下调miR-21 抑制PI3K / AKT 信号通路对白血病细胞增殖凋亡的影响

目的:探讨miR-21 对白血病K562 细胞增殖凋亡的影响及对PI3K/ AKT 信号通路的调控作用。方法:将K562 细胞分为对照组、miR-21 NC 组和miR-21 干扰组,对照组不做处理,后两组采用阳离子脂质体LipofectamineTM2000 转染miR-21 inhibitor 和miR-21 negative control。转染48 h 后,利用实时荧光定量(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-21 mRNA 的表达情况,采用MTT 比色法检测miR-21 对细胞增殖率的影响,流式细胞仪检测miR-21 对细胞周期和凋亡率的影响,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测miR-21 对各组细胞中PI3K/ AKT 信号通路相关蛋白PI3K、AKT 和p-AKT 表达的影响。结果:miR-21 干扰组中细胞的miR-21 mRNA 表达水平和细胞的存活率较对照组和miR-21 NC 组均明显降低;与对照组和miR-21 NC 组比较,流式细胞仪检测miR-3 干扰组中G0/ G1 期所占细胞比例明显升高,S 期细胞所占比例明显下降,细胞的凋亡率明显升高。Western blot 检测p-AKT 的表达水平较对照组和miR-21 NC 组明显下降,但PI3K 和AKT 蛋白的表达水平变化不大。结论:下调miR-21 能够抑制白血病K562 细胞的增殖,促进其凋亡,其作用机制可以与抑制PI3K/ AKT 信号通路有关。     

槲皮苷通过抑制PI3K/AKT信号通路诱导胃癌SGC7901细胞凋亡

目的:探讨槲皮苷是否通过抑制PI3K/AKT信号通路诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡。方法:选取SGC7901细胞作为研究对象,采用MTT法检测槲皮苷对SGC7901细胞的毒性作用并测定IC50值。实验分为对照组(不加药处理)、槲皮苷组(采用200μmol/L槲皮苷处理)、PI3K/AKT通路激动剂胰岛素样生长因子1(IGF-1)组(采用100μg/L IGF-1处理)和槲皮苷+IGF-1组(采用200μmol/L槲皮苷+100μg/L IGF-1共处理)。处理48 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测cleaved caspase-3、p-AKT(Ser473)、AKT、p-PI3K(Tyr508)和PI3K的蛋白水平。结果:从100μmol/L开始,随着槲皮苷处理浓度的逐渐升高,SGC7901细胞活力显著降低(P 0. 05),槲皮苷作用48 h的IC50值为275. 40μmol/L。200μmol/L槲皮苷作用SGC7901细胞48 h后,与对照组比较,细胞凋亡率和cleaved caspase-3蛋白水平显著上升(P 0. 05),p-AKT和p-PI3K蛋白水平显著降低(P 0. 05),然而IGF-1与槲皮苷共同作用时,IGF-1可逆转槲皮苷对SGC7901细胞的作用效果。结论:槲皮苷能够诱导胃癌SGC7901细胞凋亡,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路的激活有关。     

胃癌中LINC00659的表达及其通过调控PI3K/AKT信号通路影响胃癌细胞增殖

目的 探讨LINC00659在胃癌组织及胃癌细胞中的表达,并探讨其通过调控PI3K/AKT信号通路影响胃癌细胞增殖的分子机制。方法 采用qRT-PCR法检测LINC00659在胃癌组织及人胃癌细胞株中的表达情况;构建慢病毒介导LINC00659敲减或过表达胃癌细胞株模型,qRT-PCR法检测转染效率;CCK-8法检测LINC00659对胃癌细胞增殖能力的影响;克隆形成实验检测细胞集落形成能力;Western blot法检测敲减或过表达LINC00659后胃癌细胞中Ki-67、PCNA、PI3K和p-AKT蛋白表达水平。结果 LINC00659在胃癌组织和人胃癌细胞株中高表达(P<0.01);qRT-PCR结果显示,慢病毒感染胃癌细胞后,成功敲减或过表达LINC00659(P<0.01);CCK-8法结果显示：敲减LINC00659显著抑制胃癌AGS细胞的增殖活力,过表达LINC00659促进HGC-27细胞增殖活力(P<0.05);克隆形成实验结果显示,敲减LINC00659抑制AGS细胞的集落形成能力,过表达LINC00659促进胃癌HGC-27细胞集落形成能力(P...     

IL-8通过激活PI3K/AKT通路促进结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭

为研究IL-8对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响并探讨其作用机制,应用免疫组织化学法检测结肠癌组织和正常癌旁组织中IL-8的表达;MTT法检测不同浓度IL-8处理或抑制PI3K/AKT信号通路后结肠癌细胞SW480的增殖情况;Western blotting检测IL-8处理后SW480细胞中p-AKT、t-AKT蛋白的表达;Transwell法检测抑制PI3K/AKT通路或IL-8处理后SW480细胞的迁移和侵袭能力。结果显示,与癌旁组织相比,结肠癌组织中IL-8的表达水平明显提高;IL-8处理后SW480细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显增加,且PI3K/AKT通路异常激活;抑制PI3K/AKT通路可逆转IL-8对SW480细胞增殖、迁移和侵袭的促进作用。由此IL-8可促进结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与激活PI3K/AKT通路有关,可为IL-8在结肠癌中的治疗提供参考。     

粉防己碱通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导卵巢癌细胞自噬

目的:研究粉防己碱(tetrandrine)对人卵巢浆液性囊腺癌SKOV3细胞活力及自噬的影响,并初步探讨其作用机制。方法:采用MTT法检测不同作用浓度的粉防己碱对SKOV3细胞活力的影响。采用吖啶橙染色法观察粉防己碱对SKOV3细胞中自噬溶酶体形成的影响。Western blot法检测粉防己碱处理前后SKOV3细胞自噬相关蛋白LC3的表达情况及相关信号通路的变化。最后,采用MTT法检测粉防己碱单用及联合自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对SKOV3细胞活力的影响。结果:粉防己碱可显著抑制SKOV3细胞的活力(P<0.01),作用24 h其半数抑制浓度为15.21μmol/L。吖啶橙染色结果显示,粉防己碱明显促进SKOV3细胞中自噬溶酶体的生成。Western blot实验结果显示,粉防己碱干预后,SKOV3细胞中LC3-Ⅱ和P62蛋白的表达水平明显上调;同时,粉防己碱能明显降低PI3K/AKT/mTOR信号通路中p-mTOR和p-AKT蛋白的水平(P<0.01)。自噬抑制剂3-MA增强了粉防己碱对SKOV3细胞活力的抑制作用。结论:粉防己碱可通过抑制PI3K/AKT/m...     

槲皮素通过PTEN/PI3K/JNK信号通路减轻小鼠RAW264.7巨噬细胞炎症

目的：探讨槲皮素（quercetin, Que）对细菌脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）诱导的小鼠巨噬细胞炎症模型的抗炎效应及其与第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源蛋白（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten, PTEN）/磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K）信号通路联合抗炎的效果和机制。方法：以小鼠巨噬细胞RAW264.7为研究对象。采用CCK-8实验确认0～100μmol/L Que的安全实验浓度。将细胞分为对照组、LPS炎症细胞模型组（LPS组）和不同浓度的Que处理LPS炎症细胞模型组（Que组）。Griess法检测各组细胞内一氧化氮（nitric oxide, NO）的分泌;ELISA法检测各组细胞上清液中白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)的表达;RT-qPCR、Western blot和免疫荧光法检测Que...     

KDR调节PI3K/AKT/mTOR信号通路对宫颈癌增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨激酶插入区受体（KDR）调节磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路对宫颈癌增殖、迁移和侵袭的影响。方法 通过实时荧光定量PCR实验和免疫组织化学染色测定人宫颈癌组织和其癌旁组织中KDR的表达。体外培养HeLa细胞,随机分为对照组、KDR siRNA组、KDR siRNA阴性对照组、KDR siRNA+740 Y-P(PI3K激活剂)组,分组转染后,通过MTT实验、平板集落形成实验检测各组HeLa细胞增殖;通过Hoechst 33258染色检测各组HeLa细胞凋亡;通过划痕实验、Transwell实验分别检测各组HeLa细胞迁移及侵袭;通过免疫荧光染色检测各组HeLa细胞Bax、Bcl-2表达;通过免疫印迹实验检测各组HeLa细胞上皮间充质转化相关蛋白（Claudin-1、ZO-1、Vimentin、E-cadherin）、KDR蛋白及PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白（p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR）表达。结果 与癌旁组织相比,宫颈癌组织中KDR mRNA表达和KDR阳性表达率明...     

PTTG抑制PI3K/AKT信号通路诱导皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡的机制

目的探讨垂体肿瘤转化基因(pituitary tumoRtransforming genes,PTTG)对皮肤鳞状细胞癌细胞活力、凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法将设计合成的PTTG特异性siRNA(si-PTTG)转染人皮肤鳞癌细胞系A431(si-PTTG组),无干扰作用siRNA(NC组)及未转染的空白细胞(空白组)作为对照组,LY294002作为PI3K/AKT信号通路的抑制剂。通过MTT法、Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒及ROS检测试剂盒分别检测细胞活力、凋亡率和ROS含量。Western blot法检测PTTG、AKT、p-AKT、Cyclin D1和Bax蛋白表达。结果si-PTTG转染A431细胞后,PTTG表达明显降低(P<0.05)。与空白组比较,si-PTTG组和LY294002组细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,si-PTTG组ROS含量明显升高,p-AKT和Cyclin D1蛋白表达明显降低,Bax蛋白表达明显升高(P<0.05)。A431细胞转染si-PTTG,并用LY294002处理,细胞活力明显低于LY294002组,凋亡率高于LY294002组(P<0.05)。结论沉默PTTG表达可抑制皮肤鳞状细胞癌细胞活力,诱导细胞凋亡,其机制与细胞ROS水平增高及PI3K/AKT通路抑制有关。     

PI3K/AKT信号通路在全肝缺血再灌注大鼠肺损伤中的作用

目的 探讨磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）/AKT通路在大鼠全肝缺血再灌注肺损伤中作用。方法 本实验分两部分。(1)36只大鼠分别于肝缺血前与再灌注后不同时点处死取肺。（2）12只大鼠分成Wortmannin组与模型对照组。分别应用Western blot、原位末端转移酶(TUNEL)法与免疫组化法检测肺AKT、磷酸化AKT（p-AKT）表达、细胞凋亡与增殖细胞核抗原（PCNA）表达。结果（1）与缺血前相比,缺血再灌注后肺细胞凋亡指数显著增高; p-AKT/AKT与PCNA阳性指数呈双相变化;肺病理改变严重。（2）p-AKT/AKT与PCNA阳性指数成正相关;与凋亡指数呈负相关。（3)与模型对照组相比,Wortmannin组p-AKT/AKT与PCNA阳性指数显著降低,细胞凋亡指数显著增高,病理改变加重。结论 PI3K/AKT通路可能通过抑制凋亡、促进增殖对全肝缺血再灌注肺损伤发挥保护作用。     

依托咪酯通过PI3K/AKT通路抑制子宫内膜癌细胞增殖的实验研究

目的 探讨依托咪酯(Ed)对人子宫内膜癌细胞增殖以及磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT通路的影响。方法 CCK-8法检测不同浓度(0、10、20、40、80μg/mL)Ed处理的人子宫内膜癌细胞株Ishikawa、KLE、HEC-1-A及正常宫颈上皮细胞HcerEpic的细胞活性并计算其细胞存活率和半抑制浓度(IC₅₀)。HEC-1-A细胞随机分成阴性对照组、阳性对照组(紫杉醇)、Ed低剂量(Ed-10)组、Ed中剂量(Ed-20)组、Ed高剂量(Ed-40)组和Ed高剂量+PI3K激活剂(Ed-40+740Y-P)组。克隆形成实验检测细胞增殖情况,流式细胞术双染法和单染法分别检测细胞凋亡及细胞周期情况,蛋白免疫印迹技术检测PI3K、Akt、磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达水平。结果 不同浓度Ed处理后Ishikawa、KLE、HEC-1-A细胞存活率明显低于HcerEpic细胞(P<0.05),且呈浓度依赖性。Ed对HEC-1-A细胞的抑制作用最明显,故选择HEC-1-A细胞作为重点研究对象。Ed对HEC-...     

乌骨藤提取物通过调控PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制黑色素瘤细胞的活力并诱导细胞凋亡

目的:探究乌骨藤提取物(Marsdenia tenacissima extract,MTE)对黑色素瘤细胞活力及凋亡的作用及机制。方法:用不同浓度(0、50、100和200 mg/L) MTE处理小鼠皮肤黑色素瘤B16-F10细胞24 h或不同浓度MTE处理不同时间(0、24、48、72和96 h),MTT法检测细胞活力。流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot法检测细胞增殖、凋亡和PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白的表达,同时检测通路激动剂胰岛素样生长因子1(IGF-1)处理细胞后p-PI3K及细胞增殖和凋亡相关蛋白的表达。结果:根据预实验结果,选择MTE作用时间为72 h。MTE浓度为100 mg/L和200 mg/L时能明显抑制B16-F10细胞活力及增殖相关蛋白Ki67和PCNA的表达,并且还可诱导B16-F10细胞凋亡,提高凋亡相关蛋白cleaved caspase-3和cleaved caspase-9的蛋白水平;同时,MTE还可显著降低p-PI3K、p-AKT和mTOR的蛋白水平;此外,激动剂IGF-1可明显减弱MTE抑制细胞活力及诱导细胞凋亡的作用。结论:MTE可通过下调PI3K/AKT/mTOR通路活性抑制黑色素瘤细胞活力,诱导细胞凋亡。     

双氢青蒿素通过调控PI3K/AKT通路增强肝癌H22细胞荷瘤小鼠放疗效果

目的:探讨双氢青蒿素(DHA)调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路对肝细胞癌H22细胞荷瘤小鼠放疗增效的影响。方法:构建肝癌H22细胞荷瘤小鼠模型,实验分为模型组、单放疗组、5-氟尿嘧啶(5-FU)组和低、中、高剂量DHA组,每组8只,按照分组进行给药和放疗治疗。隔天测量各组荷瘤小鼠体重和瘤体积,给药结束后鼠尾取血后立刻脱颈处死小鼠。观察DHA对放疗的增效作用和对肿瘤生长的抑制作用,测定淋巴细胞转化程度和自然杀伤(NK)细胞活性,ELISA法检测小鼠血清白细胞介素2(IL-2)和IL-4水平,Western blot法测定小鼠肿瘤组织中PI3K、AKT和p-AKT蛋白水平。结果:成功构建肝癌H22细胞荷瘤小鼠模型。与模型组相比,单放疗组肿瘤3倍倍增时间(TGT3)显著升高(P<0.05),瘤重、淋巴细胞转化程度、NK细胞活性、IL-2和IL-4水平、PI3K表达水平和AKT磷酸化水平均显著降低(P<0.05);与单放疗组相比,随着DHA剂量升高,TGT3、增敏系数、抑瘤率、淋巴细胞转化程度、NK细胞活性及IL-2和IL-4水平随之升高(P<0....     

黄芩苷通过调控PI3K/AKT/NF-κB通路改善大鼠脑出血后的神经元凋亡

目的 研究黄芩苷(Bai)对脑出血模型大鼠神经元凋亡的改善作用并探讨其作用机制。方法 选取30只健康雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(Sham)、脑出血组(ICH)、黄芩苷治疗组(Bai),通过胶原酶IV注射法构建大鼠ICH模型。进行神经功能评分;测定各组大鼠脑组织含水量;HE染色检测脑组织形态;TUNEL法检测大鼠神经元凋亡数量;Western blot方法检测BAX、Bcl-2、Caspase-3以及PI3K/AKT/NF-κB信号通路相关蛋白的表达。结果 黄芩苷能够降低ICH大鼠神经功能评分、减轻ICH模型大鼠的脑水肿、降低ICH大鼠凋亡神经元的数量、上调Bcl-2/Bax比率、降低Cleved-Caspase-3的表达水平、激活PI3K/AKT信号抑制NF-κB蛋白的表达。结论 Bai可通过调控PI3K/AKT/NF-κB信号通路改善ICH大鼠神经元的凋亡,从而减轻ICH大鼠的脑水肿、改善其神经功能。     

PI3K在T淋巴细胞活化与细胞毒效应中的作用

磷脂酰肌醇 3激酶 (PI3K)是T淋巴细胞内重要的信号传导分子 ,具有促进细胞增殖、抑制细胞凋亡、促进骨架蛋白重排、参与细胞胞吐与分泌颗粒、促进细胞间粘附等过程。PI3K的催化产物PI 3,4 P2 和PI 3,4 ,5 P3可作为第二信使传递信号。近年来研究表明PI3K可通过激活PKB、Rac和Ca2 +等信号途径参与T淋巴细胞的活化和细胞毒效应。     

姜黄素下调PI3K/AKT/mTOR通路抑制人肝癌细胞系增殖

目的观察姜黄素对体外培养人肝癌细胞系HL-7702增殖的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养HL-7702细胞,不同浓度的姜黄素(0、10、20、40和80μmol/L)处理48 h。PI3K/AKT抑制剂LY294002联合姜黄素处理细胞。分别用MTT法检测细胞增殖,用Western blot法检测细胞内PI3K、AKT、m TOR、Bax、Bcl-2及活化的caspase-3的蛋白含量。结果姜黄素可以浓度依赖性的抑制HL-7702细胞增殖,增加细胞中PI3K、AKT和m TOR的磷酸化水平(P0.05)。姜黄素可诱导HL-7702细胞凋亡,增加Bax和活化的caspase-3的含量(P0.05),减少Bcl-2的含量(P0.05)。LY294002与姜黄素联用后,姜黄素对细胞增殖及凋亡无明显作用。结论姜黄素可抑制人肝癌细胞系HL-7702增殖,诱导细胞凋亡,作用机制可能与其下调PIK/AKT/m TOR信号通路的活性有关。     

PI3K/Akt信号通路及其抑制剂的研究进展

磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/丝氨酸-苏氨酸激酶（Akt）信号通路在信号转导的调控中扮演着重要角色,能调节细胞增殖、凋亡、代谢、运动、血管生成等生物过程。与其他信号通路相比,PI3K/Akt信号通路的组成部分更庞大,在肿瘤中更多见。目前已证实多种肿瘤中存在PI3K/Akt信号通路的超活化,对肿瘤细胞的存活、生长、运动、血管生成和代谢意义重大。因此,抑制PI3K和与通路相关的成分可能会使肿瘤生长受抑,使患者预后改善。PI3K/Akt信号通路抑制剂包括针对单一成分的抑制剂和双重抑制剂。目前大量的PI3K抑制剂已在临床前期研究中取得良好结果,有些已经在血液恶性肿瘤和实体肿瘤中进行了临床试验。在此综述中,我们简单的总结了PI3K-AKt通路的研究成果,讨论了PI3K抑制剂从临床前研究到临床研究的发展前景。     

湖北枫杨总黄酮通过调控PI3K/AKT信号通路抑制成纤维细胞样滑膜细胞的迁移和侵袭

目的：观察湖北枫杨总黄酮（PHSTF）对人类风湿成纤维细胞样滑膜细胞（MH7A细胞）迁移和侵袭的抑制作用并初步探讨其可能作用机制。方法：将MH7A细胞分为分为对照组（不做任何处理）、低剂量（6.25 mg/L）PHSTF组、中剂量（12.5 mg/L）PHSTF组、高剂量（25 mg/L）PHSTF组、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）激动剂740Y-P(10μmol/L)组和740Y-P(10μmol/L)+高剂量（25 mg/L）PHSTF组。采用CCK-8法检测MH7A细胞活力;划痕实验和Transwell实验检测MH7A细胞的迁移和侵袭;Western blot检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT蛋白水平。结果：与对照组相比,各剂量PHSTF组MH7A细胞活力显著降低（P<0.05）,划痕愈合面积显著减小（P<0.01）,迁移和侵袭至下室的细胞显著减少（P<0.01）,MMP-2和MMP-9蛋白表达水平及p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值显著降低（P<0.01）。与高剂量PHSTF组相比,PI...     

055 PI3K在T淋巴细胞活化与细胞毒效应中的作用

磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)是T淋巴细胞内重要的信号传导分子，具有促进细胞增殖、抑制细胞凋亡、促进骨架蛋白重排、参与细胞胞吐与分泌颗粒、促进细胞间粘附等过程。PI3K的催化产物PI-3，4-P2和PI-3，4，5-P3可作为第二信使传递信号。近年来研究表明PI3K可通过激活PKB、Rac和Ca(2+)等信号途径参与T淋巴细胞的活化和细胞毒效应。     

PI3K/AKT通路介导H_2O_2预处理减轻PC12细胞氧化损伤

目的探讨PI3K/AKT信号通路是否参与H2O2预处理诱导的适应性细胞保护作用。方法体外培养PC12细胞,建立H2O2预处理对抗高浓度H2O2诱导细胞损伤的实验模型。应用甲氮甲唑蓝(MTT)法测定细胞的存活率,比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)的活性,碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫印迹法(Westernblot)测定AKT的表达。结果 100μmol H2O2预处理PC12细胞90 min可显著地抑制300μmol H2O2引起的损伤,使细胞存活率从50.2%±4.6%升高至83.8%±3.5%,LDH活性由103%±10.2%下降至68.5%±5.3%,细胞凋亡率由65.5%±4.1%下降至37.1%±2.3%(P<0.01)。100μmol H2O2预处理诱导p-AKT的表达,PI3K抑制剂ly294002阻断了H2O2预处理引起的p-AKT表达。同时ly294002拮抗了H2O2预处理诱导的抗细胞损伤和凋亡作用。结论 H2O2预处理通过PI3K途径引起AKT的活化,PI3K/AKT通路的活化介导了H2O2预处理诱导的适应性细胞保护作用。