毛蕊花苷对MPP~+诱导的SHSY5Y细胞凋亡的保护作用

目的观察肉苁蓉提取物毛蕊花苷对MPP+诱导的SHSY5Y细胞损伤的影响。方法用MTT法检测细胞存活率,以流式细胞仪检测细胞内活性氧的产生和线粒体膜电位的变化,以及细胞凋亡的发生,并用荧光酶标仪测定caspase-3的活性,蛋白印迹测定Bcl-2的表达水平。结果200μmol·L-1MPP+处理细胞24h降低细胞的存活率;诱导细胞发生凋亡,凋亡率达38.9%;细胞内活性氧水平及caspase-3的活性升高;而线粒体膜电位却明显降低。而预先给予0.1、1或者10mg·L-1浓度的毛蕊花苷处理细胞12h,可提高细胞存活率;流式细胞仪检测凋亡率分别降低到29.5%,15.3%和8.6%,而且细胞内活性氧的水平明显降低,并可逐渐恢复线粒体的高能量状态;caspase-3的活性不断降低,Bcl-2的表达水平增高,并呈现一定的剂量依赖性。结论毛蕊花苷能抑制MPP+诱导的SHSY5Y细胞凋亡,其神经细胞保护作用可能与其降低细胞内活性氧水平,维持线粒体膜电位的高能状态和抑制caspase-3的活性有关。     

土槿皮乙酸诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡及机制

目的研究土槿皮乙酸(pseudolaric acid B,PAB)诱导人胃癌SGC7901细胞株凋亡及其分子机制。方法MTT法检测细胞增殖的抑制作用,电镜观察细胞的形态学变化,An-nexinV/PI双染法检测细胞早期凋亡率,罗丹明染色流式细胞仪检测线粒体膜电位,Western blot检测PAB对caspase-3、caspase-9剪切片断,bcl-2、bax蛋白表达,及对MAPKs通路相关蛋白,包括p-ERK、ERK、p-JNK、JNK、p-p38、p38表达的影响。结果PAB对人胃癌SGC7901细胞株生长具有明显的抑制作用,并呈时间和浓度依赖性。电镜结果显示0.5μmol·L-1PAB作用24 h后,核染色体聚集、边集,72 h凋亡小体形成。用0.5μmol·L-1PAB处理SGC7901细胞12、24、48、72 h,AnnexinV/PI双染检测细胞的早期凋亡,其早期凋亡率分别为10.06%、15.98%,23.12%,29.06%,而对照组的早期凋亡率仅为0.9%(P<0.05)。罗丹明染色检测线粒体膜电位,0.5μmol·L-1浓度的PAB作用于SGC7901细胞12 h后,线粒体膜电位开始下降并随时间延长而逐渐增加,12、24、48、72h线粒体膜电位下降分别为26.36%、33.26%、41.28%、52.13%(P<0.05或0.01)。0.5μmol·L-1浓度的PAB作用于SGC7901细胞24h后,Western blot法检测发现caspase-3、caspase-9 2种蛋白均出现断裂片断,并随着时间的增加断裂更明显。进一步研究发现,PAB处理SGC7901细胞后,bax蛋白表达升高,bcl-2蛋白表达下降,同时JNK、p38的磷酸化水平明显升高,ERK表达水平下降。结论PAB具有明显的细胞毒作用,能诱导SGC7901细胞凋亡,JNK和p38途径激活后通过对bax和bcl-2表达的调控,导致线粒体膜电位的下降,进而激活caspase最终导致细胞死亡,可能是其诱导胃癌细胞凋亡的分子机制之一。     

辛伐他汀通过线粒体途径诱导K562细胞凋亡

目的观察辛伐他汀诱导K562细胞凋亡不同时间的膜电位(Δψm),caspase-3、9和细胞色素C的改变,以推测其凋亡通路。方法采用浓度为20μmol.L-1的辛伐他汀处理K562细胞24、48、72 h,采用流式细胞技术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位,分光光度法检测caspase-3、9蛋白活性,免疫组织化学法检测细胞色素C蛋白。结果浓度为20μmol.L-1辛伐他汀作用K562细胞24、48、72 h后,凋亡率分别为(6.1±0.35)%、(14.15±0.42)%(、30.70±0.65)%,随着凋亡率增加线粒体膜电位降低分别为(39.6±4.80)%,(24.4±2.45)%,(6.0±1.62)%;caspase-3、9蛋白活性与对照组相比上调,细胞浆内细胞色素C升高。结论辛伐他汀诱导K562细胞凋亡时线粒体膜电位下降,caspase-3、9活性增高和细胞色素C释放,推测辛伐他汀诱导K562细胞的凋亡可能经过线粒体凋亡途径。     

芍药苷对醋酸铅诱导海马神经元凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

目的 探讨芍药苷(paeoniflorin,PF)对醋酸铅诱导海马神经元凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。方法 分离培养胎鼠海马神经元细胞,细胞免疫荧光染色鉴定纯度。MTT测定海马神经元细胞活力以确定醋酸铅最适造模浓度及时间,同时筛选合适剂量PF干预海马神经元凋亡。依据MTT测定结果,分为空白组、模型组和20,40,80 μmol·L^-1 PF组干预海马神经元细胞,作用24 h后,加醋酸铅染毒,检测细胞色素C (cytochrome C,Cyt-C)含量、线粒体膜电位及细胞内Ca²⁺浓度。流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blotting测定海马神经元细胞中caspase-3、cleaved-caspase-3、caspase-8、cleaved-caspase-8、caspase-9、cleaved-caspase-9、Bax、Bcl-2蛋白表达水平。结果 细胞免疫荧光染色鉴定结果显示分离培养的细胞为海马神经元细胞,且纯度较高。MTT测定结果显示醋酸铅最适造模浓度及时间为25 μmol·L^-1染毒24 h;PF剂量为20,40,80 μmol·L-1可显著改善海马神经元细胞活性,呈剂量依赖性。与空白组相比,模型组Cyt-C含量、凋亡率、细胞内Ca²⁺浓度显著升高(P<0.01),线粒体膜电位显著降低(P<0.01)。与模型组相比,40 μmol·L^-1 PF组和80 μmol·L^-1 PF组可降低Cyt-C含量、凋亡率、细胞内Ca²⁺浓度(P<0.05或P<0.01),升高线粒体膜电位(P<0.01),20 μmol·L^-1PF组可显著升高线粒体膜电位(P<0.05)。此外,一定剂量的PF可下调cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-8、cleaved-caspase-9、Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达。结论 PF可抑制醋酸铅诱导的海马神经元凋亡,可通过调控Bcl-2/Bax蛋白表达发挥神经保护作用。     

黄癸素诱导小鼠黑色素瘤B16细胞凋亡的研究

目的探讨黄癸素诱导小鼠黑色素瘤B16细胞凋亡的作用。方法应用MTT法检测黄癸素对体外培养的B16细胞增殖的抑制作用,观察量效及时效关系;通过Rhodamine123染色、琼脂糖凝胶电泳、Hoechst33258染色、caspase-3和caspase-8活性检测,观察黄癸素诱导细胞凋亡的作用和机制。结果黄癸素抑制B16细胞的增殖,具有明显的时间依赖性和浓度依赖性,作用24、48、72h的IC50分别为16.59、9.29和6.22mg·mL-1;B16细胞经黄癸素处理后,出现染色质固缩、DNALadder等凋亡表现,Rhodamine123染色荧光降低和caspase-3、caspase-8活性增强,提示黄癸素引起线粒体膜电位降低可能触发caspases级联反应而导致细胞凋亡。结论黄癸素可抑制B16细胞增殖,诱导B16细胞凋亡。     

新型氮芥衍生物XHH诱导K562细胞凋亡的研究

目的探讨新型氮芥衍生物N-[4-(二氯乙基)丁胺]-1,8-萘酰亚胺(XHH)对K562细胞的抗肿瘤作用及其机制。方法采用MTT法检测XHH对K562细胞增殖的影响;用Annexin V-FITC/Hoechst33342、PI/Hoechst33342和Rh123/Hoechst33342双染法高内涵观察细胞的形态学变化、凋亡率及线粒体膜电位;用分光光度法检测caspase-3、caspase-9的活性。结果在一定浓度范围内,XHH能抑制K562细胞的增殖且抗肿瘤活性优于美法仑,呈剂量和时间依赖性地诱导细胞凋亡、降低线粒体膜电位、活化caspase-3和caspase-9。结论 XHH具有较好的抗肿瘤活性,可通过线粒体/caspase-9/caspase-3途径诱导K562细胞凋亡。     

高浓度17β-雌二醇诱导巨噬细胞凋亡

目的　考察高浓度 17β 雌二醇 (E2 )对巨噬细胞的影响。方法　用Hoechst332 5 8进行染色质荧光染色 ;扫描电子显微镜观察细胞形态 ;激光共聚焦显微镜检测胞质内钙离子浓度 [Ca2 + ]i 及线粒体膜电位。结果　荧光染色及扫描电镜显示E2 (≥ 1μmol·L-1)作用后巨噬细胞出现多种凋亡表现。E2 1μmol·L-1作用后 ,细胞 [Ca2 + ]i 明显升高 ,且有剧烈的波动。E2 1μmol·L-1使线粒体膜电位下降。结论　高浓度的E2 (≥ 1μmol·L-1)能诱导巨噬细胞的凋亡 ,并且与[Ca2 + ]i 的变化及线粒体膜电位的下降有关     

辛伐他汀诱导人红白血病K562细胞凋亡的实验研究

目的:探讨辛伐他汀诱导K562细胞凋亡及其机制。方法:取浓度为0(阴性对照组)、10、20、30μmol·L-1的辛伐他汀作用K562细胞72h后,双染色法检测细胞凋亡率;DNALadder实验检测细胞凋亡条带;用线粒体分离试剂分离出胞浆蛋白、微粒体蛋白、线粒体蛋白;逆转录-聚合酶链反应法检测GRP78、caspase-9、caspase-3、GADD153mRNA表达;Western blot法检测GRP78、caspase-12、caspase-9、caspase-3、GADD153、细胞色素C蛋白水平。结果:与阴性对照组比较,10、20、30μmol·L-1辛伐他汀作用K562细胞72h后出现典型的凋亡条带,凋亡率分别为12.41%、19.08%、23.41%(P<0.01),GRP78、caspase-9、caspase-3和GADD153 mRNA表达上调(P<0.05),caspase-12、caspase-9、caspase-3蛋白水平下降,caspase-12定位于内质网,细胞色素C从线粒体释放,GRP78、GADD153蛋白表达上调。结论:辛伐他汀可通过内质网和线粒体途径诱导K562细胞凋亡。     

一氧化氮诱导PC12细胞凋亡及人参皂苷Rg1的保护作用

目的　探讨一氧化氮诱导PC12细胞凋亡及人参皂苷Rg1保护作用的可能机制。 方法　DNA凝胶电泳观察DNA的断裂情况 ,流式细胞仪检测线粒体跨膜电位 ,West ernblotting检测胞浆细胞色素C和活化型半胱氨酸蛋白水解酶caspase 3P2 0 水平。结果　一氧化氮供体SNAP(5 0 0μmol·L-1)可诱导PC12细胞凋亡 ,细胞线粒体跨膜电位明显下降、胞浆细胞色素C水平增加及caspase 3得到激活 ;预先经过 5 0、10和 2 0 μmol·L-1等浓度人参皂苷Rg1处理后 ,SNAP诱导的PC12细胞凋亡明显减少 ,同时明显减弱SNAP对细胞线粒体跨膜电位、胞浆细胞色素C水平及cas pase 3激活的影响。 结论　人参皂苷Rg1可抑制一氧化氮诱导PC12细胞凋亡 ,其作用机制可能与其稳定细胞线粒体跨膜电位、减少线粒体细胞色素C向胞浆释放及抑制cas pase 3的激活有关     

栀子苷抗H_2O_2诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的实验研究

目的探讨栀子苷对氧化应激诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的抑制作用及可能机制。方法体外培养的HUVEC细胞用不同浓度的栀子苷药物预处理24h后,加入终浓度为500μmol·L-1H2O2氧化损伤12h。荧光染色法观察细胞内DNA损伤情况,流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位的变化,Western blot检测Bcl-2和Bax蛋白的表达,酶免法测定caspase-3蛋白酶的活性,Real-time PCR检测超氧化物歧化酶(Mn-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的mRNA表达。结果与模型组相比,不同浓度栀子苷(12.5、25、50mg·L-1)可以明显改善H2O2对细胞内的DNA氧化损伤,降低细胞凋亡率,下调Bax蛋白表达,逐步恢复Bcl-2/Bax表达比例和线粒体膜电位的改变,降低caspase-3蛋白酶活性,上调细胞内Mn-SOD和GPx的表达,但对Bcl-2的表达无影响。结论栀子苷可以抑制H2O2诱导的HUVEC细胞凋亡,其机制可能与调节线粒体应激途径和发挥抗氧化损伤功能有关。     

三氮唑席夫碱衍生物对人肝癌细胞分化和凋亡的影响

目的探讨三氮唑席夫碱衍生物对人肝癌细胞BEL-7402的诱导分化和凋亡作用。方法用不同剂量的3-吡啶-3-基-4-[(4-羟基-3-甲氧基-苯亚甲基)氨基]-5-甲硫基-1,2,4-三唑(LH-37)与BEL-7402细胞共同培养,以MTT法检测细胞增殖和LH-37对细胞增殖的抑制作用;RT-PCR方法检测细胞甲胎蛋白(α-FP)和白蛋白(Alb)mRNA表达;ELISA法测定细胞α-FP含量;免疫组织化学检测细胞内激活型Caspase-3表达;Western blot检测Caspase-3和Caspase-9蛋白表达;可见光法测定超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活力;荧光显微镜观察凋亡细胞形态;Annexin-Ⅴ和PI双染流式细胞术测定凋亡细胞数。结果LH-37在10μmol·L-1~1mmol·L-1的浓度范围能抑制细胞增殖,且抑制率随浓度的增加而增高(P<0·05或P<0·01),10μmol·L-1和1·0μmol·L-1的LH-37使细胞Alb mRNA表达量增高,α-FP mRNA和蛋白质表达量明显下降,Caspase-3和Caspase-9表达量明显增加,Caspase-3阳性细胞明显增加;药物浓度达100μmol·L-1作用48h后,BEL-7402细胞皱缩,呈现凋亡各期改变,细胞凋亡率高于对照组(P<0·05)。结论三氮唑席夫碱衍生物对人肝癌BEL-7402细胞具有抗增殖、促分化和凋亡作用,作用可能与过氧化氢的氧化损伤作用有关。     

δ阿片受体激活对依赖于PKC路径的血清饥饿诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用

目的探讨δ阿片受体激活对血清饥饿诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用及机制。方法新生大鼠心肌细胞分为对照、模型、D-丙(2)-D-亮(5)脑啡肽DADLE 0.1μmol.L-1;DADLE 0.1μmol.L-1+naltrindole(δ阿片受体拮抗剂)10μmol.L-1、DADLE 0.1μmol.L-1+GF109203X 10μmol.L-1、DADLE 0.1μmol.L-1+staurosporine 1μmol.L-1组;分组给药48 h后,MTT法检测细胞存活率;流式细胞仪测心肌细胞的凋亡指数;流式细胞仪检测细胞周期。Western blot法检测心肌细胞的胞质内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)表达及蛋白激酶C(PKC)的表达。结果δ阿片受体激动剂DADLE能明显抑制由血清饥饿引起的心肌细胞的凋亡,表现为细胞存活率升高,凋亡率下降,G0/G1百分比降低,G2/M百分比增加;caspase-3蛋白表达明显下降;PKC蛋白表达明显升高;加入naltrindole可以阻断DA-DLE对心肌细胞凋亡的抑制作用,加入GF109203X和stau-rosporine可明显拮抗DADLE抑制由血清饥饿引起的心肌细胞的凋亡的作用,表现为细胞存活率降低,凋亡率升高;G0/G1百分比增加,G2/M百分比降低;caspase-3的蛋白表达明显升高;PKC表达明显降低。结论δ阿片受体激活后通过活化PKC通路抑制血清饥饿所致的心肌细胞凋亡。     

干预代谢途径抑制缺氧/复氧诱导肥大心肌细胞凋亡——依赖及非依赖性Caspase的作用

目的阐明干预肥大心肌细胞代谢途径转化防治缺血再灌注所致细胞凋亡的作用及其分子机制。方法应用血管紧张素Ⅱ(0.1mol.L-1)诱导培养小鼠心肌细胞肥大,在三气孵箱中进行缺氧/复氧处理模拟缺血再灌注。缺氧/复氧前,分别给予无药物干预及DCA(1mmol.L-1)、TMZ(5μmol.L-1)、LC(50μmol.L-1)、AA(10μmol.L-1)预处理。葡萄糖和脂肪酸氧化代谢率采用放射性计数法测定。RT-PCR和Western Blot法分别测定细胞色素C和凋亡诱导因子mRNA和蛋白质表达水平。分光光度法测定Caspase-3活性。Hoechst33258染色检测细胞凋亡百分数。结果结果表明,缺氧12h及复氧4h后肥大心肌细胞葡萄糖氧化代谢率均显著降低,而脂肪酸氧化代谢率显著升高,DCA、TMZ、LC均可明显抑制缺氧/复氧后葡萄糖氧化代谢的下降,明显抑制缺氧/复氧后葡萄糖氧化代谢的升高,AA使缺氧/复氧后肥大心肌细胞葡萄糖氧化代谢率的进一步降低和脂肪酸氧化代谢率进一步升高。同时,DCA、TMZ、LC均可明显抑制线粒体细胞色素C和AIF mRNA和蛋白质表达水平,明显抑制细胞色素C和AIF蛋白的核转位,抑制caspase-3活性,而AA作用相反。DCA、TMZ、LC明显抑制缺氧/复氧后肥大心肌细胞凋亡率,而AA作用相反。结论上述结果提示,干预肥大心肌细胞代谢途径通过抑制线粒体凋亡蛋白表达、释放有效防治肥大心肌细胞凋亡。     

小白菊内酯诱导耐药白血病细胞K562/ADR凋亡的研究

目的初步探讨小白菊内酯(PTL)对耐药白血病细胞K562/ADR细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法MTT法及LDH释放法检测小白菊内酯对K562和K562/ADR细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞内活性氧(ROS)的变化,Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3、caspase-9的表达变化。结果 PTL抑制K562/ADR细胞的增殖,呈剂量依赖,半数抑制浓度(IC50)值分别为(4.36±0.37)μmol.L-1、(10.6±2.81)μmol.L-1。10μmol.L-1PTL作用24 h诱导K562/ADR细胞的凋亡率为(31.21±0.40)%,其IC50值与凋亡率与K562细胞相比差异无显著性(P>0.05)。经10μmol.L-1PTL处理1 h,K562/ADR细胞内ROS增加;处理24 h,Bcl-2与Bax的比值降低、caspase-3、caspase-9酶源蛋白表达降低。用N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理细胞,能抑制细胞ROS水平升高和细胞凋亡。结论 PTL能诱导耐药白血病细胞凋亡,作用机制与其刺激细胞内ROS升高相关。     

环六缩酚肽抑制人前列腺癌细胞增殖活性及作用机制研究

目的研究从微生物次生代谢产物中纯化的3种环六缩酚肽对人前列腺癌细胞(PC-3)增殖的抑制作用,并进一步探讨其可能的作用机制。方法 MTT比色法检测细胞增殖抑制率;TUNEL技术检测PC-3细胞凋亡;Western印迹技术检测Bax和caspase-3蛋白的表达变化。结果 MTT法实验结果显示10μmol·L-1浓度的Pullularin C对PC-3细胞增殖有明显抑制作用,与对照组相比差异有显著性(P<0.01);TUNEL检测结果显示1μmol·L-1浓度的PullularinC处理组的细胞凋亡率明显高于阴性对照组(P<0.01);Western blot分析结果显示由Pullularin C处理的PC-3细胞中的Bax和caspase-3的表达与对照组相比有明显的增加(P<0.05)。结论 Pullularin C具有极强的抑制人前列腺癌细胞增殖作用,并可诱导其凋亡。Pullularin C诱导PC-3细胞凋亡可能通过Bax和caspase-3介导。     

茶多酚对PM2.5诱导的大鼠肺泡巨噬细胞凋亡的抑制作用

目的 研究茶多酚（tea polyphenols,TP）对SRM 2786（PM_2.5标准品）诱导的大鼠肺泡巨噬细胞（NR8383）凋亡的影响及其作用机制。方法 体外培养NR8383细胞,将其分组为对照组、模型组（125 μg·mL^–1的SRM 2786染毒组）及TP干预组（43.75,87.5,175,350 μmol·L^–1 TP+125 μg·mL^–1 SRM 2786）,分别干预24 h后,检测细胞存活率、氧化损伤（ROS和NO释放）、炎症因子释放（IL-6、IL-1β及TNF-α）、细胞凋亡率、线粒体损伤及caspase-3/caspase-9活性。结果 与对照组相比,SRM 2786可显著抑制NR8383细胞存活率,促进NO和ROS释放,促进3种炎症因子释放、线粒体损伤、细胞凋亡及caspase-3/caspase-9活性提升。而TP可显著性抑制SRM 2786诱导的NR8383细胞氧化损伤、炎性损伤、线粒体损伤,最终通过抑制caspase-3/caspase-9活性而降低细胞凋亡率,达到提高细胞存活率的目的。结论 TP可通过降低细胞氧化损伤、炎性损伤和caspase-3/caspase-9活性而抑制PM_2.5诱导的NR8383细胞线粒体途径凋亡,提高NR8383细胞活性。     

没食子儿茶素没食子酸酯对百草枯诱导SK-N-SH细胞凋亡的保护作用

目的探讨茶多酚中主要活性成分没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对百草枯诱导人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞凋亡的保护作用。方法培养的SK-N-SH细胞给予400μmol·L-1百草枯诱导细胞凋亡。实验分为6组:空白对照组、百草枯模型组、维生素E(10μmol·L-1)组和3个EGCG(1、5、10μmol·L-1)剂量组。以药物处理细胞2h后,加入百草枯,72h后MTT法检测细胞活力,取培养细胞上清液测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,Hoechst 33258荧光染色法和流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果与空白对照组相比,百草枯明显降低细胞活力(P<0.01),增加LDH漏出量(P<0.01),细胞膜结构不完整,出现空泡等凋亡现象,细胞凋亡发生率达到30.5%。EGCG处理后,显著提高细胞活力,减少LDH的漏出和降低细胞凋亡率(P<0.01),其中10μmol·L-1组的作用明显高于5μmol·L-1组或1μmol·L-1组(P<0.05或P<0.01)。结论EGCG具有抑制百草枯诱导的SK-N-SH细胞凋亡作用。     

MAPKs对丹皮酚下调黑素合成的介导作用

目的研究丹皮酚抑制黑素合成的相关的信号转导途径。方法以B16F10黑素瘤细胞系为对象,用不同的有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径干预物和丹皮酚共同处理细胞,采用多巴氧化法测定酪氨酸酶活性,氢氧化钠裂解法检测黑素含量,RT-PCR和Western blot检测酪氨酸酶的mRNA以及蛋白表达;并以Western blot法检测丹皮酚对不同MAPK途径关键激酶磷酸化蛋白表达的调节作用。结果在不同的MAPK信号途径抑制剂中,JNK1/2/3特异性抑制剂(SP600125)能够有效地拮抗丹皮酚对黑素合成的抑制作用,而且丹皮酚能够诱导磷酸化JNK/SAPK表达。结论JNK/SAPK途径参与了介导丹皮酚对黑素合成的抑制作用。