接触性生物检材提取DNA方法的比较

目的 建立提取接触性生物检材DNA的新方法.方法 用PrepFiler ExpressTM法医DNA提取试剂盒提取各类接触性生物检材DNA并STR分型;将检验成功并可以重复的检材各取5份,用Chelex-100法、M48磁珠法和Chelex-100+纯化法3种方法提取接触性检材DNA,洗脱体积为50 μL,用Identifiler Plus复合扩增,并对检验结果分析比较.结果 对于接触性生物检材,采用PrepFiler ExpressTM法医DNA提取试剂盒STR分型的成功率最高,并将该方法加以实际应用.结论 PrepFiler ExpressTM法医DNA提取试剂盒是提取接触性生物检材DNA的一种新方法,可应用于法医实际案件检验.     

用Chelex-100方法提取肋软骨DNA105例

目的研究尸体所处环境、死亡时间的条件下,用Chelex-100方法提取肋软骨DNA。方法对案件中不同条件腐败尸体，采用Chelex-100方法提取肋软骨DNA，进行PCR扩增及STR分型。结果提取肋软骨均可获得STR分型。结论肋软骨是法医检案中的一类具有实用价值的检材。     

口腔粘膜脱落细胞DNA多态性分型检测在法医学应用的初步研究

目的研究各类口腔粘膜脱落细胞的微量生物性捡材中DNA提取和检验的方法,初步论证牙刷等载体作为法医物证检材的可能性。方法分别采用Chelex-100法、有机萃取法、联合抽提法三种方法提取口腔粘膜脱落细胞载体的样本DNA,进行CTTv四个STR位点单步复合扩增和两步级联扩增两种STR-PCR方式的扩增及各位点的等位基因检测。结果实验样本中,除了1例牙刷和2例牙签未能STR位点的正确分型外,其余各无关个体口腔粘膜脱落细胞载体均可以得到与标准血痕阳性相同的STR基因型。结论根据检材的PCR相对模板DNA量,选择适宜的DNA多态性检测分型方法,各类常见的含有口腔粘膜脱落细胞检材可以进行DNA检测分型,这类检材在法医检案中具有应用价值。     

一种简易血滤纸DNA提取方法的应用

在DNA分析技术应用于实际检案过程中，从各类生物检材中得到高质量的DNA是关键。我们较常见到的检材是抗凝血，而在实际应用中，发现红细胞的裂解随着检材放置时间的延长，而越来越困难。众所周知血红素的衍生物对PCR有抑制作用，而增加裂解红细胞的次数却使得白细胞丢失。基于这种情况，我们反复比较各种方法，终于找到一种简易血滤纸DNA提取方法。现报告如下。     

直接扩增技术在接触性检材 DNA检验中的应用

目的：将DNA直接扩增技术引入案件现场不同的接触性检材的检验中,构建有效的接触性DNA的生物检材的检验方法。方法采用剪取、擦拭等方法对手套、烟蒂、衣服、饮料瓶、吸管及残缺指纹等检材进行取样,采用DNA直接扩增技术获得短串联康复序列（short tandem repeat ,STR）分型。结果 DNA直接扩增技术在5种不同检材中检出的基因型均为单一个体来源,其对手套、烟蒂、衣服、饮料瓶和吸管、残缺指纹检材的成功率分别为90％、100％、70％、90％和60％,平均成功率在70％以上。分别对5种检材多处取点样品进行平行扩增,手套、烟蒂检材3个点位成功率均在90％以上;饮料瓶、吸管3个点位的成功率达80％～90％;衣服3个点位的成功率在60％～70％;残缺指纹3个点位的成功率在50％～60％。结论 DNA直接扩增技术对接触性DNA检材检验具有较高的有效应,其结果可靠,重复性强。     

PCR及Real-time PCR评价细菌DNA提取方法

目的:比较几种不同的细菌DNA提取方法,建立一种适于PCR和Real-time PCR的细菌DNA提取方法.方法:分别用蛋白酶K法、碱裂解法、Chelex-100 NP40、Chelex-100 TritonX-100法和水煮法提取同种浓度大肠杆菌DNA,测定OD260/280;用不同方法提取不同浓度的大肠杆菌DNA,进行PCR和实时荧光定量PCR扩增,比较灵敏度.结果:5种方法提取细菌DNA,其中Chelex-100 NP40 法纯度(OD260/280=1.79±0.03)最高,此方法所提取的DNA产物进行PCR及Real-time PCR扩增未见假阳性及假阴性,其灵敏度为10个/ml细菌浓度.结论:Chelex-100 NP40的细菌DNA提取方法纯度及灵敏度高,且适应于PCR及Real-time PCR.     

几种水稻田土壤微生物总DNA提取方法的比较

目的：使人们在提取土壤总DNA时,可以根据不同的要求选用不同的方法。方法：选用了5种现在较常用的土壤微生物总DNA提取方法从水稻田土壤中提取总DNA,并对5种方法提取的DNA的质量和数量进行比较评价。结果：5种方法都可以从土壤中提取到长度大于48kb的DNA片段,但不同方法提取的DNA的产量存在明显差异。土壤总DNA都不需要纯化就可以用于PCR扩增,使用细菌16SrDNA基因的引物可以扩增得到相应的片段。结论：Bourrain法和Martin-Laurent法可以较快地提取出DNA,Martin-Laurent法提取的DNA的量最多,Tiedje法和Janssen法提取的DNA片段最大,Janssen法提取的DNA纯度最高,Reddy法提取的DNA的完整性和PCR扩增效果最好。     

现场DNA物证证据的提取、保存及检验应用进展

目的为了给刑事案件诉讼提供准确可靠的证据,在办理凶杀、强奸等多种刑事案件时,经常需要对各种来源于人体的生物检材进行个人同一认定检验。方法利用法医DNA技术对现场提取的血液(斑)、精液(斑)、唾液(斑)、人体组织、骨骼等检材进行检验,为案件侦破提供科学依据或线索;利用DNA数据库技术更大的发挥法医DNA技术在许多案件侦破中的应用,还可以利用法医DNA技术对灾难性事件(案件)中确定死亡人数、对受害者的身源进行鉴别。结果结论利用DNA物证可以为案件侦查和诉讼提供更多证据     

实验模型下两种全基因组扩增技术对指纹DNA检验的效能

目的对简并寡核苷酸引物PCR（Begenerate oligonucleotide-primed PCR,DOP-PCR）和扩增前引物延伸PCR（Primer extension pre-amplification PCR,PEP-PCR）用于指纹检材DNA检验的价值进行研究。方法建立2种指纹检材DNA模型,分别用普通PCR、DOP技术和PEP技术三种方法对指纹DNA样本进行STR分型,对三种方法的效能进行比较评价。结果实验模型1条件下,三种方法均不能获得满意分型结果;模型2条件下,DOP和PEP两种方法可以增加STR分型的成功率和信息量。结论 DOP和PEP技术必须结合高效的DNA提取技术才能最大程度发挥其检验效能。     

改良外周血DNA提取方法的效果分析

目的 探讨经济有效提取外周血DNA的方法.方法 对常用外周血DNA提取方法(试剂盒提供方法)进行改进,比较常用试剂盒方法与改进方法的效果.结果 改进法提取DNA质量及扩增效果均明显优于常用试剂盒方法.结论 改进法提取外周血DNA成功率高、质量好、扩增效果更好,并且不增加试剂成本.     

犯罪现场中生物检材的发现和提取与案件侦破

随着DNA检验技术的发展，对微量生物检材的检验越来越成为可能。同样，随着犯罪手段的日益智能化，微量生物检材在重大案件中的作用愈来愈重要，甚至对整个重大案件起着决定性作用。因此，如何有效地发现和提取生物检材特别是微量的生物检材显得愈为重要。     

不同检材微量血间日疟原虫PCR检测模板制备方法的研究

目的 探寻不同检材微量血间日疟原虫PRC检测模板制备的方法.方法 全血标本采用酚/氯仿抽提法、洗涤沉淀法、Chelex煮沸法和洗涤水煮法;滤纸干血滴及厚血膜标本以Chelex煮沸法和洗涤沉淀法制备模板.以间日疟原虫特异性引物作PCR扩增检测模板制备的效果.结果 采用上述4种不同的方法制备的全血间日疟原虫DNA模板与采用Chelex法和洗涤沉淀法制备的滤纸干血滴以及厚血膜疟原虫DNA模板均可被扩增出1条341bp的间日疟原虫特异性DNA条带,与预期的扩增片断大小一致;不同方法制备的10份间日疟患者血样DNA模板用于PCR扩增检测,结果无明显差异.其中,Chelex煮沸法和洗涤沉淀法对不同检材的疟原虫感染血样DNA模板均能有效制备,且可在同一离心管中进行,减少了交叉污染的机会.结论 Chelex法和洗涤沉淀法简便、实用,适用于不同检材微量血疟原虫PRC模板的制备.     

3种提取接触性检材脱落表皮细胞DNA方法的实验研究

目的对3种提取接触性检材脱落表皮细胞DNA的方法进行实验研究和比较,以获得最佳的方法.方法分别采用Chelex-100小体系法、磁珠法、改良磁珠法法对脱落表皮细胞的DNA进行提取,并对检测结果进行分析比较,探讨提取接触性检材脱落表皮细胞DNA的方法.结果磁珠法和改良磁珠法均能获得较高质量的细胞核DNA STR基因座分型,且后者的分型效果更好.Chelex-100小体系法的STR基因座分型效果不佳.结论磁珠法和改良磁珠法均能有效检测接触性检材脱落细胞DNA,故在法医检案中遇到接触性检材时考虑选择改良磁珠法.     

细菌DNA提取方法比较

目的：比较细菌DNA4种提取方法的优缺点。方法：采用水煮法、传统法、Genmiction DNA Kit法、E．ZNA法分别制备18种细菌DNA，比较4种方法提取DNA纯度及量的差异。结果：4种方法制备的DNA均可成功应用于PCR扩增，水煮法与E．ZNA法提取DNA量都较大，但前者纯度低于后者；Genmiction DNA Kit法提取DNA纯度高，但量较低；传统法提取的DNA量及纯度均较低，但经济、可靠。结论：4种方法各具特点，应根据实验目的选用。     

外周血DNA提取方法的比较及改良

目的 对3种提取外周血的实验方法进行了比较，并建立一种简便、快速、有效的外周血基因组DNA的提取方法。方法 采用常规酚／氯仿提取法、碘化钾法和外周血液DNA提取法。结果 外周血液DNA提取方法提取外周血基因组DNA的纯度高，通过电泳图明显可见。结论 外周血液DNA提取简便、快速、有效适用于临床标本的研究。     

生物检材在案发现场的发现与提取

目的探讨现场生物检材的发现与提取技巧。方法结合实际破案工作,综述生物检材在现场中分布范围、特点及提取技巧。结果全面、细致勘查现场,严格操作规范是保障生物检材得以发现并提取的关键环节。结论现场勘查技术人员需重视生物检材的发现与提取技巧。     

金黄色葡萄球菌DNA提取方法的研究

目的:建立一种简易的金黄色葡萄球菌DNA提取方法。方法:用4种不同的细菌DNA提取方法提取金黄色葡萄球菌DNA,用琼脂糖凝胶电泳及PCR检测提取物并比较结果。结果和结论:溶菌酶能有效的降解金黄色葡萄球菌细胞壁,且用溶菌酶破壁后提取的DNA适于PCR实验,本研究成功的得到一种简易的、改良的金黄色葡萄球菌DNA的提取方法。     

三种全血基因组DNA提取方法的比较

目的：比较三种不同的DNA提取方法提取人全血基因组DNA对DNA提取效率、纯度以及PCR扩增的效果影响。方法：分别应用中山医科大学达安公司：DNA提取液，珠海黑马医学仪器有限公司DNA提取液，胍盐酸法三种不同的方法提取人全血基因组DNA。结果：三种方法提取的DNA纯度平均分别为：1．48，1．51，1．56，各组间差异无显著性。200μL全血中所提取DNA总量平均分别为1．6μg，2．3μg，4．1μg。用0．8％琼脂糖凝胶电泳鉴定胍盐酸法制备的DNA效果较其它两种方法好，PCR扩增效果差异不明显。结论：胍盐酸法提取的DNA总量明显高于其它两种方法，提取效率高，为三种全血基因组DNA提取方法中之首诜。     

多种提取全血DNA方法的对比及探讨

目的:探讨不同方法提取全血DNA对DNA质量的影响.方法:采用了从新鲜全血中、冷冻全血中、取白细胞层法全血DNA等方法抽提全血DNA.结果:如果提取液中有0.4M的Nacl,其提取的DNA长度较长;采用双倍抗凝所提取的DNA长于肝素抗凝所提取的DNA;高温及机械损伤能使DNA缩短;EDTA浓度低与提取的DNA长度较短有关;TE溶解的鸡蛋清能使加样孔显示有产物发光.结论:不同方法可以提取不同长度的DNA,根据不同的实验需要可以采取不同的提取DNA的方法.TE溶解的鸡蛋清能使加样孔显示有产物发光的现象需要进一步研究.     

天麻总DNA提取的研究

目的：寻找快速便捷的天麻总DNA的提取方法.方法：采用天麻干品为材料,用CTAB,SDS 2种提取法及液氮、玻璃砂2种研磨方法提取干天麻总DNA,并进行了比较.结果：2种不同的研磨法和2种不同的提取方法,均可从天麻中提取到一定纯度的DNA,其中CTAB法提取的DNA纯度较好,产率较高;SDS法提取的DNA纯度较低且不稳定,产率较低.结论：从天麻干品中采用CTAB法提取DNA用于分子生物学研究是可行的,用玻璃砂研磨能取得与液氮相近的结果.