硒对镉转化人支气管上皮细胞系16HBE凋亡和癌基因表达的影响

目的研究在体外染毒条件下硒对镉转化人支气管上皮细胞系16HBE凋亡和癌基因表达的影响。方法用0.625、1.25、2.5和5.0μmol/L亚硒酸钠染毒镉转化16HBE细胞24h,用流式细胞术检测凋亡,用RT-PCR检测p53,bcl-2和bax表达。结果 0.625、1.25、2.5和5.0μmol/L亚硒酸钠染毒镉转化16HBE细胞后,随硒剂量升高细胞凋亡率增高,相关系数r=0.987 9(P<0.01),并且在1.25、2.5和5.0μmol/L亚硒酸钠剂量组的凋亡率与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。亚硒酸钠可以抑制镉转化16HBE细胞p53和bcl-2的表达(P<0.05或P<0.01),bax表达虽有所增强但P>0.05。进行相关性分析,细胞凋亡与p53和bcl-2表达呈负相关,相关系数r分别为-0.923 6(P<0.01)和-0.862 1(P<0.05),而细胞凋亡与bax表达呈正相关,相关系数r=0.781 8(P<0.05)。p53表达和bcl-2表达呈正相关,相关系数r=0.894 1(P<0.05)。p53、bcl-2表达和bax表达之间呈显著负相关,相关系数分别为-0.822 2(P<0.05)和-0.961 3(P<0.01)。结论亚硒酸钠处理镉转化16HBE细胞,通过使p53和bcl-2表达下调、bax表达上调,诱导细胞凋亡从而起到抑制细胞恶性转化的作用。     

硒化壳聚糖对NB4细胞增殖的影响及其与端粒酶活性和hTERT基因表达的关系

目的:研究硒化壳聚糖对体外培养的NB4细胞增殖的影响,探讨这种作用与端粒酶活性和hTERT基因表达的关系。方法:MTT法检测对细胞生长的抑制作用;PCR-ELISA法检测端粒酶活性;RT-PCR法检测hTERTmRNA水平。结果:硒化壳聚糖可时间剂量依赖性地抑制NB4细胞增殖,50～200mg/L硒化壳聚糖作用NB4细胞48h,可明显降低端粒酶活性和hTERTmRNA水平。结论:硒化壳聚糖可通过抑制端粒酶活性,下调hTERT基因表达来抑制NB4细胞的增殖。     

阳离子卟啉对膀胱肿瘤细胞端粒酶活性抑制作用的研究

目的探讨阳离子卟啉TMPyP4[四-（N-甲基-4-吡啶基）]对膀胱肿瘤细胞株T24和BIU87的端粒酶活性的影响.方法 MTT法测定细胞抑制率;流式细胞仪测定细胞凋亡率;PCR-ELISA法测定肿瘤细胞的端粒酶活性;RT-PCR法测定hTERT和c-myc的mRNA表达量.结果 TMPyP4和阿霉素均表现为剂量和时间依赖的细胞抑制作用.低细胞毒浓度的TMPyP4和阿霉素作用于肿瘤细胞后均能使肿瘤细胞的凋亡率增加,端粒酶活性降低,以及hTERT和c-myc mRNA表达量降低;TMPyP4作用时间较长后,上述作用优于阿霉素.结论低细胞毒浓度的TMPyP4在药物作用时间较长后诱导细胞凋亡的作用优于阿霉素,其作用机制可能与降低hTERT活性和c-mycmRNA表达量有关.     

Experimental study on anti-neoplastic activity of epigallocatechin-3-gallate to digestive tract carcinomas

Background Epigallocatechin-3-gallate (EGCG) has been demonstrated to have anti-neoplastic activity, but the effective concentration of EGCG and its possible mechanisms are uncertain. The study on the killing effects of EGCG on different digestive tract cancer cell lines can find target sites of its anti-neoplastic effect and provide a theoretical basis for its clinical application in the treatment of cancers.Methods Methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) analysis was made to detect the differential sensitivities of eight digestive tract cancer cell lines to EGCG. The effect of EGCG on cell cycle distribution of sensitive cancer cell line was measured by flow cytometry. By polymerase chain reaction (PCR)-enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) protocol, the influence of EGCG on telomerase activity of sensitive cancer cell line was also investigated. RT-PCR method was employed to detect the influence of EGCG on the expressions of hTERT, c-myc, p53 and mad1 genes in sensitive cancer cell line. Results EGCG exhibited dose-dependent killing effects on all eight disgestive tract cancer cell lines. The 50% inhibitory concentration (IC50) of SW1116, MKN45, BGC823, SGC7901, AGS, MKN28, HGC27 and LoVo cells were 51.7 μmol/L, 55.9 μmol/L, 68.5 μmol/L, 79.1 μmol/L, 83.8 μmol/L, 119.8 μmol/L, 183.2 μmol/L and 194.6 μmol/L, respectively. There were no apparent changes in cell cycle distribution of sensitive cancer cell line MKN45 48 hours after incubating with three different concentrations of EGCG compared with the controls. It was found that EGCG could suppress the telomerase activity of MKN45 cells, and the effects were dose- and time-dependent. After EGCG administration, the expression of hTERT and c-myc genes in MKN45 cells was decreased, that of the mad1 gene increased, and that of the p53 gene unchanged. Conclusions EGCG has dose-dependent killing effects on different digestive tract cancer cell lines. Administration of EGCG has no obvious effect on cell cycle distribution of sensitive cancer cell line MKN45. The anti-neoplastic activity of EGCG might be due to the inhibition of telomerase activity by means of its influence on hTERT and the up-stream regulation genes.     

丁酸钠对胰腺癌BxPC-3细胞凋亡机制的影响

目的:探讨丁酸钠对胰腺癌BxPC-3细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:采用MTT法观察不同浓度丁酸钠对BxPC-3细胞增殖的抑制作用;应用流式细胞仪检测丁酸钠作用于BxPC-3细胞后的凋亡情况;TRAP-ELISA法检测细胞端粒酶活性的变化;RT-PCR技术分析人端粒酶逆转录酶(hTERT)、bcl-2 mRNA的表达水平。结果:丁酸钠作用BxPC-3细胞能明显抑制细胞增殖,其作用具有时间和剂量依赖性。丁酸钠处理72 h的BxPC-3细胞凋亡率明显提高(P<0.01),S期细胞比例显著下降(P<0.05),G0/G1期细胞比例显著升高(P<0.05)。经丁酸钠处理的实验组端粒酶活性为0.96±0.12,未经丁酸钠处理的对照组端粒酶活性为4.18±0.34,二者之间差异有显著性(P<0.05)。丁酸钠处理的实验组hTERT mRNA水平为0.168±0.045,与对照组0.685±0.141比较差异有统计学意义(P<0.01),bcl-2实验组水平为0.138±0.034,与对照组0.715±0.026比较有统计学差异。结论:丁酸钠具有强烈诱导胰腺癌BxPC-3细胞凋亡的作用,其发生机制与丁酸钠下调hTERT Bcl-2 mRNA表达水平直接相关。     

丁酸钠联合阿霉素对HeLa细胞端粒酶活性的影响

目的研究阿霉素(ADR)与丁酸钠(NaBu)联用对HeLa细胞增殖和端粒酶活性的影响。方法MTT法检测NaBu、ADR以及两药联用的药效动力学特征;TRAP-银染法检测端粒酶活性;RT-PCR法检测hTERT mRNA表达。结果NaBu、ADR以及两药联用均可抑制HeLa细胞生长,ADR单独作用HeLa细胞48h的IC50为6000nmol/L,与1mmol/L的NaBu联用后降为320nmol/L,两组均呈剂量依赖性。ADR组和NaBu ADR组的端粒酶活性随ADR浓度增加而降低,呈剂量依赖性,在ADR浓度为100nmol/L时差异有统计学意义(P<0.05);hTERT mRNA表达与端粒酶的变化趋势一致,在ADR浓度为10nmol/L、100nmol/L浓度时差异有统计学意义(P<0.05)。结论NaBu和ADR均可抑制HeLa细胞增殖,联合应用具有协同效应,与抑制端粒酶活性、下调hTERT mRNA表达有关。     

榄香烯乳对胃癌细胞人端粒酶反转录酶及其启动子的影响

目的：观察榄香烯乳对胃癌细胞株SGC7901人端粒酶反转录酶（hTERT）表达及其启动子的影响,以深入了解榄香烯乳的抗癌机制。方法：以榄香烯乳处理胃癌细胞,分别采用实时定量PCR和免疫荧光标记法检测癌细胞hTERT mRNA和蛋白水平的表达。采用脂质体转染法将携带hTERT启动子和报告基因的质粒转染至胃癌细胞株SGC7901细胞中,2h后加入不同浓度的榄香烯乳,孵育48h后,分别检测其报告基因萤虫素酶活性。结果：榄香烯乳处理后,胃癌SGC7901细胞hTERT mRNA和蛋白水平呈浓度和时间依赖性下调。榄香烯乳处理组萤虫素酶活性下降,且呈浓度依赖性。结论：榄香烯乳可能通过下调hTERT启动子活性,抑制hTERT表达,从而抑制胃癌细胞端粒酶活性。     

hTERT-siRNA抑制胆囊癌细胞端粒酶活性及增殖运动的研究

目的:了解hTERT-siRNA对GBC-SD细胞代谢、侵袭和端粒酶活性、hTERT mRNA、hTERT蛋白、β-catenin mRNA、-βcatenin蛋白的作用,并探讨其相关机制。方法:在质粒pGCsi-H1/GFP-hTERT干扰后,采用端粒酶TRAP、半定量RT-PCR和Western blot方法检测胆囊癌细胞GBC-SD端粒酶活性、hTERT基因和-βcatenin基因mRNA、蛋白质表达水平;四甲基偶氮唑蓝(MTT)光吸收法检测琥珀酸脱氢酶(SDH)活性、运用Transwell小室了解癌细胞侵袭情况。结果:pGCsi-H1/GFP-hTERT对GBC-SD端粒酶活性、SDH活性、侵袭、hTERT mRNA、hTERT蛋白均有抑制作用并随浓度升高而增强。pGCsi-H1/NEGative对上述指标无明显抑制作用,与pGCsi-H1/GFP-hTERT抑制作用比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:pGCsi-H1/GFP-hTERT可以抑制端粒酶、SDH活性及其侵袭力,其机制与hTERT mRNA及蛋白表达降低有关。     

外源性端粒酶催化亚单位对人视网膜血管内皮细胞的影响

目的探讨外源性人端粒酶催化亚单位(hTERT)对人视网膜血管内皮细胞(hRCEC)端粒酶活性、相关基因表达和体外生存时间的影响。方法阳离子脂质体介导hRCEC转染;RT-PCR法检测人类端粒酶RNA组份(hTR)、端粒酶相关蛋白1(TEP1)及hTERT基因的表达;TRAP法检测端粒酶活性;细胞计数法绘制生长曲线。结果hTR、TEP1基因在hTERT转染hRCEC前后都表达,hTERT基因在转染前不表达,转染后24h及稳定转染克隆形成时表达,细胞停止分裂时又失去表达;转染前无端粒酶活性,转染后24h及稳定转染克隆形成时可检测到端粒酶活性,细胞停止分裂时端粒酶活性消失;稳定转染了hTERT基因后hRCEC的生存时间没有延长。结论hTERT转染可显著提高hRCEC中hTERT基因表达水平,hTERT基因表达与端粒酶活性一致,但只用hTERT转染的方法不能使hRCEC细胞生存时间延长。     

转录因子Sp1和Sp3对JurkatT细胞端粒酶活性的调节作用

目的：探讨转录因子Sp1、Sp3对Jurkat T细胞端粒酶活性和粒酶逆转录酶（hTERT）的调节作用。方法：用脂质体将Sp1、Sp3表达载体转入JurkatT细胞，用Western blotting方法检测蛋白表达水平，用端粒酶PCR－ELISA法检测细胞端粒酶活性并用银染显示端粒酶活性梯度；用RT－PCR方法检测hTERT mRNA水平。结果：Sp1、Sp3载体转化36h的细胞Sp1、Sp3蛋白水平分别升高59．6％（P＜0．01）和36．8％（P＜0．05）；随着Sp1表达水平的增加，端粒酶活性和hTERT mRNA水平明显增加，增加率分别为38．5％（P＜0．05）和25．4％（P＜0．05）。而Sp3表达载体对端粒酶活性和hTERT mRNA水平无明显影响。结论：转录因子Sp1通过调节hTERT mRNA转录水平而调节Jurkat T细胞端粒酶活性，Sp3无此作用。     

EGCG对前列腺癌细胞端粒酶的抑制作用及可能的机制

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人雄激素非依赖性前列腺癌细胞端粒酶的抑制作用及可能的作用机制。方法:用不同浓度的EGCG处理体外生长的人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞,MTT法检测EGCG对PC-3细胞的抑制作用,TRAP-PCR银染法检测端粒酶活性以及荧光定量PCR法检测人端粒酶逆转录酶mRNA的表达。结果:与对照组相比,EGCG处理组可使存活率明显降低,并随药物剂量的增加呈下降趋势(P<0.01);TRAP-PCR银染法显示,EGCG能明显抑制人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞端粒酶的活性,并呈剂量依赖性(P<0.05);荧光定量PCR法显示,被EGCG作用的人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞端粒酶逆转录酶mRNA的表达呈下降趋势,并呈剂量依赖性。结论:EGCG可能通过抑制癌细胞的端粒酶的活性来抑制前列腺癌细胞的生长,对癌细胞端粒酶的抑制作用可能是通过抑制端粒酶的关键调节酶-端粒酶逆转录酶来实现的。     

hTERT转染神经干细胞端粒酶活性及hTERT mRNA检测

目的以逆转录病毒PLXSN为载体,将hTERT基因转染入体外培养的人神经干细胞,检测神经干细胞端粒酶活性及hTERT mRNA表达情况,为建立永生化神经干细胞系提供一种新的思路.方法体外扩增人神经干细胞及基因转染后,应用PCR-ELISA法检测神经干细胞端粒酶活性,荧光定量PCR法检测hTERT mRNA表达情况.结果通过逆转录病毒介导的hTERT基因转染人神经干细胞后,端粒酶活性明显升高,持续表达,hTERT mRNA也早期呈高水平表达,但继之下降,维持在一个较低水平.结论转染hTERT基因后的神经干细胞具有表达高水平端粒酶活性,并稳定表达,这为建立基因工程的永生化神经干细胞系奠定了基础.而hTERT mRNA则逐渐下降,并维持在一个较低水平,不能作为检测神经干细胞增殖和分化能力的指标.     

人胰腺癌端粒酶亚单位的表达及其意义

目的：探讨端粒酶亚单位表达水平与人胰腺癌发生的关系，以及表达与端粒酶活性高低的相关性。方法：应用RT－PCR，DNA测序等技术研究端粒酶亚单位在胰腺癌中的表达情况，用ELISA法检测端粒酶活性。结果：24例胰腺癌标本中hTERT mRNA表达阳性率为83．3％，而癌旁组织为8．3％，两者有显著性差异。hTERT mRNA的表达是人端粒酶活性表达的关键性因素。hTR入TP1 mRNA在癌组织及癌旁组织中的表达无统计学差异，与端粒酶活性的表达无相关性。结论：端粒酶参与了胰腺癌的发生；hTERT mRNA表达水平的上调可能在胰腺癌形成过程中起重要作用。     

端粒酶hTERT基因反义核酸对膀胱癌细胞T24端粒酶活性的影响

目的 探讨hTERT基因的全硫代修饰反义寡核苷酸(AS PS-ODN)对膀胱癌细胞T24端粒酶活性的影响.方法 采用TRAP-PCR-ELISA法检测膀胱癌细胞的端粒酶活性;采用RT-PCR方法检测hTERT基因mRNA的表达水平;以免疫组化通过流式细胞仪检测hTERT基因蛋白水平的变化.结果 hTERT基因的全硫代修饰反义寡核苷酸(ASPS-ODN)作用于T24细胞48h,其端粒酶活性下降,作用72h,其端粒酶活性受到抑制.结论 通过hTERT基因的全硫代修饰反义寡核苷酸(ASPS-ODN)特异性抑制hTERT基因mRNA的表达降低膀胱癌细胞T24端粒酶活性.     

肺癌组织中hTERT和P16基因的表达

目的 :研究端粒酶逆转录酶 (hTERT)和P16基因在肺癌组织中的表达 ,探讨肺癌发生过程中端粒酶激活的分子机制。方法 :应用原位逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)和端粒重复序列扩增法 (TRAP)分别对 4 7例肺癌及相应癌旁肺组织中hTERTmRNA与端粒酶活性进行检测 ,采用免疫组化SP法测定上述组织标本中P16蛋白表达。结果 :hTERTmRNA与端粒酶活性在肺癌组织中阳性表达率分别为 78.7%和 72 .3% ,均明显高于相应癌旁肺组织 (P <0 .0 1)。肺癌中hTERTmRNA表达与端粒酶活性呈明显正相关 (r=0 .70 2 ,P <0 .0 1)。P16蛋白在肺癌中阳性表达率为 2 9.8% ,显著低于癌旁肺组织 (93.6 % ,P <0 .0 1)。P16蛋白表达与hTERTmRNA表达及端粒酶活性均呈显著负相关 (r分别为 - 0 .74 5 ,- 0 .70 2 ,P均 <0 .0 1)。结论 :hTERTmRNA表达上调和P16蛋白表达缺失与肺癌的发生密切相关 ,并可能在肺癌端粒酶活性调节中发挥重要作用。     

三氧化二砷诱导人卵巢癌细胞凋亡对端粒酶活性的影响

目的 探讨As2O3诱导细胞凋亡时对其端粒酶活性的影响及其作用机制.方法 采用光镜、电镜,PCRELISA,RT-PCR等技术,检测细胞凋亡,端粒酶活性及其催化亚单位的表达.结果 As2O3可诱导卵巢癌细胞凋亡,但存在作用浓度,细胞株类型差异性;端粒酶活性随药物作用时间和浓度的增加而明显减弱,同时伴随hTERT mRNA表达水平的下降.结论 端粒酶活性和hTERT mRNA表达在As2O3诱导SKOV3、3AO细胞凋亡过程中共同发挥作用,两者有密切关系,是诱导细胞凋亡的分子机制之一.     

干扰素对肝癌细胞端粒酶活性及c—myc蛋白的影响

目的 观察干扰素－α对肝癌细胞SMMC－7721粒粒酶活性及c-myc蛋白的影响,进一步探讨干扰素抗癌治疗的作用机制。方法 利用干扰素－α处理人肝癌细胞SMMC－7221,然后使用TRAP方法观察处理前后粒酶活性的变化,同时利用免疫组化法测定c-myc蛋白的表达。结果 干扰素－α对肝癌细胞端粒酶活性有抑制作用,并且对c-myc蛋白的表达也有抑制作用,对c-myc表在的抑制出现在端粒酶活性抑制之前。结论 干扰素可能通过对c-myc表达的抑制端粒酶活性。