大鼠内侧隔区预损毁对海马迟发性神经元死亡的影响

目的：探讨乙酰胆碱（ACh)对短暂性全脑缺血再灌后海马迟发性神经元死亡（DND）的作用。方法：80只健康雄性Wistar大鼠随机分为5组。I组：手术对照组；Ⅱ组：单纯内侧隔区（MS）损毁组；Ⅲ组：单纯脑缺血再灌注组；Ⅳ组：MS假性损毁脑缺血再灌注组；Ⅴ组：MS预损毁脑缺血再灌注组，动物先行MS损毁，第15d再行血管阻断，使脑缺血20min，并于恢复灌注72h后处死，将脑采用常规石蜡包埋、切片，Nissle、HE和Tunel免疫组化染色，在光镜下观测计数海马的神经元数。结果：（1）DND细胞主要发生在各缺血再灌注组（Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ组）的海马CA1区，其他各区未发现明显变化；（2）V组较Ⅲ，Ⅳ组DNA明显减轻，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论：ACh参与短暂性全脑缺血再灌后海马CA1区迟发性神经元损伤过程，MS预损毁能使死亡细胞明显减少。     

益气通络方对大鼠短暂性脑缺血后海马DND的保护作用

目的 :探讨益气通络方对大鼠短暂性脑缺血后海马迟发性神经元死亡 (DND)的保护作用及其机制。方法 :用Pulsinelli四血管闭塞法制作全脑缺血模型。实验动物随机分为假手术对照组、脑缺血加生理盐水组和脑缺血加益气通络方组。缺血再灌 3天后进行HE染色、TUNEL染色。结果 :①HE染色 ,光镜下观察CA1区组织病理学变化 ,并用显微测微尺测量CA1区存活锥体细胞密度 (存活锥体细胞的个数 /mm) ,表明益气通络口服液组 ( 1 1 4 .5± 1 9.0 )与生理盐水组 ( 1 0 .5± 3.0 )比较 ,P <0 .0 1。②TUNEL染色 ,光镜下假手术组未见阳性结果 ,缺血再灌流加生理盐水组CA1区大部分锥体神经元发生凋亡 ( 1 2 4 .0± 1 1 .5) ,益气通络方组CA1区凋亡的锥体神经元明显减少 ( 2 4 .5± 3.0 ) ,存活细胞增多。结论 :益气通络方能够显著降低大鼠短暂性脑缺血后海马迟发性神经元死亡 ,抑制细胞凋亡可能是其临床疗效的机制之一。     

脑缺血后海马迟发性神经元死亡的研究进展

海马CA1区神经元对缺血极为敏感,Kirino采用沙土鼠短暂性脑缺血模型率先发现CA1区神经元呈迟发性死亡.近年,各国学者对迟发性神经元死亡(delayed neuronal death,DND)进行了不懈地研究,海马神经元的迟发性死亡表现为坏死与凋亡共存现象.文章综述了引起迟发性神经元死亡的诸多因素,如胶质细胞过度活化增殖、细胞周期调控、线粒体损伤、自由基过度生成及兴奋性氨基酸扩散性抑制等.     

谷氨酸转运体抑制剂DHK抑制脑缺血预处理的保护作用

目的:观察谷氨酸转运体GLT1抑制剂二氢卡因酸盐(DHK) 对脑缺血预处理(CIP)诱导脑缺血耐受的影响.方法:采用四血管闭塞法制作大鼠全脑缺血模型,右侧脑室注射DHK.脑组织切片硫堇染色法观察海马CA1区锥体神经元迟发性死亡(DND)程度,确定组织学分级.结果:假手术组和CIP组海马CA1区未见明显的DND;损伤性缺血组海马CA1区有明显的DND;CIP 损伤性缺血组海马CA1区DND不明显; DHK CIP 损伤性缺血组中,DHK阻断了CIP对海马CA1区锥体神经元的保护作用.定量分析发现,DHK CIP 损伤性缺血组较CIP 损伤性缺血组的保护效应明显降低.结论:DHK可抑制CIP诱导的脑缺血耐受.     

灯盏花素对大鼠脑缺血再灌注后迟发性神经元死亡的保护作用

目的观察灯盏花素对大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区迟发性神经元死亡的保护作用。方法夹闭Wistar大鼠双侧颈总动脉20min造成脑缺血模型,再灌注7d后,观察灯盏花素低、高剂量对海马CA1区神经元组织病理学及神经元密度的影响。结果缺血再灌注后灯盏花素组海马CA1区组织学状况明显改善,神经元密度显著增加(与模型组比较P<0.01),且与剂量无明显关系(P>0.05)。结论蛋白激酶C抑制剂灯盏花素能减轻脑缺血再灌注后海马CA1区迟发性神经元死亡,具有脑保护作用。     

Hemin对全脑缺血大鼠海马迟发型神经元死亡的影响

目的观察Hemin对全脑缺血大鼠海马迟发型神经元死亡的影响。方法 24只雄性Wistar大鼠采用4血管闭塞法制造大鼠全脑缺血或再灌注模型,低、高剂量的Hemin于脑缺血后给药,硫堇染色下对海马CA1区锥体神经元的迟发型死亡（DND）进行评估。结果全脑缺血再灌组CA1区发生明显DND。低高剂量Hemin治疗组海马CA1区神经元DND与全脑缺血或再灌组相比未见明显改善（P〉0.05）。结论治疗性给予Hemin不能有效发挥对全脑缺血或再灌注大鼠海马的神经保护作用。     

大鼠海马缺血再灌注损伤的细胞凋亡电镜及尼莫通的保护作用

目的：探讨海马缺血再灌注损伤神经元的死亡方式及尼莫通的保护作用。方法：将实验用SD大鼠15只分为三组，即缺血再灌组、药护组、正常对照组。采用四血管闭塞法制作全脑缺血再灌注动物模型，再灌后48小时取海马，石蜡包埋切片。应用末端转移酶介导的缺口末端标记法原位检测凋亡细胞。药护组缺血前30分钟腹腔注射尼莫通。结果：在海马CA1、CA4区锥体细胞层可见反应阳性的凋亡细胞，药护组的凋亡细胞数显著少于缺血组。结论：钿胞调亡是迟发性神经元损伤的主要形式，尼莫通能抑制细胞凋亡，对海马缺血再灌注损伤有显著性保护作用。     

脑室内注射胰岛素对大鼠脑海马CA1区神经元迟发性死亡的保护作用

目的　观察大鼠全脑缺血后经脑室注射胰岛素对海马区神经元病理形态学改变的影响 ,探讨胰岛素对海马区神经元迟发性死亡的作用 .方法　利用改良四血管闭塞法 ,建立大鼠全脑缺血模型 .缺血再灌注后即刻经脑室注 1U胰岛素 ,于缺血再灌注后 1,3,5和 7d断头取脑 ,光镜下计数海马区正常神经元 .结果　缺血再灌注后 3,5及 7d治疗组鼠海马 CA1区正常神经元计数为 1(6 8.6± 10 .9) ,(133.5±10 .5 ) ,(10 5 .6± 10 .1) ,缺血组则为 (87.4± 5 .1) ,(4 5 .4±6 .1) ,(10 .5± 3.4) .两组比较存在显著差异 (P <0 .0 1) .结论　胰岛素对缺再性脑损伤具有中枢直接保护作用 ,且这种保护作用可减轻海马区神经元的迟发性死亡     

中药益智胶囊对大鼠全脑缺血后海马CA1区神经元迟发性死亡的影响

目的 观察中药益智胶囊对大鼠全脑缺血后海马CA1区神经元迟发性死亡及学习功能的影响。方法 以四血管闭塞(4-VO)法制成大鼠急性全脑缺血再灌注模型。采用免疫组织化学方法计数脑缺血再灌注脑损伤后1、2、4、8及40d后,大鼠海马CA1区正常神经元数目;用Morris水迷宫实验观察脑缺血再灌注脑损伤后40d时各组大鼠的学习记忆功能。结果 从缺血再灌注后第2天起,益智胶囊(100mg/kg·b.w.)组大鼠海马CA1区正常神经元数量显著高多于缺血对照组大鼠(P<0.01)。全脑缺血再灌注脑损伤后40d时,益智胶囊(100mg/kg·b.w.)组大鼠记忆功能明显好于缺血对照组大鼠(P<0.01)。结论 益智胶囊对全脑缺血后大鼠海马CA1区神经元具有保护作用,并可改善大鼠的记忆功能障碍。     

高血糖对短暂脑缺血海马CA1区迟发性神经元死亡的影响

目的 :通过对大鼠局灶性脑缺血再灌注海马 CA1区神经元形态学观察 ,探讨高血糖对海马迟发性神经元死亡的影响。方法 :术前给大鼠腹腔内注射生理盐水和葡萄糖造成正常血糖和高血糖状态 ,参考 Zea- L onga法制备大脑中动脉阻塞及再灌注模型。于再灌注后 1、3、7d取材 ,进行 HE染色 ,观察正常神经元。结果 :缺血再灌注后 1、3、7d正常血糖组海马 CA1区正常神经元计数为 1 76.0 0± 4.2 4 ,1 1 0 .75± 7.89,5 9.0 0± 8.41 ;高血糖组为1 68.2 5± 7.1 4,89.5 0± 8.2 0 ,39.75± 8.42 ,3d和 7d时两组之间存在显著性差异 ( P<0 .0 5 )。结论 :高血糖可加重局灶性脑缺血再灌注后海马 CA1区迟发性神经元死亡     

大鼠全脑缺血再灌注后海马区细胞凋亡及bcl-2和Bax的检测

目的：证实缺血性脑损伤主要是以细胞凋亡的方式发生。 方法：用TUNEL法标记检测损伤的神经细胞,用原位杂交组织化学法检测bcl-2 mRNA,用免疫组织化学法检测Bax蛋白。结果：手术组检测到TUNEL标记的阳性神经细胞主要位于海马CA1区,渐进性增多,第3天达到高峰,可检测到凋亡小体和正在形成凋亡小体的神经细胞。bcl-2主要在海马CA3区表达,Bax则主要在CA1区表达,两者均于再灌注8 h出现,24 h阳性信号达到高峰,72 h明显下降。结论：细胞凋亡是大鼠全脑缺血后海马区神经元丢失的重要原因,大鼠全脑缺血再灌注后海马区bcl-2 和Bax 的区域性表达可能参与海马不同区域缺血耐受性差异的形成。     

大鼠全脑缺血再灌注后海马区细胞凋亡及bcl-2和Bax的检测

目的：证实缺血性脑损伤主要是以细胞凋亡的方式发生。方法;用ＴＵＮＥＬ法标记检测损伤的神经细胞,用原位杂交组织化学法检测ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ,用免疫组织化学法检测Ｂａｘ蛋白。结果：手术组检测到ＴＵＮＥＬ标记的阳性神经细胞主要位于海马ＣＡ１区,渐进性增多,第３天达到高峰,可检测到凋亡小体和正在形成凋亡小体的神经细胞。     

尼古丁保护脑缺血再灌注大鼠神经损伤

目的：观察尼古丁对全脑缺血再灌注大鼠模型神经损伤是否具有保护作用。方法：改良的Pulsinelli四血管闭塞法制作全脑缺血再灌注模型,用尼氏染色方法观察并计数尼古丁对大鼠海马CA1区神经元存活数目的影响。结果：通过腹腔注射尼古丁能够显著减少全脑缺血再灌注引起的海马CA1区神经元死亡数,提高神经元存活数目。结论：尼古丁减轻脑缺血再灌注大鼠神经损伤。     

缺血预处理对缺血再灌注后神经元长期保护效应的观察

目的 动态观察缺血预处理后脑缺血大鼠脑皮层和海马CA1区神经元凋亡数和神经元数，探讨缺血预处理能否提供长时期神经元保护作用。方法 四血管阻断法复制全脑缺血模型，动物随机分为非缺血对照组、预处理对照组、缺血预处理组和缺血组。采用TUNEL和尼氏染色法观察缺血后不同时相点皮层及海马CA1区神经元凋亡细胞数和神经元数。结果 全脑缺血可诱导皮层及海马CA1区神经元凋亡；缺血预处理明显减少缺血再灌注后的神经元凋亡。缺血组神经元在缺血后7天明显减少．12周时大量减少；缺血预处理后7天神经元未见明显减少，但12周时仍然大量减少，与缺血组相比无显著差异。结论 全脑缺血可能通过诱导缺血区神经元凋亡，导致缺血区神经元的大量丢失；缺血预处理可在短时间内提供一定程度的神经元保护作用，但不能完全阻止缺血后神经元的凋亡，可能仅仅是推迟了缺血后神经元凋亡发生的进程。     

缝隙连接胞间通讯对大脑中动脉缺血后海马迟发性神经元死亡的影响

目的 观察探讨星型胶质细胞缝隙连接胞间通讯变化对大鼠大脑中动脉缺血再灌流后海马区迟发性神经元死亡(DND)的影响.方法 建立大鼠短暂性大脑中动脉缺血再灌流模型.利用尼氏染色、TUNEL方法 观察再灌流后星型胶质细胞缝隙连接蛋白抑制剂CBX对海马DND的影响.结果 大脑中动脉缺血再灌流后3 d、7 d海马神经元明显脱失,部分CA1、CA2区神经元凋亡;应用CBX后TUNEL阳性神经元数目明显减少,幸存神经元数目增加.结论 星型胶质细胞缝隙连接蛋白抑制剂CBX可有效抑制大鼠大脑中动脉缺血后海马神经元DND.     

NGF对缺血性脑损伤引起的大鼠海马CA1区神经细胞凋亡的作用

目的　研究神经生长因子 (NGF)对缺血性脑损伤引起的大鼠海马CA1区神经细胞凋亡的形态学影响。方法　采用Pulsinelli闭塞大鼠四动脉全脑缺血模型 ,应用光镜、透射电子显微镜及原位末端标记法 (TUNEL染色法 )观察模型组和NGF治疗组动物脑缺血 30min再灌注 7d海马神经细胞凋亡的情况。所得数据应用SPSS软件包进行统计学分析。结果　TUNEL染色法显示模型组有大量凋亡细胞 ;给药B、C组的神经细胞凋亡数目接近正常组 ,明显少于模型对照组 ,其差异具有高度显著性P <0 0 1。结论　给予外源性神经生长因子能明显抑制海马神经细胞的凋亡 ,减少缺血再灌注对神经细胞的损害     

海马不同地区域缺血时损伤和hsp70mRNA表达差异

目的：探讨缺血再灌注后鼠脑海马CA1区选择性易损伤和迟发神经元死亡现象,以及hsp70mRNA差异表达的可能机制。方法：观察鼠前脑缺血再灌注时,海马CA1区、CA3区及齿状回锥体细胞在组织学变化;以及原位杂交技术检测各区hsp70mRNA的诱导表达。结果：缺血再灌注7d后海马CA1区锥体细胞缺失明显,而CA3区及齿状回未见明显形态学变化。CA1区hsp70mRNA的诱导较其余两区迟,而持续时间较长。结论：在缺血早期加强或在缺血后期抑制hsp70mRNA的诱导,有可能保护CA1区锥体细胞。     

脑缺血后海马CA1区细胞凋亡现象的观察

观察大鼠完全性前脑缺血再灌注损伤过程中海马ＣＡ１区神经元死亡的另一种形式－细胞凋亡。采用琼酯糖凝胶电泳及原位缺口翻译法，观察海马ＣＡ１区神经元是否有凋亡特征性改变。结果；脑缺血损伤后５ｄ，从海马ＣＡ１区神经元提取ＤＮＡ，其琼酯糖凝胶电泳呈现典型梯状结构。而采用原位缺口翻译法，发现缺血损伤后３ｄ，海马ＣＡ１区开始出现胞核染色体阳性的凋亡细胞，缺血损伤后５ｄ，凋亡细胞达到高峰。结论：海马ＣＡ１区尽管     

不完全性脑缺血大鼠海马CA1区一氧化氮合酶的变化

用双侧颈总动脉夹闭加放血方法造成大鼠一过性不完全性脑缺血及再灌注模型 ,以还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶 ( NADPH-d)组织化学方法对缺血再灌注期间海马 CA1 区内一氧化氮合酶阳性神经细胞变化进行研究。结果发现 ,海马 CA1 区神经细胞受损 ,在缺血 3 0 min时一氧化氮阳性细胞数最高 ( 44 .5± 7.42 ) ,为空白对照组 2倍 ,再灌注 2 h、12 h、2 4h、3 d后逐渐下降 ,5 d时恢复正常水平 ( 2 1.12± 3 .5 0 )。研究表明 ,不完全性脑梗塞时一氧化氮合酶表达与海马 CA1 区神经细胞损伤及迟发性死亡有关     

碱性成纤维细胞生长因子对癫痫大鼠海马神经元Caspase-3表达的影响

目的研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对癫痫大鼠海马神经元的神经保护作用及可能的机制。方法戊四氮诱发大鼠癫痫发作后,腹腔分别注射生理盐水(B组)和bFGF(C组),与空白对照组(A组)按一定时段断头取脑,进行HE染色和Caspase-3免疫组织化学染色。观察各组大鼠海马神经元的损伤以及Caspase-3的表达。结果HE染色:B组神经元形态散乱,大量神经元凋亡、坏死;C组可见散在的神经元凋亡,变性坏死少见。Caspase-3免疫组化染色:B组6 h可见海马CA1、CA3和齿状回门区部分细胞的胞浆和核内有棕黄色沉淀物,24 h阳性细胞数及着色深度达到高峰,持续至72 h,120h后表达减弱。C组阳性细胞数及染色度与B组有相似的时间依赖性,但总体表达较B组弱,组间各时间点中12～72 h的差异均有统计学意义(P<0.01),6 h及120 h的差异则无统计学意义(P>0.05)。结论bFGF能显著减轻癫痫所致的大鼠海马神经元损伤。