MEX3A在肿瘤中的研究进展

MEX3蛋白是RNA结合蛋白中的一类,参与人的多种生理和病理过程。随着分子生物学研究的进展和人们对肿瘤认识的深入,越来越多的证据表明MEX3A在多种肿瘤的发病和发展中起着重要的作用。MEX3A可能成为很多肿瘤的分子标志物和治疗目标,为肿瘤的诊断和治疗提供了新思路和方向。本文综述了MEX3A的结构、功能特点及其在多种肿瘤发生发展中的研究进展。     

MEX3A在非小细胞肺癌中的表达与功能研究

目的:探究MEX3A基因在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达水平及沉默MEX3A基因后对NSCLC增殖、侵袭、迁移和凋亡及周期的影响。方法:通过mRNA转录组分析及癌症基因图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库信息分析,筛选出在NSCLC中显著高表达的MEX3A基因。通过qRT-PCR检测MEX3A在4种常见NSCLC细胞系中的mRNA表达水平,发现MEX3A在A549和NCI-H292中显著高表达。利用RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)沉默A549和NCI-H292中MEX3A的表达,CCK8及Transwell试验检测沉默MEX3A表达后对NSCLC增殖、侵袭及迁移的影响,流式细胞术分析沉默MEX3A表达后对A549和NCI-H292细胞周期及凋亡的影响。结果:MEX3A在A549和NCI-H292中高表达。沉默MEX3A后NSCLC增殖、侵袭及迁移被显著抑制,细胞周期阻滞于G2/M期,促进细胞凋亡。结论:MEX3A作为NSCLC的促癌基因,参与了NSCLC的生长及增殖过...     

Cdc42小干扰RNA对结肠癌细胞恶性表型的影响

目的 研究细胞周期分裂蛋白 Cell division cycle 42(Cdc42)小干扰RNA(siRNA)对人结肠癌细胞恶性表型的影响.方法 Western blot检测五种结肠癌细胞系中Cdc42的表达.设计并合成靶向CAc42编码区的三对siRNA及阴性对照RNA,应用Lipofectamine~(TM)2000分别转染结肠癌细胞系中高表达Cdc42的Lovo和SW620细胞,RT-PCR和Western-blot分别检测48 h后Cdc42 mRNA及蛋白的表达.Cell Counting Kit-8检测细胞的增殖能力,损伤刮擦实验和Transwell小室法分别检测细胞迁移与侵袭能力的变化.结果 RT-PCR和 Western blot检测显示,CAc42-siRNA能显著下调CAc42 mR-NA和蛋白水平,尤其Cdc42-siRNAl;siRNA处理后的肿瘤细胞增殖受到抑制,细胞迁移、侵袭能力也显著降低.结论 Cdc42-siRNA可有效抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭.提示Cdc42可能成为抑制结肠癌细胞增殖和转移新的分子靶点.     

突变型Survivin逆转HeLa细胞恶性表型的研究

背景与目的：在大多数肿瘤组织中都发现了sunvivin的异常高表达现象,这说明sunvivin在肿瘤发生中具有重要作用。本文的目的在于研究突变型sunvivin对肿瘤细胞恶性表型的影响,并初步探讨其可能机制。方法：构建突变型sunvivin的表达载体,转染HeLa细胞,通过G418筛选,得到稳定表达的细胞克隆;利用流式细胞仪分析HeLa细胞的凋亡;通过Western blot检测突变型survivin对细胞周期蛋白的影响。结果：突变型sunvivin表达质粒在HeLa细胞中表达良好,利用相应的抗体可以检测到其表达的蛋白;表达突变型sunvivin的HeLa细胞与正常对照相比,克隆形成能力明显减弱;瞬时转染突变型survivin的HeLa细胞可以自主发生凋亡;而且,突变型survivin还可以使多核HeLa细胞增多,survivin—N端的作用比survivin T34A更明显;突变型survivin可以影响周期蛋白的cyclin D1,使其蛋白水平分别下降了68％和12％。结论：突变型survivin可以部分逆转HeLa细胞的恶性表型,cyclin D1蛋白水平下降可能是其发挥作用的重要机制之一。     

Cdc42 小干扰RNA对结肠癌细胞恶性表型的影响

 目的 研究细胞周期分裂蛋白Cell division cycle 42(Cdc42)小干扰RNA(siRNA)对人结肠癌细胞恶性表型的影响. 方法 Western blot 检测五种结肠癌细胞系中Cdc42的表达。设计并合成靶向Cdc42编码区的三对siRNA及阴性对照RNA,应用Lipofectamine^TM2000分别转染结肠癌细胞系中高表达Cdc42的Lovo和SW620细胞,RT-PCR和Western blot分别检测48h后Cdc42 mRNA及蛋白的表达。Cell Counting Kit-8检测细胞的增殖能力,损伤刮擦实验和Transwell小室法分别检测细胞迁移与侵袭能力的变化。 结果 RT-PCR和 Western blot检测显示,Cdc42-siRNA能显著下调Cdc42 mRNA和蛋白水平,尤其Cdc42-siRNA1;siRNA处理后的肿瘤细胞增殖受到抑制,细胞迁移、侵袭能力也显著降低。 结论 Cdc42-siRNA可有效抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。提示Cdc42可能成为抑制结肠癌细胞增殖和转移新的分子靶点。     

反义PTTG真核表达载体对人卵巢癌细胞SK-OV-3恶性表型的抑制作用

背景与目的:垂体肿瘤转化基因(pituitarytumortransforminggene,PTTG)是一个新的原癌基因,具有多种促肿瘤生长与转移的作用。目前研究多集中于PTTG在各种肿瘤组织中的表达及其相关的调控机制,而针对其反义阻断可能性的报道较少。本研究中,我们通过构建携带能够表达全长反义PTTGmRNA的真核表达载体,观察其对人卵巢癌细胞株SK-OV-3的反义阻断效应。方法:利用含酶切位点的PCR引物克隆全长PTTG,反向插入真核表达载体pcDNA3.1;用脂质体将重组载体转染SK-OV-3细胞,G418筛选阳性克隆后,Westernblot检测PTTG蛋白和碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)表达的改变,MTT法检测细胞增殖情况,并利用软琼脂糖集落形成实验观察细胞生物学性状的变化。结果:筛选出稳定表达重组pcDNA3.1-PTTGas的SK-OV-3细胞;转染细胞组较未转染细胞组的PTTG、bFGF表达分别减少了61.5%和52.3%;转染细胞增殖明显增强;转染细胞在软琼脂中的集落形成数(2.4±0.8)明显低于未转染组和转染空白质粒对照组(23.3±5.7和21.5±7.9)(P<0.01)。结论:反义PTTG真核表达载体作为一种新的工具,为针对PTTG的肿瘤基因治疗提供了可能性。     

DcR3-RNAi对人SW-480结肠癌细胞系恶性表型的影响

目的:观察研究抑制DcR3基因表达的人SW480结肠癌细胞其恶性表型的改变.方法:应用RNA干扰(RNAi)技术,构建小双链DNA,克隆入表达载体,转染进入SW480结肠癌细胞系(DcR3高表达细胞),在细胞内形成小干扰双链RNA;识别并降解DcR3 mRNA.筛选DcR3低表达转染癌细胞,3H观测其体外DcR3-SW480-RNAi转染细胞的增长率及凋亡表达.结果:转染的DcR3-SW480-RNAi-F1R1细胞可降低DcR3 mRNA的转录,凝胶电泳反应产物显示与对照组相比,DcR3-SW480-RN-Ai-F1R1细胞组条带明显减弱;3H掺入细胞的定量分析显示DcR3-RNAi-SW480结肠癌细胞的数量明显减少,P<0.001;Western 印记检测显示凋亡抗体Caspase-3及PARP表达增加.结论:经转染的DcR3-RNAi-SW480结肠癌细胞其DcR3 mRNA表达降低.肿瘤细胞的生长数量减少,凋亡表达增加, 有一定可探索性抗癌前景.     

曲古菌素A对人结肠癌HCT-116细胞的作用及分子机制

目的：观察曲古菌素A对人结肠癌HCT-116细胞的作用。方法：采用不同浓度曲古菌素A（75、150、300、600ng/ml）分别处理人结肠癌HCT-116细胞,CCK8法检测其对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡的变化;蛋白免疫印迹法检测细胞周期相关基因CyclinD1和DMTF1的表达。结果：曲古菌素A（75、150、300、600ng/ml）组的细胞抑制率在24h、48h、72h分别为（11.88±1.7、24.17±1.40、37.32±1.85）%、（21.00±1.45、31.22±2.10、54.94±1.71）%、（37.69±2.67、43.86±3.20、71.93±5.79）%和（51.90±2.60、61.80±4.90、87.93±5.39）%,不同浓度的曲古菌素A组细胞抑制率均明显高于对照组（P〈0.05）,不同浓度的曲古菌素A组细胞抑制率比较也有统计学差异（P〈0.05）。不同浓度的曲古菌素A作用48h后细胞以G0期居多,细胞阻滞在G0/G1→S期。不同浓度的曲古菌素A作用细胞48h后,凋亡率分别为（4.6±0.55）%、（37.06±7.89）%、（65.53±5.55）%、（75.93±3.28）%,各曲古菌素A组细胞凋亡率均明显高于对照组（P〈0.05）。蛋白免疫印迹法显示曲古菌素A可下调CyclinD1表达、上调DMTF1表达。结论：曲古菌素A可明显抑制结肠癌HCT-116细胞增殖,其机制可能与调控细胞周期相关基因CyclinD1和DMTF1的表达、阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡等有关。     

曲古菌素A对人结肠癌HCT-116细胞的作用及分子机制

目的:观察曲古菌素A对人结肠癌HCT-116细胞的作用。方法:采用不同浓度曲古菌素A(75、150、300、600ng/ml)分别处理人结肠癌HCT-116细胞,CCK8法检测其对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡的变化;蛋白免疫印迹法检测细胞周期相关基因CyclinD1和DMTF1的表达。结果:曲古菌素A(75、150、300、600ng/ml)组的细胞抑制率在24h、48h、72h分别为(11.88±1.7、24.17±1.40、37.32±1.85)%、(21.00±1.45、31.22±2.10、54.94±1.71)%、(37.69±2.67、43.86±3.20、71.93±5.79)%和(51.90±2.60、61.80±4.90、87.93±5.39)%,不同浓度的曲古菌素A组细胞抑制率均明显高于对照组(P<0.05),不同浓度的曲古菌素A组细胞抑制率比较也有统计学差异(P<0.05)。不同浓度的曲古菌素A作用48h后细胞以G0期居多,细胞阻滞在G0/G1→S期。不同浓度的曲古菌素A作用细胞48h后,凋亡率分别为(4.6±0.55)%、(37.06±7.89)%、(65.53±5.55)%、(75.93±3.28)%,各曲古菌素A组细胞凋亡率均明显高于对照组(P<0.05)。蛋白免疫印迹法显示曲古菌素A可下调CyclinD1表达、上调DMTF1表达。结论:曲古菌素A可明显抑制结肠癌HCT-116细胞增殖,其机制可能与调控细胞周期相关基因CyclinD1和DMTF1的表达、阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡等有关。     

小细胞肺癌中miR-194-5p的表达及与MEX3a的相关性

目的:检测小细胞肺癌中微小RNA-194-5p(miR-194-5p)的表达,探讨其临床意义,并关注其与重组人类核糖核酸结合蛋白3a(MEX3a)的关系.方法:选择小细胞肺癌患者共51例作为观察组,分别选择大细胞癌10例、典型类癌10例、不典型类癌5例作为对照组.应用实时荧光定量PCR法检测miR-194-5p的表达,...     

miR-495通过抑制RNF113A的表达调控食管鳞癌细胞恶性表型

目的：探讨微小RNA-495(miR-495)对食管鳞癌细胞恶性表型的影响及分子机制。方法：在食管鳞癌细胞Eca109中转染miR-495模拟物、miR-495抑制剂及相应的随机对照序列,分别采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测miR-495的表达,CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期及凋亡率变化,Transwell实验检测细胞的侵袭和迁移情况,并用qPCR和Western blot检测下游靶基因RNF113A mRNA和蛋白的表达。结果：与对照组比较,转染miR-495模拟物组Eca109细胞中miR-495 mRNA水平显著升高(P<0.05),转染miR-495抑制剂组Eca109细胞中miR-495 mRNA水平显著降低(P<0.05);各组间细胞增殖能力无显著变化(P>0.05);与对照组比较,转染miR-495模拟物组细胞凋亡增多(P<0.01),迁移和侵袭能力下降(P<0.01),细胞被阻滞在G0/G1期(P<0.01);转染miR-495抑制剂组细胞凋亡减少(P<0.01),迁移和侵袭能力升高(P<0...     

Tpr-Met致NIH3T3细胞恶性转化的分子机制初探

[目的]探讨NIH3T3细胞恶性转化的分子机制。[方法]用表达Tpr-Met的重组质粒转染NIH3T3细胞致其恶性转化,用软琼脂集落实验和3H-TdR掺入DNA的方法检查细胞的生长状态及增殖性,用Westernblot检测其c-Met及P-Erk、P-Akt表达水平,用EMSA实验检测NF-кB的结合活性。[结果]转染Tpr-Met的细胞形态有明显改变,能在软琼脂中形成集落,形成的集落大且明显增多,转染pcDNA3.1/c-Met/Tpr-Met的细胞集落数分别是0,71±10和160±12,说明Tpr-Met能诱导NIH3T3细胞恶性转化。用3H-TdR掺入DNA的方法来检测细胞的增殖性,发现转染Tpr-Met的NIH3T3细胞和转染c-Met的NIH3T3细胞相比,转染Tpr-Met的细胞增殖能力明显增强,差异有极显著性(P<0.01)。转化后的NIH3T3细胞DNA与NF-кB的结合能力明显增强,并且P-Erk和P-Akt的表达水平上调。[结论]NF-кB参与了Tpr-Met致NIH3T3细胞恶性转化的信号调控,提示阻断该信号途径有可能抑制肿瘤的生长和转移。     

CYP3A5基因转染HL-60细胞介导耐药表型的研究

目的探讨CYP3A5基因与白血病细胞多药耐药的关系。方法克隆CYP3A5基因全长cDNA,构建CYP3A5基因真核表达重组质粒,稳定转染HL-60白血病细胞。采用四氮唑蓝法（MTT）测定化疗药的半数抑制量IC50值,采用流式细胞术（FCM）分析细胞周期及凋亡细胞百分比。结果空载质粒pcDNA3、重组质粒pcDNA3-CYP3A5稳定转染HL-60细胞。柔红霉素诱导后,HL-60和HL-60／pc细胞出现明显的凋亡峰,凋亡细胞比例分别为7．3％和6．3％;而HL-60／CYP3A5细胞则无明显凋亡峰,凋亡细胞比例为1．2％。HL-60／CYP3A5细胞与HL-60、HL60／pc细胞相比,显著耐受柔红霉素、阿克拉霉素、长春新碱和三尖杉酯碱,耐药倍数分别为2．89,2．01,4．05和2．79倍（P〈0．05）;而对鬼臼噻吩甙则无明显耐受,耐药倍数为1．04倍。结论CYP3A5基因的转录直接导致白血病细胞对蒽环类抗生素及生物碱类药物耐药,而对表鬼臼毒素仍然敏感。     

RNA干扰下调RhoA表达对卵巢癌细胞SKOV-3恶性表型的影响

目的:探讨RNA干扰(RNAi)下调RhoA表达对卵巢癌细胞SKOV-3恶性表型的影响.方法:构建RhoA基因特异性短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体,以脂质体介导转染卵巢癌细胞SKOV-3,RT-PCR和蛋白质印迹法检测RNAi后SKOV-3中RhoA的mRNA及蛋白表达水平变化;Boyden小室体外侵袭和划痕实验观察细胞侵袭和迁移能力,MTT比色法测定转染前后细胞增殖及粘附能力的变化.结果:转染RhoA shRNA的实验组细胞与转染空载体的对照组细胞比较,RhoA mRNA的表达分别为(5.46±2.02)%和(56.37±17.42)%,蛋白质的表达分别为(6.03±2.04)%和(59.03±19.94)%,细胞平均侵袭百分比为(15.84±4.17)%和(33.64±4.64)%,愈合百分比为(44.79±6.21)%和(68.36±4.46)%,增殖能力(A值)分别为0.726±0.166和1.703±0.340,P<0.05(n=3);而粘附能力(A值)分别为0.833±0.137和0.894±0.189,P>0.05(n=3).结论:通过RNAi降低RhoA的表达能降低卵巢癌细胞SKOV-3体外侵袭、迁移和增殖能力.     

姜黄素抑制结肠癌SW480细胞的增殖及其机制

目的:研究姜黄素对人结肠癌SW480细胞增殖以及survivin、caspase-3和p-Akt表达的影响。方法:用不同浓度姜黄素(5～40μmol/L)作用SW480细胞24、48和72 h,MTT法检测姜黄素对SW480细胞生长的抑制作用,Western blotting法检测SW480细胞中survivin、caspase-3和p-Akt蛋白的表达。结果:姜黄素以剂量(5～40μmol/L)和时间(24～72 h)依赖的方式抑制SW480细胞的增殖(P<0.01),40μmol/L姜黄素作用72 h对SW480细胞生长的抑制率可达(75.86±3.93)%。姜黄素抑制SW480细胞中p-Akt、survivin蛋白的表达、促进caspase-3蛋白的表达,均呈时间和剂量依赖性;40μmol/L姜黄素作用SW480细胞48 h后p-Akt和survivin蛋白表达显著减少[(0.204±0.025)vs(0.367±0.035),P<0.01;(0.208±0.014)vs(0.385±0.034),P<0.01],caspase-3蛋白表达显著增加[(0.371±0.028)vs(0.127±0.023),P<0.01]。结论:姜黄素抑制SW480细胞增殖,其机制可能与抑制Akt磷酸化、下调survivin和上调caspase-3蛋白的表达有关。     

膀胱原发恶性淋巴瘤的临床病理特点、免疫表型和预后

目的 探讨膀胱原发恶性淋巴瘤的临床、病理组织学特点和免疫表型。方法 回顾性总结7例膀胱恶性淋巴瘤的临床和病理组织学资料，免疫组织化学染色确定免疫表型。结果 6例原发性，1例继发性。7例均为老年患者，女性5例，男性2例；6例原发性结外MALT型边缘区B细胞淋巴瘤4例，弥漫性大B细胞淋巴瘤2例，1例继发是弥漫性大B细胞淋巴瘤。结论 膀胱恶性淋巴瘤好发于60岁左右的老年人，常见的临床表现是血尿和膀胱肿块。常见病理类型是弥漫性大B细胞淋巴瘤和结外MALT型边缘区B细胞淋巴瘤。     

c—myc反义RNA转录体的构建及其对HL60细胞恶性表型的影响

本研究构建了c—myc反义RNA真核细胞可诱导表达质粒PGXC．用PGXC及PSV2neo质粒共转染入早幼粒细胞白HL60，经G418抗性筛选得到转染细胞HL60^R，与亲本细胞相比其生长速率明显减低：细胞周期中G1期细胞增多，而S期细胞相应减少；细胞形态及功能呈现分化诱导；在软琼脂上不能形成集落，该细胞在裸鼠体内的致瘤性亦显著减弱以至消失。     

结肠癌细胞中Ese-3对树突状细胞分化成熟的影响

目的:利用体外共培养实验,观察结肠癌细胞SW480中上皮特异性转录因子Ese-3表达水平的改变对树突状细胞（dendritic cell,DC）分化成熟的影响。方法:利用慢病毒系统获得过表达Ese-3的结肠癌细胞SW480（SW480 Ese-3）及其对照细胞株（SW480 NC）。利用磁珠分选方式,从人外周血单个核细胞（PBMC）中获得CD14+细胞,经rhGM-CSF、rhIL-4刺激获得不成熟的DC（iDC）。通过Transwell小室将SW480 Ese-3和SW480 NC细胞分别与iDC进行间接共培养。流式细胞术检测共培养后的DC细胞中HLA-DR、CD14、CD83、CD86 的表达。ELISA检测细胞培养上清中IL-12p70的水平。结果:SW480 Ese-3/DC共培养组DC细胞表面标志物HLA-DR、CD83、CD86水平,较SW480 NC/DC共培养组升高,CD14水平降低;SW480 Ese-3/DC共培养组上清中IL-12p70水平较对照组升高。结论:在体外共培养实验中,SW480细胞过表达Ese-3可促进DC细胞分化成熟。     

香加皮宝藿苷-Ⅰ抑制结肠癌细胞株SW480 和RKO的恶性表型及其作用机制

目的：探讨香加皮宝藿苷-Ⅰ对人结肠癌细胞株SW480 和RKO增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响,并对其机制进行初步的探讨。方法：用不同质量浓度（0、5、10、20 μg/ml）的香加皮宝藿苷-Ⅰ溶液分别处理结肠癌细胞株SW480 和RKO,采用MTT法检测细胞的增殖情况,通过细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,通过Transwell 方法检测细胞的迁移和侵袭能力,通过流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期。通过Western blotting 检测C-PARP、Bcl-2 与caspase-3 蛋白的表达水平,通过RNA-seq 检测分析香加皮宝藿苷-Ⅰ对SW480 细胞转录组的影响及其可能影响的信号通路。结果：香加皮宝藿苷-Ⅰ能抑制SW480 和RKO细胞的增殖、侵袭和迁移,并且能够诱导细胞凋亡和阻滞于细胞G0/G1期。香加皮宝藿苷-Ⅰ处理可上调SW480 和RKO 细胞株中C-PARP与caspase-3 蛋白的表达水平、下调Bcl-2 蛋白的表达水平;RNA-seq数据分析显示,SW480 细胞DNA复制及ERBB信号通路等相关基因的转录都受到香加皮宝藿苷-Ⅰ的影响。结论：香加皮宝藿苷-Ⅰ通过影响凋亡相关蛋白的表达、细胞DNA复制和ERBB信号通路来诱导细胞凋亡和细胞G0/G1期阻滞,进而抑制人结肠癌细胞株SW480和RKO的恶性表型。