NaOH消蚀法制备胎儿脱细胞真皮基质的研究

目的：探索NaOH消蚀法对胎儿真皮基质的成分及其形态结构的影响。方法：使用NaOH消蚀法制备胎儿皮肤的脱细胞真皮基质(ADM)，应用组织化学和免疫组织化学染色方法检测细胞的余留及细胞外基质成分的破坏情况，应用扫描电镜观察ADM的构筑。结果：NaOH消蚀处理16h即可去除真皮细胞成分。制备的ADM韧性好，勿需戊二醛交联。弹性纤维的含量有所减少而胶原纤维形态完整，排列正常，保留了基本的真皮构筑。HLA—DR呈阴性，Fibronectin(FN)呈弱阳性，Laminin(LN)和Ⅳ型胶原均呈阴性。结论：NaOH消蚀法简易经济，去除细胞成分较彻底，所制备的ADM韧性好，胶原纤维形态完整，排列正常，但对基膜的成分及结构破坏较重。     

神经细胞外基质材料制备及修复周围神经缺损的实验研究

目的 :制备一种新型天然神经细胞外基质材料 ,通过动物实验研究 ,探讨其修复周围神经干节段性缺损的可行性。方法 :采用NaOH消蚀法 ,制备家兔坐骨神经细胞外基质材料 ,行扫描电镜观察及生物相容性实验 ,用于桥接修复家兔坐骨神经节段性缺损并以自体神经修复作为对照 ,术后通过肌电图检测、再生神经纤维组织学观察等方法 ,证实该支架可有效地引导和促进神经纤维再生。结果 :(1)经NaOH消蚀处理的坐骨神经组织 ,其细胞成分被完全消蚀掉 ,神经膜管保持原有的构筑特征 ;无明显排异反应并可降解吸收。 (2 )该材料和自体神经移植修复周围神经干节段性缺损在电生理和组织结构的恢复方面经统计学处理无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 :此方法制备的细胞外基质材料可有效地桥接修复周围神经干节段性缺损 ,为其临床应用奠定实验基础。     

NaOH消蚀骨基质材料的研制及其修复骨缺损实验研究

目的:制备骨基质支架并与自体红骨髓联合移植修复兔桡骨节段性骨缺损,探讨该支架作为骨组织工程载体的可行性。方法:采用NaOH消蚀技术,制备出家兔骨细胞外基质支架,行扫描电镜观察及生物相容性实验,并与自体红骨髓联合移植于兔桡骨节段性骨缺损模型,通过X线、生物力学等检查,比较其联合红骨髓及单纯支架移植修复节段性骨缺损的疗效。结果:(1)经NaOH消蚀处理后,骨组织中的细胞成分被彻底清除,细胞外基质成分-胶原纤维仍维持三维立体网状结构;无明显排异反应且可降解吸收。(2)支架+自体红骨髓修复骨缺损,4周即出现成骨现象,8周可修复骨缺损;单纯支架移植,约在12周修复。生物力学测试结果,复合红骨髓组抗压强度大于对照组(P<0.05)。结论:此方法制备的骨基质材料与红骨髓联合,可有效地修复节段性骨缺损,是理想的骨组织工程天然载体。     

NaOH消蚀法制备脱细胞真皮基质修补腹壁疝

背景：与其他疝修补材料相比,脱细胞真皮基质具有易血管化、抗感染、从而可用替代传统补片用于感染腹壁缺损重建等特点。 目的：观察NaOH消蚀法制备的脱细胞真皮基质作为修补材料应用于腹疝的应用价值。 方法：以全厚猪皮制成脱细胞真皮基质,45只SD雄性大鼠制备腹壁疝模型,随机数字表法分为腹壁疝组：直接缝合皮肤,Marlex网组和脱细胞真皮基质组：分别应用大小为3.5 cm×4.0 cm的Marlex网和脱细胞真皮基质缝合皮肤;观察修复后1周时有无腹壁疝发生,脱细胞真皮基质组修复后1,2,3,5,10周分别取材,其中每周各组取4只用于苏木精-伊红染色,光镜观察。修复后第5周Marlex网组和脱细胞真皮基质组各取6只用于抗张力试验。 结果与结论：术后1周脱细胞真皮基质组与Marlex网组腹壁疝发生率均显著低于腹壁疝组(P < 0.001)。脱细胞真皮基质的胶原纤维无明显变化,即有少量成纤维细胞植入,术后2周可见新生血管,术后5周脱细胞真皮基质内部血管密度基本稳定。将单独脱细胞真皮基质片与Marlex网行抗张力试验,Marlex网的抗张力显著高于脱细胞真皮基质(P < 0.001)。但植入体内5周后,脱细胞真皮基质筋膜组织的抗张力高于Marlex-筋膜组织(P < 0.05)。提示复合消蚀制备的脱细胞真皮基质可以作为良好的疝修补材料。     

新型脱细胞半月板细胞外基质的制备及其生物相容性的研究

目的探索新型脱细胞半月板细胞外基质(d MECM)的制备方法,并对其细胞相容性进行研究。方法无菌条件下收集新鲜的猪半月板组织,切碎,采用湿法粉碎、差速离心的方法制备dM ECM生物材料。通过天狼猩红、甲苯胺蓝染色方法分别比较天然半月板与dM ECM中胶原以及糖胺聚糖含量的区别;采用Hoechst 33258荧光染色法观察脱细胞后dM ECM中DNA残留情况。将P3代的兔内侧半月板细胞种植在铺有dM ECM的盖玻片上,体外培养7 d后行扫描电镜检测其细胞相容性。结果本实验制备的dM ECM天狼猩红、甲苯胺蓝染色均呈阳性,并且与天然半月板染色类似;dM ECM行Hoechst33258染色呈阴性;扫描电镜结果显示种植于d MECM表面上的半月板细胞黏附紧密,可见大量细胞ECM的分泌。结论本实验制备的dM ECM可以很好地保留天然半月板ECM成分,有效地去除DNA物质,并且具有良好的生物相容性,是未来半月板组织工程领域非常有前景的支架材料。     

细胞外基质材料在骨组织工程中的研究进展

由疾病、外部创伤等原因引起的大骨骼缺损的治疗需要通过骨移植手术,寻找安全易得的替代骨已经成为临床上的重要课题,近年来快速发展的组织工程骨为解决这一难题提供了一种新的途径。支架材料作为组织工程的核心要素,其表面性状、结构,机械性能和生物学性能均能调控细胞的各种生命活动和体内组织的修复再生。细胞外基质由于其天然性、低免疫排斥性和优异的生物相容性等特点,已被广泛用作再生医学的支架材料。通过回顾近些年来细胞外基质材料在骨组织工程中的应用,阐述多种细胞外基质材料的构建修饰方法及其体外、体内的生物学效应,并对其在骨再生领域的应用前景进行展望。     

实验性器官硬化细胞外基质及间质效应细胞的研究

我们应用免疫组化方法结合形态观察，对大鼠实验性肝，肺和肾小球的纤维化，硬化过程中的细胞外基质（ＥＣＭ－ＦＮ，ＣｏｌⅠ，Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ）；以及肝脏的Ｉｔｏ细胞，肺泡壁原始间叶细胞（ＰＭＣ）和肾小球系膜细胞的骨架蛋白（ＤＭ，ＶＭ，α－ＳＭＡ）表型变化，进行了动态的对比研究，发现在纤维化硬化过程中，上述三种细胞大量增生并伴细胞骨架蛋白表型和ＥＣＭ分泌的系列改变。同时对此类细胞在修复过程中演变的共同规律和某些     

输尿管细胞外基质修复输尿管缺损的实验研究

为了寻求理想的输尿管替代材料 ,采用生化方法制备了一种新型的组织工程材料细胞外基质 (Extra-cellular Matrix ,ECM) ,并用于替代同种异体输尿管缺损 ,结果表明 ECM很好的促进了缺损组织的再生 ,替代术后 16周再生组织的形态与功能已与正常组织无明显差异。异体输尿管细胞外基质是一种理想的输尿管替代材料     

内皮祖细胞在膀胱细胞外基质上的生长及分化

背景：传统的组织工程膀胱支架材料本身无血管结构,植入体内后面临血管化不足的问题。 目的：观察内皮祖细胞与膀胱细胞外基质的生物相容性。 方法：分离培养兔内皮祖细胞,种植于兔膀胱细胞外基质上与其复合培养。将复合生长材料植入兔背部皮下检测其组织相容性。 结果与结论：兔内皮祖细胞能够在膀胱细胞外基质表面正常黏附、生长、增殖,细胞形态良好。内皮祖细胞-膀胱细胞外基质植入兔体内后1周时,可见材料周围炎症反应明显,粘连严重,出血较多;苏木精-伊红染色可见组织中较多炎性细胞浸润,胶原及弹性纤维排列松散。植入后8周时可见材料已降解成碎细丝状,与周围组织融合生长在一起,但质地略脆,易出血;苏木精-伊红染色可见组织中已无明显炎症细胞浸润反应,胶原及弹性纤维排列紧密并且有新生血管长入其中。结果表明内皮祖细胞与膀胱细胞外基质具有良好的相容性,复合培养物与体内组织具有良好的相容性。     

骨组织工程基质材料的现状及展望

通过阐述理想骨组织工程细胞外基质材料的要求,并总结生物类材料、生物陶瓷类材料、聚合物类材料和复合类材料在骨组织工程中用作细胞外基质材料的优缺点,认为理想的骨组织工程细胞外基质材料最好由生物陶瓷类材料、人工合成聚合物类材料或天然聚合物类材料组成,并含有最佳的生长因子缓释系统的多孔三维立体泡沫,这种复合型细胞外基质材料的研制是骨组织工程研究中十分重要而迫切的任务。     

人包皮组织脱细胞基质的制备与生物相容性

目的 制备人包皮组织脱细胞基质移植物（AMGs）,探讨其浸提液对兔尿道黏膜细胞毒性。方法 制备人包皮组织脱细胞基质后,通过Masson 染色观察脱细胞后基质的表征,扫描电子显微镜观察其孔径大小。体外培养尿道黏膜细胞,采用免疫荧光鉴定其AE3表达。 尿道黏膜细胞与AMGs 基质浸提液体外共培养,MTT法检测 AMGs 浸提液对 尿道黏膜细胞毒性。结果 Masson 染色显示细胞去除干净,只有胶原蛋白构成的支架,扫描电镜显示支架的孔径为20～50 μm,分布均匀,形态良好。适当浓度的AMGs 基质浸提液对尿道黏膜细胞无明显毒性。结论 人包皮组织脱细胞基质为理想的 AMGs 支架材料,制备的 AMGs 材料细胞毒性小,有一定的实用价值。     

原发性高血压患者细胞外间质水平及其临床意义

检测血清Ⅲ型前胶原 (PCⅢ )、层粘连蛋白 (LN)和透明质酸 (HA)的水平与研究其对高血压心肌纤维化患者的临床价值。高血压左心室肥大组 35例、高血压不伴左心室肥大组 30例及对照组 4 0名 ,用超声心动图测定左心室重量指数 (LVMI) ,用酶联免疫吸附分析法 (ELISA)测定血清PCⅢ、LN和HA。高血压左心室肥大组较高血压不伴左心室肥大组和对照组的血清PCⅢ、LN和HA含量明显增高 (P <0 .0 1 )。结论是血清PCⅢ、LN和HA可以作为高血压左心室肥大患者心肌纤维化的观察指标     

液氮冷冻保存对主动脉瓣膜细胞活性及细胞外基质的影响

液氮冷冻保存是目前最好的同种心瓣膜保存方法 ,但液氮冷冻保存也可导致瓣膜的结构损害。为了探讨液氮冷冻保存对主动脉瓣膜组织结构的影响情况 ,本实验通过采用XTT比色法、形态学观察、免疫组织化学荧光染色法研究了不同冷冻保存时间对猪主动脉瓣膜细胞活性及细胞外基质的影响。研究结果显示 ,液氮保存后瓣膜细胞活性明显下降 (P <0 .0 5 ) ,细胞超微结构损害增加 ,可溶性细胞外基质纤维连接蛋白与硫酸软骨素不同程度流失 ,间质胶原纤维排列紊乱。但在冻存时间小于 3月时 ,损害的程度与冻存时间无明显关系。     

The Effects of Extracellular Matrix on Tissue Engineering Construction of Cartilage in Vitro

In the study of bone and cartilage diseases in our laboratory, chondrocyte stereo-differentiation mod-el was cultured into cartilage tissue. The cultured cartilage tissue was closely similar to natural tissue inboth histological condition and biochemical metabolism. The model mimicked the chondrocyte differenti-ation and metabolism in vivo completely〔1〕. We studied some essential extracellular matrices, includingcollagen, proteoglycan(PG) and hyaluronic acid(HA) on the construction of grow…     

Modulation of Growth Factor Action by the Extracellular Matrix

Growth factors were historically defined as molecules produced by the body to regulate cell growth and proliferation. After the identification of their receptors and the intracellular signaling machinery they activate, it is now clear that they are involved in the regulation of multiple processes essential for development and normal tissue function. The present review gives a brief overview of growth factor action. Receptor activation and signaling are discussed, highlighting the role of extracellular matrix interactions.     

肺癌细胞与胞外基质选择裱衬表面粘附力学的研究

肿瘤细胞与细胞外基质的粘附特性与肿瘤的侵袭转移密切相关,作者力图揭示人肺癌细胞相应的生物力学和生物流变学特征,采用微管吸吮技术定量测定体外培养的低转移人肺腺癌（PAa_)细胞和高转移人肺巨细胞癌（PG）细胞与细胞外基质重要组份胶原蛋白IV和层粘连蛋白（LN）的粘附力学特性。结果表明：与胶原蛋白IV裱衬在的粘附力,在PA,aPG细胞均较裱衬前增加,但在较低胶原浓度（1．00ug/ml,2.00ug/ml)时PAa细胞的粘附力增加幅度大于PG细胞,与LN和固定浓度（2．00ug/ml)胶原蛋白IV的复合裱衬面的粘附力为PAa细胞大于PG细胞,在较低LN浓度,PAa(0.625ug/ml),PG(0.625ug/ml,1.25ug/ml)细胞粘附力相对降低,尤以PG细胞中的降低程度和幅度为大,因此,癌细胞与细胞外基质的粘附和去粘附行为主要通过膜受体介导,从而影响癌细胞生物学特性及侵润转移能力。     

羟基磷灰石涂层与骨组织界面生物相容性与毒理学研究

依据卫生部新近制定的《生物材料和制品的生物学评价标准》(简称《标准》),确定五项评价项目,按照标准的生物学试验方法,对目前临床应用的羟基磷灰石制品进行系统研究。结果表明：国产羟基磷灰石制品除有轻微细胞毒性外,其致敏性、溶血性、致突变性和组织相容性均符合《标准》要求,临床应用安全。     

牛骨胶原基质的制备和性能研究

研究了从牛密质骨制备用作生物医学异种移植物的加工方法。将从屠宰场获得的牛腿骨骨干中部密质骨切割成一定的形状,然后经过脱脂和脱蛋白,制得可加工成任意形状的材料。用脱脂剂、非胶原蛋白除剂和蛋白酶消化剂等进行处理,脱除非胶原蛋白并切除胶原端肽,骨块经干燥,γ射线消毒后,密封包装。并进行各种理化性能测试,包括红外光谱、X射线衍射光谱、差热扫描分析(DSC)、单轴拉伸力学性能测试以及扫描电镜观察。结果表明,经过一系列处理后,获得的骨胶原基质(BBCM)是一种白色、具有一定孔隙结构的材料,保留了天然骨的无机成分和大部分胶原蛋白,具有良好的力学性能和较低的免疫原性,是一种潜在的骨移植材料和组织工程基质材料。