Aβ25-35对原代培养小鼠皮层神经元突触素和PSD-95表达的影响

目的:观察Aβ25-35对小鼠皮层神经元突触损伤作用,观察PSD-95和突触素的表达,进而探讨阿尔茨海默病的发病机制。方法:将小鼠(出生48h内)断头取脑,急性分离皮层神经元,在24孔培养基上培养7d,经NSE染色鉴定为神经元,将Aβ25-35配制成浓度为5μmol/L,分别在0h、1h、2h、4h、6h致伤皮层神经元(每个时间点分别为4孔,设对照组),经免疫组化观察突触素和PSD-95的表达情况。结果:Aβ25-35作用1h后突触素、PSD-95免疫反映复合物的灰度值明显下降,即二者的表达明显减少,1-6h与同期时间点对照组相比差异有显著性(P<0.01),于6h后突触素、PSD-95几乎未见到表达。     

人参皂苷Rg_1对β-淀粉样肽(25-35)侧脑室注射所致小鼠学习记忆障碍的改善作用及其机制

目的　观察人参皂苷Rg1对 β 淀粉样肽 [β AP ,(2 5 - 35 ) ]所致小鼠拟阿尔茨海默 (AD)学习记忆功能障碍的改善作用及其作用机制。方法　小鼠侧脑室注射凝聚态 β AP 4nmol,次日 ,ipRg15和 10mg·kg-1,10d后 ,测试各组被动回避、空间学习记忆能力 ,及皮层、海马组织胆碱乙酰转移酶 (ChAT)和乙酰胆碱酯酶 (AchE)活性变化。结果人参皂苷Rg1可明显改善 β AP所致小鼠被动回避、空间学习记忆能力及皮层海马组织ChAT活性的下降。β AP对小鼠AchE活性无显著性影响 ,但与对照、模型组相比 ,Rg1明显抑制AchE活性。结论　Rg1对 β AP(2 5 - 35 )所致的小鼠学习记忆障碍有显著改善作用 ,其对胆碱能系统的影响是Rg1重要作用机制之一。     

基于网络药理学的急支糖浆治疗咳嗽的作用机制研究及实验验证

目的 运用网络药理学的方法挖掘中药复方急支糖浆治疗咳嗽的有效成分、关键靶点以及潜在作用通路。方法 分别利用中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）和Genecards数据库筛选急支糖浆的活性成分作用靶点和咳嗽的疾病靶点,两者靶点取交集后利用Cytoscape软件构建成分-靶点网络,String数据库构建蛋白质相互作用（PPI）网络,拓扑分析获取关键靶点和成分。通过David数据库进行基因本体论（GO）生物学功能富集分析及京都基因和基因组百科全书（KEGG）信号通路富集分析。通过分子对接技术进一步佐证网络药理学结果的可靠性,通过小鼠咳嗽模型进行实验验证。结果 急支糖浆中共筛选出活性成分163种,可干预咳嗽相关靶点154个,GO富集586个,KEGG通路119条。其中,槲皮素、山柰酚、β-谷甾醇等可能为急支糖浆治疗咳嗽的关键成分,CXCL8、MAPK8、STAT3、TNF等为潜在靶点,GO富集分析的生物功能涉及到细胞增殖、血管生成、炎症反应等,KEGG通路富集分析涉及到TNF、PI3K-Akt、FoxO、HIF-1等信号通路。超过90%的分子对接结果均具有一定的结合活性。使用流式细胞术、实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、酶联免疫吸附（ELISA）的方法验证了急支糖浆对咳嗽小鼠淋巴细胞分化、炎症因子和部分关键靶点表达的影响。结论 急支糖浆治疗咳嗽的作用机制是通过多种活性成分作用于多靶点、多通路产生了调控炎症过程、调节免疫功能、促进细胞增殖、修复受损机体等综合效果,该结果为进一步研究急支糖浆有效成分和作用机制奠定基础。     

基于网络药理学和实验验证探究胆南星对癫痫的作用机制

本研究采用网络药理学方法和膜片钳技术探究胆南星(Arisaema cum Bile)对癫痫(epilepsy)的作用机制。采用TCMSP数据库和文献挖掘获得胆南星的成分及靶点,通过GeneCards和OMIM数据库检索癫痫疾病靶点。应用STRING、DAVID在线平台进行蛋白互作(protein-protein interaction)、KEGG (Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)信号通路和GO (Gene Ontology)基因功能富集分析。利用Cytoscape 3.7.2软件构建“中药-成分-靶点-通路-疾病”拓扑分析网络。动物实验已获得河北医科大学实验动物福利伦理委员会批准。网络药理学结果发现鹅去氧胆酸(chenodeoxycholic acid, CDCA)、去氧胆酸(deoxycholic acid)和β-谷甾醇(β-sitosterol)等9个有效成分,及其相应的5-羟色胺转运体(5-hydroxytryptamine transporter)、GABAA受体α2亚型(gamma-aminobutyric acid rece...     

基于网络药理学和验证实验探讨蒲黄治疗脊髓损伤的分子机制

目的 利用网络药理学和实验验证探讨蒲黄治疗脊髓损伤的分子机制。方法 使用TCMSP数据库及文献资料筛选蒲黄的有效成分及其对应靶点,使用DrugBank、OMIM、TTD、GeneCard数据库获得脊髓损伤相关靶点。Cytoscape构建蒲黄抗脊髓损伤靶点蛋白相互作用（PPI）网络图及“药物–化合物–靶点”网络图,根据网络图中各靶点的拓扑学参数筛选出蒲黄抗脊髓损伤关键靶点及关键成分。使用DAVID数据库对蒲黄抗脊髓损伤靶点进行基因本体论（GO）功能和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析。采用AutodockVina软件对关键化合物与关键靶点蛋白进行分子对接验证。动物实验观察蒲黄对脊髓损伤大鼠后肢运动神经功能的影响及对关键靶点蛋白m RNA表达的影响。结果 共筛选出花生四烯酸、异鼠李素、β谷甾醇、山柰酚、棕榈酸睾酮、山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖基（1→2）-β-D-葡萄糖苷、槲皮素、异鼠李素-3-O-新橙皮苷、香蒲新苷等活性成分。PPI网络分析显示,肿瘤坏死因子（TNF）、白细胞介素（IL）-6、蛋白激酶B(AKT1)、IL-1B、胱天蛋白酶3(CASP3)等蛋白可能在脊髓损伤的...     

基于GC-MS技术结合网络药理学探究石菖蒲挥发油抗阿尔兹海默症的作用机制

目的：通过气相色谱-质谱（GC-MS）技术分析石菖蒲挥发油的化学成分并结合网络药理学研究石菖蒲挥发油抗阿尔兹海默症（AD）的作用机制。方法：采用GC-MS技术对石菖蒲挥发油成分进行精准鉴定,运用TCMSP、Swiss Target Prediction数据库对石菖蒲挥发油成分的作用靶点进行预测。利用Genecards、OMIM数据库获得AD疾病靶点。绘制韦恩图并提取交集靶点,随后对其进行PPI网络构建和拓扑分析、GO富集分析和KEGG通路富集分析,建立“成分-靶点-疾病-通路”网络图;并采用分子对接技术进行验证。结果：经GC-MS分析共得到74个挥发油成分。获得成分疾病交集靶点138个,经PPI网络拓扑分析发现ALB、ACTB、TNF和IL-6 4个核心靶点。GO结果显示,石菖蒲挥发油可能通过激素的反应、对外源性物质刺激的反应和激素水平调节等来发挥抗AD的作用。KEGG结果表明,石菖蒲挥发油可作用于PI3K-Akt、cGMP-PKG、NF-κB和cAMP等信号通路对AD进行干预。分子对接结果表明,石菖蒲挥发油中有效成分与核心靶点具有较好的结合活性。结论：石菖蒲挥发油可通过多靶点和多通路...     

基于网络药理学的五味子治疗炎性肠病机制研究

目的：对五味子进行网络药理学研究,阐明其治疗炎性肠病的有效活性成分及潜在靶点。方法：通过生物学信息数据库预测五味子活性成分的潜在作用靶点,采用Cytoscape软件构建五味子的“成分-靶点-通路”网络模型。结果：五味子中8种成分与17个靶点具有潜在相互作用,涉及神经配体相互作用及TNF信号通路在内的多个生物过程,对炎性肠病起到治疗作用。结论：通过与炎性肠病靶点的关联筛选,结合分子对接验证,发现五味子可通过多种信号通路发挥治疗炎性肠病的作用,PTGS1（COX-1）、PTGS2（COX-2）是五味子各活性成分中作用较多的调节靶点,当归酰戈米辛O对这两个靶点的作用较强。     

阿尔兹海默病发病机制的研究进展及临床用药

阿尔兹海默病(Alzheimer′s disease, AD)是一种常见的中枢神经系统退行性疾病,主要发病于65岁以上的老年人群,通常又被称为原发性老年痴呆症。临床上常表现为记忆功能障碍、认知功能缺失、语言功能下降等,严重影响人们的生活与健康。AD的发病机制尚不明确,其被学界广泛公认的学说有：Aβ沉积及毒性作用学说、Tau蛋白过度磷酸化假说、胆碱能功能缺损学说、兴奋性氨基酸毒性学说以及炎症反应学说等。目前仍未有效的药物来预防、改善或逆转AD的发生,因此研发新型、有效的AD治疗药物成为全球关注的热点。本文对阿尔兹海默病发病机制的最新研究进展及临床用药作一综述,为进一步研究AD提供数据参考。     

雷帕霉素抗阿尔兹海默病的机制研究

大环内酯类抗生素雷帕霉素主要作为免疫抑制剂用于器官移植,近年来亦有许多研究表明它可通过抑制哺乳动物雷帕霉素靶标蛋白(m TOR)、促进自噬等途径发挥神经保护功能。本文就雷帕霉素抗阿尔兹海默病的分子机制研究进展进行综述,主要介绍其在抗衰老、减轻认知损伤、减少β-淀粉样蛋白(Aβ)聚集、促进Aβ的清除、减少Tau蛋白过度磷酸化、抑制NO大量产生以及抗阿尔兹海默的其他神经保护作用等方面的作用。     

海马蛋白与学习记忆的研究

学习记忆是大脑最基本也是最重要的高级神经功能之一,是中枢神经系统功能的整合.海马与学习记忆的关系密切,众多研究表明,损毁双侧海马的动物学习记忆能力明显下降,对动物的分辨学习、防御条件反应的保持及空间学习的能力都有破坏.中枢学习记忆的生理和病理过程与海马多种蛋白的表达具有密切关系,本文主要针对S100β蛋白、淀粉样β蛋白(Aβ)及tau蛋白对大脑学习记忆的关系进行综述.     

基于网络药理学和分子对接法探讨槲皮素治疗2型糖尿病的作用机制

目的 基于网络药理学和分子对接技术探讨槲皮素治疗2型糖尿病（T2DM）的作用机制。方法 通过TCMSP和PharmMapper数据库查询槲皮素的作用靶点，Genecards和CTD数据库收集T2DM的相关靶点，求出槲皮素-T2DM交集靶点并利用STRING和DAVID数据库对交集靶点进行通路分析，使用Cytoscape 3.6.1软件进行"靶点-通路"网络的构建，利用Auto Dock Vina进行分子对接预测槲皮素对T2DM作用靶点的结合能。结果 筛选出槲皮素的潜在靶点312个，与T2DM相关的靶点121个，核心靶点6个：NOS3、CYP1B1、NOS2、TGFB1、TTR和CDKN1A。KEGG信号通路30条，涉及toll样受体信号通路、MAPK信号通路、胰岛素信号通路等。分子对接结果显示，槲皮素与6个核心基因的分子对接亲和力均远小于-20 kJ/mol，结合活性较好。结论 槲皮素治疗T2DM具有多靶点、多通路的作用特点，可能是通过作用于NOS3、CYP1B1、NOS2等核心基因调控toll样受体信号通路、MAPK信号通路、胰岛素信号通路等发挥作用。     

基于网络药理学和分子对接技术研究槲皮素治疗宫腔黏连的作用机制

目的 利用网络药理学和分子对接技术研究槲皮素治疗宫腔黏连的潜在作用机制。方法 在TCMSP数据库查找槲皮素的作用靶点,通过GeneCards、OMIM、DrugBank和PharmGKB数据库,获取宫腔黏连的相关靶基因。取两者交集靶点,利用STRING数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用网络,并根据拓扑参数分析得到核心靶点。利用Metascape平台及微生信平台对核心靶点进行基因本体（GO）功能富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析,最后利用分子对接技术验证槲皮素与核心靶点之间的结合能力。结果 槲皮素与宫腔黏连的共同靶点有105个,其中核心靶点为低氧诱导因子-1α（HIF-1α）、蛋白激酶B1（Akt1）、丝裂原活化蛋白激酶1（MAPK1）、转录因子AP-1（JUN）等。槲皮素治疗宫腔黏连所涉及的主要生物学过程为对细菌源性反应、对脂多糖的反应、氧化应激及活性氧代谢过程等,关键通路为磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/Akt信号通路、肿瘤坏死因子（TNF）信号通路、白细胞介素-17（IL-17）信号通路等。分子对接结果显示槲皮素与HIF-1α分子对接效果最好。结论 槲皮素通过作用于HIF-1α、Akt1、MAPK1等关键靶点,参与PI3K/Akt、TNF、IL-17等信号通路的调控,抑制炎症反应及氧化应激,从而发挥治疗宫腔黏连的作用。     

人参皂苷Rg1对β-淀粉样肽(25-35)侧脑室注射所致小鼠学习记忆障碍的改善作用及其机制

目的　观察人参皂苷Rg₁对β-淀粉样肽［β-AP,(25-35)］所致小鼠拟阿尔茨海默(AD)学习记忆功能障碍的改善作用及其作用机制。方法　小鼠侧脑室注射凝聚态β-AP4nmol,次日,ipRg₁5和10mg·kg^-1,10d后,测试各组被动回避、空间学习记忆能力,及皮层、海马组织胆碱乙酰转移酶(ChAT)和乙酰胆碱酯酶(AchE)活性变化。结果人参皂苷Rg₁可明显改善β-AP所致小鼠被动回避、空间学习记忆能力及皮层海马组织ChAT活性的下降。β-AP对小鼠AchE活性无显著性影响,但与对照、模型组相比,Rg₁明显抑制AchE活性。结论　Rg₁对β-AP(25-35)所致的小鼠学习记忆障碍有显著改善作用,其对胆碱能系统的影响是Rg₁重要作用机制之一。     

石榴治疗炎性肠病作用机制的网络药理学研究与实验验证

目的 探讨石榴治疗炎性肠病（IBD）的作用机制。方法 将32只C57BL/6J小鼠随机分为空白对照组,模型对照组,石榴低、高剂量组,各8只。除空白对照组外,其余各组小鼠分别饮用2%葡聚糖硫酸钠溶液5 d以复制IBD模型。造模成功后,石榴低、高剂量组小鼠分别饮用30%或60%石榴汁,空白对照组和模型对照组小鼠正常饮用纯净水,连续7 d。观察并记录小鼠的体质量、毛发、排便状况、精神状况及疾病活动指数（DAI）;取小鼠结肠,用苏木精-伊红（HE）染色,并进行病理学观察。用网络药理学挖掘石榴治疗IBD的通路,通过TCMSP数据库挖掘石榴有效成分,GeneCards和OMIM数据库检索IBD的潜在靶点,使用Cytoscape 3.7. 0软件进行可视化分析,String数据库进行蛋白互作（PPI）分析。采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测炎性因子白细胞介素6(IL-6)和γ干扰素（IFN-γ）的表达水平,采用免疫印迹（Western blot）法检测炎性相关蛋白信号转导及转录激活因子1(STAT1)的磷酸化程度。结果 石榴低、高剂量组小鼠大便、毛发、精神状况等均好转,且与剂量呈正相关。与模型对照...     

Regorafenib对Aβ1-42诱导的阿尔兹海默病细胞与动物模型的保护作用与机制探究

研究Regorafenib对阿尔兹海默病(Alzheimer’s disease, AD)的保护作用及机制,本研究采用Aβ_1-42损伤造模建立AD细胞模型与AD动物模型,并使用Regorafenib进行干预。使用Western blot法、免疫组化以及qRT-PCR法考察Regorafenib对模型小鼠脑内AD病理的影响,进一步使用Western blot法、Hoechst/PI染色法、JC-1探针法探究Regorafenib对AD细胞损伤模型的改善作用,最后深入分析Regorafenib对AD细胞与动物模型发挥保护作用的分子机制。结果显示,Regorafenib能显著缓解AD小鼠脑中tau蛋白的异常磷酸化,并改善脑内小胶质细胞和星形胶质细胞的异常活化,降低炎症因子表达水平。同时,Regorafenib可以有效缓解Aβ_1-42致SH-SY5Y损伤的细胞模型中tau蛋白异常磷酸化水平;改善细胞凋亡情况及线粒体膜电位的异常下降,并且Regorafenib主要通过调节AMPK/MEK/ERK通路改善Aβ_1-42诱导的阿尔兹海默...     

尼古丁对Aβ_(25-35)诱导学习记忆障碍小鼠的治疗作用

目的探讨nAChR激动剂尼古丁对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导的学习记忆障碍小鼠模型的治疗作用以及可能的作用机制。方法小鼠侧脑室注入凝聚态Aβ25-354.5μl。次日,用药组给予尼古丁0.2和2 mg.kg-1(ip,bid×7d),对照组及模型组ip生理盐水。给药结束4 d后(造模成功后11 d),进行各组行为学及皮层、海马组织乙酰胆碱酯酶(AChE)、胆碱乙酰转移酶(ChAT)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)活性指标的检测。结果定位航行实验发现,训练d 4,模型组小鼠的上台潜伏期和游泳距离明显高于对照组和0.2、2 mg.kg-1尼古丁治疗组(P<0.01);空间搜索实验发现,实验d 5撤除平台,模型组在平台所在象限(第Ⅱ象限)中游泳的时间百分比明显低于对照组(P<0.01)和0.2及2 mg.kg-1尼古丁治疗组(P<0.05);模型组在平台所在象限(第Ⅱ象限)中游泳的距离百分比明显低于对照组(P<0.01),但与0.2及2 mg.kg-1尼古丁治疗组无差别(P>0.05)。酶活性检测发现尼古丁治疗组的AChE及ChAT的活性较对照组明显升高(P<0.01);尼古丁治疗组(2 mg.kg-1)MDA的活性较模型组明显降低(P<0.01),尼古丁治疗组(0.2 mg.kg-1)的活性较模型组无改变(P>0.05);尼古丁治疗组的GSH活性较模型组明显升高(P<0.01)。结论尼古丁能够改善Aβ25-35诱导痴呆小鼠的学习记忆功能障碍,该作用与其增强ChAT的活性以及抗氧化应激有关。     

基于网络药理学和细胞实验探讨小檗碱治疗肺癌的作用机制

目的 探究小檗碱对人非小细胞肺腺癌细胞A549的增殖抑制和凋亡作用机制。方法 采用在线数据库获取小檗碱和肺癌的交集靶点,构建蛋白互作（PPI）网络分析,对靶点进行基因本体功能（GO）及京都基因和基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。以人非小细胞肺腺癌细胞A549为受试对象开展实验验证,采用细胞计数试剂法（CCK-8）筛选小檗碱对细胞增殖抑制作用时间和浓度;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡;蛋白质印迹法（Western blotting）检测p53、Bax和Bcl-2蛋白表达水平。结果 网络药理学分析得到交集靶点92个,富集到的信号通路主要包括p53和凋亡（Apotosis）等信号通路。实验验证发现,不同浓度的小檗碱均能不同程度地抑制肺腺癌A549细胞的增殖（P <0.01）;干预24 h时,IC50值为8.51μg/ml,且小檗碱能显著上调p53和Bax蛋白,下调Bcl-2蛋白的表达水平（P <0.01）。结论 小檗碱可以作为一种潜在的抗肿瘤药物进一步研究。     

基于网络药理学和实验验证车前子治疗狼疮性肾炎的作用与调控机制

目的 利用网络药理学、分子对接和实验验证方法探讨车前子治疗狼疮性肾炎(LN)的潜在机制。方法 通过网络药理数据库获取车前子活性成分,预测其潜在作用靶点和LN疾病靶点,利用STRING和Cytoscape构建蛋白互作图,将核心靶点进行GO和KEGG富集分析。体外实验验证车前子活性成分Quercetin对TNF-α诱导人肾小球系膜细胞(HMC)异常增殖的改善作用。结果 经筛选得车前子和LN共同作用靶点60个,治疗主要与MAPK、PI3K等通路密切相关。分子对接结果表明,核心成分与AKT1、IL-1B等关键靶点有较好结合活性。通过体外实验,Quercetin可通过调控AKT,ERK1/2和IL-1β抑制TNF-α诱导的HMC异常增殖。结论 本研究表明车前子可能通过多成分-多靶点-多途径作用于LN,并为LN新药开发和机制研究提供了天然的候选产物和思路。     

川贝母药理作用机制的网络药理学研究

目的 探讨川贝母药理作用机制及可能适用的临床病症.方法 采用中药系统药理学数据库与分析平台(TSMSP)获取川贝母的有效化学成分,以口服生物利用度(OB)≥30％及药物相似性(DL)≥0.18为标准,鉴定潜在活性成分;采用UniProt数据库进行靶点基因转换;采用DAVID 6.8数据库和Cytoscape 3.5.1...     

基于网络药理学和分子对接探讨西黄丸治疗宫颈癌的作用机制

目的 利用网络药理学和分子对接的方法研究西黄丸治疗宫颈癌的分子机制。方法 采用计算机检索TCMSP、BATMAN-TCM数据库,并筛选西黄丸的有效活性成分及作用靶点。检索OMIM、GeneCards数据库,获得宫颈癌的疾病靶点,合并去重后,与西黄丸获得的有效成分靶点取交集。运用String数据库构建蛋白质相互作用（PPI）网络图。利用Cytoscape3.9.1软件进行可视化,并采用DAVID数据库对交集基因进行（GO）功能富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。最后运用AutoDock Vina、Pymol软件进行分子对接验证。结果 筛选得到西黄丸70个主要活性成分,包括表雄酮、槲皮素、雄甾酮等。与宫颈癌相关的靶点有116个,核心靶点有肿瘤蛋白P53(TP53)、表皮生长因子受体（EGFR）、蛋白激酶B1(Akt1)、白细胞介素（IL）-6、原癌基因（MYC）、转录因子AP-1(JUN)、半胱氨酸蛋白酶3(CASP3)、IL-1B、肿瘤坏死因子（TNF）、雌激素受体1(ESR1)、B淋巴细胞2(Bcl-2)、低氧诱导因子-1A(HIF-1A)、基质金属蛋白酶9(M...