恶性渗出液的细胞遗传学研究

用直接法对71例不同组织病理类型癌患者的渗出液,进行了细胞遗传学研究。71例恶性渗液中,45例为腹水,26例为胸水。将渗出液离心后加0.03μg/ml秋水仙素,然后孵育30分钟,收获细胞,常规制片,G、C显带。结果71例标本中有50例存在异常中期分裂相,占70.4%。细胞学检查阳性者为56     

人腮腺细胞分离培养的初步观察

目的从人体腮腺组织分离培养获得具有体外增殖能力的涎腺细胞。方法取成人腮腺良性肿物切除的腮腺组织,将组织块在无菌条件下剪出小腺叶,剪成1 mm2大小碎块。用质量浓度10％的Ⅰ型胶原酶10 ml消化20 min,用质量浓度0．25％胰蛋白酶10 ml消化15 min。收集2次消化细胞悬液,离心获得细胞沉淀。以15 ml含用质量浓度10％胎牛血清、2 mmol／L L-谷胺酰胺、100μg／ml链霉素、100 U／ml青霉素、5μg／ml人胰岛素、5μg／ml氢化考的松、2μg／ml异丙肾上腺素的DMEM和F12培养基各占50％的培养液重悬细胞沉淀,计数细胞总量为2．5×105。在预先铺被鼠尾胶原的6孔板的3个孔中,每孔播种细胞悬液5 ml。培养板置37℃、体积分数5％CO2,饱和湿度条件培养箱中培养。     

一种用滤过膜制备积液细胞标本的方法

临床胸腹水的细胞学检测 ,通常将标本离心 ,取沉淀物直接涂片。此方法细胞背景重 ,特别是血性积液涂片 ,因有大量红细胞而使目标细胞相对减少。此类片子行ＨＥ染色 ,因涂片厚而易脱落 ,行免疫组化染色则易出现非特异性着色。我们用细胞采集器中的滤过膜 ,制成了高质量的细胞悬液涂片 ,细胞背景几乎无色 ,现介绍如下。1　材料和方法临床送检的胸腹水 5～ 10ｍｌ不等 ,滤过膜为细胞采集器的孔径 8μｍ的滤过膜和普通滤纸。操作 :(1)胸腹水常规离心涂片 (10 0 0～ 15 0 0ｒ/ｍｉｎ) 5～ 10ｍｉｎ ,将上清液倒另一容器 ,留取沉淀物及液体约 0 5…     

恶性肿瘤细胞多药耐药基因（MDR1）表达产物P170的流式细胞？…

目的，探讨用流式细胞免疫学检测恶性实体瘤组织及腹水细胞多药耐药基因（ＭＤＲ１）表达的方法和临床意义，方法；采用搓网方法，将１２种９４例不同的恶性肿瘤手术切除标本制成细胞膜完整的单细胞悬液，并从６例癌性腹水中提取富含癌细胞的悬液，再用流式细胞免疫学方法检测悬液中的癌细胞ＭＤＲ１表达产物Ｐ１７０含量，结果：经所用方法制备悬液中癌细胞丰富，杂质细胞少，荧光显微镜下观察细胞膜完整，Ｐ１７０阳性细胞抗体荧光     

鼠IgM类单克隆抗体的纯化

本文介绍一种采用常规蛋白质分离提取技术,来纯化IgM类单克隆抗体的方法。将腹水经10000g离心5min,弃沉淀。用pH8.0、20mmol Tris溶液调蛋白浓度至10～12mg/ml。在4℃搅拌中加入45％饱和度硫酸铰,4℃放置1h,10000g离心15min,沉淀重悬于pH8.0 100mmol Tris-150mmolNaCl中,并对该溶液透析。将样品通过Ul-     

卵巢乳头状浆液囊腺癌细胞系的细胞遗传学

OAW42细胞系是由一个卵巢乳头状浆液囊腺癌病人的腹水细胞建立的。腹水700g离心15分钟,细胞团再悬浮于Dulbe-cco改良的Eagle培养基中,补充以20%胎牛血清、20IU/ml胰岛素、1mM谷胺酰胺、1mM丙酮酸钠和3.7g/l碳酸氢钠。细胞每周传代一次,收获时用0.2μg/ml秋水仙碱和10μg/ml溴乙啶处理5小时后,用0.25%胰蛋白酶消化,细胞在培养40、68和88周后分别对21、36和52代细胞进行细胞遗传学分析。每次分析时计数50个分散良好的     

用单克隆抗独特型抗体检测肾综合征出血热（HFRS）病人外周血淋巴细胞表面特异抗原受体的临床意义

用抗独特型抗体(Ab2)检测细胞表面抗原受体是将Ab2作为探针用于免疫学检测而出现的新的研究方法。本文在制备了HFRS病毒抗独特型抗体的基础上应用单克隆抗独特型抗体(1B1)作间接免疫荧光试验，检测了HFRS病人外周血淋巴细胞表面特异抗原受体。首先，采取病人外周肝素抗凝血用淋巴细胞分离液按常规方法分离淋巴细胞，将淋巴细胞用RPMI 1640不完全培养液离心洗一次后弃上清，将沉降细胞重新悬浮后调至0．1ml并加入5％小牛血清．混匀，取约10—30μl加在预置于离心细胞沉淀器的玻片上，800rpm离心5分钟，取下玻片待干燥后加丙酮-福尔马林固定液固定30秒，水洗，吹干。     

用单克隆抗独特型抗体检测肾综合征出血热(HFRS)病人外周血淋巴细胞表面特异抗原受体的临床意义

用抗独特型抗体(Ab_2)检测细胞表面抗原受体是将Ab_2作为探针用于免疫学检测而出现的新的研究方法。本文在制备了HFRS病毒抗独特型抗体的基础上应用单克隆抗独特型抗体(IB_1)作间接免疫荧光试验,检测了HFRS病人外周血淋巴细胞表面特异抗原受体。首先,采取病人外周肝素抗凝血用淋巴细胞分离液按常规方法分离淋巴细胞,将淋巴细胞用RPMl1640不完全培养液离心洗一次后弃上清,将沉降细胞重新悬浮后调至0.1ml并加入5％小牛血清,混匀,取约10～30μ1加在预置于离心细胞沉淀器的玻片上,800rpm离心5     

用简单的细胞化学方法区别淋巴细胞和单核细胞形成的EAC玫瑰花

在临床实践中常采用EAC玫瑰花试验来检查,鉴定B淋巴细胞。从末梢血中分离淋巴细胞通常是用密度梯度离心的方法,所分离的淋巴细胞悬液中常常含有不同数量的单核细胞,而单核细胞像B淋巴细胞一样,具有补体受体,因此就防碍了B淋巴细胞的检查。据报导有人采用羰基铁处理细胞悬液,以除掉其中的单核细胞,但除掉的不够     

单克隆IgM抗体对小鼠抵抗表皮葡萄球菌荚膜株感染的保护作用(文摘)

本文检查了3种不同类型的单克隆抗体(IgM IgG1和IgG2b)对小鼠抵抗表皮葡萄球菌ATCC31432株(荚膜型)攻击的被动保护活性。实验的方法是,将ATCC31432株培养在BHI肉汤中37℃18h,用生理盐水洗1次并再混悬。以比浊法制备OD 430 nm1.0的菌细胞悬液。通过常规平板计数法测定每ml悬液中的活菌数为1.48±0.61×10~9     

山莨菪碱(654-2)等对肥大细胞中组胺释放的影响

肥大细胞是富含组胺的细胞,是开展组胺释放研究的理想细胞。我们选用体重为200-300克大白鼠,经腹腔注入Hank′s液,收集肥大细胞。并制成1～2×10~5个细胞/ml的细胞悬液备用。以荧光法测定组胺含量,以1ml细胞悬液中组胺释放总量/1ml细胞悬液中组胺总量×100％表示     

恶性肿瘤细胞多药耐药基因(MDR1)表达产物P170的流式细胞学的检测

目的，探讨用流式细胞免疫学检测恶性实体瘤组织及腹水细胞多药耐药基因（ＭＤＲ１）表达的方法和临床意义。方法：采用搓网方法，将１２种９４例不同的恶性肿瘤手术切除标本制成细胞膜完整的单细胞悬液，并从６例癌性腹水中提取富含癌细胞的悬液，再用流式细胞免疫学方法检测悬液中癌细胞ＭＤＲ１表达产物Ｐ１７０含量。结果：经所用方法制备悬液中的癌细胞丰富，杂质细胞少，荧光显微镜下观察细胞膜完整，Ｐ１７０阳性细胞抗体荧光位于细胞膜上。结论：研究恶性实体肿瘤细胞ＭＤＲ１表达是可行的，可明确其原始的药物敏感性，对临床化疗有重要价值     

BALB/c小鼠腹水中杂交瘤细胞的再利用(摘要)

<正> 在利用杂交瘤技术制备单克隆抗体过程中,小鼠腹水经离心后,我们发现沉淀中的细胞约有50～80％为活性较好的杂交瘤细胞。为了重新利用这些细胞,我们将小鼠腹水中的产AFP单抗杂交瘤细胞,以淋巴细胞分离液(比重1.088)分离,可得活性     

气功外气对小鼠淋巴细胞和肿瘤细胞作用的体外试验

一、气功外气对小鼠脾淋巴细胞增殖的作用按本室常规制备小鼠脾细胞悬液(2×10~6/ml),ConA最终浓度为3μg/ml或不加ConA,淋巴细胞转化试验用~3H-TdR掺入法测定,细胞悬液分装于设有对照组与试验组的平皿内各6ml,试验组接受气功外气15分钟,对照组不接受外气,发功完毕两组细胞充分摇匀后,分别吸取0.2ml加入96孔培养板内,每组设6个复孔,37℃,5%CO_2培养72小时。结果发现,气功外气对无     

培养液中血清的含量对原代兔婴肾细胞生长的影响

组织培养技术应用广泛,但是组织培养成本高,特别是小牛血清,即价格昂贵又日趋短缺。培养原代兔婴肾细胞通常用含10%小牛血清的199培养液,培养2天左右换液,4～7天长成单层细胞。我们在实践中观察到细胞贴壁和生长速度似乎与培养液中血清含量关系密切,特进行本实验,探索节省血清的培养方法。按常规取出兔婴双侧肾脏,将肾皮质组织放入10 ml小瓶中,剪成约1mm~3大小的碎块,加入0.25%胰酶-0.02%EDTA液,于37℃消化20～30分钟。然后倾去消化液,用Hank′s液洗一次,加2～3 m1培养液,以毛细吸管将碎块吹打成乳糜状,再加培养液至10ml,静置数分钟,待未吹散的组织块沉降后,收集上部的细胞悬液。按此方法重复2次后,弃去沉降物,将几次收集的细胞悬液混合均匀,计数。培养采用含15%小牛血清的199培养液,其中含100u/ml青霉素和10ug/m1的链霉素。用该生长液把混合均匀的细胞悬液稀释     

胎儿胸腺细胞对OKT3反应性的研究

<正>OKT3对成熟T细胞有很强的促增殖作用,其对T细胞作用有赖于CD3分子的存在.据报道17周龄后胎儿胸腺细胞(FT)中CD3~+细胞已达60%以上,但关于FT对OKT3的反应性少有报道,本文对此进行了研究,旨在进一步了解FT的功能特性.1 材料和方法1.1 FT和胎儿脾单个核细胞(FSMC)制备 取18～28周龄胎儿胸腺,经200目铜同研磨,Hanks液洗涤后,用含10%小牛血清的1640培液制成FT悬液;胎脾制成单细胞悬液后,经淋巴细胞分离液分出FSMC,洗涤,制成FSMC悬液.1.2 细胞增殖测定 采用~3H-TdRn掺入法.FT和FSMC培养浓度为1×10~6/ml;OKT3(北医大提供小鼠腹水)和IL-2(中科院上海生化所产品)最终浓度分别为10~(-4)稀释和10U/ml;设立OKT3单独和OKT3+IL-2联合刺激两种培养条件,并设相应对照,每组为3个复孔.1.3 免疫荧光技术和流式细胞仪分析 采用间接免疫荧光染色法.抗CD25单抗和FITC标记的羊抗鼠IgG均为DAKO产品.用FACS420进行表型分析.2 结果     

几种细胞因子对人脐血CD34+干细胞在体外诱导扩增为树突状细胞的研究

多种疾病用树突状细胞 (dendriticcell,DC)作免疫治疗具有一定的疗效。由于DC在人体组织中含量甚微 ,限制了DC的研究及临床应用。因此如何获得足够的成熟DC便成为DC广泛应用的关键技术问题。我们比较了不同细胞因子组合对脐血CD34 造血干细胞在体外诱导扩增为DC的效率及功能的影响 ,提供一种体外获得大量成熟DC的有效途径。脐血采自本院正常分娩志愿者 ,Fi coll淋巴细胞分离液离心获得单个核细胞 ,按CD34 细胞MACS免疫磁性分离试剂盒操作说明分离纯化CD34 细胞。纯化的CD34 细胞配制成含 5× 10 4 ml细胞的悬液 ,按以下 5组…     

小鼠腹水单克隆抗体一步法提纯

本文报道一种可大规模快速地提纯小鼠腹水中单克隆抗体的方法。此操作是利用羟基磷灰石层析(hydroxylapatite chromatography)获得腹水后4～5小时内就可回收纯化的IgG。简言之,将腹水以20,000×G离心30分钟,再配成约35ml液体装入60ml的羟基磷灰面层析柱,用线性梯度磷酸盐(0.01M至0.3M)洗脱结合的蛋白,得到三个蛋白高峰(图1)。     

小鼠形成腹水性肿瘤和产生单克隆抗体的影响因素

杂文瘤细胞注入小鼠腹腔内诱发腹水性肿瘤,并产生含有高滴度单克隆抗体的腹水。为确定形成腹水和产生单克隆抗体的最佳条件,研究了影响分泌免疫球蛋白肿瘤生长的几个因素。用SP2/0骨髓瘤。胞和免疫小鼠脾细胞融合产生杂交瘤细胞,作者证明:(1)诱发腹水性肿瘤需要的最佳杂交瘤细胞数在6—32×15~5细胞之间;(2)每只小鼠最多用0.5ml降植烷致敏;(3)用降植烷致敏后14天才可注射杂交瘤细胞;(4)用雄性小鼠形成腹水和产生单克隆抗体明显优于雌性鼠;(5)小鼠年龄应在43～78天之间。在上述条件下最多在6天过程中,平均每鼠产生7～10ml腹水,其中含有高滴度的抗体。这些动物在注射肿瘤细胞后通常活存11～16天,在第5和第9天之间开始产生腹水。     

密度梯度离心后精子悬液中弹性硬蛋白酶浓度和精子DNA完整性的测定

目的检测体外授精过程中精液和经密度梯度离心后精子悬液中弹性硬蛋白酶(PMN-Elastase)的浓度与精子DNA的完整性,探讨密度梯度离心对精浆中PMN-Elastase的作用和精子DNA的损伤情况。方法选择我中心64例进入体外受精周期患者,其中根据女方取卵手术当天男方精液检测PMN—Elastase不同浓度将患者分为A组(15例):含量1000ng/ml(显性感染);B组(20例):含量290-1000ng/ml(隐性感染);C组(20):含量290ng/ml(正常水平),分析和比较处理前后三组精子悬液中PMN-Elastase的浓度和DNA完整率。结果三组处理后的精子悬液中A组PMN-Elastase前后浓度没有明显区别(P0.05),B组和C组浓度明显下降(P0.05);三组处理后的DNA完整率均明显提高(P0.05),经过长时间孵育均明显降低(P0.05)。结论高浓度PMN-Elastase的精液经密度梯度离心后的精子悬液中PMN-Elastase浓度并不增加,精子活力和DNA完整率增加,可能不影响受精结局。