醒脑静注射液保护大鼠脑缺血-再灌注损伤及血脑屏障的作用研究

目的:对醒脑静注射液通过改善血脑屏障的通透性进而保护大鼠脑缺血-再灌注损伤的作用进行研究。方法:采用大脑中动脉阻塞法(MACO)建立大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤模型,以神经功能评分、脑梗死体积和脑组织形态学综合评价10、15 mL/kg醒脑静注射液腹腔注射对大脑缺血-再灌注损伤的保护效应,通过静脉注射伊文思蓝考察醒脑静注射液对大鼠血脑屏障通透性的影响,采用免疫组化和Western blot考察脑紧密连接蛋白ZO-1的表达。结果:经神经功能评分、梗死体积分析及HE染色分析脑组织形态学特征,表明以10、15 mL/kg剂量醒腹腔注射脑静注射液能显著减轻大鼠脑缺血-再灌注的损伤,对血脑屏障通透性考察发现醒脑静注射液组大鼠脑内伊文思蓝含量显著低于模型组,且脑紧密连接蛋白ZO-1表达显著高于模型组。结论:醒脑静注射液能逆转大鼠脑缺血-再灌注损伤对血脑屏障的破坏,降低血脑屏障通透性,从而减轻脑组织在缺血-再灌注中的损伤。     

冰片配伍灯盏花素对大鼠脑缺血再灌注损伤血脑屏障通透性的影响

目的:研究冰片配伍灯盏花素后对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障通透性的影响。方法:50只雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、冰片组、灯盏花素组及冰片配伍灯盏花素组。线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型,缺血2 h,再灌注24 h进行检测。伊文思蓝法检测血脑屏障通透性,免疫印迹法检测ZO-1和Claudin-5蛋白的表达,RT-PCR法检测ZO-1和Claudin-5基因的表达。结果:冰片配伍灯盏花素能显著降低脑组织中EB浓度(9.87±1.15),提高ZO-1和Claudin-5蛋白(0.83±0.06,1.05±0.07)和mRNA(1.51±0.07,1.58±0.08)的表达。结论:冰片配伍灯盏花素对血脑屏障的保护作用可能与冰片促进灯盏花素透过血脑屏障有关。     

三化汤对大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障损伤的保护作用

目的:观察三化汤对大鼠脑缺血再灌注血脑屏障损伤的保护作用.方法:将大鼠随机分为假手术组、模型组、三化汤低、高剂量组(7.2,14.4 g?kg-1 )ig、尼莫地平组(8.1 mg?kg-1)ig.大鼠常规饲养3d后灌胃给药,每日1次,连续给药7d后采用线栓法制备脑缺血再灌注大鼠模型.采用比色法检测大鼠脑组织伊文思蓝(EB)的含量,采用酶联免疫法检测大鼠血清S100B蛋白的含量.结果:假手术组大鼠脑组织EB含量、血清S100B蛋白含量减少,模型组大鼠脑组织EB含量、血清S100B蛋白含量显著升高(P＜0.01);与模型组比,各用药组大鼠脑组织EB含量、血清S100B蛋白含量显著降低(P＜0.05),其中三化汤高剂量组、尼莫地平组比三化汤低剂量组降低明显(P＜0.05).结论:大鼠脑缺血再灌注后可引起血脑屏障的损伤,三化汤对大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障损伤具有一定的保护作用.     

三化汤对脑缺血再灌注大鼠脑组织胞质附着蛋白表达的影响

目的:观察三化汤对脑缺血再灌注大鼠脑组织胞质附着蛋白(ZO-1)表达的影响.方法:将大鼠随机分为假手术、组、模型组、三化汤低、高剂量组(7.2,14.4g·kg-1)、尼莫地平组(8.1 mg·kg-1).大鼠常规饲养3d后灌胃给药,每日1次,连续7d后采用线栓法制备脑缺血再灌注大鼠模型.脑缺血2h再灌注24 h后,取脑组织采用免疫组织化学法检测各组大鼠ZO-1的表达.结果:与假手术组比,模型组脑组织ZO-1表达显著降低(P＜0.01);与模型组比,三化汤高剂量组脑组织ZO-1表达显著升高(P＜0.01),尼莫地平组脑组织ZO-1表达也明显升高(P＜0.05),三化汤低剂量组脑组织ZO-1表达升高不明显,无显著性差异;三化汤高剂量组升高脑组织ZO-1表达较尼莫地平组明显(P＜0.05).结论:三化汤对大鼠脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用.     

黄芪注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠MMP-9和IL-1β的影响

目的：观察黄芪注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠MMP-9及IL-1β的影响,探讨其对脑缺血再灌注损伤保护作用的机制。方法：采用大脑中动脉局灶性栓塞（MCAO）模型,干湿比重法检测脑含量,免疫组化法检测脑组织MMP-9的表达,ELISA法检测脑组织IL-1β的含量。结果：与模型组相比,黄芪注射液可显著降低脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织MMP-9和IL-1β的表达及含水量。结论：黄芪注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠有明显的抗炎和减轻水肿的保护作用。     

黄芪对脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及JUN蛋白表达的影响

目的观察黄芪对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及其相关基因JUN蛋白表达的影响,探讨其对脑缺血再灌注损伤保护作用的机制。方法分别采用TUNEL及免疫组织化学与医学图像分析相结合的方法检测大鼠脑组织神经细胞凋亡及JUN蛋白的表达。结果与假手术组相比,模型组大鼠脑组织神经细胞凋亡数目及JUN蛋白表达增多;与模型组相比,黄芪组大鼠脑组织神经细胞凋亡数目及JUN蛋白表达减少。结论黄芪可通过抑制脑缺血再灌注后神经细胞凋亡而发挥脑保护作用,其抗凋亡机制可能与下调JUN蛋白的表达有关。     

rt-PA静脉溶栓治疗脑梗死后对血脑屏障及ZO-1蛋白表达影响的实验研究

目的:研究重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)对大鼠脑梗死溶栓治疗后脑组织中ZO-1蛋白的表达,探讨不同剂量rt-PA对脑梗死溶栓后血脑屏障的影响.方法:采用大鼠自体血栓栓塞法制备大脑中动脉闭塞动物模型,采用免疫荧光染色技术检测ZO-1蛋白的表达水平,以及比色法测定血脑屏障对伊文思蓝(evans blue,EB)的通透率.结果:与正常对照组及假手术组比较,低剂量rt-PA在溶栓治疗后脑组织中ZO-1蛋白表达升高,而且EB含量显著减低;而高剂量rt-PA组ZO-1表达降低,脑组织中EB含量显著升高.结论:低剂量rt-PA在大鼠脑梗死溶栓治疗后可能对血脑屏障存在保护作用.     

乌司他丁对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤caspase-3表达的影响

目的观察乌司他丁对脑缺血再灌注损伤的保护作用,探讨其作用机制。方法健康雄性Wistar大鼠24只,随机分为4组,假手术组、生理盐水对照组、乌司他丁10 000 U/kg治疗组,乌司他丁50 000 U/kg治疗组。采用线栓法制备大脑中动脉缺血再灌注模型,缺血1 h,再灌注24 h。HE染色观察大鼠脑组织的病理改变、免疫组织化学法检测脑组织caspase-3蛋白的表达、TUNEL法检测脑组织细胞凋亡数。结果乌司他丁可明显降低脑缺血再灌注中脑组织caspase-3蛋白的表达,减少脑细胞凋亡,与生理盐水对照组相比差异有统计学意义（P〈0.01）。结论乌司他丁对脑缺血再灌注损伤有保护作用,可能与下调脑组织caspase-3蛋白表达,减少脑组织凋亡有关。     

刺五加注射液对脑缺血再灌注大鼠转化生长因子β1表达的影响

目的:探讨刺五加注射液对脑缺血再灌注大鼠转化生长因子-β1表达的影响.方法:采用免疫组织化学方法检测脑缺血再灌注大鼠脑组织中转化生长因子β1蛋白含量.结果:应用刺五加注射液的治疗组大鼠脑组织中TGF-β1在各时间点的表达与模型组相应时间点相比明显增加(P＜0.01或P＜0.05).结论:刺五加注射液能显著提高脑缺血再灌注大鼠脑组织中TGF-β1蛋白表达,对缺血性损伤脑组织具有保护作用.     

补肾祛痰活血汤对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织BBB及VEGF的影响

目的:探讨补肾祛痰活血汤对SD大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障(BBB)通透性及血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法:将50只SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、治疗组、对照组;治疗组予补肾祛痰活血汤干预,对照组予消栓通络胶囊干预,正常组、模型组、假手术组予相应量的生理盐水。术前3 d灌胃给药干预,在造模后72 h,评估血脑屏障对伊文思蓝(EB)的通透性,测定SD各组大鼠脑组织含水量的变化,检测血清血管内皮生长因子(VEGF)含量。结果:在造模后72 h,模型组、治疗组、对照组SD大鼠脑组织中EB含量、脑组织含水量均高于正常组、假手术组;模型组SD大鼠脑组织中EB含量、脑组织含水量均高于对照组;对照组SD大鼠脑组织中EB含量、脑组织含水量均高于治疗组;脑组织EB含量及含水量与脑组织损伤程度相关。缺血再灌注模型组SD大鼠血清VEGF高于正常组、假手术组,治疗组高于对照组,对照组高于模型组(P0.01)。结论:补肾祛痰活血汤能抑制脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障破坏,减轻脑组织水肿,减轻缺血再灌注脑组织损伤,可促进局灶性脑缺血再灌注后VEGF的表达。     

益脑康胶囊对脑梗死大鼠溶栓后血脑屏障的保护作用及对ZO-1蛋白表达的影响

目的:观察益脑康胶囊(YC)配伍对急性脑梗死大鼠重组组织型纤溶酶原激活剂rt-PA溶栓后血脑屏障通透性及紧密连接的附着蛋白(ZO-1)蛋白表达的影响.方法:将SD大鼠随机等分为假手术组、溶栓组、益脑康胶囊低剂量组(1 g·kg-1)、益脑康胶囊高剂量组(3 g·kg-1),连续口服3d.建立大鼠自体血栓栓塞大脑中动脉闭塞模型,采用分光光度计法及Western blot法分别检测大鼠脑组织伊文思蓝含量及ZO-1蛋白的表达.结果:与假手术组相比,各组脑内EB含量均显著增高,ZO-1蛋白水平明显降低;与溶栓组相比,YC低剂量组脑内EB含量差异不显著,高剂量组脑内EB含量显著下降,高、低剂量组ZO-1蛋白表达水平均显著增加;与YC低剂量组相比,高剂量组脑内EB含量显著下降,ZO-1蛋白表达水平显著增加.结论:益脑康胶囊可以减轻溶栓后血脑屏障破坏,可能与其上调ZO-1蛋白的表达有关.     

电针调控AQP4、ZO-1的表达对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响＊

目的 探讨电针“水沟穴”、“百会穴”是否可以通过调控AQP4、ZO-1的表达从而减轻脑缺血再灌注大鼠血脑屏障损伤。方法 选用健康的雄性SD大鼠随机分为5组：正常对照组（NC）、MCAO模型组（M）、电针组（EA）、AQP4 siRNA组（siRNA）和空载质粒组（EP）。采用改良后的Longa线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型，电针组于模型构建成功后5 min针刺大鼠的“水沟穴”和“百会穴”，并接电针，AQP4 siRNA组和空载质粒组右侧脑室缓慢注入AQP4 siRNA表达质粒和不含AQP4 siRNA的空载质粒。采用神经功能缺损评分观察各组大鼠神经功能缺损程度，CV染色法测定各组大鼠脑半球肿胀率及脑水肿情况，Western blot技术测定各组大鼠AQP4、ZO-1蛋白含量，RT-PCR测定各组大鼠AQP4、ZO-1mRNA含量。结果 与NC组相比较，M组及EP组大鼠神经功能缺损程度及脑水肿程度较重，AQP4蛋白及mRNA表达明显上升，ZO-1蛋白及mRNA表达明显下降；与M组及EP组相比较，EA组及siRNA组大鼠神经功能缺损程度及脑水肿程度较轻，AQP4蛋白及mRNA表达显著下降，ZO-1蛋白及mRNA表达显著上升。结论 电针可以有效抑制AQP4的表达及ZO-1的降低，从而改善血脑屏障的损伤，减少脑水肿的产生，促进神经功能恢复。调控AQP4、ZO-1的表达可能是电针“水沟穴”和“百会穴”改善脑缺血再灌注后脑水肿及血脑屏障损伤的作用机制之一。     

补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血损伤血脑屏障的影响

目的观察补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血损伤血脑屏障的保护作用,阐明该方抗脑缺血的机理。方法采用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型。将SD大鼠随机分为假手术组、模型组和补阳还五汤组,造模后24 h给药,补阳还五汤组给予补阳还五汤灌胃,假手术组、模型组给予等量生理盐水灌胃。造模后7 d,评价各组大鼠神经功能并处死取材,四氮唑红染色观察大鼠脑组织梗死体积,HE染色观察大鼠脑微血管的一般形态,ELISA检测大鼠脑组织内基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-2、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白水平及血清中血管性血友病因子(vWF)的表达。结果与模型组比较,补阳还五汤组能显著改善神经功能行为评分,减少脑梗死体积,降低MMP-9、MMP-2、VEGF、vWF水平。病理观察结果显示,补阳还五汤组脑组织病理变化较模型组减轻。结论补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血具有保护作用,其作用可能与保护血脑屏障,抑制MMP-9、MMP-2、VEGF、vWF的表达有关。     

青藤碱对脑缺血再灌注损伤大鼠前列腺素E2含量和血脑屏障通透性的影响

目的探讨青藤碱(Sin)对缺血再灌注损伤大鼠前列腺素E2(PGE2)含量和血脑屏障通透性的影响。方法将大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、Sin低剂量治疗组和Sin高剂量治疗组,线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型。Sin低(30mg/kg)、高剂量(60mg/kg)治疗组于术前30min分别给予大鼠腹腔注射。用放免法检测缺血90min再灌注24h大鼠额顶部皮质PGE2含量、脑含水量和伊文斯蓝(EB)含量变化。结果与假手术组比较,缺血再灌注组额顶部皮质PGE2含量明显升高;与缺血再灌注组比较,Sin高、低剂量治疗组PGE2含量明显降低,高、低剂量组之间差异有统计学意义。与假手术组比较,缺血再灌注组脑含水量和EB含量明显升高;与缺血再灌注组比较,Sin高、低剂量治疗组脑含水量和EB含量明显降低,高、低剂量组之间差异有统计学意义。结论Sin对缺血再灌注脑损伤具有保护作用,其机制可能与减少再灌注损伤后PGE2含量、减轻血脑屏障通透性有关。     

脑清喷鼻微乳对急性脑梗死大鼠 血脑屏障通透性影响及其机制

目的: 观察脑清喷鼻微乳对急性脑梗死大鼠血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)超通透性影响及其相关分子机制。方法: 采用自身栓子法制备大鼠大脑中动脉栓塞模型(MCAO),筛选后随机分为对照组、模型组、脑清喷鼻微乳组,并给予药物干预。脑清喷鼻微乳组予脑清喷鼻微乳0.19 mL·kg^-1(相当于含麝香酮0.011 mg·kg^-1)滴鼻给药,每日3次,对照组与模型组给予相同时间点等量生理盐水滴鼻。每组于1,3,7 d 3个时相对大鼠进行神经功能缺损评分后,取材观察各时相大鼠大脑皮质缺血区神经元及内皮细胞形态,检测伊文思蓝(EB)、紧密连接蛋白-1(zonula occludins protins-1,ZO-1)、层黏连蛋白(laminin,LN)及水通道蛋白-4(aquaporin protein-4,AQP-4)含量。结果: 与同一时相正常组相比,模型组Bederson's评分、EB及AQP-4蛋白含量明显升高(P<0.05),ZO-1、Laminin蛋白含量显著降低(P<0.05),神经元坏死较多及内皮细胞损害严重。与同一时相模型组相比,脑清喷鼻微乳组Bederson's评分、EB及AQP-4蛋白含量明显降低(P<0.05),ZO-1,Laminin蛋白含量显著升高(P<0.05),神经元存活率较高及内皮细胞损害较轻。同组内不同时相相比较,脑清喷鼻微乳组Bederson's评分、EB及AQP-4蛋白含量逐渐降低(P<0.05),ZO-1蛋白含量逐渐升高(P<0.05),Laminin蛋白含量3 d后逐渐升高(P<0.05),1 d时神经元及内皮细胞水肿最严重,7 d时神经元变性坏死最多,内皮细胞基膜及细胞器缺损最为严重。结论: 脑清喷鼻微乳通过调控血脑屏障(BBB)3层结构中的主要蛋白ZO-1,Laminin及AQP-4蛋白的含量,调节BBB通透性,保护BBB结构及功能的完整性,减少神经元凋亡,减轻可逆性神经元损伤,促进神经功能的恢复。     

脑脉泰胶囊对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤血脑屏障和 脑水肿 的影响

 目的 研究脑脉泰胶囊对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤血脑屏障和脑水肿的影响。 方法 大脑中动脉线拴法（ MCAO ）制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型：雄性 SD 大鼠随机分为假手术组（ sham ）、脑缺血再灌注模型组（ MCAO ）、脑脉泰大、中、小剂量组（ MCAO+ 脑脉泰 2.2 , 1.1 , 0.6 g ·kg^-1 ）和尼莫地平组（ MCAO+ 尼莫地平 1 × 10 ^-2 g ·kg^-1 ）,每组 10 只大鼠。大鼠大脑中动脉阻断 1.5 h ,再灌注 24 h 。伊文思兰（ EB ）法测定血脑屏障的损伤程度;用 TUNEL 法和免疫组化染色法分别检测缺血半暗带凋亡细胞和水通道蛋白（ AQP4 ）的表达;电镜观察脑组织超微结构。 结果 脑脉泰大、中 2 个剂量能显著减少大鼠实验性局灶性脑缺血的 EB 含量、降低脑含水量,脑缺血半暗带的凋亡细胞显著减少, AQP4 表达减少,与 MCAO 模型组比较,有显著性差异（ P <0.05 ）。电镜显示 MCAO 模型组神经细胞胞质水肿,神经元核不规则,核膜断续,线粒体肿胀、嵴断裂或空泡化,粗面内质网扩张。与 MCAO 模型组比较,脑脉泰组大鼠神经细胞水肿和线粒体损伤明显减轻。 结论 脑脉泰对脑缺血 / 再灌注损伤的保护作用和减轻脑水肿的机制,可能与抑制神经细胞凋亡,降低 AQP4 蛋白的表达,减少线粒体和血脑屏障的损伤有关。     

清开灵对缺氧体外血脑屏障紧密连接蛋白ZO-1表达的影响

目的观察缺氧对体外血脑屏障（blood brain barrier,BBB）紧密连接蛋白ZO-1表达的影响以及清开灵的干预作用。方法通过体外培养Balb/c小鼠脑微血管内皮细胞系形成BBB,采用缺氧缺糖24 h建立BBB缺血损伤模型,分别以荧光实时定量和Western blot的方法测定BBB紧密连接蛋白ZO-1的基因转录和蛋白表达水平,同时观察不同剂量清开灵对ZO-1表达的影响。结果与正常组相比,缺氧缺糖24 h可使BBB表达ZO-1明显减少（P〈0.01）。清开灵能够显著增加缺血后ZO-1的基因转录和蛋白表达水平,与模型组差异显著（P〈0.05或P〈0.01）。结论清开灵可通过改善脑缺血对BBB主要组成蛋白的表达,发挥其对缺血性脑中风的脑保护作用。     

茅莓总皂苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑水肿及血-脑脊液屏障变化的影响

目的：研究茅莓总皂苷(TSRP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑水肿及血脑屏障通透性的影响。方法：采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,在大鼠脑缺血2 h再灌注6,24,48,72 h分别测定脑含水量和伊文思蓝含量的变化及茅莓总皂苷各剂量组的影响。结果：与模型组比较茅莓总皂苷各剂量组均能不同程度降低脑含水量和伊文思蓝含量。结论：茅莓总皂苷各剂量组显著降低缺血2h再灌注6,24,48,72 h脑水肿和其对血脑屏障通透性,这可能是其减轻I/R时脑水肿的机制之一。     

加味四君子汤对脑缺血大鼠脑组织Occludin，ZO-1，Claudin-1蛋白及其mRNA表达的影响

目的:探讨加味四君子汤对脑缺血大鼠脑组织闭合蛋白(Occludin),密封蛋白-1(Claudin-1),闭锁连接蛋白-1(ZO-1)表达的影响,并探讨相关的作用机制。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,依达拉奉组(3.2×10~(-3)g·kg~(-1)),加味四君子汤加减低、中、高剂量组(4.77,9.54,19.08 g·kg~(-1))。采用线栓法制备大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,治疗7 d后处死,运用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠缺血侧脑皮质区Occludin,ZO-1,Claudin-1蛋白的表达,运用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠缺血侧脑皮质区Occludin,ZO-1,Claudin-1 mRNA表达。结果:与假手术组比较,模型组Occludin,Claudin-1,ZO-1蛋白显著减少(P0.01);与模型组比较,依达拉奉组、加味四君子汤各剂量组Occludin,Claudin-1,ZO-1蛋白均显著增高(P0.01)。与假手术组比较,模型组大鼠Occludin,Claudin-1,ZO-1 mRNA表达下调(P0.01);与模型组比较,依达拉奉组、加味四君子汤各剂量组大鼠Occludin,Claudin-1,ZO-1 mRNA表达上升(P0.01)。结论:加味四君子汤可能通过增加紧密连接蛋白Occludin,ZO-1,Claudin-1的表达,保护血脑屏障,减轻缺血性脑卒中大鼠脑水肿。