局部应用尿激酶对大鼠血-视网膜屏障外向通透性的影响

背景 视网膜血管再通是治疗视网膜血管阻塞性疾病的关键.研究证实,玻璃体腔注射尿激酶可抑制视网膜毛细血管内皮细胞间紧密连接复合体中Occludin蛋白的表达. 目的 用伊文思蓝(EB)玻璃体注射法观察尿激酶眼局部注射后大鼠血-视网膜屏障(BRB)外向通透性的变化. 方法 采用随机数字表法将60只SD大鼠随机分为4个组,各组大鼠均以右眼作为实验眼.尿激酶玻璃体注射组大鼠将尿激酶350 U(商品单位)4μl注入右眼玻璃体腔,同容积的PBS以同样方式注射作为PBS玻璃体注射组,尿激酶球后注射组大鼠将10μl 1000U尿激酶注入右眼球后组织,等容积的PBS以同样方式注射作为PBS球后注射组.上述药物注射后24 h,所有大鼠右眼玻璃体腔注射质量分数0.5％ EB 4μl.EB注射后4h摘取大鼠右侧眼球,完整取出玻璃体并以甲酰胺温浴萃取EB.所得提取液以甲酰胺-分光光度法检测EB的质量浓度,并据此推算大鼠玻璃体腔内EB的质量浓度,对各组间大鼠玻璃体中EB质量浓度进行比较. 结果 尿激酶玻璃体注射组大鼠玻璃体呈淡蓝色反光,眼科手术显微镜下可见视网膜血管;尿激酶球后注射组大鼠玻璃体呈蓝色,眼底血管不易显示,而PBS玻璃体注射组和PBS球后注射组大鼠玻璃体均呈深蓝色反光,眼底无法窥见.尿激酶玻璃体注射组、PBS玻璃体注射组、尿激酶球后注射组和PBS球后注射组大鼠玻璃体的甲酰胺EB溶液吸光度(A)值分别为0.181±0.008、0.450±0.017、0.330±0.009和0.436±0.012;尿激酶玻璃体注射组大鼠玻璃体腔内EB的质量浓度为(0.266±0.014)g/L,明显低于PBS玻璃体注射组、尿激酶球后注射组和PBS球后注射组的(0.667±0.026)、(0.496±0.015)和(0.657±0.017)g/L,4个组间差异有统计学意义(F=100.406,P＜0.01),其中尿激酶玻璃体注射组大鼠玻璃体EB质量浓度均明显低于其他3个组,差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 大鼠眼局部应用尿激酶可增加BRB的外向通透性,玻璃体腔内注射EB是检测大鼠BRB外向通透性的可靠方法.     

糖尿病大鼠药物性玻璃体松解术的研究

目的 研究在糖尿病大鼠中能否采用药物性玻璃体松解术诱导完全性玻璃体后脱离(PVD).方法 实验研究.成年SD大鼠用链脲佐菌素(STZ)腹腔注射诱发糖尿病,4周后用视觉电生理、视网膜血管铺片、透射电镜观明确视网膜病变的发生.发病4周后将糖尿病大鼠分为4组:A组10只,右眼玻璃体内注射透明质酸酶5 U;B组10只,右眼玻璃体腔内注射纤溶酶0.5 U;C组10只,右眼玻璃体腔内注射纤溶酶0.5 U+透明质酸酶5 U;D组10只,右眼玻璃体注射BSS 2 μl.注射后一周内观察眼部一般情况并检查视觉电生理变化(F-ERG).一周时取各组大鼠视网膜做扫描电镜检查和组织切片,观察视网膜组织结构及玻璃体后脱离的发生情况.对数据采用t检验进行统计学分析.结果 糖尿病大鼠发病4周时已经有视觉电生理的改变,血管铺片显示周细胞的减少(t=6.1,P<0.01);Ops振幅降低、峰时延迟(t=2.8,3.4;P<0.05);透射电镜显示毛细血管周细胞水肿变性.玻璃体腔注射药物一周后,通过扫描电镜观察A组和D组无PVD发生(0/10);B组发生部分性PVD 6/10,完全性PVD 4/10;C组发生完全性PVD 10/10.视觉电生理检查各组与注射前相比差异均无统计学意义(P>0.05),组织切片检查未显示视网膜组织结构的异常改变.结论 STZ诱导糖尿病4周大鼠视网膜已经出现了病理改变,在其玻璃体腔中注射0.5 U的纤溶酶加5 U的透明质酸酶能够稳定地诱发出完全性PVD,而单独使用纤溶酶仅能诱发出部分性PVD,透明质酸酶不能诱发出PVD.各组未见药物对视网膜的结构和功能造成明显的毒性反应.     

胰高血糖素类肽-1缓释珠对大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

目的探讨玻璃体内植入胰高血糖素类肽-1（GLP-1）缓释珠对大鼠视网膜神经节细胞的保护作用。设计实验研究。研究对象SPF级Sprague-Dawley（SD）雄性大鼠25只。方法将25只大鼠随机分为2组,实验组13只,对照组12只。实验组大鼠右眼玻璃体内植入4个GLP-1缓释珠,对照组右眼玻璃体内注入4μl复方氯化钠。GLP-1缓释珠直径600μm,内含3000个整合了GLP-1基因的人骨髓间充质干细胞,外被致密的藻酸盐外膜,以确保GLP-1产物可顺利释放而不引起免疫排斥。玻璃体内注射均在右眼视神经夹伤后立即进行。视神经夹伤后第23天用3％荧光金从双侧上丘做逆行标记,第28天取双眼球标本做视网膜铺片并在荧光显微镜下拍摄照片,采用人工双盲法进行视网膜神经节细胞计数。主要指标视网膜神经节细胞密度以及视网膜神经节细胞存活率。结果视网膜神经节细胞密度实验组与对照组分别为（2113±474）／mm2和（1734±424）／mm2,两组之间的差异有统计学意义（t=2．111,P=-0．046）。视网膜神经节细胞存活率实验组与对照组分别为（74±18）％和（57±16）％,两组之间的差异有统计学意义（t=-2．451,P=-0．022）。结论GLP-1缓释珠玻璃体内植入后对视神经夹伤大鼠视网膜神经节细胞具有保护作用,可以提高视网膜神经节细胞存活率。     

Delta样配体4单克隆抗体对视网膜新生血管形成和血管内皮生长因子表达的影响

背景 Delta样配体4(Dll4)参与视网膜内细胞的发育和血管的发生过程,并与血管内皮生长因子(VEGF)共同参与诱导和挑选尖端细胞的过程.Dll4在视网膜新生血管形成中的作用及其与VEGF表达的关系值得关注. 目的 研究Dll4单克隆抗体玻璃体腔内注射后对视网膜中Dll4、VEGF及其受体表达和视网膜新生血管形成的影响.方法 将5日龄的新生SPF级SD大鼠与母鼠一起在含体积分数为(80±2)％氧气的密闭玻璃箱内饲养至12日龄,然后返回自然环境下饲养至17日龄以建立大鼠氧诱导视网膜病变(OIR)模型.于模型大鼠12日龄时右眼玻璃体腔内注射Dll4单克隆抗体2.5 μl(0.5 μg)为Dll4单克隆抗体注射组,左眼以同样的方式注射等体积PBS作为PBS对照组.于大鼠17日龄时处死大鼠并分离视网膜.应用逆转录PCR(RT-PCR)法检测两组大鼠视网膜中Dll4、VEGF、VEGF受体-1(VEGFR-1)、VEGFR-2、神经纤维网蛋白-1(neuropilin-1)mRNA的表达情况,采用视网膜铺片ADP酶染色法观察大鼠视网膜新生血管形态,采用视网膜切片苏木精-伊红染色法计数突破内界膜的血管内皮细胞核数目,评估新生血管的严重程度.两组间各检测指标的差异比较采用配对t检验. 结果 Dll4单克隆抗体注射组大鼠视网膜内Dll4 mRNA表达灰度值(Dll4 mRNA/β-actin mRNA)为0.22±0.06,明显低于PBS对照组的0.98±0.13,差异有统计学意义(t=21.839,P=0.000),而2个组间VEGF mRNA及其受体VEGFR-1 mRNA、VEGFR-2 mRNA表达灰度值的差异均无统计学意义(t=0.463,P=0.649;t=1.687,P=0.109;t=-1.674,P=0.111);与PBS对照组比较,Dll4单克隆抗体注射组小鼠视网膜中neuropilin-1 mRNA的表达量明显升高,差异有统计学意义(0.73±0.08 vs.0.64±0.07)(t=-2.677,P=0.015).Dll4单克隆抗体注射组大鼠视网膜新生血管密度明显高于PBS对照组.Dll4单克隆抗体注射组大鼠视网膜突破内界膜的血管内皮细胞数为(63.6±11.6)个/张,PBS对照组为(35.1±5.2)个/张,差异有统计学意义(t=-7.879,P=0.000). 结论 Dll4在视网膜新生血管形成的过程中发挥重要作用,并可能通过对VEGFR的反馈抑制发挥抑制病理性新生血管过度形成的作用.     

血管内皮生长因子反义寡脱氧核苷酸联合血管生成素-1对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜血管渗漏及新生血管生成的影响

目的 观察血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)反义寡脱氧核苷酸(ASODN)联合血管生成素-1(angiogenin-1,Ang-1)对糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)大鼠视网膜血管渗漏及新生血管生成的影响.方法 选取健康雄性SD大鼠60只,随机分为正常对照组(A组)5只和糖尿病组55只,糖尿病组通过链脲佐菌素腹腔注射诱导糖尿病模型成功后再饲养3个月行眼底荧光血管造影检查,确定DR大鼠模型且视网膜病变程度相仿的大鼠,随机抽取45只分为DR对照组(B组,5只)、PBS缓冲液对照组(C组,10只)、VEGF ASODN干预组(D组,10只)、Ang-1干预组(E组,10只)、联合干预组(F组,10只).C组玻璃体内注射PBS缓冲液5μL;D组玻璃体内注射浓度为100 μmol·L-1 VEGF ASODN 5 μL;E组玻璃体内注射浓度为160 mg·L-1Ang-1 5 μL;F组玻璃体内注射100 μmol·L-1 VEGF ASODN及160 mg·L-1 Ang-1各5μL;3 d后再次行上述操作.各组大鼠行眼底荧光血管造影检查,对比观察不同组别大鼠视网膜血管渗漏情况,病理组织切片光学显微镜下突破内界膜的观察视网膜新生血管芽细胞核数.结果 A、B、C、D、E和F组视网膜新生血管渗漏面积分别为0、( 20.98±1.14) mm2、(21.47±1.65) mm2、(14.60±1.55) mm2、(13.80 ±1.19) mm2、( 10.81±1.35) mm2;D、E、F组新生血管渗漏面积低于B、C组,差异有统计学意义(F=103.99,P ＜0.05);F组渗漏面积低于D、E组,差异有统计学意义(F=190.94,P＜0.05);B组与C组之间差异无统计学意义(t =0.22,P＞0.05).A、B、C、D、E和F组突破内界膜的新生血管芽细胞核数分别为(1.13±0.31)个、(80.31±5.21)个、(81.08 ±2.57)个、(37.37±3.41)个、(41.07±2.09)个、(14.41±1.23)个;D、E、F组突破内界膜的血管芽细胞核数均低于B、C组,差异有统计学意义(F=1339.41,P＜0.05);F组突破内界膜的血管芽细胞核数低于D、E组,差异有统计学意义(F =714.91,P ＜0.05);B组与C组之间差异无统计学意义(t=0.35,P＞0.05).结论 VEGFASODN联合Ang-1玻璃体内注射能明显抑DR大鼠视网膜新生血管的生成,减少视网膜血管渗漏.     

粉防己碱抑制激光诱导鼠脉络膜新生血管

目的 观察玻璃体腔注射粉防己碱对实验性鼠脉络膜新生血管的抑制作用及其对视网膜结构和功能的影响。 方法 应用半导体激光（波长810 nm，曝光时间0.1 s，光斑直径100 μm，能量120 mW）光凝诱导20只Brown Norway (BN) 大鼠20只眼的脉络膜新生血管(CNV)模型。将大鼠随机分为实验组和对照组，每组各10只大鼠20只眼，实验组大鼠激光光凝后0、3 d玻璃体注射0.05 ml浓度为3.21 μmol/L的粉防己碱药液，对照组玻璃体内注射同体积的生理盐水；两组均在激光光凝14 d后行荧光素眼底血管造影，观察其新生血管的发生率。另有5只健康BN大鼠，每只鼠右眼玻璃体内注射入0.05 ml浓度为3.21 μmol/L的粉防己碱药液，左眼注射同体积生理盐水，第一次注药前及注药后1 h、1 d和第二次注药后1 h、1、7、14 d行视网膜电图（ERG）检查，第二次注药后14 d行光学、电子显微镜检查。 结果 实验组大鼠CNV发生率为23.26%，明显低于对照组63.33%（P<0.01）。3.21 μmol/L的粉防己碱玻璃体内注射b波波幅比率与注药前相比差异无统计学意义(P>0.05)。光学、电子显微镜检查未见明显细胞异常。 结论 粉防己碱能抑制鼠CNV形成；3.21 μmol/L浓度的粉防己碱玻璃体内注射对视网膜无毒性作用。 (中华眼底病杂志, 2006, 22, 242-244)     

促红细胞生成素受体抗体抑制小鼠视网膜新生血管形成

目的:观察促红细胞生成素受体抗体(erythropoietin recep-tor antibody,EpoRA)对视网膜新生血管形成的抑制作用。方法:将鼠龄为7d的C57BL/6J幼鼠置于750±20mL/L氧仓中连续饲养5d,建立高氧诱导的血管增生性视网膜病变模型。幼鼠20只右眼在建模前1d予以玻璃体内注射EpoRA 2μL作为治疗眼,左眼不注射作为对照眼。在H.E.染色的组织学切片上观察并计数突破视网膜内界膜进入玻璃体的新生血管内皮细胞核数目;用ADP酶组织化学法行视网膜铺片,观察视网膜血管改变。饲养在正常条件下的幼鼠作为正常对照组;模型幼鼠8只仅在玻璃体内注射生理盐水,作为阴性对照组。结果:在组织切片上,可见突破视网膜内界膜进入玻璃体腔内的新生血管内皮细胞核,在用EpoRA注射的右眼,明显少于未经EpoRA注射的左眼(17.20±5.42个vs23.47±8.43个;P<0.01)。ADP酶组织化学法视网膜铺片中,可见视网膜新生血管的密度和异常程度,在用EpoRA注射的右眼,明显轻于未经EpoRA注射的左眼以及阴性对照组。正常对照组未见明显异常。结论:EpoRA可抑制小鼠模型中的视网膜新生血管形成。     

激肽释放酶结合蛋白对脉络膜新生血管抑制作用研究

目的 观察激肽释放酶结合蛋白(KBP)对脉络膜新生血管(CNV)的抑制作用.方法 40只Brown Norway大鼠随机分为KBP组和对照组,每组均为20只,右眼为实验眼.采用532 nm激光建立CNV模型.激光光凝后1周行荧光素眼底血管造影(FFA)检查.检查后第2天,KBP组大鼠玻璃体腔注射浓度为4 mg/ml的KBP溶液5μl,对照组大鼠玻璃体腔注射5μl去离子水.两组大鼠注射后1、2、3周行FFA检查,各时间点检查后,分别摘除5只大鼠眼球制作石蜡切片进行苏木精-伊红染色、血管内皮生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子(PEDF)免疫组织化学3-氨基-9-乙基咔唑染色.应用Image Pro Plus6.0图像分析系统,测量CNV渗漏面积和激光光斑区累积吸光度[A,旧称光密度(OD)]值.结果 激光光凝后1周,FFA检查结果显示CNV形成,可见荧光渗漏.注射后1、2、3周,KBP组大鼠CNV渗漏逐渐减少;对照组大鼠CNV渗漏随观察时间延长而增加.光学显微镜观察发现,KBP组光凝斑面积较对照组光凝斑面积逐渐缩小,新生血管亦逐渐萎缩;对照组光凝斑处新生血管持续存在.免疫组织化学检查结果显示,两组大鼠激光光凝后1周,视网膜VEGF(F=1.29)、PEDF(F=6.29)表达平均累积A值比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).注射后1、2、3周,两组大鼠视网膜VEGF、PEDF表达平均累积A值比较,差异均有统计学意义(VEGF:F=14.16、66.89、24.34,PEDF:F=4.22、62.04、233.05;P＜0.001).结论 玻璃体腔注射KBP能有效抑制CNV的形成和发展.     

两种糖尿病大鼠模型血-视网膜屏障对EB通透性的比较

目的 探讨2种糖尿病大鼠模型血-视网膜屏障对伊凡思蓝(Evans-Blue,EB)通透性的改变.方法 对照组及1周、4周和16周时Sprague-Dawley(SD)和Brown-Norway(BN)糖尿病大鼠,EB 45 mg·lg-1颈静脉注入,分别检测视网膜中EB含量.结果 对照组及1周、4周和16周时SD和BN糖尿病大鼠视网膜标准化EB含量分别为(12.24±3.11)ng·mg-1、(21.68±4.41)ng·mg-1、(21.78±3.17)ng·mg-1、(23.56±4.05)ng·mg1和(13.22±3.59)ng·mg-1、(23.41±4.47)ng·mg1、(26.40±5.00)ng·mg-1、(31.01±4.46)ng·mg-1,糖尿病大鼠视网膜标准化EB含量明显高于对照组,其差异均有显著性(P＜0.05).2种不同种系大鼠相比,BN糖尿病大鼠1周、4周和16周时视网膜标准化EB含量均显著高于SD大鼠(P＜0.05),而对照组差异无显著性(P＞0.05).结论 通过检测视网膜内EB含量,可以比较精确的发现早期糖尿病大鼠视网膜病变中血-视网膜通透性的改变.不同大鼠种系的差异性决定了其对STZ诱导的糖尿病大鼠视网膜通透性改变的不同.     

灯盏细辛抑制外源性VEGF诱导的大鼠视网膜血管病变TGFβ1的表达

目的:探讨灯盏细辛(EBHM)对外源性VEGF诱导的大鼠视网膜血管病变眼玻璃体腔TGFβ1和视网膜TGFβ1mRNA表达的影响.方法:大鼠48只随机分为rrVEGF164,rrVEGF164 EBHM,rrVEGF164 NS和正常对照4组.rrVEGF164 EBHM组每天60g/L的灯盏细辛浸膏ip.分别于不同时问收集玻璃体液后采用ELISA检测TGFβ1的浓度,并提取视网膜总的RNA后行RT-PCR检测TGFB 1mRNA的表达.结果:在2wk或6wk时VEGF、VEGF NS和VEGF EBHM组实验眼玻璃体内TGFβ1的浓度均高于正常对照组(P＜0.05).VEGF EBHM组低于VEGF组和VEGF NS组(P＜0.05).各组TGFβ1mRNA/GAPDHmRNA的差异与玻璃体内的TGFβ1浓度变化一致.结论:rrVEGF164作用大鼠玻璃体内TGFβ1浓度升高,视网膜TGFβ1mRNA表达增强.灯盏细辛能部分抑制rrVEGF164诱导的大鼠视网膜血管病变玻璃体内TGFβ1浓度的升高和视网膜TGFβ1mRNA表达的增强.     

血管紧张素Ⅱ和血管内皮生长因子在视网膜新生血管中的表达及意义

目的:探讨血管紧张素II(angiotensin II,Ang II)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在视网膜新生血管发生发展中的作用。方法:随机对照实验研究。选取7d龄C57BL/6J新生小鼠40只,随机分为2组:正常对照组和高氧模型组,每组20只,高氧模型组建立氧诱导视网膜病变模型。采用荧光素血管灌注视网膜铺片观察视网膜血管形态学改变;制作视网膜组织切片并进行HE染色计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数;采用Western blot检测视网膜Ang II和VEGF蛋白的表达。采用独立样本t检验和Pearson相关分析进行统计学分析,以P<0.05作为差异具有统计学意义。结果:荧光素血管灌注视网膜铺片:高氧模型组较正常对照组可见大量新生血管丛,伴明显荧光渗漏。突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数:高氧模型组(43.23±2.57)个较正常对照组(1.37±0.93)个明显增多,差异具有统计学意义(P=0.00)。视网膜Ang II蛋白表达水平:高氧模型组(0.365±0.004)较正常对照组(0.035±0.003)明显上调,差异具有统计学意义(P=0.00)。视网膜VEGF蛋白表达水平:高氧模型组(0.372±0.004)较正常对照组(0.049±0.007)明显上调,差异具有统计学意义(P=0.00)。结论:Ang II促血管生成的作用与VEGF存在明确的联系,Ang II通过上调VEGF参与视网膜新生血管的形成。     

葛根素对体外培养的视网膜血管内皮细胞增殖的影响

目的观察不同浓度葛根素对体外培养的视网膜血管内皮细胞增殖的影响。方法取第7代牛视网膜血管内皮细胞用于实验。葛根素组中加入含不同浓度葛根素的培养液,对照组加入等量空白培养液。24h及48h后采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测视网膜血管内皮细胞的增殖情况。结果与空白对照组比较,0.05mg·L-1、0.50mg·L-1、5.00mg·L-1、50.00mg·L-1和500.00mg·L-1葛根素组作用24h及48h后视网膜血管内皮细胞增殖明显。24h葛根素组OD值(按照葛根素浓度由低到高分别为:0.283±0.060、0.337±0.030、0.349±0.030、0.405±0.030、0.352±0.020)明显高于对照组(0.161±0.060),差异均有统计学意义(均为P<0.01);48h葛根素组OD值(按照葛根素浓度由低到高分别为:0.371±0.030、0.377±0.040、0.410±0.040、0.400±0.020、0.310±0.040)也明显高于对照组(0.279±0.050),差异均有统计学意义(均为P<0.01)。结论葛根素对体外培养的视网膜血管内皮细胞有明显的促增殖作用,其作用与葛根素的剂量有关。     

长链非编码RNA(LncRNA)母系表达基因3(MEG3)对糖尿病视网膜病变大鼠模型视网膜血管内皮细胞凋亡的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)母系表达基因3(MEG3)对糖尿病视网膜病变(DR)大鼠模型视网膜血管内皮细胞凋亡的影响。方法 取SPF级雄性SD大鼠以及体外培养的人视网膜微血管内皮细胞(HRMEC),均随机分为对照组、模型组、LncRNA MEG3过表达组、miR-145-5p agomir组、共转染(LncRNA MEG3过表达质粒+miR-145-5p agomir)组、共转染阴性对照(LncRNA MEG3空载质粒+miR-145-5p agomir阴性对照质粒)组,采用腹腔注射链脲佐菌素建立DR大鼠模型,25 mmol·L^-1葡萄糖诱导DR细胞模型。对照组大鼠腹腔注射柠檬酸缓冲液,对照组细胞以正常培养基培养,将大鼠与细胞均分组进行处理,以LncRNA MEG3质粒、miR-145-5p agomir转染处理后,通过伊文思蓝(EB)检测大鼠视网膜血管通透性;TUNEL染色检测大鼠视网膜血管内皮细胞凋亡率;EdU染色与Hoechst 33258染色分别检测细胞增殖、凋亡情况;依照试剂盒测量大鼠房水中及HRMEC炎症因子白细胞介素(IL)-6、IL-...     

米诺环素对糖基化终末产物所致大鼠视网膜微血管渗漏的作用及其机制研究

目的研究基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在糖基化终末产物（AGEs）所致血-视网膜屏障损害中的作用,评估米诺环素对AGEs所致血-视网膜屏障损害的治疗作用。方法 36只SD大鼠用随机数字表法分为牛血清白蛋白（BSA）组、AGEs-BSA组和AGEs-BSA＋米诺环素组。BSA组和AGEs-BSA组分别自尾静脉注入BSA和AGEs-BSA,每日1次,每次40mg/kg,AGEs-BSA＋米诺环素组在每日注射AGEs-BSA的同时隔日腹腔注射米诺环素45mg/kg。14d后,每组取6只大鼠用伊文思蓝（EB）法观察并比较各组视网膜血管的通透性,其余大鼠处死后,采用RT-PCR及Westernblot法观察视网膜MMP-9的表达。结果 AGEs-BSA组MMP-9mRNA和蛋白水平均较BSA组升高,差异有统计学意义（P〈0.01）,同时,视网膜微血管渗透性也显著升高（P〈0.01）。而在AGEs-BSA＋米诺环素组大鼠视网膜基因和蛋白水平的MMP-9均被抑制（P〈0.01）,同时视网膜微血管渗漏被部分逆转（P〈0.01）。视网膜微血管的渗透性与MMP-9蛋白的表达呈正相关（r=0.891,P=0.000）。结论 AGEs所致的视网膜微血管渗漏与MMP-9的高表达有密切关系,AGEs的作用至少部分是通过MMP-9实现的。米诺环素能部分逆转AGEs-MMP-9途径所致的血管渗漏。     

血管抑素降低ROP幼鼠视网膜及虹膜血管渗漏性的作用机制研究

目的：探讨血管抑素（angiostatin）玻璃体注射对氧诱导的早产儿视网膜病变（retinopathy of prematurity，ROP）的视网膜及虹膜血管渗漏的作用及其机制。方法：将出生7d（P7）的Brown Norway鼠置高氧环境（750mL／L O2）5d后再置正常氧环境诱导ROP，建立ROP动物模型，并以年龄相匹配的正常鼠作为正常对照。所有ROP鼠（P14）及正常鼠均右眼玻璃体腔注射血管抑素，左眼注射相同剂量的PBS（磷酸盐缓冲生理盐水）作为对照。用Evans蓝微血管渗透性检测法及总蛋白标准化分别于注射后1，2和3d检测视网膜和虹膜的血管渗透性；用Western blot蛋白印迹分析和免疫组化方法检测注射24h后血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）在视网膜的表达。结果：ROP鼠视网膜及虹膜的血管渗透性明显增加（P〈0．01）；中剂量（3．75ug/眼）和高剂量（7．5ug/眼）血管抑素降低ROP鼠视网膜血管渗透性（P〈0．05，P〈0．01），而低剂量组（1．88ug／眼）没有引起明显改变，呈现剂量依赖型；三种不同剂量的血管抑素玻璃体注射后ROP鼠的虹膜均未发生明显的血管渗透性的改变。血管抑素注射后第1d和第2d视网膜血管渗透性明显降低（P〈0．05。P〈0．01），而第3d无明显降低，其作用呈现出时间进程。Western blot蛋白印迹和免疫组化分析表明血管抑素显著降低了ROP鼠视网膜的VEGF水平，但对正常鼠无影响。结论：血管抑素可以降低ROP鼠视网膜的病理性血管渗漏，其血管渗透性下降可能与血管抑素下调VEGF的表达有关。血管抑素可能对ROP等其他视网膜血管渗漏性疾病具有潜在的治疗作用。     

五苓散对糖尿病视网膜病变大鼠血-视网膜屏障的保护作用

目的：探讨五苓散对糖尿病视网膜病变(DR)大鼠血-视网膜屏障的保护作用及其机制。

方法：SD雄性大鼠50只随机分为空白组、模型组、高剂量组、低剂量组、阳性对照组,每组10只,采用高脂高糖饮食联合腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型。高剂量组和低剂量组大鼠采用五苓散水煎液灌胃,模型组和空白组大鼠采用等量生理盐水灌胃,阳性对照组大鼠右眼球内注射康柏西普。给药12wk后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清C反应蛋白(CRP)和可溶性细胞间黏附分子1(sICAM-1)表达水平,HE染色观察视网膜组织结构,伊文思蓝(EB)渗漏试验观察大鼠血-视网膜屏障通透性,免疫组织化学法检测血管内皮生长因子(VEGF)在视网膜中的表达。

结果：模型组大鼠空腹血糖水平和视网膜组织EB渗透量、CRP和sICAM-1表达均较空白组明显升高,高剂量组大鼠视网膜组织EB渗透量、CRP和sICAM-1表达均低于低剂量组和阳性对照组(均P<0.05)。模型组大鼠视网膜神经节细胞层结构紊乱,视网膜水肿,VEGF表达明显升高; 与低剂量组和阳性对照组比较,高剂量组大鼠视网膜组织神经节细胞排列较清晰,水肿减轻。

结论：五苓散能有效降低糖尿病大鼠血清炎症因子水平,降低视网膜组织中VEGF的表达,减轻水肿,保护血-视网膜屏障。     

磷酸果糖激酶-2/果糖-2，6-二磷酸酶3在增生型糖尿病性视网膜病变患者玻璃体和血清中的表达及其相关性分析

目的　定量检测增生型糖尿病性视网膜病变（proliferative diabetic retinopathy,PDR）患者玻璃体和血清中磷酸果糖激酶-2/果糖-2,6-二磷酸酶3（phospofructokinase-2/fructose-2,6-bisphosphatase 3,PFKFB3）和血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的表达水平,探讨PFKFB3在PDR患者中可能的作用机制。方法　纳入确诊为PDR拟行单眼玻璃体切割术的患者42例（42眼）作为试验组,并根据术前是否行玻璃体内注射抗VEGF药物进一步将试验组分为非注药组和注药组,纳入同期诊断为全层黄斑裂孔（full thickness macular hole,FTMH）及黄斑前膜（preretinal membrane of the macula,PRMM）的20例（20眼）患者作为对照组。收集各组患者的玻璃体和血清标本,定量检测各组标本中的PFKFB3和VEGF表达水平,并进行统计学分析。结果　试验组患者玻璃体中PFKFB3水平为（463.17±381.28）ng·L^-1,明显高于对照组［（158.43±86.88）ng·L^-1］（t=4.919,P＜0.001）,试验组血清中PFKFB3水平为（153.45±83.78）ng·L^-1,明显高于对照组［（92.72±32.42）ng·L^-1］（t=4.098,P＜0.001）。非注药组患者玻璃体中PFKFB3水平为（797.29±387.44）ng·L^-1,明显高于注药组［（257.56±181.49）ng·L^-1］（t=5.230,P＜0.001）,而非注药组血清中PFKFB3水平与注药组差异无统计学意义（t=0.679,P=0.501）。非注药、注药组和对照组患者玻璃体与血清中的PFKFB3水平无相关性（非注药组:r=0.194,P=0.471;注药组:r=0.071,P=0.731;对照组:r=0.254,P=0.279）。试验组患者玻璃体中VEGF水平为（1713.50±1386.90）ng·L^-1,明显高于对照组［（205.52±92.93）ng·L^-1］（t=7.014,P＜0.001）;试验组血清中VEGF水平为（224.98±168.08）ng·L^-1,明显高于对照组［（86.80±36.51）ng·L^-1］（t=5.082,P＜0.001）。非注药组患者玻璃体中VEGF水平为（3399.72±510.06）ng·L^-1,明显高于注药组［（675.82±242.57）ng·L^-1］（t=20.014,P＜0.001）,非注药组血清中VEGF水平为（373.40±174.23）ng·L^-1,明显高于注药组［（133.65±73.10）ng·L^-1］（t=5.228,P＜0.001）。非注药、注药组和对照组患者玻璃体与血清中的VEGF水平均存在正相关关系（非注药组:r=0.952,P＜0.001;注药组:r=0.423,P=0.031;对照组:r=0.776,P＜0.001）。非注药组、注药组和对照组患者玻璃体中PFKFB3与VEGF水平均存在正相关关系（非注药组:r=0.865,P＜0.001;注药组:r=0.587,P=0.002;对照组:r=0.807,P＜0.001）,而在血清中仅注药组的PFKFB3与VEGF水平存在正相关关系（r=0.444,P=0.023）。结论　PFKFB3可能参与了PDR的发生发展过程;VEGF可能通过上调PFKFB3的表达而参与PDR的发生发展。     

石斛多糖对糖尿病大鼠血-视网膜屏障的保护作用及其机制

背景 糖尿病视网膜病变(DR)的发病机制涉及多条通路,近年来炎症因子相关的通路学说在DR发病中的作用越来越受到人们的关注.研究表明,高糖环境下视网膜内肿瘤坏死因子-α(TN F-α)等促炎因子含量增加,从而加速视网膜中紧密连接蛋白的异常,导致血-视网膜屏障(BRB)破坏.研究发现石斛多糖可抑制TNF-α的高表达,但其在DR早期对TNF-α表达的影响尚不清楚. 目的 研究石斛多糖对糖尿病大鼠TNF-α诱导的BRB通透性异常及视网膜内紧密连接蛋白1(ZO-1)、闭合蛋白(occludin)、连接蛋白-5(claudin-5)表达的影响.方法 将50只清洁级成年SD大鼠分为正常对照组、糖尿病模型组及低、中、高剂量石斛多糖组,每组10只大鼠,糖尿病模型组和低、中、高剂量石斛多糖组大鼠均采用链脲佐菌素腹腔内注射法诱导糖尿病模型.低、中、高剂量石斛多糖组于建模成功后6周按照分组分别用100、200及300 mg/(kg·d)石斛多糖灌胃,正常对照组和糖尿病模型组大鼠用生理盐水灌胃.干预后8周各组大鼠心脏灌注伊文思蓝并获取双侧眼球,分别进行相关指标检测,通过测定大鼠视网膜中伊文思蓝质量浓度评估大鼠视网膜渗漏量;采用Western blot法检测大鼠视网膜内ZO-1、occludin、claudin-5蛋白的相对表达量,采用ELISA法检测大鼠视网膜中及血清中TNF-α的质量浓度.结果 正常对照组、糖尿病模型组及低、中、高石斛多糖组大鼠视网膜伊文思蓝渗漏量分别为(12.68±1.30)、(30.45±2.60)、(22.12±1.15)、(17.99±1.00)和(21.49±1.00) μg/μl,糖尿病模型组大鼠视网膜伊文思蓝渗漏量明显高于正常对照组,低、中、高石斛多糖组视网膜伊文思蓝渗漏量明显低于糖尿病模型组,差异均有统计学意义(均P＜0.01).Western blot检测显示,糖尿病模型组大鼠视网膜中TNF-α蛋白相对表达量为1.12±0.10,明显高于正常对照组的0.27±0.03,低、中、高石斛多糖组视网膜中TNF-α蛋白表达量明显低于糖尿病模型组,ZO-1、occludin和claudin-5蛋白表达量明显高于糖尿病模型组,差异均有统计学意义(均P＜0.05);ELISA法检测显示,糖尿病模型组大鼠视网膜和血清中TNF-α质量浓度明显高于正常对照组,低、中、高石斛多糖组大鼠视网膜和血清中TNF-α质量浓度明显低于糖尿病模型组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).不同剂量石斛多糖组各指标的比较差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 石斛多糖可能通过下调糖尿病大鼠视网膜中TNF-α的表达和上调紧密连接蛋白的表达而改善糖尿病大鼠BRB通透性的异常.     

人参皂苷RG3对脉络膜新生血管的抑制作用

目的 分别从体外实验和体内实验两个方面探讨人参皂苷RG3对脉络膜新生血管的抑制作用.方法 体外实验:MTT检测人参皂苷RG3对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)增殖的抑制作用,HUVEC分为正常组(含体积分数10％胎牛血清的DMEM/F-12培养基)、对照组(含2 g· L-1 DMSO)和12.5 μmol·L-1、25.0 μmol·L-1、50.0 μmol·L-1、100.0 μmol·L-1人参皂苷RG3给药组,给药处理6h后测定其吸光度值.HUVEC分为对照组(含2g·L-1DMSO)和100.0Iμmol·L-1人参皂苷RG3组,小管形成实验检测人参皂苷RG3对小管形成的抑制作用,Western blotting检测人参皂苷RG3对VEGF蛋白表达的影响.体内实验:雄性C57BI/6J小鼠20只,随机分为对照小鼠组和人参皂苷RG3小鼠组,皮下注射预处理给药2周,半导体激光造模,于光凝后第1天和第21天行荧光素眼底血管造影检查.结果 MTI结果显示,正常组、对照组、12.5 μmol·L-1、25.0 μmol·L-1、50.0 μmol·L-1、100.0 μmol·L-1人参皂苷RG3给药组的吸光度值分别为0.43±0.17、0.43 +0.05、0.33±0.02、0.24±0.02、0.18 +0.01、0.15 +0.01,对照组与正常组相比差异无统计学意义(P＞0.05),其余各组与对照组相比差异均有统计学意义(均为P＜..05).小管形成实验结果显示,对照组与100.0 μmol·L-1人参皂苷RG3组小管形成数目分别为(72.5±5.56)个和(11.33±3.71)个,差异有统计学意义(P＜0.01).Western blotting结果显示,100.0 μmol·L-1人参皂苷RG3组的VEGF蛋白相对表达量(0.14±..01)明显低于对照组(0.46±0.0l),差异有统计学意义(P＜0.01).体内实验荧光素眼底血管造影结果显示,人参皂苷RG3小鼠组的荧光渗漏面积明显低于对照小鼠组.结论 人参皂苷RG3可以抑制脉络膜新生血管的形成.