实时荧光恒温扩增技术检测乙型肝炎病毒基因型的研究

HBV感染呈全球流行趋势,严重危害了人类的身心健康。目前根据HBV基因全核苷酸序列异源性≥8％或S基因区核苷酸异源性≥4％将HBV毒株分为A～I九种不同基因型,HBV毒株在不同的地域流行趋势存在明显差异,我国主要流行B、C两种基因型。HBV基因型对HBV感染者的治疗以及预后判断具有重要意义,然而目前HBV基因分型检测方法存在操作繁琐或检测灵敏度不够理想等问题。为解决上述问题,我们根据HBV基因型序列特征,设计了B、C特异型的恒温扩增引物,同时结合SYBR Green I荧光染料,建立了实时荧光恒温扩增技术检测HBV基因B、C型的实验方法。     

维吾尔族D型乙型肝炎病毒株全基因克隆研究

目的 进行新疆维吾尔族D型乙型肝炎病毒(HBV)全基因克隆.方法 提取慢性HBV患者血清中的病毒DNA,以聚合酶链反应(PCR)对HBV的全基因组进行扩增,克隆入pUCM-T载体,并对测序结果进行比对分析.结果 通过HBV全基因克隆化研究,获得我国首例维吾尔族慢性HBV感染者D型HBV病毒株的全基因序列.其基因组全长为3174 碱基对(bp),与目前D基因型参照序列比较同源性约为92%～98%,位于1760～1768位出现9个碱基的缺失,与一株来自中国的D/C重组基因型(GenBank登录号:AY862865)序列比较同源性约为91%.氨基酸序列分析其血清型为ayw 2型.结论 新疆维吾尔族D基因型HBV病毒株有其自身特点.     

乙型肝炎病毒基因型与肝细胞肝癌关系的研究

目的 探讨HBsAg阳性肝细胞肝癌(HCC)患者乙型肝炎病毒(HBV)DNA基因型与其患HCC之间的关系.方法 运用PCR条带分析与基因测序相结合的方法对我院500例HBsAg阳性患者(其中HCC患者150例)的HBV DNA进行分型,并对分型结果进行分析.结果 HBV DNA B型和C型基因型是HBsAg阳性HCC患者和非HCC患者的共同优势基因型.但HCC患者中C型基因型所占比例为65.33%(98/150),明显高于非HCC患者的25.14%(88/350),而B型则相反,分别为28.67%(43/150)与68.86%(241/350),x2=75.45,P<0.05.HCC患者中,HBV的B型与C型基因型分布在不同性别及不同年龄段之间的差异无统计学意义(P>0.05).结论 HBV DNA C型基因型在HCC患者中多见,可能与HCC的发生有关.     

乙型肝炎病毒相关性肾炎15例报道

乙肝病毒感染导致的肾损害是肾小球肾炎的一种 ,随着肾活检的广泛开展 ,临床报道的病例不断增多 ,现将我院近年来收治的 15例乙肝相关性肾炎报道如下。资料与方法1　临床资料　 15例患者均为住院病人 ,其中男 12例 ,女 3例 ;年龄 18岁～ 38岁 ,平均 2 6岁。乙肝病程 1年～ 10年     

乙型肝炎病毒相关性肾炎的相关因素分析

目的 研究乙型肝炎病毒相关性肾炎（HBV-GN）的相关因素。 方法 采用回顾性病例对照研究。用Logistic回归对86例HBV-GN患者及135例非HBV-GN慢性HBV感染者进行比较。 结果 单因素分析结果显示,HBV-GN与男性（OR 2.79,95％CI 1.48～5.25,P = 0.001）、HBeAg阳性（OR 2.60,95％CI 1.49～4.53,P = 0.001）、HBV复制（OR 3.63,95％CI 1.80～7.33,P < 0.01）、肝硬化（OR 4.58,95％CI 1.41～14.91,P = 0.011)及谷丙转氨酶（ALT）升高（OR 2.53,95％CI 1.42～4.51,P = 0.002)相关。多因素分析结果显示,HBV-GN与男性（OR 2.21,95%CI 1.12～4.33,P = 0.022）、HBV复制（OR 2.77,95%CI 1.28～5.97,P = 0.01）、肝硬化（OR 4.55,95%CI 1.29～16.10,P = 0.019）及ALT升高（OR 1.96,95%CI 1.04～3.69,P = 0.037）相关。HBV-GN中,与IgA肾病型（HBV-IgAN）比较,单因素分析结果显示,经典型HBV-GN（膜性肾病或膜增生性肾炎型）与男性（OR 5.24,95％CI 1.64～16.81,P = 0.005）、HBV复制（OR 8.02,95％CI 2.15～29.84,P = 0.002）及ALT升高（OR 3.10,95％CI 1.00～9.67,P = 0.051）相关;多因素分析结果显示,仅与男性（OR 6.51,95%CI 1.76～24.11,P = 0.005）及HBV复制（OR 7.22,95%CI 1.68～30.97,P = 0.008）相关。结论 男性、HBV复制、肝硬化及ALT升高都可能是HBV-GN的易患因素。与HBV-IgAN比较,经典型HBV-GN与病毒复制及男性更相关,两者可能有不同的病理机制。     

乙型肝炎病毒相关性肾炎的治疗

乙型肝炎病毒相关性肾炎(hepatitis B virus - associated glomerulonephritis,HBV -GN)是免疫复合物介导的继发性肾小球疾病之一.乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染与免疫介导的炎症并存,导致其治疗棘手,当前HBV - GN在国内外都缺乏确实有效的治疗方案,目前的治疗方案主要有抗病毒、激素及免疫抑制剂、中西医结合治疗等,其中抗病毒治疗是其他治疗方法的基础,而糖皮质激素及免疫抑制剂的应用与否及其应用的疗程和剂量尚存在争议.     

乙型肝炎病毒相关肾炎

乙型肝炎病毒相关肾炎郭怡清乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染可引起多种多样的肝外病变，肾小球肾炎是常发生在ＨＢＶ感染的一种疾病。１９７１年Ｃｏｍｂｅｓ首次报道并论证了ＨＢＶ抗原对某些肾炎的致病作用，引起各国学者们的重视与研究。１９７９年以后，ＨＢＶ感染与肾小...     

基因直接测序分析HBV多聚酶区基因突变与基因分型

HBV是一种嗜肝DNA病毒,其基因组为3200bp的双链DNA分子,按照全基因序列的异质性,HBV可分为A-H等8个基因型。HBV的变异率极高,而且具有很高的复制率,在由共价闭合环状DNA反转录过程中因HBV聚合酶和反转录酶缺乏校正活性,因此不能去除错误掺入的碱基。HBV常引起慢性持续感染,在长期反复感染和复制中发生变异,并受人体免疫应答、抗病毒药物等环境因素的影响。核苷（酸）类似物拉米夫定和替比夫定等抗病毒药物的作用靶点均为HBV聚合酶和反转录酶,     

乙型肝炎病毒X蛋白抑制足细胞增殖

目的 通过构建复制缺陷型腺病毒载体将乙型肝炎病毒（HBV）X基因（即HBx基因）导入足细胞株,探讨HBx蛋白对足细胞增殖的影响及其分子机制。 方法 采用pAdxsi系统构建携带HBx基因的复制缺陷型腺病毒载体。以瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态。以MTT检测和羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯（CFDA-SE）荧光染料示踪细胞增殖的方法,对细胞增殖进行定量评估。采用流式细胞仪检测细胞周期分布。采用cyclin/DNA双参数流式细胞术和Western印迹检测细胞周期调控蛋白的表达。 结果 PCR和基因测序鉴定证实,Ad.HBx构建成功。Western印迹显示,足细胞感染Ad.HBx（感染复数MOI =100）后第3、5天均可表达相对分子质量为17 000的HBx蛋白,表明HBx可在足细胞株稳定表达。细胞形态学观察显示腺病毒感染后第5天Ad.HBx组细胞呈现明显的有丝分裂障碍特征,双核、多核和多形核细胞比例明显增加。MTT检测结果显示空白组和Ad组足细胞的生长曲线基本吻合,而Ad.HBx组细胞的生长曲线自第4天起较前两组偏低,至第5天时该差异具有统计学意义（P < 0.01）;同时,CFDA-SE细胞增殖示踪实验也证实,于腺病毒感染后第3天Ad.HBx组细胞的增殖速度已明显低于空白组和Ad组（增殖指数11.2比15.4、13.3）,且随时间推移进一步减慢（增殖指数32.5 比 61.6、54.0）,表明HBx可显著抑制足细胞增殖。细胞周期分析和细胞周期调控蛋白检测的结果显示,HBx可诱导足细胞周期G2/M阻滞,同时伴有cyclin B1、p21的表达上调及cyclin A的下调。 结论 乙肝病毒基因编码的HBx蛋白可使cyclin B1降解受阻,同时下调cyclin A和上调细胞周期负调蛋白p21的表达,导致细胞周期阻滞于G2/M期,从而抑制足细胞增殖。这可能是乙型肝炎病毒相关性肾炎患者肾小球足细胞缺失,肾脏病变慢性进展的重要机制之一。     

血液透析患者丙型肝炎病毒标志检测

研究血透患者的丙型肝炎病毒感染。方法 在60倒尿毒症血透患者中,采用第二代酶联免疫法测定抗丙型肝炎病毒(HCV)抗体,同时采用套式多聚酶联反应(PCR)法测定HCV-RNA。结果 27例抗HCV-HgG阳性,24例抗HCV-IgM阳性,37例HCV-RNA阳性,总阳性率为63.3％;输血组的HCV感染率为69.6％,而非输血组HCV感染率仍高达42.9％;透析时间大于3年者,HCV的感染率达100％。结论 血透患者HCV感染是相当严重的,其中输血为HCV传染的主要途径,但可能还存在经透析装置等其它传播途径。     

Hepatitis B virus: genotypes and subtypes in Brazilian hemodialysis patients

There are no data concerning the genotypic analysis of hepatitis B virus (HBV) infection in Brazilian dialysis centers. Serum samples from all hemodialysis patients (n = 282) in Goiania City, Central Brazil, were tested for hepatitis B surface antigen (HBsAg). An overall prevalence of 12.0% was found, ranging from 0 to 33.3% depending on dialysis centers. Positive samples (n = 34) were submitted to serological subtyping by monoclonal ELISA and HBV DNA detection by polymerase chain reaction (PCR). Among 30 PCR-positive samples, 26 were genotyped by use of the line probe assay technology (INNO-LiPA HBV, Innogenetics, Gent, Belgium). HBV genotypes A (50. 0%) and D (46.2%) were the most frequently found whereas genotype F (3.8%) was rare in this population. Serological subtypes adw2 (44. 1%) and ayw3 (41.2%) were dominant. By contrast, adw4 and ayw2 were found at a low frequency (2.9%). A correlation was observed in the distribution of genotypes and subtypes by dialysis center. Genotype D and subtype ayw3 were predominant in 2 hemodialysis centers whereas genotype A and subtype adw2 were predominant in the others. The findings of high HBsAg prevalence rates restricted to certain dialysis centers and the data obtained through genotyping and serological subtyping suggest HBV nosocomial transmission in these hemodialysis centers.     

维持性血液透析患者感染乙型和丙型肝炎的分析

目的为了评价血液透析（血透）患者乙型和丙型肝炎（HBV、HCV）感染状态及对临床情况和肝功能的影响。方法对62例血透患者应用ELISA法和RT-PCR法检测抗-HCV和HCVRNA，采用斑点杂交法和固相放免法检测HBV标志，并检测肝功能和血浆蛋白电泳。结果62例患者中，抗-HCVIgM阳性27例（43．6％），抗-HCVIgG阳性29例（46．8％），HCVRNA阳性34例（54．8％），三项任一项阳性37例（59．7％），5例（8．1％）HBsAg阳性，其中HBeAg和HBVDNA阳性3例。结论向透患者中HCV感染严重，临床情况及预后差，检测血浆蛋白和电泳较肝功能酶学能更好地作为肝炎诊断和反映病情的指标。     

乙型肝炎病毒表面大蛋白在抗病毒治疗中的临床意义

目的探讨乙型肝炎病毒表面大蛋白（LHBs）在监测抗病毒疗效上的临床意义。方法跟踪监测46例阿德谲韦酯治疗患者60周,分别采用ELISA法、时间分辨免疫荧光分析法和实时定量PCR法检测患者小同时间的LHBs、HBV血清学标志物和HBV DNA载量,并进行相关性分析。结果LHBs和HBV DNA下降趋势一致,其相关系数r=0．97,但LHBs消退晚于HBV DNA。治疗60周时共有20例患者的HBV DNA〈5×10^2／mL,其中8例LHBs转阴;疗效反复组14例患者HBV DNA转阴后又转阳,3例患者LHBs转阴;治疗无效组12例患者,2例LHBs转阴。结论动态监测LHBs可作为抗病毒治疗效果评价指标的有益补充.     

乙肝病毒X蛋白通过激活核因子-κB信号通路上调MDR1的表达

目的 探讨核因子(NF)-κB信号通路是否是乙肝病毒X蛋白(HBx)上调多药耐药基因(MDR1)的途径之一.方法 建立稳定转染HBx基因的L02(L02/HBx)细胞系,用NF-kB信号通路阻断剂吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)阻断NF-κB信号通路.采用荧光双标激光扫描共聚焦显微镜观察转染前后及PDTC加入前后NF-κB信号通路的激活失活,同时用实时聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot检测转染前后及PDTC加入前后MDRl的表达.结果 转染HBx基因后NF-κB信号通路被激活,MDRI表达明显上调(P<0.05);PDTC加入后NF-κB信号通路被阻断,MDRi表达明显下调(P<0.05).结论 NF-κB信号通路可能是HBx介导肝癌多药耐药,上调多药耐药基因MDR1的途径之一.     

乙型肝炎病毒与肝细胞癌的抗病毒治疗与风险评估

肝细胞癌在全世界的发病率逐年增高,已经成为导致癌症相关死亡的主要疾病之一.多年来研究发现,乙型肝炎病毒的慢性感染是导致肝细胞癌发病的重要原因,针对乙肝的抗病毒治疗可明显降低肝细胞癌的发病率及术后的肿瘤复发.对乙型肝炎患者做出适当的相关风险评估,给予高危患者及时有效的医疗干预,对于预防肝细胞癌的发生,延缓其发展有重要作用.