IL-6含量分别为(162.81±33.92) ng·L-1、(256.76±64.15) ng·L-1、(391.27±90.46) ng·L-1,Leptin含量分别为(69.80±21.37) ng·L-1、(155.08±32.76) ng·L-1、(230.27±56.92) ng·L-1,对照组房水VEGF含量为(144.69±26.55) ng·L-1、IL-6含量为(86.71±22.69) ng·L-1,Leptin含量为(43.62±20.02) ng·L-1,对照组与实验组比较差异均有统计学意义(F=118.62,P＜0.01;F=110.53,P＜0.01;F=101.22,P＜0.01).对照组、无糖尿病性视网膜病变组、单纯型糖尿病性视网膜病变组与增生型糖尿病性视网膜病变组房水VEGF、IL-6、Leptin含量有依次增加的趋势.房水中VEGF与IL-6、Leptin含量有相关性(r=0.995,P=0.000;r=0.776,P=0.000);房水中VEGF、IL-6、Leptin含量与糖尿病患者的病程及糖尿病视网膜病变的严重程度有相关性(r=0.722,P=0.000;r=0.716,P=0.000)、(r=0.869,P=0.000;r=0.865,P=0.000)、(r=0.776,P=0.000;r=0.765,P=0.000).结论 VEGF、IL-6、Leptin在糖尿病视网膜病变的形成过程中有重要作用,且VEGF与IL-6、VEGF与Leptin之间有相关性.     

玻璃体内注射Infliximab治疗大鼠葡萄膜炎的实验研究

目的 观察玻璃体内注射Infliximab治疗大鼠葡萄膜炎的效果.方法 Wistar大鼠60只,随机分为A、B、C3组,每组20只.A、B两组大鼠左眼玻璃体内注射牛血清蛋白诱导建立葡萄膜炎模型,C组不造模.造模成功后A组大鼠玻璃体内注射10 g·L-1 Infliximab 0.1 mL,B、C组注射生理盐水0.1mL.于造模前及造模成功后7d、14 d、21 d行大鼠活体眼部检查,并抽取房水,ELISA法检测房水中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)的含量,同时摘取眼球行组织病理学观察.结果 造模前,各组大鼠房水中TNF-α和IL-2含量差异均无统计学意义(均为P＞0.05);造模后7d,A组和B组大鼠房水中TNF-α和IL-2含量差异均无统计学意义(均为P＞0.05),但均较C组高(均为P＜0.05).造模后14d、21 d,A组大鼠房水中TNF-α含量为(331.49±74.40)ng·L-1、(164.59±69.49) ng·L-1,B组为(589.15±113.45) ng·L-1、(347.48±84.38)ng·L-1,两组相比差异均有显著统计学意义(均为P＜0.01);A组大鼠房水中IL-2含量为(35.74±14.87)ng·L-1、(31.58±16.94)ng· L-1,B组分别为(74.16±18.04)ng·L-1、(69.48±20.73)ng· L-1,两组相比差异亦均有统计学意义(均为P＜0.01).造模后21 d,A组炎症反应较B组明显减轻.结论 Infliximab能显著抑制葡萄膜炎大鼠模型房水中TNF-α、IL-2的产生,减轻大鼠眼部炎症反应和病理损害,对葡萄膜炎有较明显治疗效果.     

血管生成素-1对糖尿病大鼠视网膜微血管病变、基质金属蛋白酶和血管内皮生长因子的抑制作用

目的 观察血管生成素-1(angiogenin-1,Ang-1)对糖尿病大鼠视网膜微血管痛变和基质金属蛋白酶( matrix metalloproteinases,MMP)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的抑制作用.方法 通过尾静脉注射链脲佐茵素( streptozotocin,STZ)建立糖尿病大鼠模型.随机分配治疗组大鼠20只,每15 d每眼球后注射Ang-1溶液0.05mL 1次(4ng·L-1),糖尿病阳性对照组20只不给予任何处理.2组与正常对照组(20只)分别饲养3个月、6个月时,采用眼底荧光素血管造影(fundus fluorescoin angiography,FFA)观察视网膜血管改变;免疫组化法定量检测各组大鼠视网膜VEGF的表达;蛋白印迹法定量检测MMP的表达量.结果 FFA观察结果:3个月时糖尿病阳性对照组大鼠视网膜毛细血管扭曲、不规则,Ang-1治疗组可见明显的改善;6个月时,糖尿病阳性对照组可见视网膜微动脉瘤,Ang-1治疗组与糖尿病阳性对照组相比微动脉瘤减少.免疫组化检测结果显示,3个月、6个月时正常对照组仅见微弱的VEGF表达,灰度值分别为92.968 7±2.0400和81.0311±2.7700,糖尿病阳性对照组表达明显上调,灰度值分别为120.0008 ±2.9011和124.790 5±1.9615,与正常对照组比较差异均具有显著统计学意义(P＜0.05、P＜0.01);Ang-1治疗组3个月、6个月时VEGF表达灰度值分别为116.154 8±1.343 1和92.850 9±2.323 4,与糖尿病阳性对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).蛋白印迹法定量检测结果显示,正常对照组MMP蛋白无表达,3个月时Ang-1治疗组表达量高于糖尿病阳性对照组(P＜0.05),6个月时糖尿病阳性对照组与Ang-1治疗组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Ang-1能有效改善糖尿病大鼠视网膜的微血管病变,并抑制视网膜内VEGF、MMP的表达.     

恒河猴血管内皮细胞移植替代角膜内皮细胞后房水血管内皮生长因子水平的变化

目的探索恒河猴血管内皮细胞移植替代角膜内皮细胞后房水血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)浓度的变化。方法实验组将体外培养增殖的恒河猴视网膜-脉络膜血管内皮细胞通过离心沉淀法移植到撕除后弹力层的恒河猴角膜内表面;对照组撕除角膜内皮层后,不做任何处理,直接原位缝合角膜植片。分别于术前及术后1周、2周、3周、4周、6周、8周、12周抽取房水,通过ELISA方法检测其中VEGF浓度,并进行统计分析。结果实验组和对照组术后1周时VEGF浓度差异无统计学意义(P>0.05),术后2周、3周、4周时实验组VEGF浓度分别为(374.74±3.30)ng·L-1、(419.06±1.39)ng·L-1、(481.83±3.36)ng·L-1,同时间点对照组分别为(271.11±1.12)ng·L-1、(345.18±3.27)ng·L-1、(380.33±5.03)ng·L-1,差异均具有统计学意义(均为P<0.05),相应时间点实验组显著高于对照组。实验组术后1周、2周、3周、4周VEGF浓度的差异均有统计学意义(均为P<0.05),各时间点与术前(128.75±3.83)ng·L-1差异均有统计学意义(均为P<0.05)。对照组术后各时间点VEGF浓度与术前差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论血管内皮细胞移植到角膜内表面后,房水VEGF浓度在术后4周内持续升高,之后稳定在一较高水平。     

外源性H2S对糖尿病大鼠晶状体透明度的影响及其作用机制

目的　探讨外源性H₂S对糖尿病大鼠晶状体透明度的影响及其作用机制。方法　取SPF级健康雄性SD大鼠15只作为实验对象。通过腹腔注射链脲佐菌素制作糖尿病大鼠模型;按随机数字表法将大鼠随机分为3组,对照组（正常大鼠）、模型组（糖尿病模型大鼠）、治疗组（糖尿病模型大鼠+NaHS处理）,每组5只。造模后,治疗组大鼠每天上午腹腔注射NaHS（5 mg·kg^-1）1次,对照组和模型组给予相同体积生理盐水,连续给药12周。12周后,在田字格十字交叉处观察各组大鼠晶状体的透明度,ELISA检测各组大鼠晶状体TNF-α、AGEs的含量。结果　给药12周后,对照组大鼠晶状体透明度良好,能够清晰看到十字交叉。模型组晶状体明显混浊,看不到十字交叉。治疗组晶状体与对照组相比,出现轻微的混浊,但与模型组相比,晶状体相对透明。对照组、模型组、治疗组大鼠晶状体组织中TNF-α浓度分别为（174.91±28.44）ng·L^-1、（283.75±44.46）ng·L^-1、（200.14±22.15）ng·L^-1,AGEs浓度分别为（302.21±49.15）ng·L^-1、（470.71±56.40）ng·L^-1、（369.90±67.86）ng·L^-1。模型组TNF-α和AGEs浓度均高于对照组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;治疗组TNF-α和AGEs浓度均低于模型组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　外源性H₂S能抑制TNF-α、AGEs的表达,从而提高糖尿病大鼠晶状体透明度。     

白藜芦醇对大鼠糖尿病性白内障抗氧化损伤的保护作用

目的探讨白藜芦醇对糖尿病性白内障大鼠抗氧化损伤的保护作用。方法 90只SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组和白藜芦醇治疗组,每组各30只。模型组及白藜芦醇治疗组采用链脲佐菌素诱发糖尿病,白藜芦醇治疗组按400mg.kg-1体质量给予白藜芦醇灌胃,灌注后4周、8周、12周观察3组大鼠晶状体混浊度的变化情况;同时检测晶状体内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathi-one peroxidase,GSH-PX)及过氧化氢酶(catalase,CAT)的变化;采用RT-PCR检测晶状体中铜锌超氧化物歧化酶(Cu-Zn superoxide dismutase,CuZnSOD)mRNA表达水平。结果正常对照组大鼠晶状体始终透明。灌注后12周白藜芦醇治疗组晶状体混浊度高于正常对照组(χ2=8.26,P<0.05),但与糖尿病模型组相比明显减轻(χ2=14.72,P<0.05)。糖尿病模型组大鼠晶状体中SOD、GSH-PX以及CAT活性分别为:(10.39±1.25)U·mg-1、(24.36±1.05)U·mg-1、(1.62±0.24)U·mg-1,明显低于正常对照组的(40.16±1.87)U·mg-1、(67.86±1.24)U·mg-1、(5.57±1.54)U·mg-1。与糖尿病模型组相比,白藜芦醇能增强SOD、GSH-PX和CAT活性,分别为(29.06±1.33)U·mg-1、(47.58±2.35)U·mg-1、(3.26±0.47)U·mg-1。此外,白藜芦醇还能上调糖尿病大鼠晶状体内CuZnSODmRNA的表达(P<0.05)。结论白藜芦醇能增加晶状体抗氧化酶活力,能从多个环节发挥对糖尿病白内障的抗氧化作用,从而延缓白内障的发生和发展。     

CDK抑制剂对糖尿病大鼠视网膜Müller细胞胶质增殖及新生血管形成的抑制作用

目的　探讨CDK抑制剂对糖尿病大鼠视网膜Müller细胞胶质增殖及新生血管形成的影响。方法　雄性SD大鼠30只，随机分成对照组、糖尿病组、治疗组(CDK抑制剂SCH727965)，每组各10只。后两组大鼠采用单次腹腔注射55 mg·kg^-1链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)的方法诱导糖尿病模型。模型诱导成功后，治疗组玻璃体内注射SCH727965 8 μL(3 nmol·L^-1)。12周后，免疫荧光检测三组大鼠视网膜胶质纤维酸性蛋白质(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达，免疫组织化学检测视网膜色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)表达，Western blot检测GFAP、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、PEDF蛋白相对表达量。结果　与对照组GFAP (100.00±0.00)%、VEGF(100.00±0.00)%、PEDF(38.26±0.52)%、PCNA(9.34±0.47)%表达相比，糖尿病组GFAP(168.24±2.72)%、VEGF(156.79±1.75)%、PCNA(16.11±0.34)%表达均明显增加，PEDF(23.72±0.71)%表达明显降低(均为P<0.01)；而与糖尿病组相比，治疗组GFAP(124.37±3.01)%、VEGF(118.36±1.98)%、PCNA(12.05±0.67)%表达均明显降低，PEDF(8.22±0.36)%表达明显增加(均为P<0.05)。结论　SCH727965可下调大鼠糖尿病状态下视网膜GFAP、VEGF、PCNA表达，上调PEDF表达，进而抑制Müller细胞增殖及新生血管形成。     

虾青素对1型糖尿病大鼠代谢性白内障的预防作用及其机制

背景 糖尿病性白内障的发病机制尚未完全明了,研究认为多种代谢通路参与其发病,其中包括氧化应激机制.研究表明虾青素有强大的抗氧化作用,可有效抑制氧化应激损伤及脂质过氧化,但目前鲜见虾青素对糖尿病性白内障防治作用研究的相关报道. 目的 观察虾青素对1型糖尿病大鼠代谢性白内障的预防作用及其机制.方法 将38只SPF级6周龄雄性SD大鼠纳入研究,其中30只大鼠用一次性腹腔内注射质量分数1％链脲佐菌素(STZ)方法制备糖尿病大鼠模型,连续3d血糖值＞16.7 mol/L者为造模成功,应用随机数字表法将造模成功的24只大鼠随机分为糖尿病模型组、低剂量虾青素组和高剂量虾青素组,正常对照组8只大鼠同法注射等容量生理盐水.低剂量虾青素组和高剂量虾青素组大鼠分别给予50mg/(kg·d)和100 mg/(kg·d)虾青素以及橄榄油和饲料混合物连续喂养3个月,糖尿病模型组大鼠以等容量橄榄油混合饲料喂养,正常对照组以正常饲料喂养.造模后用裂隙灯显微镜行眼前节照相并对晶状体混浊的严重程度分为1～5级;收集大鼠双侧眼球制备晶状体切片,采用苏木精-伊红染色法观察大鼠晶状体的组织病理学改变;采用免疫组织化学法观察晶状体中糖基化终末产物(AGEs)的阳性表达并进行定量分析;采用ELISA双抗体夹心法测定各组大鼠晶状体内AGEs质量浓度、丙二醛(MDA)浓度、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)水平以及谷胱甘肽(GSH)质量浓度.结果 造模后2、4、6、8、10和12周糖尿病模型组、低剂量虾青素组和高剂量虾青素组大鼠血糖水平均明显高于正常对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05),而糖尿病模型组、低剂量虾青素组和高剂量虾青素组间大鼠血糖水平的差异均无统计学意义(均P＞0.05).正常对照组大鼠晶状体透明,为1级,糖尿病模型组晶状体混浊均为5级,不同剂量虾青素组大鼠晶状体混浊度多为3～4级.低剂量虾青素组和高剂量虾青素组大鼠晶状体匀浆内的AGEs质量浓度分别为(7.23±0.50) μg/ml和(7.01±0.37) μg/ml,MDA浓度分别为(1.43±0.22) mmol/L和(1.35±0.16)mmol/L,均低于糖尿病模型组的(7.61±0.45) μg/ml和(1.62±0.42) mmol/L,差异均有统计学意义(均P＜0.05).低剂量虾青素组和高剂量虾青素组大鼠晶状体中GSH质量浓度分别为(272.70±12.53) ng/L和(283.52±16.17) ng/L,SOD含量分别为(55.45±6.47)μmol/(min·L)和(56.73 ±5.12) μmol/(min·L),CAT含量分别为(2.91±0.41) μmol/(min· L)和(3.02±0.13) μmol/(min·L),均明显高于糖尿病模型组的(241.52±15.13) ng/L、(51.67±5.45) μmol/(min·L)和(2.72±0.27)μmol/(min·L),差异均有统计学意义(均P＜0.05),低剂量虾青素组大鼠晶状体中GSH质量浓度和SOD含量明显低于高剂量虾青素组,差异均有统计学意义(均P＜0.05). 结论 虾青素能够延缓1型糖尿病大鼠代谢性白内障的发生和发展,其作用机制与其抗氧化应激反应有关.     

褪黑素对糖尿病大鼠早期视网膜神经细胞凋亡的影响

目的研究褪黑素对糖尿病大鼠早期视网膜神经细胞凋亡的影响。方法将54只健康雄性8周龄SD大鼠,随机分为正常对照组、糖尿病组及褪黑素组各18只,各组再按4周、8周、12周3个时间点随机分为3小组,每组各6只大鼠。正常对照组不进行干预;糖尿病组大鼠给予一次性腹腔注射链脲佐菌素60mg·kg-1,以诱导糖尿病大鼠模型;褪黑素组在成功建立糖尿病大鼠模型后给予褪黑素(10mg·kg-1·d-1)灌胃进行干预。每只大鼠取左眼眼球,制作石蜡组织病理学切片,应用TUNEL法检测视网膜神经细胞凋亡情况。结果正常对照组4周、8周、12周均未见视网膜神经细胞凋亡。糖尿病组4周可见视网膜神经细胞凋亡,糖尿病组8周和12周视网膜神经节细胞凋亡指数较同期正常对照组大鼠均明显升高,糖尿病组4周、8周、12周凋亡指数分别为(0.48±0.53)%、(5.66±2.10)%和(11.83±1.58)%,8周及12周与同期正常对照组相比差异有统计学意义(均为P=0.000)。褪黑素4周组与同期糖尿病组神经细胞凋亡情况无明显差异,褪黑素组8周及12周较同期糖尿病组神经细胞凋亡情况有不同程度的减轻,视网膜神经节细胞凋亡指数有所下降,褪黑素组4周、8周、12周凋亡指数分别为(0.30±0.74)%、(1.67±0.54)%和(7.73±0.95)%,褪黑素组8周及12周时与同期糖尿病组相比差异有统计学意义(均为P=0.000)。结论褪黑素能够通过减轻糖尿病大鼠早期视网膜神经细胞的凋亡,达到神经保护的目的。     

慢病毒介导sFlt-1基因转移抑制视网膜新生血管的实验研究

目的研究可溶性fms样酪氨酸激酶-1（sFlt-1）对小鼠视网膜新生血管的抑制作用。方法将54只C57/6J小鼠随机分为3组,每组18只。将其中2组小鼠于生后第7天开始置于体积分数75%氧环境中,5d后返回正常空气环境中以建立氧诱导的小鼠视网膜新生血管模型,于17d时玻璃体腔内分别注射1μLlenti-GFP和携带sFlt-1基因片段的重组慢病毒,设为模型对照组和lenti.sFlt-1组,18只正常空气环境中生长的小鼠玻璃体腔内注射1μL磷酸盐缓冲液,设为正常对照组。通过小鼠眼球连续切片苏木精-伊红染色和心脏荧光素灌注视网膜铺片法观察小鼠视网膜新生血管的变化情况,采用免疫组织化学染色法检测视网膜血管内皮生长因子（VEGF）和VEGF受体-2（KDR/Flk-1）的表达变化。结果经RT-PCR扩增的靶基因片段序列与GenBank中的标准序列相吻合。感染后的人RPE细胞能够表达sFlt-1蛋白。正常对照组小鼠视网膜内界膜平整,模型对照组小鼠突破内界膜血管内皮细胞核的数目为（47.26±6.76）,而lenti.sFlt-1组为（5.21±1.93）个,差异有统计学意义（P〈0.05）。视网膜铺片可见新生血管荧光素渗漏表现。慢病毒携带的sFlt-1基因片段转移至模型小鼠视网膜后,发现突入玻璃体腔的血管内皮细胞核数较模型对照组显著减少,并且视网膜毛细血管扩张、微血管瘤样改变、新生血管等荧光素渗漏表现亦明显减少;同时lenti.sFlt-1组VEGF的表达与模型对照组相比在视网膜神经节细胞层和内核层仍呈现强阳性染色,无明显变化,而KDR/Flk-1的阳性染色显著减少。结论慢病毒介导sFlt-1基因转移能显著抑制小鼠视网膜新生血管的发生。     

当归补血汤对2型糖尿病大鼠玻璃体和血清中血管内皮生长因子表达的影响

背景糖尿病视网膜病变（DR）主要的病理改变是新生血管生成，血管内皮生长因子（VEGF）是诱导新生血管生成的重要因子，因此是评价糖尿病（DM）血管性疾病并发症的重要指标。目的研究当归补血汤（ASD）对链脲佐菌素（STZ）诱导的DM大鼠玻璃体和血清中VEGF表达的影响，探讨其在DR治疗中的作用机制。方法雄性SPF级sD大鼠34只以高脂饮食喂养8周，然后腹腔注射小剂量（25mg／kg）STZ建立2型DM大鼠模型，将血糖〉13．9mmol／L者纳入实验并用计算机数字随机生成法随机分组。11只DM动物作为模型组，ASD治疗组10只、格列奇特治疗组（Gli组）10只，于造模第4天开始分别以3．6g／kgASD、10mg／kgGli（5m1）和饮用水灌胃至实验结束。另取10只正常匹配动物饲以正常饲料作为正常对照组，以等量饮用水灌胃，分别于灌胃后第4、第8周收集各组动物腹主动脉血检测血糖、血甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL），灌胃后第8周采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定大鼠血清和玻璃体中VEGF的质量浓度。结果灌胃治疗后第4周、第8周，ASD组血糖和TG明显低于DM组，差异有统计学意义（P〈0．05）；HDL高于DM组，差异有统计学意义（P〈0．05）；灌胃后第8周，正常对照组、ASD组、Gli组间血清、玻璃体中VEGF质量浓度的差异均无统计学意义（P〉0．05）；而DM组大鼠血清中VEGF质量浓度明显低于正常对照组，玻璃体中VEGF质量浓度明显高于正常对照组，差异均有统计学意义（P〈0．01）；DM组大鼠血清中和玻璃体中VEGF质量浓度分别为（147．65±4．55）和（673．45±100．85）ng／L，二者间无明显直线相关关系（r=0．314，P〉0．05）。结论结果提示ASD能够降低玻璃体中VEGF的质量浓度，可能有延缓DM大鼠DR的发生的作用。     

血管内皮生长因子反义寡脱氧核苷酸联合血管生成素-1对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜血管渗漏及新生血管生成的影响

目的 观察血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)反义寡脱氧核苷酸(ASODN)联合血管生成素-1(angiogenin-1,Ang-1)对糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)大鼠视网膜血管渗漏及新生血管生成的影响.方法 选取健康雄性SD大鼠60只,随机分为正常对照组(A组)5只和糖尿病组55只,糖尿病组通过链脲佐菌素腹腔注射诱导糖尿病模型成功后再饲养3个月行眼底荧光血管造影检查,确定DR大鼠模型且视网膜病变程度相仿的大鼠,随机抽取45只分为DR对照组(B组,5只)、PBS缓冲液对照组(C组,10只)、VEGF ASODN干预组(D组,10只)、Ang-1干预组(E组,10只)、联合干预组(F组,10只).C组玻璃体内注射PBS缓冲液5μL;D组玻璃体内注射浓度为100 μmol·L-1 VEGF ASODN 5 μL;E组玻璃体内注射浓度为160 mg·L-1Ang-1 5 μL;F组玻璃体内注射100 μmol·L-1 VEGF ASODN及160 mg·L-1 Ang-1各5μL;3 d后再次行上述操作.各组大鼠行眼底荧光血管造影检查,对比观察不同组别大鼠视网膜血管渗漏情况,病理组织切片光学显微镜下突破内界膜的观察视网膜新生血管芽细胞核数.结果 A、B、C、D、E和F组视网膜新生血管渗漏面积分别为0、( 20.98±1.14) mm2、(21.47±1.65) mm2、(14.60±1.55) mm2、(13.80 ±1.19) mm2、( 10.81±1.35) mm2;D、E、F组新生血管渗漏面积低于B、C组,差异有统计学意义(F=103.99,P ＜0.05);F组渗漏面积低于D、E组,差异有统计学意义(F=190.94,P＜0.05);B组与C组之间差异无统计学意义(t =0.22,P＞0.05).A、B、C、D、E和F组突破内界膜的新生血管芽细胞核数分别为(1.13±0.31)个、(80.31±5.21)个、(81.08 ±2.57)个、(37.37±3.41)个、(41.07±2.09)个、(14.41±1.23)个;D、E、F组突破内界膜的血管芽细胞核数均低于B、C组,差异有统计学意义(F=1339.41,P＜0.05);F组突破内界膜的血管芽细胞核数低于D、E组,差异有统计学意义(F =714.91,P ＜0.05);B组与C组之间差异无统计学意义(t=0.35,P＞0.05).结论 VEGFASODN联合Ang-1玻璃体内注射能明显抑DR大鼠视网膜新生血管的生成,减少视网膜血管渗漏.