二甲胺四环素对大鼠脊髓损伤后Caspase-3表达及细胞凋亡的影响

[目的]探讨大鼠脊髓损伤后应用二甲胺四环素（minocyc line）对Caspase-3表达及细胞凋亡的影响。[方法]成年大鼠脊髓损伤后应用二甲胺四环素的治疗组（A组）和应用生理盐水对照组（B组），于损伤后不同时点取材，用HE染色观察损伤脊髓组织病理变化，用免疫组化染色检测Caspase-3表达阳性细胞，原位末端标记法（TUNEL法）标记凋亡细胞。[结果]HE染色镜检发现脊髓组织病理学改变A组明显轻于B组。A、B两组均发现凋亡细胞及Caspase-3表达，神经细胞凋亡指数及Caspase-3表达均B组〉A组（P〈0．01）。[结论]二甲胺四环素能抑制大鼠脊髓损伤后Caspase-3表达及细胞凋亡。     

白介素-1受体拮抗剂对大鼠急性脊髓损伤后神经细胞凋亡和caspase-3表达的影响

目的：观察白介素-1受体拮抗剂（IL—1Ra）对脊髓损伤（SCI）后继发性神经细胞凋亡和caspase-3表达的影响。方法：60只SD大鼠，随机分为假手术组、脊髓损伤组、IL-1Ra治疗组和生理盐水对照组，每组15只。采用Allen’s法建立大鼠急性SCI动物模型．IL—1Ra治疗组和生理盐水对照组于SCI后立即硬膜下腔内分别注射IL-1Ra（10μg／10μl）和等量生理盐水，于伤后24h以损伤为中心（假手术组取相应部位），切取长约8mm脊髓组织．用蛋白印迹法和免疫组化染色法检测caspase-3表达的变化：采用实时定量PCR法检测caspase-3mRNA的表达情况；用原位末端标记法（TUNEL）检测SCI后神经细胞凋亡情况。结果：SCI后24h，SCI组与假手术组比较受损伤的脊髓组织中caspase-3mRNA和蛋白表达水平均显著升高（P〈O．05），且TUNEL阳性细胞明显增多（P〈O．01）：IL—1Ra治疗组大鼠受损伤节段脊髓组织caspase-3表达及TUNEL阳性细胞数较生理盐水对照组）均明显减少（P〈O．01）。结论：IL-1Ra治疗可减少急性SCI后脊髓组织中caspase-3的表达和神经细胞凋亡的发生。     

他克莫司对大鼠急性脊髓损伤后细胞凋亡及热休克蛋白70表达的影响

目的探讨脊髓损伤后他克莫司（FK506）对热休克蛋白70表达的影响及其与神经细胞凋亡的关系。方法采用Allen法建立大鼠急性脊髓损伤模型。雄性Wistar大鼠72只,随机分为假手术组（n=12）、损伤组（n=30）和FK506组（n=30）。FK506组伤后5min一次性经尾静脉注射FK506（0．3mg／kg）,假手术组和损伤组以相同方法给予0．9％的生理盐水。术后行脊髓功能评分;逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测热休克蛋白70mRNA的表达;免疫组织化学染色检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3和热休克蛋白70的表达;原位末端标记法（TUNEL）检测神经细胞凋亡。结果热休克蛋白70mRNA和蛋白的表达在FK506组较损伤组明显增加（P〈0．05）,分别于伤后6、24h达高峰;FK506组半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3的表达和神经细胞凋亡均较损伤组明显减少（P〈0．01,P〈0．05）;脊髓功能评分在FK506组显著优于损伤组（P〈0．05）。结论FK506能抑制脊髓损伤后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3的活性,减轻神经细胞凋亡,促进脊髓功能恢复,其机制可能与诱导热休克蛋白70表达增加有关。     

大鼠脑损伤后脑神经细胞内bcl-2和bcl-xL水平的变化及意义

目的　观察大鼠急性脑损伤后脑神经细胞内bcl 2、bcl xL的表达状况及意义。　方法55只大鼠采用弥漫性脑损伤模型制成轻、重度 2组大鼠脑损伤模型 ,以免疫组化方法 ,检测脑神经细胞中bcl 2、bcl xL的表达水平 ;以原位细胞凋亡 (TUNEL)法检测神经细胞凋亡水平。　结果　正常大鼠神经细胞中很少有bcl 2表达 (额顶区 4 40± 1 67,海马区 3 2 0± 1 30 ) ;但可见bcl xL表达 (额顶区45 60± 4 34 ,海马区 50 2 0± 3 50 )。大鼠大脑遭受打击后 ,神经细胞bcl 2表达明显增高 ,以伤后第 1天最为明显 (轻度组 :皮层 :30 0± 4 3 ,海马 :46 6± 3 2 ) ,轻度组高于重度组。各观测时间点bcl 2表达水平与神经细胞凋亡水平呈负相关 (r在 - 0 847～ - 1 0 0 0之间 ,P <0 0 1 ,n =1 0 )。bcl xL表达变化不明显。　结论　大鼠急性脑损伤后脑神经细胞内bcl 2表达增高 ,而bcl xL在损伤后变化不大 ,两者可能与急性脑损伤后保护神经细胞避免凋亡有关     

脊髓干细胞移植对脊髓损伤后CD-95和p75表达及神经细胞凋亡的影响

目的探讨胚胎脊髓神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤后CD-95和p75表达及神经细胞凋亡的影响。方法160只sD大鼠随机分为空白组，假手术组，脊髓损伤组，细胞移植组，分别在细胞移植后1、3d、1、2、4周应用苏木素-伊红（HE）染色）、免疫组织化学、Tunel（凋亡测定）标记、电镜方法观察CD-95、p75和神经细胞凋亡的变化。结果移植后1、3d、1、2、4周，脊髓损伤组和细胞移植组比较，CD95（P〈0．05）；p75，P〈0．01。Tunel方法测定细胞凋亡结果，差异有统计学意义（P〈0．05）。电镜观察可见，空白对照组和假手术组未见凋亡现象，细胞移植后1周，损伤对照组电镜下可见大量神经细胞凋亡小体。细胞移植组未见凋亡小体。结论脊髓源性神经干细胞移植后减少了CD-95和p75的表达，也减少了凋亡，说明移植促进了脊髓神经功能的恢复，也抑制了继发性脊髓损伤。     

大鼠脊髓慢性压迫及减压后神经细胞凋亡及其相关基因的表达

目的：观察慢性压迫性脊髓损伤后及减压后神经细胞凋亡和Bcl-2mRNA，P53mRNA,CASPASE-3神经功能恢复的影响。方法：将55只同龄Wistar大鼠，置入后路渐进式压迫装置，制作成慢性压迫性脊髓损伤模型。随机分为假手术对照组（A组5只），慢性脊髓压迫组（B组25只），减压组（C组25只）。应用原原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导dUTP标记（TUNEL）技术及原位杂交检测方法，观察各组细胞凋亡率及细胞凋亡相关基因Bcl-2mRNA、P53mRNA、CASPASE－3在慢性压迫性脊髓损伤后及减压后的表达，分别于损伤后及减压后1、3、7、14、28d对慢性脊髓损伤区进行细胞凋亡及原位杂交检测。结果：A、B、C三组均发现神经细胞凋亡及细胞凋亡相关基因Bcl-2mRNA、P53mRNA，CASPASE－3的表达，A、B、C三组细胞凋亡率及阳性细胞灰度值比较，差异有显著性意义（P＜0．05）。阳性细胞表达程度与细胞凋亡的减少及神经功能的恢复相一致。结论：慢性压迫性脊髓损伤可导致大量的神经细胞凋亡，同时激活内源性保护机制，使脊髓发生适应性改变，减压可能通过激活此机制而减轻神经细胞凋亡，起到保护作用。     

红细胞生成素对马兜铃酸诱导肾小管上皮细胞凋亡的保护机制研究

目的探讨红细胞生成素（EPO）抑制马兜铃酸（AA）所诱导的肾小管上皮细胞（LLC—PK1）凋亡的作用机制。方法以不同浓度AA（5、10、20mg／L）刺激LLC—PK1细胞株，同时培养体系中加入不同浓度的EPO（5、10、20U／m1），另设对照组。各组细胞培养24h后，TUNEL法原位检测细胞凋亡情况；流式细胞仪检测凋亡细胞的比例；Western印迹检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白激酶（caspase）3、bcl—xL的蛋白表达。结果（1）与对照组（6．09±1．84）％相比，AA5mg／L组TUNEL阳性细胞比例增加【（9．79±2．58）％】；AA10、20mg／L阳性细胞比例显著增加[（37．67±8．23）％、（62．95±8．29）％】，与对照组差异有统计学意义（P〈0．05）。AA10mg／L组细胞经EPO10、20U／ml干预后，阳性细胞比例显著下降f（22．41±3．47）％、（14．63±2．66）％，P〈0．051；AA20mg／L组细胞经不同浓度EPO干预后，阳性细胞比例无显著变化。（2）与对照组相比，AA5mg／L组细胞caspase-3的活性表达有少量增加；AA10mg／L组细胞caspase-3显著增加；而AA20mg／L组caspase-3表达降低。与AA10mg／L组相比，EPO10U／ml和EPO20U/ml干预后，细胞caspase-3的表达显著降低。（3）与对照组相比，AA5mg／L组细胞bcl—xL的表达明显增加；AA10mg／L组细胞bcl-xL表达减少；AA20mg／L组细胞bcl—xL表达显著减少。与AA10mg／L组相比，EPO5U/ml干预后，细胞bcl-xL有所增加；EPO10U／ml和EPO20U／ml干预后，细胞bcl—xL的表达显著增加。结论EPO可能通过促进抗凋亡蛋白bcl-xL的表达、抑制凋亡蛋白酶caspase-3的过高表达，从而抑制了AA诱导的肾小管上皮细胞的凋亡。     

牵张性脊髓损伤后神经细胞中Caspase-3表达及其作用的实验研究

目的:观察大鼠牵张性脊髓损伤后脊髓神经细胞中半胱氨酸天冬氨酶3(Caspase-3)的表达及其在神经细胞凋亡中的作用。方法:大鼠脊髓T13~L2经牵张损伤,皮层体感诱发电位监测P1-N1波幅下降至术前波幅70%后维持10m in,分别于术后6h、1、4、7、14、21d处死取材。采用流式细胞仪、原位末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素脱氧尿嘧啶核苷酸缺口末端标记法(TUNEL法)、免疫组织化学检测等方法观察大鼠脊髓神经细胞中Caspase-3表达变化及神经细胞凋亡情况,测定Caspase-3活性。结果:脊髓损伤后神经细胞凋亡率、TUNEL阳性细胞数、Caspase-3免疫组织化学阳性表达及Caspase-3活性测定均较空白对照组及椎板切除组显著升高(P<0.05或0.01),前三项指标改变趋势大致相同,均为术后7d达高峰,而Caspase-3活性则术后4d达高峰。结论:大鼠牵张性脊髓损伤后神经细胞中Caspase-3表达增高、Caspase-3活性增强,是检测神经细胞凋亡的早期生物学指标,对认识脊髓损伤机制具有一定的意义。     

低剂量他克莫司治疗大鼠急性脊髓损伤的实验研究

目的：探讨低剂量他克莫司（tacrolimus，又名FK506）对大鼠急性脊髓损伤是否具有神经保护作用。方法：雄性Wistar大鼠72只，随机分为假手术组（12只）、损伤组（30只）和FK506治疗组（30只）。采用Allen’s打击法致伤大鼠T10脊髓，假手术组仅做椎板切除术。FK506治疗组在脊髓损伤后5min一次性经尾静脉注射FK5060．3mg／kg，其余两组以相同方法给予等量生理盐水。致伤后30min、6h、24h、48h、72h取伤段脊髓组织行病理观察及原位末端标记法（TUNEL）检测神经细胞凋亡，伤后1、3、7、14、21d行脊髓功能BBB评分和斜板实验。结果：伤后3、7、14、21d，FK506治疗组斜板实验和BBB评分明显优于损伤组，两组间比较差异有显著性（P〈0．05）；伤后各时间点FK506治疗组脊髓损伤区出血坏死较损伤组轻；伤后6、24、48、72h神经细胞凋亡FK506治疗组较损伤组明显减少，两组间比较差异有显著性（P〈0．05）。结论：在大鼠急性脊髓损伤后早期应用低剂量他克莫司（0．3mg/kg）治疗对神经具有保护作用，可减少神经细胞凋亡，减轻脊髓继发性损伤，促进脊髓功能恢复。     

米诺环素对大鼠脊髓损伤后线粒体细胞色素C的释放及神经细胞凋亡的影响

目的：探讨大鼠脊髓损伤后应用米诺环素（minocycline）对线粒体细胞色素C的释放及神经细胞凋亡的影响。方法：成年大鼠脊髓损伤后分为应用米诺环素腹腔注射的治疗组（A组）和应用生理盐水的对照组（B组），于损伤后不同时间点取材，采用流式细胞仪磷脂结合蛋白V，碘化丙啶（AnnexinV／PI）双标检测凋亡细胞，HE染色观察损伤脊髓组织病理变化，免疫组化染色检测胞浆中细胞色素C表达阳性的神经细胞以及BBB运动评分观察术后动物行为学。结果：HE染色镜检发现损伤脊髓组织病理学改变A组明显轻于B组；免疫组化染色A、B两组均发现凋亡的神经细胞以及胞浆中细胞色素C的阳性表达，神经细胞凋亡率及细胞色素C表达的阳性细胞率B组均〉A组（P〈0．01）；术后动物行为学观察显示，与B组比较A组大鼠后肢的运动功能显著增强，后肢反射的恢复较快。BBB运动评分B组明显小于A组（P〈0．05）。结论：米诺环素能有效抑制大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡以及线粒体中细胞色素C的释放，促进神经功能的恢复。     

环扎法致大鼠脊髓损伤早期减压后caspase-3的表达及其与神经细胞凋亡相关性研究

[目的]探讨大鼠急性脊髓损伤后早期不同减压时间对神经细胞凋亡及caspase -3表达的影响.[方法]采用环扎法大鼠急性脊髓损伤压迫模型.84只SD大鼠,随机分成4组,对照组即A组:行椎板减压;实验组分为B组:环扎术后8h行减压术;C组:环扎术后72 h行减压术;D组:环扎术后不行减压术.分别于手术后1、3、7、21 d行HE染色、免疫组化染色测定caspase -3的表达、原位末端脱氧核糖核酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸(dUTP)标记法(TUNEL法)检测神经细胞的凋亡水平、行为学(BBB评分,斜板评分)观察大鼠神经功能恢复情况.[结果]各组不同时间点BBB评分、斜板评分之间比较具有显著性差异(P＜0.05);实验组caspase -3、Tunel阳性细胞均在术后1d增多、3d达高峰、7d表达减弱、21 d仍有表达;不同时间点caspase -3、Tunel阳性细胞数比较均具有统计学差异,二者成正相关(r =0.69 ～0.98,P＜0.05).[结论]环扎法致大鼠脊髓损伤动物模型是一种理想的脊髓损伤造模方法.大鼠脊髓损伤早期减压可能阻止或减轻脊髓神经细胞凋亡.     

Expression and effect of Caspase-3 in neurons after tractive spinal cord injury in rats

Thereisextensiveapoptosisafterinjuryofthecentralnervoussystem.Apoptosisisarathercomplicatedprocess,involvingwithsubtleregulationsofmacromolecules,likecellreceptor,adaptormolecule,proteaseandinhibitor.Among them,Caspaseproteasefamilyisthecoreinthe processo…     

脑源性神经生长因子转基因细胞移植和大剂量甲基强的松龙对脊髓损伤后细胞凋亡的影响

目的：探讨大鼠脊髓损伤后腺病毒介导的脑源性神经生长因子（AxCA-BDNF）体外转基因成肌细胞移植和静脉内注射大剂量甲基强的松龙（MP）对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡的影响。方法：120只Wistar大鼠分为：脊髓挫伤组（A组），脊髓挫伤后AxCA-BDNF基因转染的成肌细胞移植组（B组），脊髓挫伤后静脉内注射大剂量MP治疗组（C组），脊髓挫伤后同时应用AxCA-BDNF和MP组（D组）。手术后1、3、7、14、28d用行为学和电生理检查观察大鼠功能恢复情况，并用计算机图像分析技术对脊髓损伤区细胞凋亡（TUNEL法）和Bcl-2蛋白表达（免疫组化法）进行定量分析。结果：四组中均发现凋亡细胞及Bcl-2蛋白阳性表达细胞．图像分析发现四组凋亡细胞核数为A组〉B组〉C组〉D组；Bcl-2免疫反应阳性细胞表达顺序为D组〉C组〉B组〉A组。大鼠后肢功能恢复和电生理检查也有类似的变化趋势。结论：体外转基因成肌细胞移植和大剂量MP都能抑制大鼠脊髓损伤后的细胞凋亡，促进大鼠后肢功能恢复，两者联合应用具有协同作用。     

大剂量甲基强的松龙对大鼠慢性压迫性脊髓损伤后神经细胞凋亡影响的实验研究

目的:观察大剂量甲基强的松龙对大鼠慢性压迫性脊髓损伤后神经细胞凋亡及神经功能恢复的影响。方法:将60只同龄Wistar大鼠,置入后路渐进式压迫装置,制作成中度慢性压迫性脊髓损伤模型。随机分为大剂量甲基强的松龙治疗组(A组,30只)和单纯慢性压迫性脊髓损伤组(B组,30只)。应用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导dUTP标记(TUNEL)技术,分别于慢性压迫性脊髓损伤后1、3、7、14、28d对脊髓损伤区进行细胞凋亡检测。结果:A、B两组均发现细胞凋亡,两组细胞凋亡率比较,差异有显著性(P<0.01和0.05)。治疗组细胞凋亡的减少与神经功能的恢复相一致。结论:慢性压迫性脊髓损伤可导致细胞凋亡,大剂量甲基强的松龙对神经细胞凋亡可起到抑制作用。     

体外转基因成肌细胞移植对大鼠损伤脊髓细胞凋亡的影响

目的：探讨大鼠脊髓损伤后胚胎脊髓和腺病毒介导的脑源性神经生长因子（AxCA-BDNF)体外转基因成肌细胞移植对大鼠脊髓细胞凋亡的影响。方法：将动物分为：大鼠脊髓半切洞损伤明胶海绵填充组（A组）,大鼠脊髓半切洞损伤应用胚胎脊髓移植组（B组）,脊髓半切洞损伤损伤AxCA-BDNF基因转染的成肌细胞移植组（C组）大鼠脊髓半切洞损伤后应用胚胎脊髓和AxCA-BDNF基因转染的成肌细胞移植组（D组）。手术后1、3、7、14、28d应用行为学和电生理检查观察大鼠功能恢复情况,对脊髓损伤区进行细胞凋亡的检测（TUNEL）以及Bcl-2蛋白表达的测定（免疫组化法）。采用计算机图像分析技术,进行定量分析。结果：A、B、C、D四组中均发现凋亡细胞及Bcl-2蛋白阳性表达细胞,图像分析发现,各组凋亡细胞核为A＞B＞C＞D;Bcl-2免疫反应阳性细胞表达顺序为D＞C＞B＞A,Bcl-2免疫反应阳性细胞的表达与大鼠后肢功能恢复有同样的变化趋势。结论：大鼠胚胎脊髓和体外转基因成肌细胞移植能抑制脊髓损伤后的细胞凋亡。     

促红细胞生成素在大鼠脊髓缺血再灌注损伤中的表达及其意义

目的:观察促红细胞生成素(EPO)在大鼠脊髓缺血再灌注损伤(SCII)中的表达和重组人促红细胞生成素(rhuEPO)预处理对再灌注损伤脊髓神经细胞的作用。方法:将W ister大鼠分为正常组、假手术组、rhuEPO处理组和生理盐水对照组;rhuEPO处理组和生理盐水对照组于术前3h腹腔注射rhuEPO和生理盐水,制备大鼠脊髓缺血再灌注损伤模型。以免疫组化和W estern blot法检测脊髓组织中EPO的表达变化;以原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导dUTP标记法(TUNEL法)检测细胞的凋亡情况。结果:EPO在无损伤脊髓中即有少量的表达,SCII后8h表达显著上调,于12、24h(12h与24h组比较差异无显著性意义,P>0.05)达高峰,伤后3d表达逐渐下调,5d仍保持较高水平。rhuEPO处理组SCII后8h、12h及24h时神经细胞凋亡水平明显低于生理盐水对照组,差异有显著性意义(P<0.01)。结论:在脊髓缺血再灌注损伤中EPO呈现时序性表达变化,可能是机体内源性神经保护的机制之一;EPO预处理能明显抑制SCII后神经细胞的凋亡。     

大鼠牵张性脊髓损伤后细胞凋亡及相关基因表达的实验研究

目的观察大鼠牵张性脊髓损伤后细胞凋亡现象,检测脊髓损伤后凋亡相关基因的表达。方法大鼠脊髓T13～L2经牵张损伤,皮层体感诱发电位(CSEP)监测P1N1波幅下降至术前波幅70%后,分别于术后30min、6h、1、4、7、14、21d处死大鼠,取材(n=4)。应用流式细胞仪、原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导dUTP标记(TUNEL)技术观察脊髓细胞凋亡情况,用免疫组化检测p53、bax和bcl2的表达。结果流式细胞仪及TUNEL法检测显示,损伤组术后6h凋亡细胞开始增多,术后7d细胞凋亡率达高峰,随后开始回落,持续21d,与空白对照组及椎板切除组比较,差异有显著性意义(P<005,001)。TUNEL法染色显示,白质中出现大量胶质细胞凋亡。免疫组化染色显示损伤组术后6h开始,p53、bax和bcl2阳性表达开始增多,p53阳性细胞数术后4d达高峰,bax和bcl2术后7d达高峰,损伤组各时相点的阳性表达与空白对照组与椎板切除组比较差异有显著性意义(P<005,001)。结论牵张性脊髓损伤后存在细胞凋亡现象,从形态上看包括神经元和胶质细胞凋亡,细胞凋亡是牵张性脊髓损伤继发损害中细胞死亡的一种重要形式,也是继发损伤期的重要病理变化。凋亡相关基因p53、bax大量表达,可能在脊髓细胞凋亡过程中起重要作用。