二十碳五烯酸对脂多糖诱导的人单个核细胞NF-κB活性及细胞因子分泌的影响

目的 探讨二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人单个核细胞核转录因子-kB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)活性、VEGF、IL-1α和IL-6分泌的影响.方法 分离人外周血单个核细胞,将其分为空白对照组、LPS组、0.030 g·L-1 EPA处理组、0.050 g·L-1 EPA处理组.LPS组仅加入LPS进行培养(LPS终浓度为10 mg·L-1),EPA处理组允加入2种浓度的EPA(EPA终浓度分别为0.030 g·L-1和0.050 g·L-1)培养1 h,再加入LPS进行培养.LPS刺激6 h、12 h、24 h后,收集各组上清液,ELISA检测上清液中VEGF、IL-1α和IL-6的分泌量;LPS刺激24 h后的沉淀细胞用Western blot法检测人单个核细胞NF-κB活性.结果 LPS刺激6 h后,空白对照组、LPS组、0.030 g·L-1 EPA处理组、0.050 g·L-1EPA处理组VEGF含量(ng·L-1)分别为:22.57±8.86、66.49±4.21、46.18±2.35、45.49±6.61;12 h后分别为:18.05±3.18、107.30±5.70、61.29±2.86、54.34±7.41;24 h后分别为:20.49±5.92、157.63±5.95、59.54±4.20、53.13±11.42.LPS刺激6 h后IL-1α含量(ng·L-1)分别为:15.63±2.98、75.41±4.12、53.60±4.71、31.03±8.49;12 h后分别为:40.37±4.51、408.00±47.93、142.80±14.65、99.17±5.86;24 h后分别为:63.37±1.99、929.73±27.97、322.03±101.80、161.23±14.59.LPS刺激6 h后IL-6含量(ng·L-1)分别为:34.94±2.71、117.60±7.89、82.25±14.56、60.66±2.12;12 h后分别为:51.00±6.65、183.60±8.64、127.37±11.48、71.61±8.16;24 h后分别为:68.04±21.53、297.50±25.72、132.37±20.87、102.45±21.46.与空白对照组相比,LPS刺激后人单个核细胞NF-κB p65表达和VEGF、IL-1α、IL-6分泌明显升高.EPA抑制LPS诱导的人单个核细胞NF-κB p65活性;下调其VEGF、IL-1α和IL-6分泌,与LPS组比较差异均有统计学意义(均为P<0.05).结论 LPS激活人单个核细胞NF-κB,促进其VEGF及细胞因子表达.EPA抑制LPS诱导的人单个核细胞NF-κB活性,下调其VEGF及细胞因子表达.这为EPA应用于各种新生血管性疾病和炎症性疾病的防治提供了理论依据.     

泪腺炎患者血清性激素变化及其与γ-IFN、IL-4的相关性

目的 观察泪腺炎患者血清中雌二醇(estradiol,E2)、睾酮(testosterone,T)、泌乳素(prolactin,PRL)水平的变化,并探讨这种变化与血清中γ-干扰素(γ-interferon,γ-IFN)、白细胞介素4(interleukin-4,IL-4)变化的关系.方法 收集42例2013年11月至2014年10月我院确诊为泪腺炎的患者炎症期(炎症期组)与炎症缓解期(缓解期组)的血清,40例同年龄段于我院体检的正常人血清作为正常对照组,采用电化学发光法检测血清中E2、T、PRL的水平,酶联免疫吸附法测定血清中γ-IFN、IL-4水平.结果 泪腺炎患者炎症期组血清E2、PRL水平分别为(64.12±35.92) ng·L-1和(17.63±8.59) μg·L-1,显著高于缓解期组的(43.16 ±26.57)ng·L-1和(10.30±5.59) μg·L-1及正常对照组的(41.92±21.68)ng·L-1和(9.08±2.61) μg·L-1,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);炎症期组与缓解期组血清T分别为(0.80±1.36) μg·L-1和(0.79±1.42) μg·L-1,与正常对照组的(1.76±2.49) μg·L-1相比差异均有统计学意义(均为P ＜0.05).炎症期组血清γ-IFN、IL-4水平分别为(353.12±108.36)ng·L-1和(1200.43±314.69)ng·L-1,显著高于缓解期组的(192.68±43.16)ng·L-1和(919.38±227.16)ng·L-1及正常对照组的(190.93±36.40)ng·L-1和(853.37±172.31)ng·L-1,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).E2与γ-IFN、IL-4水平呈正相关(均为P＜0.05);T与γ-IFN、IL-4水平呈负相关(均为P＜0.05);PRL与γ-IFN、IL-4水平呈正相关(均为P＜0.05).女性患者炎症期组血清γ-IFN水平为(344.46±112.06)ng·L-1,高于男性的(292.98±71.27)ng·L-1(P＜0.05),E2/T比值为665.36,明显高于男性的13.91(P ＜0.05).结论 泪腺炎患者血清中性激素E2、PRL的升高、T的降低及E2/T比例失调可能介导Th1、Th2细胞免疫通路的平衡紊乱从而致病.女性体内高水平的雌激素可能是导致女性易患自身免疫性疾病的主要原因.     

增生性糖尿病视网膜病变玻璃体中结缔组织生长因子的定量分析

目的 定量测定结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)在增生性糖尿病视网膜病变(proliferative di-abetic retinopathy,PDR)患者玻璃体中的浓度,探讨其在PDR发病机制中的作用.方法 采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法定量检测27眼PDR、5眼非增生性糖尿病视网膜病变及5眼正常对照组玻璃体中CTGF的浓度.结果 PDR组玻璃体中CTGF浓度(567.09±181.15)ng·L-1明显大于对照组(128.06±57.28)ng·L-1及非增生性糖尿病视网膜病变组(150.70±52.39)ng·L-1(P均<0.01).PDR组中Ⅵ期患者玻璃体中CTGF浓度(706.17±88.78)ng·L-1大于Ⅳ期(349.20±110.60)ng·L-1及Ⅴ期(526.70±122.50)ng·L-1(P均<0.01).结论 PDR患者玻璃体中CTGF浓度升高可能与视网膜新生血管纤维膜的形成有关,CTGF在PDR发展过程中起着一定作用.     

不同浓度肽聚糖对角膜上皮细胞Toll样受体(TLR)2和TLR4表达的影响

目的 研究不同浓度肽聚糖对角膜上皮细胞Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)2和TLR4表达的影响.方法 原代培养C57小鼠角膜上皮细胞,随机分为对照组(无肽聚糖刺激)及按照肽聚糖刺激浓度分为10 mg·L-1组、30 mg·L-1组、80 mg·L-1组(作用时间均为12 h);按照肽聚糖刺激时间分为12 h组、24 h组、36 h组(作用浓度均为30mg·L-1),应用实时荧光定量PCR与流式细胞术检测各组TLR2、TLR4 mRNA和蛋白的表达量.结果 与对照组(1.00±0.14、1.00±0..01)相比,10 mg·L-1组(4.35±0.46、3.53±0.50)、30 mg· L-1组(8.06±0.72、5.31±0.34)、80 mg· L-1组(2.93±0.46、2.23±0.04)的TLR2、TLR4 mRNA表达增加,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);与对照组(1.00±0.14、1.00±0.01)相比,12h组(2.94±0.46、2.23±0.50) TLR2、TLR4 mRNA表达增加,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).与对照组相比,各浓度组和12 h组角膜上皮细胞TLR2、TLR4蛋白表达均增加,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 肽聚糖可以刺激小鼠角膜上皮细胞TLR2、TLR4 mRNA和蛋白表达增加,提示感染性角膜炎的发生、发展可能与角膜上皮细胞TLR2、TLR4识别病原体并参与炎症反应有关.     

缺氧条件下移植培养视网膜分泌NO、ET-1和8-iso-PGF2α的变化

目的 观察缺氧对移植培养视网膜分泌一氧化氮(nitric oxided,NO)、内皮素-1(endothelin-1,ET-1)和8-iso-前列腺素F2α(prostaglandin F2α,PGF2α)的影响及曲安奈德(triamcinolone acetonide,TA)对该过程的干预作用.方法 在体外移植培养大鼠视网膜基础上,无酚红DMEM培养液中加入终浓度为200 μmol·L-1的CoCl2建立化学缺氧模型.实验分4组:缺氧组(H组)、TA处理组(T组)、缺氧+TA处理组(HT组)和正常对照组(C组),其中T组和HT组培养液中加入100 mg·L-1 TA.采用硝酸还原酶法、放射免疫法和高效液相色谱方法检测各组视网膜培养24 h后NO、ET-1和8-iso-PGF2α的浓度.结果 H组、T组、HT 组和c组移植视网膜培养液中NO浓度分别为(157.6±13.2)μmol·L-1、(93.2±17.1)μmol·L-1、(121.6±7.3)μmol·L-1、(106.4±15.6)μmol·L-1;ET-1浓度分别为(231.2 ±15.7)ng·L-1、(147.1 ±15.7)ng·L-1、(143.5±7.3)ng·L-1、(169.3±5.5)ng·L-1;8-iso-PGF2α浓度分别为(350.3±67.5)μg·L-1、(154.1 ±24.0)μg·L-1、(176.9±75.0)μg·L-1、(236.1±36.5)μg·L-1.缺氧处理后NO、ET-1、8-iso-PGF2a分泌均明显增加,H组与C组比较,差异均有统计学意义(t=3.342、3.454、2.975,P=0.002、0.001、0.005);正常移植视网膜经TA处理后,T组与C组相比,NO分泌水平无明显变化(t=1.493,P=0.145),而ET-1、8-iso-PGF2a分泌均受到抑制(t=2.177、3.124,P=0.037、0.004);TA可抑制缺氧处理的视网膜NO、ET-1、8-iso-PGF2a分泌,HT组与H组相比,差异均有统计学意义(t=2.731、2.705、3.342,P=0.010、0.011、0.002).结论 缺氧能刺激视网膜生成分泌NO、ET-1和8-iso-PGF2a,TA可抑制该过程.TA可抑制正常视网膜ET-1和8-iso-PGF2a分泌,对NO分泌无明显作用.     

外伤性眼内炎兔房水中细胞因子的表达

目的分析干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)在兔眼外伤后不同时间房水中的浓度变化,探讨眼内炎的发病机制。方法将18只实验兔随机分为3组,每组6只兔。Ⅰ组为正常对照组,Ⅱ组和Ⅲ组右眼建立外伤性眼内炎模型,并将金黄色葡萄球菌接种于Ⅲ组受伤眼的玻璃体内。ELISA法测定造模前及造模后6h、12h、24h、48h、96h房水中IFN-γ、IL-6、IL-8、TGF-β的浓度;于6h、12h、24h、48h、96h、8d、16d分别用裂隙灯及间接显微镜观察眼部炎症情况并评分。结果造模后Ⅱ组炎症反应明显较Ⅲ组轻,造模12h后两组各时间点临床炎症评分间差异均有统计学意义(均为P<0.05)。Ⅱ组和Ⅲ组兔房水中IFN-γ在造模后均升高,24h时达到高峰,分别为(516.45±20.80)ng.L-1、(508.21±31.45)ng.L-1,与造模前(337.15±17.25)ng.L-1相比差异均有统计学意义(均为P<0.05);造模后24hIL-6在Ⅱ组和Ⅲ组兔房水中的浓度即达到高峰,分别为(61.69±2.11)ng.L-1、(61.81±2.18)ng.L-1,与造模前(46.34±2.09)ng.L-1相比差异均有统计学意义(均为P<0.05);Ⅱ组和Ⅲ组兔房水中IL-8在造模后48h浓度达到高峰,分别为(66.78±2.00)ng.L-1、(64.94±3.39)ng.L-1,与造模前(44.50±1.40)ng.L-1相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。造模后24hTGF-β在Ⅱ组和Ⅲ组兔房水中的浓度最低,分别为(288.79±7.17)ng.L-1、(293.99±1.93)ng.L-1,与造模前(404.45±2.86)ng.L-1相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论外伤性眼内炎导致机体免疫系统破坏,房水中细胞因子表达发生变化,因此在眼内炎的早期,应联合采取免疫干预措施来控制炎症反应。     

整合素β1介导的ERK/MAPK通道在人晶状体上皮细胞转分化中的作用

目的研究转化生长因子-β2(transforming growth factor β2,TGF-β2)对培养的人氉晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)整合素β1、磷酸化ERK(pERK)及F-actin表达的影响,探讨整合素β1介导的ERK/MAPK通路在HLEC转分化中的作用。方法体外培养的HLEC,加入不同浓度(0ng·L-1和10ng·L-1、33ng·L-1、100ng·L-1、333ng·L-1、1000ng·L-1)的TGF-β2处理不同时间(12h、24h、48h、72h),采用MTT法测定TGF-β2对HLEC增殖的影响,并确定最佳干涉浓度和时间用于后续实验。实验分2组,实验组用含最佳干涉浓度TGF-β2的培养基培养HLEC,对照组使用无血清培养基培养,于最佳干涉时间对2组细胞行免疫细胞化学染色检测HLEC中整合素β1、pERK及F-actin的表达,RT-PCR检测整合素β1、pERK及F-actin mRNA的表达。结果 TGF-β2抑制HLEC的增殖,呈浓度和时间依赖性,TGF-β2的最佳干涉终浓度为100ng·L-1,作用48h后达到最大抑制效果。TGF-β2增加HLEC整合素β1、pERK及F-actin的表达,相对表达量分别为0.116±0.031、0.123±0.028、0.140±0.033,均较对照组(0.045±0.011、0.025±0.009、0.079±0.024)明显升高(均为P<0.01)。RT-PCR结果显示,TGF-β2明显促进整合素β1mR-NA、pERK mRNA及F-actin mRNA的表达,相对表达量分别为0.658±0.146、0.582±0.171、0.760±0.193,较对照组(0.246±0.051、0.338±0.092、0.138±0.027)明显升高(均为P<0.01)。结论 TGF-β2抑制了HLEC的增殖,促进整合素β1、pERK及F-actin的表达,整合素β1介导的ERK/MAPK信号通路可能参与了HLEC转分化过程,导致后囊膜混浊。     

99Tc-MDP对兔实验性葡萄膜炎房水及血清细胞因子的影响

目的 探讨99锝-亚甲基二膦酸盐(99Tc-MDP,商品名为云克)对兔实验性葡萄膜炎的治疗作用.方法 将实验兔21只随机分为生理盐水对照组、地塞米松治疗组、99Tc-MDP治疗组,每组各7只.ELISA法测定实验性兔葡萄膜炎动物模型造模前、造模后5 d、给药治疗后10 d、停药后5 d房水白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)及转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)含量值、血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)及干扰素γ(interferon γ,IFN-γ)含量值.结果 生理盐水对照组房水中IL-10和TGF-β在给药后10 d分别为(86.2±51.2)ng·L-1、(91.2±67.9)ng·L-1,均低于造模后5 d的(95.1±44.7)ng·L-1、(135.6±106.3)ng·L-1;给药后10 d血清TNF-α及IFN-γ分别为(151.9±57.9)ng·L-1、(4.7±1.2)ng·L～,均低于造模后5 d的(175.6±96.0)ng·L-1、(5.8±2.3)ng·L-1.地塞米松治疗组给药后10 d房水IL-10和TGF-β分别为(106.9±28.5)ng·L-1、(168.1±56.6)ng·L-1,高于造模后5 d的(82.7±41.4)ng·L-1和(117.4±45.5)ng·L-1;给药后10 d血清TNF-α及IFN-γ分别为(80.3±23.4)ng·L-1、(3.2±2.3)ng·L-1,低于造模后5 d的(188.2±104.9)ng·L-1、(5.7±3.6)ng·L-1.99Tc-MDP治疗组给药后10 d房水IL-10和TGF-β分别为(136.2±47.2)ng·L-1、(183.1±79.6)ng·L-1,高于造模后5 d的(98.1±31.3)ng·L-1和(131.7±53.4)ng·L-1;给药后10 d血清TNF-α及IFN-γ分别为(82.7±66.1)ng·L-1、(2.8±1.4)ng·L-1,均低于造模后5 d的(191.7±72.4)ng·L-1、(6.8±4.1)ng·L-1;与生理盐水对照组比较,地塞米松治疗组及99Tc-MDP治疗组均可使兔房水IL-10及TGF-β升高,血清TNF-α及IFN-γ降低,差异均有统计学意义(P均<0.05).但地塞米松治疗组与99Tc-MDP治疗组之间比较差异无统计学意义.结论 99Tc-MDP有升高兔实验性葡萄膜炎房水中IL-10和TGF-β及降低血清中TNF-α和IFN-γ的作用.由于其全身并发症少,可能成为有前景的葡萄膜炎治疗用药.     

SDF-1在增生性糖尿病视网膜病变中的表达及意义

目的 观察基质细胞衍生因子(stromal cell derivedfactor-1,SDF-1)在糖尿病视网膜新生血管膜和玻璃体中的表达水平,并探讨其与增生性糖尿病视网膜病变(proliferativedibetic retinopathy,PDR)程度的相关性.方法 采用免疫组织化学法,对12例PDR患者视网膜新生血管膜上的SDF-1表达情况进行检测.采用双夹心酶联免疫吸附测定法对PDR组20例、PDR引起的新生血管性视网膜病变组10例、增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)组20例和正常人组10例的玻璃体中SDF-1浓度进行检测.结果 在12例新生血管膜的标本中10例有SDF-1的阳性表达.PDR组玻璃体中,SDF-l浓度为(351.31±120.30)ng·L-1,PDR引起的新生血管性视网膜病变组为(1 161.49±103.43)ng·L-1,PVR组为(72.59±8.78)ng·L-1,正常人组<62.5 ng·L-1;PDR组与PDR引起的新生血管性视网膜病变组、PVR组SDF-1含量相比,差异均有统计学意义(t=-18.17、10.31,P<0.001).结论 SDF-1参与了糖尿病视网膜新生血管的形成;玻璃体中的SDF-1浓度与PDR程度呈正相关.     

IL-6对甲状腺相关眼病分化后眼眶脂肪细胞瘦素mRNA表达的影响

目的 探讨白介素-6(interleukin-6,IL-6)对体外培养的甲状腺相关眼病(thyroid associated ophthalmopathy,TAO)分化后眼眶脂肪细胞瘦素mRNA表达的影响.方法 取TAO患者行眼眶减压术的眼眶脂肪组织,体外培养眼眶前脂肪细胞,诱导分化,采用0.5 μg·L-1、5 μg·L-1和50 μg·L-1的IL-6处理分化后的脂肪细胞24 h(设空白对照组),以及5 μg·L-1的IL-6分别处理分化后的脂肪细胞0 h、12 h、24 h、48 h,实时荧光定量PCR检测瘦素mRNA的表达.结果 体外培养的眼眶前脂肪细胞在诱导分化刺激下,分化为脂肪细胞;0.5 μg·L-1、5 μg·L-1和50 μg·L-1的IL-6作用24 h,瘦素mRNA表达分别为1.61±0.53、0.88±0.62、0.21±0.56,随质量浓度的增大而下降,呈量效依赖性,但与对照组(1.84±0.82)相比,差异没有统计学意义(P＞0.05);5 μg·L-1的IL-6作用12 h、24 h、48 h,瘦素mRNA表达分别为1.43±0.46、1.05±0.62、0.20±0.75,随时间的延长而下降,呈时效依赖性,但与0 h组(1.73±0.31)相比,差异没有统计学意义(P＞0.05).结论 IL-6对TAO分化后眼眶脂肪细胞的瘦素mRNA表达有下调作用,但无统计学意义.     

飞秒激光辅助的白内障手术对2型糖尿病患者术中房水细胞因子表达的影响

目的　检测合并2型糖尿病的白内障患者行飞秒辅助的白内障手术时术中房水中前列腺素E₂（prostaglandin E₂,PGE₂）、白细胞介素6（interleukin 6,IL-6）、白细胞介素1β（interleukin 1β,IL-1β）、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α,TNF-α）及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的浓度,并探讨其和术后糖尿病黄斑水肿（diabetes macular edema,DME）的关系。方法　前瞻性队列研究。将在武汉爱尔眼科医院接受飞秒激光辅助的白内障手术112例（112眼）患者纳入本研究,并按是否合并2型糖尿病分成两组:糖尿病组61例（61眼）,对照组51例（51眼）。在飞秒激光步骤完成之后立即收集2组房水样本。采用酶联免疫吸附方法检测房水样本中PGE₂、IL-6、IL-1β、TNF-α及VEGF的浓度。术前及术后均使用OCT检测并比较2组患者的黄斑中央区厚度。结果　糖尿病组房水样本中PGE₂浓度为（87.4±12.1）ng·L^-1、IL-6浓度为（39.7±6.6）ng·L^-1、IL-1β浓度为（59.2±7.2）ng·L^-1、TNF-α浓度（6.3±1.0）ng·L^-1、VEGF浓度为（274.1±40.4）ng·L^-1;对照组房水样本中PGE₂浓度为（67.6±9.4）ng·L^-1、IL-6浓度为（24.8±5.7）ng·L^-1、IL-1β浓度为（27.1±5.3）ng·L^-1、TNF-α浓度（3.1±0.5）ng·L^-1、VEGF浓度为（189.7±17.6）ng·L^-1。糖尿病组房水样本中的PGE₂、IL-6、IL-1β、TNF-α及VEGF的浓度均明显高于对照组（均为P<0.01）。房水样本中PGE₂、IL-6、IL-1β、TNF-α及VEGF的浓度释放与年龄、性别、激光固定时间及激光作用时间均无相关性（均为P>0.05）。糖尿病组术前黄斑中央区厚度为（142.5±7.6）μm,术后为（166.5±13.6）μm,术前术后无明显差异（P>0.05）。对照组术前黄斑中央区厚度为（139.4±10.2）μm,术后为（156.2±7.0）μm,术前术后差异无统计学意义（P>0.05）。结论　飞秒激光辅助的白内障手术中糖尿病患者术前术后黄斑中央区厚度均未发现明显差异,且所有患者均未出现术后黄斑水肿。     

玻璃体内注射Infliximab对实验性自身免疫性葡萄膜炎的治疗作用

目的观察玻璃体内注射Infliximab对实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)的治疗作用。方法雌性新西兰大白兔32只,随机分为3组,其中模型对照组和正常对照组各8只,治疗组16只。模型对照组和治疗组用牛血清蛋白作为异体抗原,玻璃体内、耳缘静脉两次注射法诱导EAU模型(双眼均造模)。造模成功后次日,各组分别行玻璃体内注射1次,正常对照组和模型对照组注射生理盐水0.1mL,治疗组注射10g·L-1Infliximab0.1mL。于造模前及造模后5d、10d、15d4个时间点行兔活体眼部检查,并抽取房水行ELISA法检测房水中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)和白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)的含量;各时间点摘除双侧眼球行组织病理学观察。结果造模前,各组房水中TNF-α和IL-2含量比较差异均无统计学意义。造模后5d,模型对照组和治疗组房水中TNF-α和IL-2含量差异均无统计学意义(均为P>0.05),但均较正常对照组高(均为P<0.05)。造模后10d、15d,模型对照组房水中TNF-α分别为(652.29±102.76)ng·L-1、(372.63±47.59)ng·L-1,治疗组分别为(395.88±48.97)ng·L-1、(140.44±41.69)ng·L-1,两组相比差异均有统计学意义(均为P=0.00);模型对照组房水中IL-2分别为(85.55±7.74)ng·L-1、(64.10±7.78)ng·L-1,治疗组分别为(40.89±8.81)ng·L-1、(26.48±7.71)ng·L-1,两组相比差异亦均有统计学意义(均为P=0.00)。造模后10d,治疗组的组织病理学显示炎症较模型对照组有明显减轻。正常对照组始终无阳性体征和病理改变。结论 Infliximab能显著抑制牛血清蛋白诱导的EAU模型房水中TNF-α、IL-2的产生,减轻EAU眼部炎症反应和病理损害,对EAU有治疗作用。     

体外骨髓间充质干细胞对脂多糖活化的视网膜小胶质细胞生物学功能的影响

背景 视网膜小胶质细胞(RMG)的活化在视网膜变性疾病的发病过程中发挥重要作用,趋化因子CX3C模体配体1(CX3CL1)参与小胶质细胞稳态的调节.骨髓间充质干细胞(BMSCs)可通过旁分泌的方式释放可溶性因子,保护中枢神经系统组织细胞的生物功能,但其对治疗视网膜变性疾病的途径和靶细胞是否为RMG尚不清楚. 目的 观察BMSCs对脂多糖(LPS)活化的RMG生物学功能的影响,探讨CX3CL1/CX3CR1信号通路对二者相互作用的影响.方法 采用视网膜胶质细胞混合培养和振荡分离的方法分离培养SD大鼠RMG,采用免疫荧光染色法观察细胞中CD11b、Iba1和谷氨酰胺合成酶(GS)的表达以鉴定培养的RMG.在细胞培养液中添加1 mg/ml的LPS液2μl以刺激RMG 24 h,然后将细胞分为LPS对照组、BMSCs组和CB-BMSCs组,其中BMSCs组将RMG与BMSCs共培养24 h,CB-BMSCs组将RMG与中和性抗体封闭CX3CL1的BMSCs共培养24 h,未予LPS刺激的RMG作为空白对照组.采用ELISA法检测共培养体系中RMG分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的变化;采用EdU法观察各组RMG的增生能力;采用流式细胞术检测RMG吞噬荧光微球后的平均荧光强度(MFI);利用Transwell小室试验检测RMG的迁移细胞数.结果 用视网膜胶质细胞混合培养和振荡分离的方法成功分离和培养出RMG,细胞中CD11b和Iba1阳性表达呈绿色荧光,GS呈阴性表达.空白对照组、LPS对照组、BMSCs组和CB-BMSCs组细胞上清液中TNF-α的分泌量分别为(2.55±0.97)、(24.91±3.07)、(20.38±2.97)和(24.90±1.88) ng/ml,总体比较差异有统计学意义(F=119.90,P＜0.05);IL-1β的分泌量分别为(1.12±0.36)、(10.40±2.76)、(7.00±1.75)和(9.55±1.11)ng/ml,总体比较差异有统计学意义(F=34.96,P＜0.05);其中BMSCs组TNF-α和IL-1 β分泌量均低于LPS对照组(均P＜0.05),而CB-BMSCs组与LPS对照组间TNF-α和IL-1β分泌量的差异均无统计学意义(均P＞0.05).各组间RMG增生率的总体比较差异有统计学意义(F=42.94,P＜0.05),其中BMSCs组RMG增生率明显低于LPS对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),而BMSCs组与CB-BMSCs组间差异无统计学意义(P＞0.05).各组间RMG的MFI值和迁移细胞数量的总体比较差异均有统计学意义(F=70.55、15.49,均P＜0.05),其中BMSCs组MFI值和迁移细胞数量均明显高于LPS对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05),而CB-BMSCs组与LPS对照组间MFI值和迁移细胞数量的比较差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 BMSCs能够抑制LPS活化的RMG的增生能力,可能通过CX3CL1/CX3CR1信号通路来抑制活化的RMG分泌促炎性因子,并增强RMG的吞噬和迁移能力.     

大肠杆菌内毒素诱导的大鼠眼内炎表现及细胞因子的表达

目的 观察大肠杆菌内毒素(LPS)诱导的大鼠眼内炎模型组织病理学特征和玻璃体内肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和LPS的表达模式.方法 采用随机数字表法将大鼠随机分为生理盐水对照组(SC组)136只、眼内炎组(EO组)168只、空白对照组(BC组)12只.E0组玻璃体腔注射5 μl LPS溶液诱导眼内炎动物模型;SC组注入等量无菌生理盐水;BC组不作任何干预.注射后6、12、24、48、72 h,5、7 d,观察大鼠眼部炎症表现并分别摘除各组眼球行组织病理学检查,并取其玻璃体检测细胞因子TNF-α、IL-1β和LPS的浓度.结果 EO组注射后6～72 h,眼内可见严重炎症反应,注射后7 d炎症基本消退.注射后24 h,眼内白细胞浸润数量为(1224.64±132.2)个/眼,达到高峰;注射后72 h,浸润细胞数量迅速下降至(342.25±47.7)个/眼.EO组注射后24 h,TNF-α和IL-1β浓度分别为(996.18±89.45)、(5556±1440)pg/ml,均达到高峰并持续至注射后48 h,随后迅速下降;注射后7 d,TNF-α和IL-1β浓度分别为(22.16±5.84)、(73.7±18.7)pg/ml.EO组注射后72 h,玻璃体腔内LPS含量迅速下降为(11.03±3.41)ng,7 d后玻璃体腔内LPS含量为(0.22±0.08)ng.结论 大鼠眼内炎模型的主要病理特征是大量白细胞眼内浸润,TNF-α、IL-1β的高水平表达以及玻璃体腔自发性细菌成分清除;TNF-α、IL-1β表达模式与LPS眼内清除过程一致.     

地塞米松对脂多糖诱导人视网膜色素上皮细胞炎症损伤及NLRP3/Caspase-1通路的影响

目的　探究地塞米松（Dex）对脂多糖（LPS）诱导人视网膜色素上皮（HRPE）细胞炎症损伤及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）通路的影响。方法　体外培养ARPE-19细胞株,MMT法检测不同浓度Dex处理细胞24 h、48 h、74 h对LPS诱导ARPE-19细胞存活率的影响,确定Dex最佳处理浓度和时间。ARPE细胞随机分为:正常对照组（NC组）、LPS组（5 mg·L^-1 LPS）、Dex组（0.20 mol·L^-1 Dex）、Dex+LPS组（0.20 mol·L^-1 Dex+5 mg·L^-1 LPS）,RT-qPCR检测各组细胞肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1β、IL-6、NLRP3、Caspase-1 mRNA相对表达量,ELISA法测定TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白表达水平,Western blot检测NLRP3、Caspase-1蛋白表达水平。结果　同一时间点,与NC组比较,LPS组ARPE-19细胞存活率均显著降低（均为P<0.05）,且随着Dex浓度增加,细胞存活率呈先升高后下降的趋势;0.20 mol·L^-1 Dex作用LPS诱导的ARPE-19细胞24 h时细胞存活率为(90.77±5.73)%,接近NC组,因此选用0.20 mol·L^-1Dex作用24 h用于后续实验。NC组与Dex组间TNF-α、IL-1β、IL-6、NLRP3、Caspase-1 mRNA相对表达量差异均无统计学意义（均为P＞0.05）。与NC组、Dex组比较,LPS组、Dex+LPS组TNF-α、IL-1β、IL-6、 NLRP3、Caspase-1 mRNA及蛋白表达水平均显著升高,且Dex+LPS组TNF-α、IL-1β、IL-6 、NLRP3、Caspase-1 mRNA及蛋白表达水平均显著低于LPS组（均为P<0.05）。结论　Dex可能通过抑制NLRP3/Caspase-1通路减轻LPS诱导的HRPE炎症损伤。     

恒河猴血管内皮细胞移植替代角膜内皮细胞后房水血管内皮生长因子水平的变化

目的探索恒河猴血管内皮细胞移植替代角膜内皮细胞后房水血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)浓度的变化。方法实验组将体外培养增殖的恒河猴视网膜-脉络膜血管内皮细胞通过离心沉淀法移植到撕除后弹力层的恒河猴角膜内表面;对照组撕除角膜内皮层后,不做任何处理,直接原位缝合角膜植片。分别于术前及术后1周、2周、3周、4周、6周、8周、12周抽取房水,通过ELISA方法检测其中VEGF浓度,并进行统计分析。结果实验组和对照组术后1周时VEGF浓度差异无统计学意义(P>0.05),术后2周、3周、4周时实验组VEGF浓度分别为(374.74±3.30)ng·L-1、(419.06±1.39)ng·L-1、(481.83±3.36)ng·L-1,同时间点对照组分别为(271.11±1.12)ng·L-1、(345.18±3.27)ng·L-1、(380.33±5.03)ng·L-1,差异均具有统计学意义(均为P<0.05),相应时间点实验组显著高于对照组。实验组术后1周、2周、3周、4周VEGF浓度的差异均有统计学意义(均为P<0.05),各时间点与术前(128.75±3.83)ng·L-1差异均有统计学意义(均为P<0.05)。对照组术后各时间点VEGF浓度与术前差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论血管内皮细胞移植到角膜内表面后,房水VEGF浓度在术后4周内持续升高,之后稳定在一较高水平。     

胰岛素样生长因子结合蛋白-6对RPE细胞增殖和迁移的影响

目的探讨胰岛素样生长因子结合蛋白-6(insulin-like growth factor binding protein-6,IGFBP-6)对视网膜色素上皮(retinal pigmented epithelium,RPE)细胞增殖和迁移的影响。方法用IGF-Ⅱ(50mg·L-1)、PDGF(20mg·L-1)、VEGF(40mg·L-1)和TGF-β(4mg·L-1)干预ARPE-19细胞6h,以诱导细胞增殖,再加入不同浓度IGFBP-6(1mg·L-1、10mg·L-1、100mg·L-1、500mg·L-1、1000mg·L-1)作用24h、48h后,通过MTS实验观察OD值的变化,研究IGFBP-6对细胞增殖的影响。细胞划痕实验分为IGF-Ⅱ组(50mg·L-1)、IGF-Ⅱ+IGFBP-6组(含IGF-Ⅱ50mg·L-1和IGFBP-6500mg·L-1)、无血清培养液组的实验,细胞划痕24h、48h后,计算各组细胞移行愈合率的变化,从而研究IGFBP-6对细胞迁移的影响。结果 MTS比色法显示一定浓度的IGFBP-6(100mg·L-1、500mg·L-1、1000mg·L-1)可以抑制IGF-Ⅱ诱导的ARPE-19细胞增殖(P<0.05),各浓度IGFBP-6对PDGF、VEGF、TGF-β诱导的细胞增殖均无明显影响(均为P>0.05);细胞划痕实验显示,IGF-Ⅱ组、IGF-Ⅱ+IGFBP-6组、无血清培养液组的细胞移行愈合率[分别为(24h:43.91%±3.85%、29.76%±2.49%、26.12%±2.33%;48h:66.09%±1.67%、59.88%±3.43%、57.05%±2.49%)]差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 IGFBP-6能够抑制IGF-Ⅱ诱导的RPE细胞增殖和迁移。     

结膜松弛症泪液中细胞因子的检测

目的:分析结膜松弛症泪液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)的表达量的变化。方法:收集25例结膜松弛症患者和13例正常对照组的泪液样本,毛细管从每眼收集15μL泪液,采用放射免疫测定法测定结膜松弛症组和正常对照组的泪液中TNF-α,IL-6和IL-8的浓度并进行统计学分析。结果:结膜松弛症患者TNF-α浓度为19.05±6.35ng/mL,正常对照组TNF-α浓度为14.13±7.76ng/mL;IL-6浓度为13.16±8.97pg/mL,正常对照组IL-6浓度为4.24±3.97pg/mL;IL-8浓度为34.40±20.73pg/mL,正常对照组IL-8浓度为18.31±11.62pg/mL;两组之间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:应用放射免疫的方法可检测泪液中的细胞因子含量,结膜松弛症组泪液中三种细胞因子的含量显著增高提示结膜松弛症可能与细胞因子的增加及免疫反应有关。