胸腔积液和外周血T-SPOT.TB对结核性胸膜炎患者的诊断效果

目的研究胸腔积液和外周血T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)对结核性胸膜炎患者的诊断效果。方法选取2015年1月至2016年12月该院就诊的疑诊结核性胸膜炎患者77例,对所有患者进行细菌学、影像学、并发症、组织病理学、生化、胸腔积液常规、癌胚抗原等检查,并对所有患者进行诊断评估。将诊断为结核性胸膜炎的45例患者作为研究组,非结核伴胸腔积液的32例患者作为对照组,对2组患者进行胸腔积液和外周血T-SPOT.TB检测,评价2种检测方法的特异度、敏感度、阴性预测值、阳性预测值、阳性似然比、阴性似然比。结果胸腔积液T-SPOT.TB检测研究组阳性率为100.00%,对照组阳性率为9.38%;外周血T-SPOT.TB检测研究组阳性率为91.11%,对照组阳性率为12.50%。外周血阴性预测值为87.5%,阳性预测值为91.11%,敏感度为88.89%,特异度为87.50%,阳性似然比为12.54,阴性似然比为0.19;胸腔积液阴性预测值为90.63%,阳性预测值为100.00%,敏感度为100.00%,特异度为90.63%,阳性似然比为20.39,阴性似然比为0.05。外周血阴性预测值、阳性预测值、敏感度、特异度、阳性似然比均低于胸腔积液,差异有统计学意义(P0.05)。结论胸腔积液T-SPOT.TB检测对诊断结核性胸膜炎有较高的特异度和敏感度,且优于外周血T-SPOT.TB检测,对于临床诊断不明的胸腔积液患者,可进行胸腔积液T-SPOT.TB检测。     

TaqMan探针法荧光定量PCR检测脑脊液细菌方法的建立及应用

目的 建立TaqMan探针法荧光定量PCR检测方法,用于脑脊液标本细菌的快速检测.方法 针对细菌的16S rRNA基因,设计合成细菌的通用引物和革兰阳性菌、革兰阴性菌分型探针,通过构建质粒和制作脑脊液模拟标本来研究引物和探针的检测特异度和敏感度.结果 两种革兰分型探针只对相应的细菌可以检测到荧光信号,乙肝病毒DNA、白色念珠菌及人基因组DNA检测结果均为阴性,此方法最低可以检测到10个拷贝的质粒DNA以及102CFU/ml的金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌.结论 TaqMan探针法荧光定量PCR检测细菌的特异度和敏感度高,检测快速,对脑脊液细菌的早期诊断有重要意义.     

细菌革兰双检荧光定量PCR方法检测新生儿败血症

目的 建立细菌革兰阴、阳性菌双重实时荧光定量检测体系,探讨其检测败血症的临床应用价值.方法 分析细菌16SrRNA基因序列,在高度保守区自行设计通用引物和革兰阴性和阳性分型探针,选取临床较常见的35株菌株进行细菌革兰双检实时荧光定量PCR方法检测;对临床疑为败血症的512例新生患儿分别做细菌革兰双检荧光定量PCR和血培养检测.结果 细菌革兰双检荧光定量PCR具有较好的敏感性和特异性,能稳定检测到10 CFU左右细菌数.35株菌株进行细菌革兰双检荧光定量PCR检测,均为阳性,且革兰阴、阳性菌能正确分型和定量.巨细胞病毒、EB病毒、乙肝病毒、新型隐球菌及白色念珠菌、人基因组DNA及空白对照均为阴性.对临床疑为败血症的512份新生患儿标本中,革兰双检荧光定量PCR检测血标本阳性率8.20%(42/512),血培养阳性率6.25%(32/512),前者明显高于后者,差异具有统计学意义(χ<'2>=8.10,P<0.01),30例非感染性疾病同期患儿血标本革兰双检荧光定量PER及细菌培养均为阴性.若以血培养作为对照,细菌革兰双检荧光定量PCR方法的诊断敏感度为100%,特异度为97.92%,准确性98.05%.结论 建立了用通用引物和分型双荧光探针的细菌革兰双检荧光定量PER方法.其检测快速、准确,具有很大的临床推广价值.     

实时定量PCR在血流感染病原体快速检测中的应用

目的探讨实时定量PCR在血流感染病原体检测中的临床应用价值。方法选取收治的80例患者共92份血液标本进行实时定量PCR检测,同时进行血液培养,比较两种方法的特异度和敏感度。结果在92份标本当中,两种方法共同阴性标本66份(71.7%),两种方法共检测出病原体10种。实时定量PCR和血培养共同检出阳性标本7例,两种方法的一致性为79.3%。实时定量PCR的阴性预测值是0.94,敏感度是0.64,特异度是0.82。其中15份标本实时定量PCR阳性而血培养阴性,4份标本血培养阳性而实时定量PCR阴性。其中2份标本所培养出的病原体不在实时定量PCR的检测范围内,且实时定量PCR也不能检测光滑念珠菌。结论实时定量PCR是快速检测血液感染标本的有价值方法,但不能完全替代血培养。     

内毒素和降钙素原在尿路感染中的诊断价值

目的探讨尿液内毒素、血清降钙素原在尿路感染中的临床诊断价值。方法收集755例中段尿标本进行细菌培养,用UF-1000i尿沉渣分析仪检测白细胞计数(WBC)、细菌计数,同时进行尿液内毒素和血清降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)检测,结果进行比较。结果 755份标本中,尿培养阳性标本256份。其中革兰阴性菌199例(77.7%),革兰阳性菌45例(17.6%),真菌12例(4.7%)。细菌性尿路感染其WBC、细菌计数、CRP、PCT值均明显高于真菌和培养阴性的患者,均有统计学差异(P<0.001)。PCT灵敏度81.6%,特异度81.9%,阴性预测值89.6%。尿液内毒素在革兰阴性菌引起尿路感染中明显升高,而革兰阳性菌、真菌感染和培养阴性的标本中均变化不明显,有显著性差异(P<0.01)。内毒素在革兰阴性菌引起的尿路感染中灵敏度91.4%,特异度93.7%,阴性预测值90.3%。结论革兰阴性菌是引起尿路感染的主要致病菌,尿液内毒素、血清PCT对辅助诊断泌尿系统感染有很高的价值,可提高灵敏度和特异度,并有助于区分尿路感染致病菌的种类。     

聚合酶链反应诊断细菌和真菌性中枢神经系统感染的临床价值

目的探讨聚合酶链反应(PCR)在细菌和真菌性中枢神经系统感染快速诊断中的临床价值。方法收集137例中枢神经系统感染患者留存的脑脊液进行DNA提取,采用细菌和真菌通用引物扩增病原体DNA并进行序列测定,对比同期脑脊液培养方法与PCR方法的检测结果。结果 137份脑脊液标本中PCR检测到细菌50株,真菌6株,脑脊液培养检测到细菌38株,真菌5株;PCR检测法灵敏度为40.9%,特异度为100%,阳性预测值为100%,阴性预测值为38.2%,诊断效率为56.7%;传统培养法则分别为31.4%、100%、100%、34.7%、44.4%。PCR的灵敏度、阴性预测值和诊断效率均明显优于传统培养方法,特异度和阳性预测值与培养法相当,两方法鉴定菌种的符合率为97.7%。结论通用引物PCR扩增法具有快速、特异、灵敏、准确等特点,对细菌和真菌性中枢神经系统感染的病原学快速诊断具有重要的应用价值。     

检测艰难梭菌感染的五种方法比较

目的 比较分析用于美国医院临床微生物实验室的5种艰难梭菌感染检测方法 ,从中选择1种适于早期诊断艰难梭菌感染的灵敏、特异、简单、快速及经济的实验方案.方法 对174份临床送检的腹泻患者粪便标本同时用TGC、Premier Toxin A&B EIA(A/B-EIA)、C.Diff Quick Chek Complete(D-EIA)、BD GeneOhm Cdiff assay(BD-PCR)和实验室发展的PCR(LD-PCR)方法 进行艰难梭菌的检测.以金标准TGC法作为参比标准,评价各种检测方法 的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值.结果 TGC法检测174份腹泻患者大便标本,艰难梭菌感染的阳性率为13.8%(24/174).与TGC法比较,4种检测方法 的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为:A/B-EIA 62.5%、99.3%、93.8%、94.3%;D-EIA 66.7%、98.7%、88.9%、94.9%;BD-PCR 83.3%、98.7%、90.9%、97.4%;LD-PCR 79.2%、93.3%、65.5%、96.6%.所有标本中,至少1种方法 检测为阳性的标本共计34份,其中15份标本5种方法 检测结果 均为阳性.D-EIA法检测结果 中,18份标本GDH及毒素A/B均为阳性,23份仅GDH阳性,133份GDH及毒素A/B均为阴性.18份D-EIA检测阳性标本全部与BD-PCR检测结果 一致,16份与TGC法检测结果 一致.24份TGC阳性标本中,有22份包括在41份GDH抗原呈阳性的标本中.D-EIA检测为假阴性的8份标本中,4份BD-PCR检测为阳性.根据本实验结果 ,D-EIA与BD-PCR相结合的二步法检测方案灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为83.3%、98.7%、90.9%、97.4%.结论 从技术角度评价,以BD-PCR法为最优.结合D-EIA与BD-PCR的二步法检测方案,是对临床送检标本进行艰难梭菌感染检测的灵敏、特异、简便、快速、经济的检测方案.     

血清降钙素原、白介素-17及内毒素联合检测在诊断老年呼吸道细菌性感染中的价值

目的分析血清降钙素原(PCT)、白介素-17(IL-17)、内毒素联合检测诊断老年呼吸道细菌性感染的临床价值。方法选择90例老年呼吸道细菌性感染患者作为观察组,选择同期收治非细菌性病毒感染(非特异性肺炎)老年患者40例作为对照组。测定治疗前血清PCT、IL-17、内毒素水平,分析PCT、IL-17、内毒素联合检测对老年呼吸道细菌性感染的诊断价值。结果观察组血清PCT、内毒素、IL-17水平均显著高于对照组(P0.05);革兰阴性菌(G-)感染组血清PCT、内毒素、IL-17水平均显著高于革兰阳性菌(G+)感染组(P0.05);重症肺炎组患者血清PCT、内毒素、IL-17水平均显著高于非重症肺炎组(P0.05);内毒素诊断G-菌阳性老年呼吸道细菌性感染曲线下面积(AUC)为0.876,敏感度、特异度分为95.2%、91.8%,诊断G+菌阳性老年呼吸道细菌性感染AUC、敏感度、特异度分别为0.601、66.3%、85.5%。PCT、内毒素、IL-17联合诊断G-菌阳性、G+菌阳性老年呼吸道细菌性感染综合价值均显著优于单项诊断(P0.05)。结论 PCT、IL-17、内毒素对鉴别老年呼吸道细菌性感染与非特异性肺炎有较好的临床价值,3项联合诊断老年呼吸道细菌性感染有较高的敏感度与特异度。     

ICU患者血浆内毒素定量检测在革兰阴性菌败血症早期诊断中的应用

目的研究血浆中内毒素定量检测在革兰阴性菌败血症早期诊断中的临床应用价值。方法采集医院疑似革兰阴性菌败血症的112例重症监护病房患者静脉血标本,同时进行血浆内毒素定量检测和血培养检测,比较两种检测方法的差异。结果革兰阴性菌败血症患者组血浆内毒素含量为(109.6±112.1)pg/mL,明显高于非败血症组的(6.5±5.9)pg/mL,差异有统计学意义(P<0.01)。以20pg/mL为临界值时,血浆内毒素含量检测阳性49例(43.7%),阴性63例(56.3%);血培养阳性24例(21.4%),阴性88例(78.6%)。血浆内毒素检测具有较好的敏感度(85.7%)和特异度(90.3%),阳性预测值(87.6%)和阴性预测值(92.3%)均较高;血培养的敏感度较低(46.2%),但特异度较高(92.4%),阳性预测值和阴性预测值分别为86.5%和80.7%。两种方法联合检测后敏感度提高至95.2%,特异度为88.9%。结论血浆内毒素定量测定具有快速、敏感的特点,对革兰阴性菌败血症的早期诊断具有一定的临床应用价值。     

痰标本甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌培养与聚合酶链反应快速检测方法的比较

目的评价聚合酶链反应(PCR)快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)方法在痰标本中的应用。方法同时采集痰标本送细菌培养、真菌培养和PCR快速检测,以细菌培养方法为金标准,评价PCR方法的灵敏度和特异度。结果 PCR方法检测痰标本MRSA的灵敏度为88.9%,特异度为73.6%,阳性预测值为36.4%,阴性预测值为97.5%,均较文献报道的鼻拭子PCR的灵敏度和特异度低。结论将痰标本PCR检测MRSA用于临床动态监测MRSA的流行尚缺乏进一步的数据支持,但PCR结果不受其他细菌生长的影响,而且阴性预测值高达97.5%,在排除MRSA感染或定植方面有一定价值。     

Combination of conventional and endotoxin-specific limulus tests for measurement of polysaccharides in sera of rabbits with experimental systemic candidiasis.

Factor G, the coagulation enzyme from limulus amebocytes, is activated by (1-->3)-beta-D-glucan but not by endotoxin. The endotoxin-specific limulus test, which is devoid of factor G, reacts only with endotoxin. However, the conventional limulus test which includes factors G and C, reacts with not only endotoxin but also with (1-->3)-beta-D-glucan. In this study, the culture supernatant of Candida albicans in RPMI medium activated the conventional limulus test, but not the endotoxin-specific limulus test. All five rabbits inoculated intravenously with Candida albicans (1.0 x 10(7) CFU/rabbit) showed increased levels of reactivity with the conventional limulus test, whereas no elevation in the levels of the endotoxin-specific limulus test was observed in the sera of any infected rabbits. Only one serum sample from rabbit No. 5 on day 8 showed a positive Cand-tectest. The difference in the titers of the two limulus tests was suggestive of a diagnosis of Candida infection.     

革兰氏阴性细菌感染患者血清内毒素检测临床探讨

目的 探讨细菌内毒素(ET)检测在革兰氏阴性细菌感染性疾病患者中的临床应用。方法 对200例送细菌培养检测的患者,同时抽取血标本,采用鲎试剂动态浊度法对其行ET水平检测。结果 送检标本中有112例ET水平>0.030 EU/ml; 39例患者标本培养检出细菌,革兰氏阴性菌(G^-)24例,ET检测结果0.264±0.109 EU/ml,均>0.115 EU/ml; 革兰氏阳性菌(G⁺)15例,ET结果0.023±0.025 EU/ml,两组比较,差异有统计学意义(t=28.23,P<0.05)。结论 血液ET升高与G^-菌感染有相关性,患者先行血ET检测有利于对患者G^-菌感染早期诊断和治疗提供理论依据。     

血清PCT、IL-6、内毒素联合检测诊断老年呼吸道细菌性感染的临床价值

目的 探究血清降钙素原(PCT)、白细胞介素-6(IL-6)、内毒素联合检测诊断老年呼吸道细菌性感染的临床价值.方法 选择2019年10月至2020年10月我院收治的240例老年呼吸道感染患者作为研究对象,经胸部X线检查及实验室细菌学检测结果将患者分为细菌感染组和非细菌性感染组,各120例;选择同期在我院进行常规体检的...     

Use of limulus assay to compare the biological activity of peptidoglycan and endotoxin.

The gelation of a lysate prepared from the amebocytes of Limulus polyphemus, the horseshoe crab, has been used to detect endotoxin-like material in clinical studies and in "in vitro" experiments. The investigation of blood samples from 54 hospitalized patients suspected of having endotoxemia, revealed a positive limulus test in 14. Infections due to gram-positive organisms were not associated with positive assays. These results were in agreement with the observation that living gram-positive microorganisms - in contrast to gram-negative bacteria - did not initiate lysate gelation when studied "in vitro". Only very high concentrations of peptidoglycan, isolated from the cell walls of various gram-positive bacteria, induced the reaction. Therefore, these findings support the view, that the limulus test is relatively specific for the detection of gram-negative bacterial endotoxin and endotoxemia.     

Rapid diagnosis of septic arthritis using 16S rDNA PCR: a comparison of 3 methods

Few studies address the utility of molecular techniques for diagnosis of infection in synovial fluid (SF). We evaluated 3 different methods using 16S rDNA polymerase chain reaction (PCR) on 63 specimens for the diagnosis of joint infection. SF samples were classified as normal, inflammatory, or septic based on the patient's clinical and laboratory results. Samples were analyzed by conventional PCR using primers for the bacterial 16S rDNA gene and by real-time PCR utilizing 2 different sets of primers for the target gene 16S rDNA. PCR results were compared to culture results. All inflammatory and normal SF samples were culture negative. There was concordance with 10 of the 16 septic samples by 2 of the PCR methods. When comparing 3 methods for rapid detection of septic arthritis, real-time PCR using SYBR-Green I and conventional PCR demonstrated favorable test characteristics, but need further study.     

鲎试剂灵敏度对玻璃注射器细菌内毒素检测的影响

为考察不同灵敏度的鲎试剂对玻璃注射器细菌内毒素检测的影响,本文采用10EU/ml、1EU/ml、0.5EU/ml及0.25EU/ml等四种灵敏度的鲎试剂对487批的本院供应室采集的玻璃注射器样品进行了检测。结果,除灵敏度为0.25EU/ml的鲎试剂检出5批阳性(1.03％)之外,其余均为阴性。表明采用高灵敏度的鲎试剂可提高玻璃注射器的阳性检出率。     

乳糖酸阿奇霉素注射液细菌内毒素检测方法的研究

目的对乳糖酸阿奇霉素注射液进行凝胶法干扰试验,检测乳糖酸阿奇霉素注射液细菌内毒素。方法按照中国药典细菌内毒素检查方法（2010,~版二部）,对2批样品进行干扰试验和细菌内毒素检查。结果浓度为0．83mg／mL的样品稀释液对标示灵敏度为0．25EU／mL的鲎试剂无干扰作用。结论使用细菌内毒素检查法检查乳糖酸阿奇霉素注射液中的细菌内毒素是可行的,可用细菌内毒素检查法代替家兔热原检查法。     

医院透析液污染状况调查

目的了解医院血透室透析液污染状况,提出整改措施。方法采用细菌计数法和鲎试验方法,对医院血液透析室透析用水中菌落数及内毒素含量进行监测分析。结果对各组水样均采集32份,透析用水和透析液内毒素均不超标,合格率均为100%。透析用B液细菌超标率为22%,出口液细菌超标率为10%,入口液细菌超标率为20%。结论该医院血液透析室透析用水质量合格,但透析液存在细菌超标现象,建议临床使用透析浓缩干粉。     

血清(1-3)-β-D葡聚糖检测在深部真菌感染诊断中的临床价值

目的探讨血清(1-3)-β-D葡聚糖(BG)检测(G试验)在深部真菌感染早期诊断中的临床应用与价值。方法选取2015年10月至2016年4月重庆市急救医疗中心132例疑似深部真菌感染患者作为研究对象,将38例确诊患者和拟诊患者视为阳性组,其余94例视为阴性组,采用金山川MB-80微生物快速动态检测系统测定血清BG水平,并与患者体液真菌培养结果进行比较分析。结果阳性组、阴性组血清BG水平分别为(150.8±133.2)、(25.7±20.1)pg/mL,差异有统计学意义(t=5.76,P0.05)。G试验诊断深部真菌感染的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为78.9%、85.1%、68.1%、91.0%;真菌培养诊断深部真菌感染的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为57.9%、80.9%、52.3%、82.6%。结论血清BG检测方法快速、准确、简便,在深部真菌感染早期诊断及临床合理用药指导中具有临床应用价值。