沉默lncRNA TUG1对肾透明细胞癌细胞增殖、凋亡及迁移的影响

目的:探究沉默lncRNA TUG1对肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)细胞增殖、凋亡及迁移的影响。方法:选用37例ccRCC组织及癌旁组织样本,通过提取样本总RNA并行逆转录及转染,利用qRT-PCR检测lncRNA TUG1在ccRCC组织、细胞系及癌旁组织中的表达,并通过CCK-8法、流式细胞检测法及划痕实验检测沉默lncRNA TUG1对ccRCC细胞A704、A498增殖、凋亡及迁移的影响,采用统计软件进行数据处理,探究lncRNA TUG1在ccRCC中的表达及临床意义。结果:qRT-PCR检测lncRNA TUG1表达情况,结果显示:lncRNA TUG1在ccRCC组织中的表达显著高于癌旁组织,在肾细胞癌细胞系A704和A498中的表达明显高于正常细胞系HK2,差异有统计学意义（P＜0.05）;CCK-8检测细胞增殖情况,结果显示:A704和A498细胞经转染干扰后细胞增殖活性较对照组显著降低（P＜0.05）,沉默lncRNA TUG1可抑制细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡情况,结果显示:A704和A498细胞凋亡比例较空白对照组明显增多（P＜0.05）,沉默lncRNA TUG1可促进细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移能力,结果显示:A704和A498细胞迁移能力较空白对照组降低（P＜0.05）,沉默lncRNA TUG1可抑制细胞迁移。结论:沉默lncRNA TUG1可诱导ccRCC细胞凋亡,抑制其增殖、迁移,可作为临床研究的新靶点。     

LNX1通过调控TIAM1/ERK信号通路抑制肾透明细胞癌细胞的增殖、侵袭和迁移

目的：探讨泛素链接酶LNX1(ligand of numb-protein X 1)对肾透明细胞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其可能的分子作用机制。方法：利用基因表达谱交互分析（Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA）数据库分析LNX1 m RNA在肾透明细胞癌组织中的表达水平,及其与肾透明细胞癌患者预后的相关性。采用慢病毒感染的方法将携带特异性针对LNX1基因的shRNA(shLNX1)转入肾透明细胞癌细胞786-O和ACHN中;采用瞬时转染的方法将重组质粒flag-LNX1转入786-O和ACHN细胞中。分别采用CCK-8实验和细胞集落形成实验检测沉默或过表达LNX1对786-O和ACHN细胞增殖能力的影响,Transwell小室实验检测沉默或过表达LNX1对786-O和ACHN细胞侵袭和迁移能力的影响。采用生物信息学分析法筛选LNX1的下游靶基因,采用蛋白质印迹法检测沉默或过表达LNX1对T淋巴瘤侵袭和转移诱导蛋白1(T-lymphoma invasion and metastasis-inducing prote...     

基于TCGA数据库分析E2F7在肾透明细胞癌组织中的表达及临床意义

目的:通过数据挖掘分析E2F7在肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,ccRCC）组织中的表达特征及临床意义。方法:基于GEPIA、LinkedOmics数据库分析E2F7在ccRCC中的差异性表达及其与患者预后的关系。应用WebGestalt工具分析与E2F7表达相关的基因。结果:E2F7 mRNA在ccRCC组织中表达水平高于正常肾组织。Linkedomics数据库分析显示E2F7 mRNA在ccRCC病理分期中存在表达差异（P＜0.05）,且随着病理分期的升高,表达水平有上调趋势。E2F7 mRNA在不同T、M、N分期（P＜0.05）中存在差异性表达。生存分析表明,E2F7的表达水平与ccRCC患者的总体生存率（Logrank P=0.023）与无复发生存率（Logrank P=0.041）显著相关,此外,E2F7表达水平与BUB1B、CDC6、CCNE2、CCNE1（r分别为0.827 7、0.720 4、0.677 8、0.612 5,P均<0.01）基因呈显著正相关,与PINK1、KAT5、HSD17B8（r分别为-0.511 0、-0.508 4、-0.502 9,P均<0.01）基因呈显著负相关。E2F7表达相关基因富集分析与DNA复制、细胞周期以及NF-kappa B信号通路（NF-kappa B signaling pathway）相关。结论:在ccRCC中E2F7的表达与患者的病理分期、T分期、N分期、M分期及预后有一定的相关性,因此E2F7可能成为ccRCC的预后标志物及潜在治疗靶点。     

BP1基因对肾透明细胞癌细胞株RLC-310增殖、克隆形成及迁移能力的影响

目的:研究BP1基因对肾透明细胞癌细胞株RLC-310细胞增殖、克隆形成能力及迁移能力的影响。方法:将前期构建的质粒pEGFP-N1-BP1转染入RLC-310细胞系,用Real-time PCR和Western blot检测BP1 mRNA与蛋白的表达情况;通过MTT、平板克隆实验及Transwell实验检测pEGFP-N1-BP1对RLC-310细胞的作用。结果:转染了pEGFP-N1-BP1的RLC-310细胞中BP1基因/蛋白的表达明显上调;转染组较空白对照组细胞增殖能力明显增加(P＜0.05),克隆能力及迁移能力增强(P＜0.05)。结论:BP1基因能够增强RLC-310细胞的增殖、克隆形成能力及迁移能力。     

E2F因子与表皮细胞的增殖和凋亡

近 10年来 ,有关细胞周期和细胞增殖的研究有了惊人的发展 ,而有关 2个肿瘤抑制因子pRB和p5 3的研究尤其受到关注。目前普遍认为 ,这 2个因子是与其他一系列肿瘤相关基因和蛋白共同作用 ,通过多种通道发挥肿瘤抑制活性的。E2F因子作为 1个重要的细胞周期调控因子 ,既促进细胞增殖又参与了对细胞凋亡的调控 ,其与 pRB、p5 3的密切关系已日益受到重视。1　E2F转录因子概述1.1　E2F因子的结构和分类E2F蛋白因子 (E2factor)最初是在腺病毒的E2启动子中被发现的 ,因其具有激活此类启动子的作用 ,因而得名[1] 。E2F因子最简单的活性形式是 …     

姜黄素诱导激活FOXO3a促进肾透明细胞癌细胞的增殖抑制和细胞凋亡

目的:研究姜黄素(curcumin)对人肾透明细胞癌（clear-cell renal cell carcinoma,ccRCC）细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用,及叉头框蛋白O3a（Forkhead box protein O3a,FOXO3a）在姜黄素抗肿瘤效应中发挥的关键作用。方法:MTT法用于检测姜黄素对ccRCC细胞活力的抑制作用;Annexin V/PI双染实验检测姜黄素对ccRCC细胞的诱导凋亡作用;免疫印迹法（Western blot,WB）检测姜黄素对FOXO3a、p-FOXO3a及下游BIM表达的影响,和凋亡蛋白caspase 3的激活情况。实时荧光定量PCR技术（real-time quantitative PCR,RT-qPCR）检测FOXO3a转录水平。小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）技术用于沉默ccRCC细胞系中FOXO3a的表达。结果:通过对6种ccRCC细胞系（ACHN、786-O、769-P、A-498、Caki-1及Caki-2）FOXO3a蛋白基础表达水平进行检测,选取FOXO3a表达较高的786-O细胞系为研究对象。0~160 μmol/L姜黄素处理786-O细胞24 h和48 h后,呈时间和浓度依赖性对细胞活力具有显著抑制作用;786-O细胞在0~80 μmol/L姜黄素处理24 h后,明显促进细胞凋亡水平,且伴随着凋亡相关蛋白caspase 3的激活。786-O细胞中,姜黄素抑制p-FOXO3a,促进FOXO3a活化,并上调下游BCL-2家族促凋亡蛋白BIM表达水平。在siRNA沉默FOXO3a蛋白表达后,姜黄素对786-O细胞的生长抑制和诱导凋亡作用被抑制。结论:姜黄素通过诱导激活FOXO3a,在ccRCC细胞上发挥生长抑制和诱导凋亡的抗肿瘤作用。     

下调SLC6A3对肾透明细胞癌细胞SNU-349增殖、迁移的影响

背景与目的:溶质载体家族6成员3(solute carrier family 6 member 3,SLC6A3)在肾透明细胞癌患者中呈高表达,但SLC6A3对肾透明细胞癌细胞转移的影响及分子机制尚不明确.探讨SLC6A3对肾透明细胞癌细胞增殖、迁移的影响及潜在的分子机制.方法:采用免疫组织化学法检测2017年1月—2...     

lncRNA SNHG1通过抑制p27kip1促进胃癌细胞的增殖作用

目的:确定长链非编码RNA SNHG1（lncRNA SNHG1）在胃癌中的表达，并探讨其在胃癌细胞增殖中的作用。方法:通过原位杂交及实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测26例胃癌患者肿瘤组织及相应癌旁组织中SNHG1的表达。同时通过RT-qPCR检测正常胃上皮细胞及胃癌细胞系中SNHG1的表达情况。为评估SNHG1对胃癌细胞增殖能力的影响，向胃癌细胞系中转染shRNA或pcDNA调控SNHG1表达，并通过CCK-8法、流式细胞术及克隆形成实验检测细胞活力、细胞周期与细胞形成集落的能力。通过相关性分析、免疫组化、RT-qPCR及Western blot等方法检测了胃癌组织及细胞中p27kip1的表达，并进一步研究其与SNHG1的关系。结果:lncRNA SNHG1在胃癌组织中的表达明显高于癌旁组织，尤其是在肿瘤中晚期。SNHG1可明显促进胃癌细胞的增殖，缩短细胞周期，增强肿瘤细胞的集落形成能力。同时胃癌组织及细胞系中p27kip1与SNHG1存在相关性，上调SNHG1可以抑制胃癌细胞中p27kip1的表达，反之亦然。上调p27kip1可以拮抗SNHG1对胃癌细胞增殖能力的促进作用。结论:lncRNA SNHG1通过抑制p27kip1促进胃癌细胞增殖，表明SNHG1可能成为胃癌的潜在治疗靶点。     

基于TCGA 数据库分析DTX2 在肾透明细胞癌组织中表达的临床意义及其对肾癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响

目的：基于TCGA数据库分析Deltex E3泛素连接酶2(DTX2)在肾透明细胞癌（ccRCC）组织中的表达水平及临床意义,探讨DTX2对ccRCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法：利用TIMER数据库分析DTX2在泛癌组织中的表达水平,通过UALCAN数据库进一步验证ccRCC组织和癌旁组织中DTX2 mRNA和蛋白表达差异。使用UALCAN数据库中的TCGAccRCC队列数据集,分析ccRCC中DTX2表达与患者临床病理特征的相关性。通过K-M plot数据库分析DTX2表达与cc RCC患者预后的相关性。利用DAVID数据库对DTX2相关基因进行GO和KEGG通路富集分析。通过qPCR法检测DTX2基因在人胚肾293(HEK293)细胞和ccRCC细胞A498、Caki-1中的表达水平。利用siRNA技术分别将DTX2 siRNA及其阴性对照质粒转入A498、Caki-1细胞,采用CCK-8法、平板克隆实验、划痕实验及Transwell侵袭实验分别检测敲低DTX2对细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果：TCGA数据库分析结果表明,与癌旁组织相比,ccRCC组织中DTX2 mRNA和...     

转录因子BATF3通过调控波形蛋白促进肾透明细胞癌细胞的恶性生物学行为

目的：探讨碱性亮氨酸拉链转录因子ATF样蛋白3（BATF3）在肾透明细胞癌（ccRCC）组织中的表达及其调控ccRCC细胞恶性生物学行为的分子机制。方法：收集2019 年3月至2022 年1月间在中国人民解放军联勤保障部队第九八〇医院手术切除的64例ccRCC组织和相应癌旁组织,qPCR 法检测ccRCC组织、癌旁组织和肾癌ACHN、786-O细胞中BATF3 mRNA的表达,免疫组化检测ccRCC 组织、癌旁组织中BATF3蛋白的表达,并分析其与临床病理特征的关系。构建BATF3敲减及过表达质粒,分别转染786-O、ACHN 细胞,通过MTS 法、Transwell 实验检测BATF3 对786-O 或ACHN 细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响,qPCR 法检测敲减或过表达BATF3 对786-O 或ACHN 细胞EMT 相关基因表达的影响,CHIP、双荧光素酶报告基因实验检测BATF3是否与波形蛋白（VIM）启动子区结合并调控其转录,MTS法、Transwell 实验检测同时过表达BATF3及敲减VIM对786-O细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。结果：与癌旁组织比较,ccRCC 组织中BATF3的mRNA和蛋白均呈高表达(均P<0.01),并且BATF3 mRNA 与ccRCC 的分化程度和TNM分期密切关联（均P<0.01）;与正常肾上皮细胞293T相比,BATF3 在ACHN 及786-O细胞中均呈高表达（均P<0.01）。敲减BATF3 表达均能明显抑制786-O 细胞的增殖、迁移、侵袭能力(均P<0.01),过表达BATF3则均能促进ACHN细胞的增殖、迁移和侵袭能力（均P<0.01）,敲减或过表达BATF3能抑制786-O 细胞或促进ACHN细胞的EMT相关基因的表达（均P<0.01）。BATF3可与VIM启动子区的位点结合,直接调控VIM的转录表达。同时过表达BATF3及敲减VIM可逆转过表达BATF3对786-O 细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。结论：BATF3在ccRCC 组织中呈高表达,并与其分化程度和TNM 分期密切关联;BATF3 通过调控VIM 的表达影响ACHN、786-O 细胞的恶性生物学行为,其可作为临床治疗ccRCC的潜在靶点。     

转录因子E2F1在乳腺浸润性导管癌组织中的表达及其临床意义

目的检测转录因子E2F1在乳腺浸润性导管癌（IDC）组织中的表达及其在IDC发生、发展中的作用。方法采用免疫组化S-P法检测91例乳腺IDC组织、18例不典型增生组织、30例正常乳腺组织中E2F1蛋白表达情况。结果 91例乳腺IDC组织、18例不典型增生组织及30例正常乳腺组织中E2F1蛋白阳性表达率分别为47.3%（43/91）、11.1%（2/18）和0.0%（0/30）,差异有统计学意义（P〈0.05）。IDC组织中E2F1蛋白表达与腋窝淋巴结转移、肿瘤大小、组织学分级、TNM分期及ER、PR状态有关（P〈0.05）。结论 E2F1在IDC组织中高表达,可能是参与乳腺IDC病程进展的重要因子,可作为预测乳腺IDC淋巴结转移及预后评估的指标。     

沉默信息调节因子过表达或谷氨酰胺剥夺对肾透明细胞癌细胞凋亡、增殖的影响

背景与目的：肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,ccRCC）是最常见的肾癌类型,它与代谢密切相关。探讨沉默信息调节因子4（silent information regulator 4,SIRT4）过表达或谷氨酰胺（glutamine,Gln）剥夺对ccRCC细胞增殖、凋亡的影响。方法：慢病毒构建SIRT4和突变体H161Y过表达的Caki-2细胞株,利用无Gln的培养基来构建Gln剥夺模型,并通过体外增殖活力实验［细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8,CCK-8）］和克隆形成实验来分析两者对Caki-2细胞增殖和生长能力的影响;利用DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧自由基（reactive oxygen species,ROS）水平进而评估Gln代谢对细胞ROS含量的影响;进一步通过线粒体膜电位检测、凋亡检测和蛋白质印迹法（Western blot）检测凋亡相关分子,分析SIRT4过表达以及Gln剥夺对Caki-2细胞凋亡的影响。结果：过表达SIRT4可抑制Gln代谢从而抑制Caki-2细胞增殖,另外还原性物质还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide phostate,NADPH）的生成减少能够增加细胞内ROS含量,促进细胞凋亡。而Gln剥夺抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的效果均比过表达SIRT4明显,但长期缺乏Gln将导致细胞无法生长。结论：无论是过表达SIRT4还是Gln剥夺均能抑制ccRCC细胞增殖,促进凋亡。     

HOTTIP通过竞争性结合miR-506调节Vimentin基因的表达调控肾透明细胞癌细胞迁移

目的:探究HOTTIP通过竞争性结合miR-506来调节Vimentin基因的表达调控肾透明细胞癌细胞迁移的作用机制。方法:通过生信分析TCGA数据库中肾透明细胞癌的差异表达miRNA、mRNA、lncRNA。利用miRcode数据库数据对lncRNA-miRNA的结合进行预测,并对miRNA调控的靶基因进行预测。qRT-PCR检测肾透明细胞癌细胞系中HOTTIP、miR-506、Vimentin的表达,RNA pull-down实验检测miR-506和HOTTIP结合,RIP实验检测miR-506与HOTTIP和Vimentin的结合,Transwell和划痕愈合实验检测786-O细胞迁移能力。结果:HOTTIP在肾透明细胞癌中显著上调,并且与患者预后显著相关,其靶miRNA miR-506在肾透明细胞癌中显著下调。miR-506的下游调控基因Vimentin在肾透明细胞癌中显著上调并且与患者预后显著相关。HOTTIP通过竞争性结合miR-506来调节Vimentin基因的表达。干扰HOTTIP后,肾透明细胞癌细胞的迁移能力显著降低,而干扰HOTTIP的同时沉默miR-506或过表达...     

肾透明细胞癌胸壁转移误诊1例

1临床资料患者,女,55岁,因右胸壁肿块、咳嗽5个月于2010年12月23日入我院。曾有咯血,痰量少,无发热、胸痛、胸闷。在当地医院按支气管炎治疗,无效。入院前2天行胸部CT平扫:见右侧下胸壁肋骨骨质破坏,并见一大小约5 cm类圆形软组织密度影,边缘尚清,右下肺背段见一不规则高密度影,大小约3.7 cm×2.8 cm,有分叶及毛刺;两肺散在     

转录因子E2F-1 siRNA对胃癌MGC803细胞体外侵袭及增殖能力的影响

背景与目的:转录因子E2F-1作为细胞周期进程中重要的调控因子,与肿瘤的发生有着密切的关系.本研究通过转染人E2F-1基因的小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)表达质粒,探讨其对胃癌MGC803细胞中E2F-1表达及侵袭和增殖能力的影响.方法:用脂质体LipofectamineTM 2000将具有短发夹结构的人E2F-1 siRNA表达质粒转染至MGC803细胞,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白印迹(Western blot)技术分别检测E2F-1 mRNA及蛋白的表达;应用体外侵袭实验及克隆实验分别检测E2F-1 siRNA表达质粒对MGC803细胞侵袭力和增殖能力的影响.结果:成功转染E2F-1 siRNA表达质粒48 h后.MGC803细胞中E2F-1基凶mRNA表达的抑制率超过90%;与未转染组及阴性对照组细胞比较,E2F-1蛋白的表达分别降低81.5%和79.6%.转染pSilencer4.1-E2F-1质粒组的穿膜细胞数(18.0±2.6)与阴性对照组(48.0±4.6)和空白对照组(54.0±5.6)比较差异有统计学意义(P<0.05),其细胞集落形成数(46.0±2.0)与阴性对照组(122.3±1.5)和空白对照组(128.7±2.1)比较差异也有统计学意义(P<0.05).结论:E2F-1 siRNA表达质粒可显著下调E2F-1基因在胃癌MGC803细胞中的表达,在一定程度上抑制胃癌细胞的侵袭和增殖.     

干扰B7-H4表达通过下调E2F家族相关转录因子抑制乳腺癌细胞的增殖

目的：探讨干扰B7-H4表达对乳腺癌细胞增殖、凋亡、周期以及相关下游分子表达的影响。方法：利用脂质体转染技术分别将特异性靶向B7-H4的siRNA(siB7-H4)及其阴性对照（siNC）转染至对数生长期的乳腺癌T47D和MCF-7细胞,分别命名为T47D-siB7-H4、T47D-siNC、MCF-7-siB7-H4和MCF-7-siNC组。用qPCR法和WB法验证siRNA干扰效果及其对细胞周期分子cyclin D1表达的影响,CCK-8法和FCM分别检测干扰B7-H4表达对T47D和MCF-7细胞增殖、周期和凋亡的影响,qPCR法检测B7-H4干扰对E2F家族相关转录因子表达的影响。结果：成功构建干扰B7-H4表达的乳腺癌T47D和MCF-7细胞。与T47D-siNC和MCF-7-siNC组相比,T47D-siB7-H4和MCF-7-siB7-H4组细胞中B7-H4 mRNA和蛋白表达水平均显著降低、细胞增殖能力显著降低（均P<0.01）,并伴有G1/S期细胞周期阻滞以及cyclin D1表达下调（均P<0.01）,但细胞凋亡率差异无统计学意义（均P>0.05）...     

转录因子E2F1在外阴鳞癌中的表达及意义

目的:探讨转录因子E2F1在外阴鳞癌(VSCC)中的表达情况及其临床意义。方法:采用PCR（qRT-PCR）、Western blot和免疫组化检测30例VSCC及对应癌旁组织中E2F1的水平,分析E2F1表达与临床病理参数的关系。结果:VSCC组织中E2F1的mRNA相对表达量为(1.27±0.04),高于癌旁外阴组织的E2F1水平(0.84±0.06)（P＜0.05）;VSCC组织中E2F1的蛋白相对表达量为(1.16±0.04),高于癌旁外阴组织的E2F1水平(0.93±0.03)（P＜0.05）;免疫组化示VSCC组织中E2F1的阳性表达率(56.67%,17/30)明显高于癌旁外阴组织(33.33%,10/30)(P＜0.05),且其阳性表达率与FIGO分期有关(P＜0.05)。结论:E2F1在VSCC组织中表达上调,且与FIGO分期有关,提示E2F1可能与VSCC的发生、发展有关。     

AJUBA调控MST1 YAP1和TAZ因子促进食管鳞状细胞癌细胞体外增殖 迁移和侵袭

  目的  探讨AJUBA在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）细胞中表达以及是否通过调控MST1、YAP1和TAZ因子影响细胞增殖、侵袭和迁移。  方法  采用Western blot 法检测AJUBA 蛋白在食管癌细胞系KYSE30、KYSE150与KYSE450中的表达水平,构建shRNA 干扰载体AJUBA转染至KYSE150食管癌细胞系;通过体外克隆形成实验、流式细胞术、划痕实验和Transwell实验探究AJUBA对KYSE150细胞的增殖、周期、迁移和侵袭能力的影响。采用RT-PCR和Western blot检测MST1、YAP1和TAZ mRNA和蛋白的表达;核质分离实验检测AJUBA、YAP1和TAZ蛋白表达情况。  结果  稳定干扰AJUBA基因后,平板克隆实验结果显示,与阴性对照组相比,shAJUBA组的细胞克隆形成数量明显减少,差异具有统计学意义（P<0.001）;流式细胞周期实验结果显示,shAJUBA组中的细胞阻滞于G₀/G₁期,G₂/M期与S期细胞显著减少（P<0.05）;划痕实验和Transwell侵袭实验结果显示,与AJUBA空染组相比,shAJUBA组细胞迁移能力和侵袭能力均明显减弱（P<0.001）;RT-PCR与Western blot实验结果显示,shAJUBA组细胞中的MST1、YAP1、TAZmRNA与蛋白表达水平均显著降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。核质分离实验结果提示AJUBA蛋白在正常食管鳞状上皮细胞株（SHEE）细胞核中表达,而在KYSE150细胞胞质与胞核中表达;YAP1和TAZ蛋白在SHEE细胞中不表达,在KYSE150细胞质与细胞核中表达,上述结果差异均具有统计学意义（均P<0.05）。  结论  AJUBA促进食管癌细胞的增殖、侵袭与迁移,可能与激活MST1、YAP1、TAZ因子的表达而影响食管鳞状细胞癌进展有关。