PCR—ELISA微孔板杂交技术检测结核杆菌DNA

目的 采用PCR-ELISA微孔板杂交技术检测结核杆菌DNA。方法 采用PCR技术扩增结核杆菌DNA，并将扩增产物加入预先包被结核杆菌探针的微孔板，再加入结核杆菌显色探针，同时进行微孔板核酸夹心杂交ELISA显色。共检测肺部疾病患者痰标本510例。结果 该法的灵敏度为59．3％，特异性为95．0％；阳性预测值为96．3％，阴性预测值为51．4％。结论 PCR-ELISA微孔板杂交技术可快速、准确地检测结核杆菌DNA，是结核病早期诊断和鉴别诊断的可靠实验室方法。     

TTV与其它肝炎病混合感染及其基因型的研究

研究TTV与其它肝炎病混合感染对肝脏病变的影响及本地区TTVDNA的基因型。选TTV ORF1的保守序列作内外引物,采用微板核酸杂交－ELISA方法检测患者血清TTVDNA并对检测结果和临床资料进行统计学分析。选取异源性大于50％的序列作显色探针Ⅰ和显色探针Ⅱ,进行分型研究。学生、非甲－非戊型肝炎、慢性乙型肝炎和肝硬化患者血清TTV阳性率分别为3．3％、14．3％、12％、16％。TTV阳性和TTV阴性的慢性乙型肝炎及肝硬化患者,在年龄、性别、ALT和TBil之间无显著差异（P＞0．05）。本地区流行的TTV可分为两个主要的基因型,即I型（66．75）、Ⅱ型（25％）,部分存在混合感染（8．3％）。TTV可能与HBV、HCV有类似的传播途径,故常重叠感染。TTV与乙型肝炎及肝硬化混合感染后不影响两者的肝脏病变。TTV不是本地区非甲－非戊型肝炎的主要病因。     

广东地区TTV感染情况及基因分型

目的 调查广东地区ＴＴ病毒（ＴＴＶ）感染流行情况和基因分型。方法 选取ＴＴＶＯＲＦ１的保守序列作内外引物,Ⅰ型、Ⅱ型同源性极高的序列ｎｔ２４６４～ｎｔ２５２０作包被探针,异源性大于５０％的序列ｎｔ２１２５～ｎｔ２１５９作显色探针Ⅰ和显色探针Ⅱ,采用微板核酸杂交－ＥＬＩＳＡ技术对２８０例肝功能损害的肝炎患者血清进行ＴＴＶ检测及ＴＴＶ基因分型研究。结果 检测出４４例ＴＴＶ阳性患者,检出率为１５．７１％     

核酸杂交检测HBV DNA及基因分型

检测血清中HBVDNA并进行基因分型。采用聚合酶链反应（PCR）扩增HBV DNA后，采用不同的探针，利用微板杂交法将其分为六个亚型。50例广东地区HBVDNA阳性病人中C型占68％（34例），B型占10％（5例），D型占6％（3例），F型占2％（1例），另有8％为混合型（3例BC，1例BCD），没有发现A型和E型，3例分型结果阴性，为未定型。广东地区HBV基因亚型以C型为主，B型次之，其它较少。可能存在其他亚型。     

TTV基因分型的研究

目的调查华南地区 ＴＴＶ感染流行情况和基因分型。方法选取 ＴＴＶ开放读码枢１的保守序列作内外引物, Ｇ１、 Ｇ２、 Ｇ３、 Ｇ４、 Ｇ５、 Ｇ６同源性极高的系列 ２ １６０— ２ １９６ ｎｔ作包被探针,异源性大于 ２０％的序列作显色探针Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４、Ｇ５、Ｇ６,采用ＰＣＲ微板核酸杂交ＥＬＩＳＡ技术对３８０例肝功能损害的肝炎患者血清进行ＴＴＶ检测及ＴＴＶ基因分型研究。结果检测出６１例ＴＴＶ阳性患者,检出率为１６．０％。对６１例ＴＴＶ进行基因分型,Ｇ１型４４例,Ｇ２型５例,Ｇ１、Ｇ２混合型感染１０例,Ｇ３、Ｇ４各１例,尚未发现Ｇ５、Ｇ６型。慢性肝炎中ＴＴＶ感染者与急性肝炎中ＴＴＶ感染者比例两者相近。结论在华南地区的肝炎疾病中, ＴＴＶ有较高的感染率; ＴＴＶ存在四个基因型,主要为Ｇ１型,其次为Ｇ２型,尚未发现Ｇ５、Ｇ６型。     

微反应板酶联夹心杂交定量检测乙型肝炎病毒基因组

目的 建立一种在微量反应板上进行乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）基因杂交定量分析的技术。方法 利用人工合成的多组寡核苷酸探针与乙型肝炎病毒全基因组在微量ＤＮＡ结合板上进行杂交反应,并利用自制的标记放大探针检测杂交信号,信号值以Ａ值标示,与标准曲线比较后,可求得待测标本中ＨＢＶ基因含量。结果 （１）本方法可直接从血清标本中对ＨＢＶ定量,可定量范围为２０ｐｇ－２０ｎｇ／ｍｌ;（２）不与人类基因组及其它病毒或细菌     

核酸杂交和McAb—IFA快速检出鉴定白纹伊蚊体内登革热病毒…

本文报道用实验感染和自然叮咬吸血感染带毒的雌性白纹伊蚊，用克隆的Ｄｅｎ．Ｖ－ｃＤＮＡ探针作斑点杂交检测蚊体内病毒ＲＮＡ和Ｄｅｎ．ｖ－ＭｃＡｂ－ＩＦＡ检查蚊头压片的病毒抗原。探针检出病毒ＲＮＡ的时间分别为实验感染后第２ｄ，自然叮咬血后第１ｄ。ＭｃＡｂ－ＩＦＡ检出病毒抗原的时间分别为实验感染后第３ｄ，自然叮咬后第２天。从登革热监测点中，检出Ｂ组虫媒病毒的存在，提示早期检出蚊虫携带病毒水平，可预测Ｂ组虫     

用原位核酸杂交技术探讨肠道病毒与急型克山病的关系

目的 探讨肠道病毒(柯萨奇病毒)与吉林省急型克山病的关系。方法 用柯萨奇病毒B3、B4、B5、A9共同序列作寡核苷酸探针对吉林省急型克山病尸捡心肌组织12例及病区与非病区尸捡正常心肌组织各7例进行原位核酸杂交。结果 吉林省急型克山病12例中有11例出现阳性杂交信号，即有肠道病毒RNA存在，阳性率为91．66％，对照组均为阴性。结论 吉林省急型克山病病人心肌组织中有肠道病毒感染，提示急型克山病的发病可能与肠道病毒感染有关。     

用原位核酸杂交法探讨柯萨奇病毒与克山病的关系

为进一步探讨柯萨奇病毒与克山病的关系，采用柯萨奇Ｂ３病毒（ＣＶＢ３）制备的ｃＤＮＡ探针与黑龙江、山东、云南三省病区克山病尸检心肌组织及胎儿克山病心肌组织的石蜡切片进行了原位核酸杂交，并用脑外伤、ＣＯ中毒等意外死亡健康成人及冠心病、风心病尸检心肌组织和病区、非病区７～８个月引产胎儿心肌组织的石蜡包埋切片作为对照。结果急型克山病８／１３、慢型克山病３４／５０、亚急型克山病２２／２９呈现阳性杂交信号，提示有柯萨奇病毒ＲＮＡ的存在，冠心病２／１５、风心病１／１５、显著低于克山病，而健康成人对照组均为阴性，胎儿克山病一例呈阳性反应，病区引产胎儿心肌组织１０例中有２例也检出柯萨奇病毒ＲＮＡ，而非病区胎心则为阴性。结果提示在一些克山病的发生和发展过程与柯萨奇Ｂ组病毒的感染高度相关。     

用原位核酸杂交法探讨慢型克山病与柯萨奇B组病毒的关系

为探讨山东慢型克山病与柯萨奇Ｂ组病毒的关系，用缺口平移法制备生物素标记ＣｏｘＢ３病毒的ｃＤＮＡ探针与慢型克山病１４例尸检心肌组织及１０例脑外伤，ＣＯ中毒等意外死亡的正常成人心肌组织及１０例非病区７￣８个月引产胎儿的心肌组织切片进行原位杂交，１４例慢克中有９例检测到柯萨奇Ｂ组病毒的ＫＮＡ，阳性率达６４％，而对照组均为阴性。提示柯萨奇Ｂ组病毒感染可能是山东慢型克山病发病因素之一。     

山东人群TTV感染状况及TTV山东株部分基因序列分析

1997-10 Nishizawa et al [1]发表了第一篇关于人类肝炎相关DNA病毒基因,暂命名为输血传播病毒(transfusion transmitted virus,TTV)的论文,周育森et al [2]在国内首先测定了中国人TTV部分基因克隆序列.迄今国内少数实验室也相继开展了TTV感染的分子流行病学、临床和实验研究.初步研究结果表明,TTV感染同输血或血液制品密切相关,可能是导致肝功长期损害ALT异常又一重要致病因子.为探讨山东地区TTV感染存在和基因变异的情况及TTV在人类肝炎中作用和地位.我们以套式聚合酶链反应(nested-PCR)法,对输血后丙型肝炎和非甲～庚型肝炎患者进行TTV检测,并对部分病例进行序列分析,现将结果报告如下.     

用原位核酸杂交法探讨柯萨奇B组病毒与云南慢型克山病的关系

为了探讨柯萨奇Ｂ组病毒感染与云南慢型克山病的关系，本文用缺口平移法制备生物素标记的柯萨奇Ｂ３病毒的ｃＤＮＡ探针与云南慢型克山病尸检心肌组织１５例及脑外伤等非正常死亡的尸检心肌组织１０例石腊切片及引产胎儿心肌组织１０例的石腊切片进行原位杂交。结果云南慢克１６例中有１１例出现阳性杂交信号，即有柯萨奇Ｂ组病毒（ＣＶＢ）ＲＮＡ存在，阳性率达７３．３％。脑外伤等非正常死亡的心肌及胎心均为阴性。提示云南慢型克     

用原位核酸杂交法探讨柯萨奇B组病毒与克山病的关系

为探讨柯萨奇Ｂ病毒感染与黑龙江省急型克山病的关系。本文用缺口平移法制备生物标记的柯萨奇Ｂ３病毒的ｃＤＮＡ探针与１３例急型克山病尸检心肌组织及脑外伤、ＣＯ中毒等意外死亡的正常成人心肌组织１０例，非病区７－８个月引产胎儿心肌组织１０例的石腊切片进行原位杂交。     

新疆老年人群TTV感染状况的初步研究

目的了解输血传播病毒（TTV）在老年易感人群中的感染情况。方法采用套式PCR方法,对214例老年易感人群血清进行TTV—DNA的检测。结果在214例老年易感人群中共检出71例TTV—DNA阳性血清,总检出率为33．2％,TTV—DNA阳性率与民族、性别无统计学差异（χ^2=1．14,P〉0．05）;其中甲型肝炎老年病人中TTV—DNA阳性率为28．6％,乙型肝炎老年病人中TTV—DNA阳性率为36．0％,HBsAg（＋）携带者的TTV—DNA阳性率为29．1％,各组相比差异无统计学意义（χ^2=0．779,P〉0．05）。结论新疆老年易感人群中存在较高的TTV感染,TTV的感染可能与肝炎有关。     

微滴度板杂交试验在疟疾种属特异性诊断的应用

本实验应用113份指尖取血制作的滤纸片干血滴样品分离疟原虫DNA进行微滴度板杂交试验。结果表明：1．滤纸片干血滴一微滴度板杂交实验用血量少、经过自然干燥后，样品易于保存和运输，而且提取DNA的方法简便。2．此方法特异性高、敏感性强、其检测极限可达到1．5个原虫／μl血。3．此方法可在进行疟疾诊断的同时进行种属鉴定，并可对多种疟原虫同时感染进行诊断。     

用原位核酸杂交法探讨柯萨奇B组病毒与黑龙江慢型克山病的关系

克山病是原因未明的地方性心肌病，慢型克山病有关病毒病因的研究未见有关报道，作者用生物素标记的柯萨奇Ｂ３病毒的ｃＤＮＡ探针与黑龙江病区慢型克山病尸检心肌组织及非正常死亡成人心肌组织和非病区７￣８个月引产胎儿心肌组织进行了原位杂交，以检测柯萨奇Ｂ组病毒ＲＮＡ。结果１３例慢型克山病中有９例呈现阳性杂交信号，阳性率达６９．２％，两对照组均为阴性。表明黑龙江慢型克山病心肌组织中有柯萨奇Ｂ组病毒ＲＮＡ的存在，     

PCR-ELISA微孔板杂交技术检测结核杆菌DNA

目的　采用PCR ELISA微孔板杂交技术检测结核杆菌DNA。方法 采用PCR技术扩增结核杆菌DNA，并将扩增产物加入预先包被结核杆菌探针的微孔板，再加入结核杆菌显色探针，同时进行微孔板核酸夹心杂交ELISA显色。共检测肺部疾病患者痰标本 510例。结果 该法的灵敏度为 59.3%，特异性为 95.0%；阳性预测值为 96.3%，阴性预测值为 51.4%。结论 PCR ELISA微孔板杂交技术可快速、准确地检测结核杆菌DNA，是结核病早期诊断和鉴别诊断的可靠实验室方法。     

单克隆抗体—ELISA技术检测间日疟感染的现场研究

对１１２例发热病人血样同时进行镜检和用ＭｃＡｂ－ＭｃＡｂＥＬＩＳＡ夹心法检测间晶疟抗原，发热病人血片分别由基层镜检员和省级专业人员镜检，检出间日疟阳性率分别为３０．３６％和４３．７５％，ＥＬＩＳＡ法检测阳性率为４２．８６％，其敏感性、特异性均在９５％以上。具有采样方便、样本可成批操作、结果客观等特点，适用于基层开展灭疟后期疟疾传染源监测。     

乙型肝炎病毒基因分型与疾病病情的关系

目的探讨乙型肝炎病毒基因分型与疾病病情的关系。方法采用PCR微板核酸杂交ELISA技术检测299例慢性乙型肝炎患者HBV基冈型,并分析其与HBVDNA定量和HBeAg阳性率的关系。结果本组患者HBV基因分型结果以c型143例最多,B型119例次之,其他类型少见;肝衰竭患者HBVC基因型（53．3％）显著高于B基因型（34．7％,P〈O．05）;C型患者HBVDNA定量（7．0±1．1lgcopies／m1）和HBeAg阳性率（68．5％）均明显高于B型（6．1±1．01gcopies／ml和45．4％,P〈0．05）。结论本组乙型肝炎病毒基冈分型以c型和B型居多,在肝衰竭患者HBVC型感染者多于B型。