含当归芍药散简方脑脊液对神经细胞的保护作用

目的:探讨含当归芍药散简方脑脊液的神经保护作用及其可能的机制.方法:采用FeSO4和H202作用产生自由基的方法诱导建立PC12细胞氧化损伤模型,分别用当归芍药散简方(0.135 g·mL-1)ig家兔(1.5 g·kg-1),于1,14 d时取脑脊液添加于培养液中(每组分5％,10％,20％3个体积分数)处理PC12细胞,MTT法铡定细胞活性,硫代巴比妥酸(TBA)比色法测定丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活力,甲基百里香酚蓝(MTB)比色法测定细胞内Ca1+水平,免疫细胞化学法测定α7烟碱型乙酰胆碱受体(nAchR)阳性表达,BCA蛋白定量及斑点印迹法测定α7nAchR亚单位水平.结果:含20％当归芍药散简方脑脊液对PC12细胞活性(以吸光度表示,A)1 d组(1.241±0.117)和14d组(1.297±0.213)与损伤组(0.986±0.051)比较能明显增加PC12细胞活性(P＜0.05,P＜0.01)、显著提高SOD活力(19.48±0.34),(19.52±0.33)U·mL-1对(18.18±0.12)U·mL-1(P＜0.01),有效降低MDA含量及细胞内Ca2+水平均降低,与损伤组比较P＜0.01;明显上调α7nAChR的表达,14 d组与1d组比较有显著性差异(P＜0.05).结论:当归芍药散简方对FeSO4和H2O2诱导建立PC12细胞氧化损伤模型具有保护作用,其机制与保护α7nAchR有关.     

红景天苷对H2O2和高糖诱导损伤的血管内皮细胞保护作用研究

目的:探讨红景天苷对H2O2和高糖诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,分别以H2O2和高糖诱导内皮细胞损伤,分别给予10-6、10-5、10-4mol/L的红景天苷处理,MTT法测定细胞活力,检测LDH、MDA释放量和SOD活性。结果:结果显示红景天苷10-6、10-5、10-4mol/L组对正常人脐静脉内皮细胞皆无损伤作用;红景天苷10-5、10-4mol/L组对H2O2损伤模型的细胞活力有显著改善(P<0.05或P<0.01),红景天苷10-6、10-5、10-4mol/L组对高糖损伤模型的细胞活力均有显著改善(P<0.01),并且红景天苷10-5、10-4mol/L组能显著降低H2O2和高糖损伤组培养液中LDH和MDA释放量,升高细胞内SOD活性(P<0.05或P<0.01)。结论:红景天苷对H2O2和高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤有明显的保护作用。     

何首乌不同炮制品对H_2O_2致PC12细胞损伤的保护作用

目的初步研究何首乌不同炮制品对H2O2诱导PC12细胞损伤的保护作用。方法实验用何首乌分生品、清蒸品、黑豆汁蒸品,各分成高、中、低剂量(即10、5、2.5 mg生药/mL),采用MTT法测定其对正常PC12细胞和H2O2致PC12细胞损伤的保护作用,并用比色法测定SOD活性、LDH和MDA水平。结果何首乌生品、清蒸品、黑豆汁蒸品对正常PC12细胞增殖均无明显影响(P>0.05),但均可显著刺激H2O2致PC12损伤细胞增殖(P<0.05),黑豆汁蒸品和清蒸品均显著升高SOD活性(P<0.05)、减少LDH释放(P<0.05)、降低MDA(P<0.05)水平来改善H2O2致PC12细胞氧化应激而对损伤细胞有保护作用,生品虽能升高SOD活性(P<0.05),但同时也显著升高MDA和LDH水平(P<0.05)。结论清蒸和黑豆汁蒸均可加强何首乌保护PC12细胞免受H2O2损伤的作用。     

龙眼肉不同提取物的神经保护作用及其机制

目的:探讨龙眼肉的神经保护作用及其机制。方法:采用Aβ诱导PC12细胞损伤,用龙眼肉不同提取物作用于损伤的PC12细胞,Elisa试剂盒检测SOD、MDA水平,MTT检测细胞增殖;采用H2O2诱导PC12细胞损伤,Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡。结果:龙眼肉水提取物和正丁醇提取物能提高Aβ诱导损伤的细胞存活和SOD活力,抑制H2O2诱导损伤的早期细胞凋亡,对MDA含量无明显影响;乙酸乙酯提取物可减少H2O2诱导损伤的各期细胞凋亡及坏死,但对Aβ诱导损伤的细胞存活以及SOD活力和MDA含量无明显影响。结论:龙眼肉具有神经细胞保护作用,但不同提取物作用机制可能不同。     

三七总皂苷对H2O2损伤的皮肤成纤维细胞的保护作用

目的探讨三七总皂苷对H2O2诱导的人皮肤成纤维细胞氧化应激损伤的保护作用。方法用不同浓度(12.5～50μg.ml-1)的三七总皂苷预处理细胞24 h,100μmol.L-1 H2O2干预4 h,MTT法测定细胞活力,流式细胞技术检测凋亡细胞百分率,紫外分光光度计测定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性和丙二醛(MDA)的含量,羟脯氨酸比色法检测胶原含量。结果三七总皂苷可显著降低H2O2对皮肤成纤维细胞的生长抑制率,减少细胞凋亡数量,降低MDA含量,增强SOD和GSH-Px的活性,增加胶原含量,各指标差异显著(P<0.05,P<0.01)。结论三七总皂苷可拮抗H2O2诱导的皮肤成纤维细胞的氧化应激损伤,保护机制与其抗氧化作用有关。     

红芪总黄酮对过氧化氢致脐静脉内皮细胞损伤的抗氧化作用

目的:研究红芪总黄酮对过氧化氢(H2O2)诱导脐静脉内皮细胞损伤的保护作用。方法:化学发光法检测红芪总黄酮对氧自由基的清除能力。建立H2O2致脐静脉内皮细胞损伤模型,化学比色法检测乳酸脱氢酶(LDH),丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,单细胞凝胶电泳法检测对细胞DNA损伤的影响。结果:红芪总黄酮可清除氧自由基。100μmol/L H2O2诱导脐静脉内皮细胞4 h,细胞液LDH、细胞内MDA含量升高SOD活性降低,DNA损伤明显。红芪总黄酮可明显抑制MDA损伤,显著降低LDH释放及细胞内MDA含量,提高SOD活性。结论:红芪总黄酮对H2O2诱导脐静脉内皮细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与提高脐静脉内皮细胞的抗氧化能力有关。     

芍药苷对Aβ25-35诱导PC12细胞氧化损伤的影响

目的:研究芍药苷对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用及其机制.方法:Aβ25-35造成PC12细胞损伤,检测细胞的存活率(MTT法)、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率以及细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平的变化.采用流式细胞仪测定细胞内活性氧(ROS)水平和线粒体膜电位的变化.Western blot法检测细胞内HO-1,Cyt C和cleaved Caspase-3蛋白的表达水平.结果:芍药苷组(5,10,20 μmol·L-1)能不同程度地对抗Aβ25-35对PC12细胞的损伤,增加细胞存活率,减少LDH漏出率和MDA含量,增加抗氧化酶SOD,GSH-Px和HO-1的活性,减少细胞内ROS形成,提高线粒体膜电位,减少Cyt C释放和cleaved Caspase-3蛋白的表达.结论:芍药苷对Aβ25-35致PC12细胞损伤具有一定的抑制作用,其作用机制可能与抑制Aβ25-35诱导的氧化应激以及减轻线粒体损伤有关.     

罗汉果甜苷对PC12细胞氧化应激的保护作用研究

目的 考察罗汉果甜苷在PC12细胞中对外源性氧化损伤的保护作用.方法 采用MTT法考察0.01 ～ 100μg/ml罗汉果甜苷对正常PC12细胞活力的影响,并在H2O2刺激的PC12细胞中考察0.01 ～ 10 μg/ml的罗汉果甜苷对细胞活力的影响,通过对细胞活力的考察选择罗汉果甜苷合适的实验剂量,测定罗汉果甜苷0.1及1μg/ml对H2O2刺激的PC12细胞中过氧化氢酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力的影响以及对丙二醛(MDA)含量的影响.结果 罗汉果甜苷在1 ～ 10 μg/ml浓度能提高正常PC12细胞活力,在0.1～ 10 μg/ml浓度下能显著提高H2O2刺激的PC12细胞活力(P＜0.01).0.1及1μg/ml两个剂量的罗汉果甜苷均能显著提高H2O2刺激的PC12细胞中SOD活力(P＜0.001)和GSH-Px活力(P ＜0.001),并减少MDA生成(P＜0.05).结论 罗汉果甜苷能缓解氧化应激导致的PC12细胞活力下降,并能增强PC12细胞的抗氧化能力.     

人参炔醇对大鼠原代培养的神经细胞过氧化氢损伤的影响

目的探讨人参炔醇对原代神经细胞氧化应激的保护作用。方法通过MTT法、流式细胞术观察人参炔醇对神经细胞氧化应激的影响;并观察人参炔醇体外对自由基的清除作用及对细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性与丙二醛(MDA)含量的影响。结果2～16μmol/L人参炔醇对H2O2损伤神经细胞有一定的保护作用,可剂量依赖性地促进细胞存活,8μmol/L人参炔醇可显著减少细胞的坏死率及凋亡率(P<0.01)。30～100μmol/L人参炔醇对自由基有一定的清除作用,2～8μmol/L人参炔醇还可显著提高H2O2损伤细胞内SOD、GSH-Px活性并抑制MDA的生成(P<0.01)。结论人参炔醇具有保护神经细胞对抗氧化应激的活性,该活性与细胞内SOD活性增高有关。     

PI3K/Akt通路在芍药苷抗Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的:研究PI3K/Akt通路在芍药苷对PC12细胞神经保护中的作用。方法:芍药苷组(5,10,20μmol·L-1)预处理30 min,然后加入Aβ25-35(20μmol·L-1)共同作用24 h;抑制剂LY294002(10μmol·L-1)于芍药苷(10μmol·L-1)作用前预处理30 min。用MTT比色法检测细胞存活率,Annexin-V/PI双染检测细胞凋亡率,以及Western blot法检测p-Akt,Bax,Bcl-2,cleaved caspase-3蛋白表达。结果:芍药苷可抑制Aβ25-35所诱导的PC12细胞毒性和凋亡,其保护作用可能是通过上调Akt磷酸化水平,增加Bcl-2蛋白表达、降低Bax蛋白表达、抑制caspase-3等的激活而实现的;抑制剂LY294002可减弱上述芍药苷的保护作用。结论:芍药苷可通过激活PI3K/Akt信号通路对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤具有保护作用。     

远志皂苷对H2O2诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的：观察远志皂苷（Tenuigenin TEN）对过氧化氢（H202）所致PCI2细胞损伤的保护作用。方法：以H2O2损伤PCI2细胞为氧化应激损伤模型，MTT法检测细胞存活率；采用紫外分光光度法测定LDH漏出量，观察细胞的损伤程度；硫代巴比妥酸法测定MDA含量，黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性。结果：TEN能明显改善H：0：导致的细胞损伤，与H2O2处理组相比，20、10mg／L组可使细胞存活率升高，LDH漏出量明显降低，降低MDA含量，提高SOD活性。结论：TEN对H2O2诱导的PCI2细胞损伤具有明显的保护作用。     

当归含药血清对阿尔兹海默病细胞模型损伤的保护作用

目的:观察当归含药血清对Aβ25-35与H2O2分别诱导的阿尔兹海默病(AD)细胞模型的抗氧化能力的影响,探讨当归防治AD的作用及机制。方法:用Aβ25-35与H2O2分别诱导PC12细胞损伤,以不同浓度当归含药血清对抗干预,以MTT比色法观测当归含药血清对两种AD细胞模型增殖的保护作用,以比色法检测当归含药血清对AD细胞模型培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、总超氧物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)含量的影响,分析当归治疗AD机制。结果:10%当归含药血清对损伤的PC12细胞的存活率有明显提高作用,可显著降低细胞模型培养液中LDH活力、MDA含量,提高T-SOD活力(P<0.05)。讨论:当归含药血清对H2O2及Aβ25-35损伤的PC12细胞有保护作用,机制与当归阿魏酸提高细胞抗氧化能力有关。     

罗布麻总黄酮对过氧化氢致血管内皮细胞损伤的保护作用

目的：探讨罗布麻总黄酮对过氧化氢（H2O2）所致的人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）损伤的保护作用。方法：采用MTT法观察不同浓度罗布麻总黄酮对HUVEC增殖的影响,流式细胞仪检测不同浓度罗布麻总黄酮对HUVEC细胞周期变化的影响,采用比色法分别检测细胞培养液NO和SOD的活性、MDA和LDH的含量,免疫组化法测定NF-κB的表达。结果：正常细胞组比,200μmol．L—H2O2模型组细胞增殖活性下降,细胞凋亡率明显增加,G0／G1期细胞比率增加,S期细胞和G2／M期细胞比率明显降低,培养上清液中NO和SOD活性明显下降,MDA和LDH的释放量明显增加,NF—κB的表达时明显增加（P〈0．01）。不同浓度的罗布麻总黄酮作用后,与模型组比较,可明显提高细胞增殖活性,降低细胞凋亡率,降低G0／G1期细胞比率,增加S期细胞和G2／M期细胞比率;并可提高细胞上清液中NO水平和SOD活性,降低MDA和LDH的释放,可抑制H2O2引起的NF-κB的过度表达。其中,中、高剂量组有显著性差异。结论：罗布庥总黄酮对H2O2引起HUVEC损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能与其抗氧化作用及调节有关NF—κB的表达有关。     

葡萄籽原花青素对原代培养海马细胞氧化应激的影响

目的:研究葡萄籽原花青素(GSP)对过氧化氢(H2O2)诱导大鼠原代培养海马细胞氧化应激损伤的影响。方法:采用原代培养的方法,建立H2O2致海马细胞氧化损伤模型,观察细胞形态学变化;MTT法测定细胞活力;化学比色法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,以及活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量。结果:1 mmol/L的H2O2诱导海马细胞24 h,细胞活力下降(均P<0.01),细胞内ROS和MDA含量增加,SOD、CAT及GSH-Px活性下降。而GSP可明显减少细胞损伤,使细胞内SOD、CAT及GSH-Px活性增加,并减少细胞内ROS和MDA含量。结论:GSP对H2O2诱导的海马神经细胞氧化应激损伤具有保护作用,其作用机制可能与提高海马细胞的抗氧化能力有关。     

Protective effect of a polysaccharide isolated from a cultivated Cordyceps mycelia on hydrogen peroxide-induced oxidative damage in PC12 cells

Cordyceps sinensis as a well-known traditional Chinese tonic has many therapeutic functions. In the present study, an acid polysaccharide (APS) was isolated from cultivated Cordyceps mycelia by ion-exchange and sizing chromatography. The protective capacity of APS against H(2)O(2)-induced oxidative damage in rat pheochromocytoma PC12 cells was investigated by measuring cell viability, lactate dehydrogenase (LDH) release, antioxidant enzyme activity, malondialdehyde (MDA) levels and intracellular accumulation of reactive oxygen species (ROS) and Ca(2+). The results demonstrated that pretreatment of PC12 cells with APS, prior to H(2)O(2) exposure, significantly increased the survival of cells and the activities of glutathione peroxidase (GSH-Px), catalase (CAT) and superoxide dismutase (SOD), and reduced the levels of LDH and MDA. Intracellular accumulation of reactive oxygen species (ROS) and Ca(2+) were also inhibited by APS treatment. In conclusion, APS was found to increase the cellular antioxidant defence capacity, thereby protecting PC12 cells against oxidative stress.     

Prevention of oxidative injury by flavonoids from stems and leaves of Scutellaria baicalensis Georgi in PC12 cells

Reactive oxygen species (ROS) are important mediators in a number of neurodegenerative diseases, such as Alzheimer's disease (AD) and Parkinson's disease (PD). The neuroprotective effects of flavonoids from the stems and leaves of Scutellaria baicalensis Georgi (SSF) against hydrogen peroxide (H2O2)-induced rat pheochromocytoma line PC12 injury were evaluated by cell lesion, free radicals and ATPase disorders. Following a 30 min exposure of the cells to H2O2 (100 microm), a marked decrease in cell survival and activity of superoxide dismutase (SOD) and Na+-K+-ATPase as well as an increase of malondialdehyde (MDA) production and lactate dehydrogenase (LDH) release were observed. Pretreatment of the cells with SSF (18-76 microg/mL) prior to H2O2 exposure notably elevated the cell survival and activity of SOD and Na+-K+-ATPase, and lowered the MDA level and LDH release. Neuroprotection by SSF was also observed in animal models. The present results indicated that SSF exerts neuroprotective effects against H2O2 toxicity, which might be of importance and might contribute to its clinical efficacy for the treatment of neurodegenerative disease.     

毛蕊异黄酮苷和芍药苷联用对氧糖剥夺再灌注HT22细胞PI3K/AKT信号通路的影响

目的观察并探讨毛蕊异黄酮苷和芍药苷联用对氧糖剥夺再灌注诱导的HT22细胞氧化应激损伤的作用及其机制。方法建立HT22细胞氧糖剥夺再灌注损伤模型,将HT22细胞分为正常对照组、模型组、给药组、尼莫地平组,应用CCK-8法检测细胞存活率,测定毛蕊异黄酮苷和芍药苷联用对HT22细胞活力的影响,检测细胞中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)含量,并采用Western Blot法检测PI3K、AKT蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,氧糖剥夺再灌注处理组的HT22细胞存活率明显降低(P<0.01),LDH活性及MDA的含量升高(P<0.05,P<0.01),SOD活力降低(P<0.01),PI3K、AKT蛋白表达明显下降(均P<0.01);与模型组相比,给药组能明显提高氧糖剥夺再灌注损伤后HT22细胞的存活率(P<0.01),降低LDH、MDA的含量(P<0.05,P<0.05),SOD活力提高(P<0.01),PI3K、AKT蛋白表达升高(均P<0.01)。结论毛蕊异黄酮苷和芍药苷联用对氧糖剥夺再灌注诱导的HT22细胞氧化应激损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能通过调节PI3K/AKT信号通路实现。     

化瘀祛痰方药对H2O2诱导人脐带静脉内皮细胞氧化应激保护作用的研究

目的探讨化瘀祛痰方药含药血清对H2O2诱导人脐带静脉内皮细胞（EA.hy926细胞）氧化应激的保护作用。方法体外培养EA.hy926细胞,随机分为5组。正常对照组：仅用DMEM完全培养基培养,不加任何药物;H2O2刺激组：培养液中加入终浓度为300μmol/L H2O2;含药血清低剂量组、含药血清中剂量组、含药血清高剂量组分别使用5%、10%、20%含药血清预处理24 h后加入终浓度为300μmol/L H2O2。各组细胞培养24 h后进行各项指标测定。采用MTT法检测细胞活性,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD）活力,2,4-二硝基苯肼显色法检测乳酸脱氢酶（LDH）活性,硫代巴比妥酸法测定丙二醛（MDA）含量,硝酸还原酶法检测一氧化氮（NO）活性。采用细胞活性氧检测试剂盒,通过荧光显微镜观察细胞内活性氧水平的变化。结果与正常对照组相比,H2O2刺激后细胞活性明显下降,SOD、NO活性显著降低,而LDH活性、MDA含量则显著增加,活性氧水平明显升高。10%、20%化瘀祛痰方药含药血清可显著提高细胞存活率及SOD、NO活性,而显著降低LDH活性、MDA含量及活性氧水平。结论化瘀祛痰方药对H2O2诱导EA.hy926细胞氧化应激具有保护作用,这可能是其抗动脉粥样硬化的作用机制之一。     

白藜芦醇对过氧化氢损伤心肌细胞的保护作用及其机制研究

目的探讨白藜芦醇对H2O2所致心肌细胞损伤的保护作用。方法采用H2O2处理培养的乳鼠心肌细胞,造成氧化应激模型,应用MTT法观察白藜芦醇对心肌细胞活力的影响,SOD及MDA试剂盒检测细胞培养液中SOD与MDA含量,并通过流式细胞仪检测乳鼠心肌细胞的凋亡情况。结果①损伤模型组与空白对照组比较,心肌细胞活力明显降低,心肌细胞凋亡率明显增加,而MDA活性明显升高,SOD活性明显降低;②不同浓度白藜芦醇可显著性提高受损心肌细胞活力,减少心肌细胞的凋亡,同时可显著降低培养液中MDA活性,而升高SOD活性。结论白藜芦醇可减轻H2O2对心肌细胞的损伤程度,对心肌细胞具有保护作用,其机制可能与其抗心肌细胞氧化和抗凋亡有关。