KLF4在大鼠晶状体损伤促进视神经再生过程中的表达

目的 观察单纯视神经损伤及视神经损伤联合晶状体损伤后视网膜神经节细胞及其轴突中锌指样转录因子4(KLF4) mRNA表达量的变化,探讨晶状体损伤促进视神经再生的相关机制.方法 取54只健康成年Wistar大鼠随机分成对照组(6只)、单纯视神经损伤组(24只)、视神经损伤联合晶状体损伤组(24只).分别于7d、14 d、21 d处死对照组大鼠各2只,单纯视神经损伤组和联合晶状体损伤组大鼠各8只.透射电镜观察损伤后轴突的显微结构变化,荧光定量聚合酶链反应检测不同分组不同时间点视网膜神经节细胞及其轴突上KLF4 mRNA的表达.结果 损伤7d时,透射电镜下见单纯视神经损伤组和联合晶状体损伤组轴突较对照组明显肿胀,轴浆电子密度降低,髓鞘结构混乱,联合晶状体损伤组可见部分簇状排列的无髓鞘包裹的新生神经纤维,损伤14 d和21 d时单纯视神经损伤组和联合晶状体损伤组均少见髓鞘轮廓,见众多胶原纤维.损伤7d时,单纯视神经损伤组(2-△△△为0.561 ±0.045)和联合晶状体损伤组(0.091 ±0.026)KLF4 mRNA相对表达量较对照组(1.003±0.113)均有不同程度降低,联合晶状体损伤组降至最低,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);损伤14 d时,单纯视神经损伤组(2-△△Ct为0.333±0.106)和联合晶状体损伤组(0.401±0.169) KLF4 mRNA相对表达量较对照组仍有不同程度降低,差异有统计学意义(均为P＜0.05),但单纯视神经损伤组和联合晶状体损伤组间差异无统计学意义(P＞0.05);损伤21d时,单纯视神经损伤组(2-△△Ct为1.100±0.100)和联合晶状体损伤组(1.166 ±0.115) KLF4 mRNA相对表达量较对照组轻度增高,差异均无统计学意义(均为P＞0.05).结论 晶状体损伤促进视神经再生的机制可能与KLF4表达减少有关,这为基因转录水平靶向治疗视神经病变提供了新的思路.     

在晶状体损伤诱导的视神经长时程再生过程中MMP-12的表达规律

目的:探讨晶状体损伤诱导SD大鼠视神经钳压损伤后轴突长时程再生过程中MMP-12的表达变化。方法:建立SD大鼠视神经损伤模型和晶状体损伤模型,将实验动物24只分为对照组(仅开放眼眶暴露视神经)、晶状体损伤组、视神经损伤组、晶状体损伤联合视神经损伤组,每组各6只大鼠。采用有参转录组测序分析损伤视神经区域差异基因表达变化,筛选相关高表达差异基因,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和酶联免疫吸附实验(ELISA)定量分析损伤区MMP-12的表达量变化。结果:转录组测序主成因分析表明,晶状体损伤联合视神经损伤是基因表达变化中的主要成因。基因表达差异分析显示,晶状体损伤联合视神经损伤组中,存在MMP-12基因表达上调。在建模成功后14、21d时,晶状体损伤联合视神经损伤组的MMP-12 mRNA表达量与对照组、视神经损伤组和晶状体损伤组比较上调(P<0.05);在7、28d时,各组间表达无差异。在建模成功后7、14、21d时,晶状体损伤联合视神经损伤组的MMP-12蛋白表达量与对照组和视神经损伤组比较上调(P<0.05);21d时,晶状体损伤联合视神经损伤组与视神经损伤组比较上...     

大鼠视神经再生的组织病理学机制

目的探讨大鼠视神经再生的组织病理学机制。方法 40只Wistar大鼠按随机数字表法随机分为正常组（n=8）、单纯视神经损伤组（n=16）和视神经损伤联合晶状体损伤组（n=16）3组。单纯视神经损伤组：单纯的视神经完全性横断性损伤并保存中央血管完好;视神经损伤联合晶状体损伤组：视神经的完全性横断性损伤并保存中央血管完好,同时损伤晶状体形成白内障。4周后处死动物,处死前3d,用毛细玻璃管注入大鼠玻璃体内4～5μL质量分数2.5%的罗丹明B异硫氰酸盐（RITC）。大鼠视神经和视网膜行常规组织病理学检查并计数视网膜神经节细胞（RGCs）的数量。结果正常视神经可以观察到神经纤维及神经胶质细胞。单纯视神经损伤组视神经断端可见呈团块状的胶质瘢痕,细胞较密集,排列紊乱。视神经损伤联合晶状体损伤组视神经断端无胶质瘢痕,且细胞排列较疏松,并有纵向排列的趋势,伴有大量巨噬细胞浸润。视神经损伤联合晶状体损伤组周边部RGCs的数量为4.06±1.45,单纯视神经损伤组为4.06±1.45,2组比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论视神经再生的关键是克服视神经断端作为物理性屏障的胶质瘢痕和提高RGCs的存活数量。     

实时荧光聚合酶链反应检测视神经损伤后NgRmRNA表达的变化

目的：定量检测成年大鼠视神经损伤后NgR mRNA表达的变化情况,探讨Nogo-A和NgR在视神经损伤后的表达变化间的关系.方法：采用荧光定量PCR（：Fluoresence Quantive polymerase chainreaction,FQ-PCR）法,定量分析视神经损伤后1,3,5,7,15d视神经NgRmRNA表达的变化.结果：大鼠视神经钳夹伤后其NgR mRNA表达无显著变化.结论：Nogo-A和其受体NgR表达变化的不一致,提示了Nogo-A除了抑制再生外,可能还有其它尚未阐明的功能.     

Nogo-A mRNA在视神经损伤后视网膜中的表达和分布

目的 定位检测Nogo-A mRNA在成年大鼠正常视网膜和视神经损伤后视网膜中的表达和分布。方法 将90只成年大鼠随机分为2组，有眼为对照组，左眼为实验组。实验组在眼球后2mm用视神经损伤夹夹持9s，根据处死时间不同分别于夹伤后1、3、7d取出大鼠眼球，沿其长轴制作视网膜冰冻切片。应用原位杂交方法检测视网膜中Nogo-A mRNA的表达和定位。将切片图像输入图像分析仪进行处理。结果 视网膜中可见Nogo-A mRNA在不同细胞层中的表达：视网膜神经节细胞层、内颗粒层、外颗粒层中可见Nogo-A mRNA表达，其中以视网膜神经节细胞层为最多。夹伤组中1、3、7d组分别与对照组比较，阳性细胞染色面积差异有极显著统计学意义（t=3．82，4．21，4．07；P〈0．01），A值差异有非常显著统计学意义（t=3．90，4．52，3．78；P〈0．01）。结论 Nogo-A mRNA在视神经损伤后视网膜中的表达明显增多，在抑制视神经损伤后轴突再乍的机制中可能起重要作用。     

反义寡核苷酸对视神经少突胶质细胞Nogo-A mRNA表达调控的实验研究

目的 研究反义寡核苷酸对体外培养的视神经少突胶质细胞Nogo-A表达的影响,为进一步研究视神经损伤修复奠定基础。方法 使用新生2d的Wistar大鼠视神经,采用组织块接种法获得少突胶质细胞,并通过GC抗体免疫染色对培养的细胞进行鉴定。实验分为对照组(A)、随机序列组(B)和2μmol/L(C)、5μmol/L(D)、10μmol/L(E)三种Nogo-A反义寡核苷酸浓度组。细胞培养24h后,提取总RNA,使用RT-PCR检测Nogo-A mRNA的表达变化。结果 视神经组织接种后3d,有圆形或梭形的细胞自视神经迁出;11d左右,细胞基本铺满盖玻片;GC抗体免疫组化显示获得的细胞为少突胶质细胞。RT-PCR结果显示三种浓度的反义寡核苷酸组,Nogo-A mRNA的表达均显著降低(P<0.01),随机序列对Nogo-A mRNA的表达无影响(P>0.05)。结论 Nogo-A反义寡核苷酸可有效地、特异性地抑制靶基因的表达。     

地塞米松对兔视神经钳夹伤后视网膜神经节细胞存活及Nogo-A表达的影响

目的观察地塞米松对家兔视神经钳夹伤后视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)存活的影响及损伤视神经、视网膜Nogo-A表达的变化。方法采用兔球后视神经钳夹伤模型,健康成年家兔分为正常对照组、损伤组、治疗组。分别于损伤后3d、7d、14d处死动物,观察单位面积RGC存活数量及损伤后Nogo-A在视神经、视网膜的表达变化。结果视神经损伤后,治疗组RGC的存活数高于损伤组及对照组(P<0.01)。对照组、损伤组损伤后3d、7d、14d视神经、视网膜Nogo-A表达增强,至损伤后7d达高峰;治疗组视神经、视网膜表达亦增强,各时间点均弱于损伤组、对照组,差异有显著统计学意义(P<0·01)。结论视神经损伤后,地塞米松能够增加RGC的存活数量,能够下调No-go-A的表达,这可能是地塞米松治疗作用机制之一。     

牛磺酸对大鼠视神经损伤后MMP-2和MMP-9表达的促进作用

目的观察视神经损伤后基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)-2和MMP-9的表达及牛磺酸对其表达的影响,探讨牛磺酸在视神经再生修复方面的作用。方法 84只大鼠随机分为4组,正常组(12只)不作处理,对照组、预治疗组、治疗组(每组24只)建立大鼠视神经不完全损伤模型,预治疗组于造模前3d、治疗组于造模后1h开始每天1次给予体积分数5%牛磺酸腹腔注射,对照组造模后1h每天1次给予等量蒸馏水腹腔注射。各组分别于伤后3d、7d、14d、28d取视神经采用免疫组织化学法检测MMP-9平均光密度值,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测MMP-2mRNA。结果对照组、预治疗组、治疗组视神经损伤后MMP-9和MMP-2mRNA的表达较正常组均增高,预治疗组及治疗组与对照组相比,各时间点MMP-9和MMP-2mRNA的阳性表达均明显升高(均为P<0.05)。在视神经损伤后3d时预治疗组MMP-9光密度值为39.53±4.05、MMP-2mRNA灰度值为1.746±0.268,其阳性表达与治疗组的MMP-9光密度值32.96±3.62、MMP-2mRNA灰度值1.303±0.289相比均明显增高(均为P<0.05),其后两组相近,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论视神经损伤后MMP-2和MMP-9的表达增强,牛磺酸治疗可以提高视神经组织中MMP-2、MMP-9的表达,对视神经损伤后的再生修复有一定的促进作用。     

反义寡核苷酸抑制大鼠损伤视神经 Nogo-A mRNA的表达

目的:观察反义寡核苷酸对损伤视神经Nogo-A的影响.方法:实验分为对照组、随机序列组、和2,5,10μmol/L 3种Nogo-A反义寡核苷酸浓度组.大鼠视神经钳夹伤后,采用逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR),半定量分析反义寡核苷酸对损伤视神经Nogo-A mRNA表达量的变化.结果:反义寡核苜酸均显著降低Nogo-A mRNA的表达(P＜0.01),随机序列对Nogo-AmRNA的表达无影响(P＞0.05).结论:反义寡核苷酸对视神经损伤后Nogo-A mRNA表达有抑制作用.     

大鼠视神经夹伤后CNTF CNTFR及OMgpmRNA表达的研究

目的 观察大鼠视神经夹伤后对闪光视觉诱发电位(F-VEP)的影响及睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)、睫状神经营养因子受体(ciliary neurotrophic factor recepter,CNTFR)、少突胶质细胞髓鞘糖蛋白(oligodendrocyte myelin glycoprotein,OMgp)在视网膜中的表达变化.方法 采用夹持视神经方法建立大鼠视神经不完全损伤模型,在夹伤后1、3、7、14和28d剥离视网膜,提取总RNA用半定量逆转录聚合酶反应(rt-PCR)方法测定视网膜中CNTF,CNTFR,OMgp mRNA的表达,同时观测术后1、7、14和28dF-VEP波形改变.结果 大鼠视神经损伤后视网膜中CNTF,CNTFR,OMgp mRNA有所增加,正常大鼠视网膜中CNTF,CNTFR,OMgp少量表达.视神经损伤后F-VEP潜伏期延长,波幅降低,波形低而宽,14d后有所恢复.结论 大鼠视神经损伤后,CNTF,CNTFR,OMgp表达均增加,而CNTFR的增加可为外源性CNTF治疗视神经损伤提供依据.F-VEP的振幅,潜时伤后变化与时间相关,伤后14d变化最明显,以后有恢复迹象.     

Expression of insulin‐like growth factor 1 receptor in rat retina following optic nerve injury

Purpose: To investigate the apoptosis in retinal ganglion cells (RGCs) and insulin‐like growth factor 1 receptor (IGF‐1R) in the retina following optic nerve crush. Methods: Healthy Wistar rats (N = 70) were divided into two groups: a normal control group and an optic nerve injury group. Immunohistochemistry and flow cytometry were performed to detect the expression of IGF‐1R and to measure the apoptosis of RGCs, respectively. Results: Immunohistochemistry revealed that at 1 hr after optic nerve injury, IGF‐1R immunoreactivity began to increase and reached a maximal level at 24 hr (p < 0.05), where it remained elevated up to 14 days after injury. RGC apoptosis in the normal control group was 0.53%, while the apoptosis rate in the optic nerve injury group increased over time. The apoptosis rate in the optic nerve injury group was 1.4% at 1 hr, 4.4% at 6 hr, 5.2% at 12 hr and reached a maximal level (8.5%) at 24 hr. Subsequently, the rate declined to 1.9% 7 days after injury and 0.9% 2 weeks after injury. Conclusion: The IGF‐1R immunereactivity in the retina increased after optic nerve injury. IGF‐1R may regulate the apoptosis and regeneration of RGCs at different stages after optic nerve injury.     

溴莫尼定治疗大鼠视神经夹挫伤机制探讨

目的观察0.2%酒石酸溴莫尼定对视神经夹挫伤大鼠视网膜形态及bcl-2/bax表达的影响,探讨其作用机制。方法雌性SD大鼠90只随机分为正常组、模型组、治疗组,每组30只。60只大鼠用视神经钳夹法制作SD大鼠视神经夹挫伤模型,治疗组30只鼠给予0.2%酒石酸溴莫尼定点眼,于实验的l、3、5、7、14、21d处死大鼠,用苏木精-伊红染色计数各组鼠视网膜神经节细胞（RGCs）的数量,用透射电镜观察和比较各组鼠视网膜的超微结构改变,免疫组织化学染色检测鼠视网膜中bcl-2及bax的表达。结果正常组视网膜结构正常,治疗组较模型组视网膜形态损伤减轻。造模后3～21d,模型组和治疗组较正常对照组RGCs数量明显减少（P〈0.05）,但治疗组较模型组RGCs数量明显增加（P〈0.01）。造模后5～7d,治疗组bcl-2在鼠视网膜中的表达量较模型组明显增加（P〈0.01）,但bax表达量明显减少（P〈0.01）。模型组和治疗组的bcl-2在鼠视网膜中的表达量较正常组增加但bax表达量明显减少（P〈0.05）。结论0.2%酒石酸溴莫尼定对大鼠视神经夹挫伤有一定的治疗作用,其机制与抑制凋亡有关。     

Nogo在视神经损伤后再生中的研究进展

哺乳动物外周神经损伤后轴突能再生很长距离。在一定条件下,中枢神经系统受损后也能部分再生。Nogo是一种已经被证实的髓鞘相关抑制因子,中枢神经损伤后Nogo释放增加、表达增强,启动神经元凋亡过程,导致神经元死亡。我们从Nogo-A,Nogo-66,可溶性NgR片段、RhoA酶与Rho-A/Rho激酶信号通道、钙离子几个方面综述Nogo的作用机制,并探讨其在视神经损伤后神经再生中的应用前景。     

大鼠外伤性视神经损伤模型的建立

目的建立大鼠定量视神经损伤模型,为研究视神经损伤的发病机制及治疗效果奠定基础。方法健康Sprague-Dawley大鼠27只,随机分为3组,分别为A组(损伤组)12只、B组(假损伤对照组)12只、C组(正常对照组)3只。A组暴露视神经,应用40g力的视神经夹在大鼠眼球后2mm处夹视神经30s,B组仅暴露视神经,C组不做任何处理。A、B组按损伤后不同时间分为3d组、7d组、14d组、28d组,采用双上丘注射50g.L-1荧光金标记双眼视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells RGCs)。视网膜铺片荧光照相,计算RGCs计数,RGCs标识率及RGCs丧失率。结果 C组与B组RGCs计数及RGCs标识率比较,无明显差异;A组与B组各时间点RGCs计数及RGCs标识率比较,均有明显差异;A组视神经损伤后不同时间RCCs计数逐渐下降(3d:152.26±25.12,7d:111.19±20.32,14d:101.23±17.19,28d:94.86±18.26),14d组与28d组比较无统计学意义,其他时间点比较有统计学意义,视神经损伤后RGCs标识率随时间延长渐进性降低(3d:79.35%±8.29%,7d:59.76%±7.79%,14d:53.26%±7.26%,28d:51.29%±3.26%),而RGCs丧失率随时间延长渐进性增加(3d:20.65%±3.15%,7d:40.24%±5.63%,14d:46.74%±4.37%,28d:48.71%±5.12%)。结论应用40g力视神经夹在大鼠眼球后2mm处夹视神经30s能成功建立定量视神经损伤动物模型。