槲皮素对HeLa细胞中HPV18 E7、P16 mRNA表达的影响

目的:探讨不同浓度的槲皮素对HeLa细胞HPV18 E7、P16 mRNA表达的影响及意义。方法:采用不同浓度的槲皮素处理体外培养的HeLa细胞,分别培养24,48,72 h,半定量RT-PCR法检测HeLa细胞中HPV18E7、P16 mRNA表达的变化。结果:槲皮素能显著降低HPV18 E7 mRNA、P16 mRNA在HeLa细胞中的表达。①处理相同时间各浓度槲皮素除10μmol/L处理24 h组E7 mRNA的表达无差异性(P>0.05)外,余浓度与溶剂对照组相比均存在显著性差异(P<0.01);相同浓度的各时间段之间也存在差异性(P<0.05)。②处理相同的时间下各浓度槲皮素组与溶剂对照组相比P16 mRNA的表达均存在显著性差异(P<0.01),各浓度组之间也存在显著的差异性(两两比较,P<0.01);相同浓度的各时间段之间也存在差异性(P<0.05)。结论:槲皮素能下调宫颈癌HeLa细胞HPV18 E7、P16 mRNA表达,并呈时间剂量依赖性,可能是促进HeLa细胞凋亡的机制之一。     

槲皮素对人宫颈癌HeLa细胞midkine和caspase-3表达的影响

目的 通过观察槲皮素对宫颈癌 HeLa 细胞中midkine(MK)、caspase-3 基因和蛋白表达水平,探讨槲皮素体外诱导 HeLa 细胞凋亡的机制.方法 宫颈癌细胞株 HeLa 细胞经培养、传代后分为实验组(分别加入浓度为10、20、40、80及160 μmol/L的槲皮素)和空白对照组.采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)方法检测细胞内的MK和caspase-3基因mRNA和蛋白表达水平.结果 随槲皮素浓度的增高HeLa细胞中MK mRNA和蛋白表达依次下降,其中80 μmol/L、160 μmol/L组下降较明显,而caspase-3的mRNA和蛋白表达随药物浓度增高表达增强(P<0.01).结论 槲皮素可能通过下调MK、上调caspase-3的表达水平而发挥抗宫颈癌作用.     

槲皮素对HeLa细胞中HPV18E7、P16mRNA表达的影响

目的：探讨不同浓度的槲皮素对HeLa细胞HPV18 E7、P16 mRNA表达的影响及意义。方法：采用不同浓度的槲皮素处理体外培养的HeLa细胞,分别培养24,48,72 h,半定量RT-PCR法检测HeLa细胞中HPV18E7、P16 mRNA表达的变化。结果：槲皮素能显著降低HPV18 E7 mRNA、P16 mRNA在HeLa细胞中的表达。①处理相同时间各浓度槲皮素除10μmol/L处理24 h组E7 mRNA的表达无差异性（P〉0.05）外,余浓度与溶剂对照组相比均存在显著性差异（P〈0.01）;相同浓度的各时间段之间也存在差异性（P〈0.05）。②处理相同的时间下各浓度槲皮素组与溶剂对照组相比P16 mRNA的表达均存在显著性差异（P〈0.01）,各浓度组之间也存在显著的差异性（两两比较,P〈0.01）;相同浓度的各时间段之间也存在差异性（P〈0.05）。结论：槲皮素能下调宫颈癌HeLa细胞HPV18 E7、P16 mRNA表达,并呈时间剂量依赖性,可能是促进HeLa细胞凋亡的机制之一。     

冬凌草甲素对人宫颈癌HeLa细胞线粒体凋亡途径的影响

目的 观察冬凌草甲素对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响,并探讨其诱导HeLa细胞线粒体凋亡的机制.方法 体外培养HeLa细胞,分别以0μmol/L(设为空白对照组)、5μmol/L、10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L冬凌草甲素处理12 h、24 h、36 h、48 h,CCK-8法检...     

苯并[a]芘对宫颈癌HeLa细胞细胞色素P450 1A1的诱导作用

目的探讨苯并[a]芘（BaP）对宫颈癌HeLa细胞增殖及细胞色素P450 1A1（CYP1A1）表达的影响。方法不同浓度（0、1.0、2.5、5.0、7.5和10.0μmol/L）的BaP处理宫颈癌HeLa细胞,MTT法检测BaP对HeLa细胞增殖的影响,W estern b lotting和RT-PCR分别检测CYP1A1的蛋白表达和mRNA表达,荧光素标记检测CYP1A1活性。结果 MTT法检测显示,各浓度BaP组光密度（D553 nm）均较对照组（0μmol/L BaP）升高,其中7.5μmol/L BaP组最高（P〈0.05）。W estern b lotting和RT-PCR检测结果显示,各浓度BaP组CYP1A1 mRNA及蛋白的表达水平均高于对照组,其中7.5μmol/L BaP组最高（P〈0.05）。CYP1A1活性检测结果显示,各浓度BaP组HeLa细胞CYP1A1酶活力均高于对照组,以5.0μmol/L BaP组活力最高（P〈0.05）。结论 BaP可诱导HeLa细胞增殖,诱导HeLa细胞表达CYP1A1,并增加酶活性。 更多还原     

硫酸脱氢表雄酮对MIN6细胞葡萄糖刺激的胰岛素分泌的影响

目的探讨硫酸脱氢表雄酮(DHEAS)对胰岛β细胞株MIN6葡萄糖刺激的胰岛素分泌的影响。方法以葡萄糖刺激浓度为2.8mmol/L和16.7mmol/L的对数生长期MIN6细胞作为实验对象,分别以1、5、10μmol/LDHEAS干预10min和24h(不同浓度DHEAS组),以5μmol/LDHEAS或与10μmol/L糖皮质激素受体阻断剂RU486联合干预24h(DHEAS和DHEAS+RU486组),设立空白对照组。ELISA法测定细胞培养上清液中胰岛素分泌量,Real-TimePCR检测细胞胰岛素mRNA表达。结果干预后10min和24h时点,5μmol/L和10μmol/LDHEAS组MIN6细胞培养上清液中的胰岛素分泌量均显著高于空白对照组(P<0.05);干预后24h时点,DHEAS+RU486组与DHEAS组MIN6细胞培养上清液中胰岛素分泌量比较差异无统计学意义(P>0.05),但均显著高于空白对照组(P<0.05)。干预后24h时点,5μmol/L和10μmol/LDHEAS组MIN6细胞胰岛素mRNA表达均显著高于空白对照组(P<0.05)。结论 DHEAS对MIN6细胞葡萄糖刺激的胰岛素...     

吗啡对乳腺癌MCF-7细胞生存素及livin表达的影响

目的:探讨吗啡对人乳腺癌MCF-7细胞生存素(survivin)和livin的表达及细胞增殖与凋亡的影响。方法:人乳腺癌MCF-7细胞以1×103个/ml密度接种在6孔板内,随机分为对照组,0.1μmol/L吗啡组,1.0μmol/L吗啡组。于吗啡孵育24 h时,分别采用RT-PCR法和蛋白质印迹法测定细胞内生存素及livin mRNA及蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡改变;于吗啡孵育24,48及72 h时采用MTT法检测细胞增殖改变情况。结果:与对照组比较,0.1μmol/L吗啡组及1.0μmol/L吗啡组生存素和livin蛋白及mRNA表达水平均显著降低(P<0.01),0.1μmol/L吗啡组及1.0μmol/L吗啡组细胞增殖降低而细胞凋亡增加(P<0.01)。结论:吗啡通过下调MCF-7细胞生存素和livin的表达,从而抑制细胞增殖并促进细胞凋亡。     

葛根素抑制人子宫颈癌细胞株HeLa增殖和诱导凋亡作用研究

目的:探讨葛根素对人子宫颈癌细胞株HeLa的作用及其机制。方法:取对数生长期的HeLa细胞分别用不同剂量的葛根素处理(0μmol,12.5μmol,25μmol,50μmol)。细胞培养48 h后,利用MTT法检测HeLa细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡水平,RT-PCR法检测Bax mRNA和Bcl-2 mRNA水平。Western blotting法检测Wnt、β-catenin、Bax、Bcl-2、p53和p21表达水平。结果:葛根素成剂量依赖性地抑制HeLa细胞增殖,促进细胞凋亡,促进BaxmRNA表达,减少Wnt、β-catenin、Bcl-2 mRNA、p53和p21表达。结论:葛根素可抑制宫颈癌HeLa细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制与减少Wnt/β-catenin信号通路活化相关。     

槲皮素对宫颈癌细胞C33A增殖和凋亡的影响

目的 观察槲皮素对人宫颈癌细胞C33A增殖和凋亡的影响,初步探讨其相关作用机制.方法 用不同浓度槲皮素(空白对照、20、40、80 μmol/L),顺铂(空白对照、5、10、15、20 μg/mL)以及两者联合(槲皮素40 μmol/L+顺铂10 μg/mL)分别作用于C33A细胞24 h和48 h后,噻唑蓝(MTT法)检测细胞活力的变化;流式细胞术检测槲皮素对C33A细胞周期的影响;Western blot检测槲皮素对C33A细胞Cyclin D1、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达的影响.结果 MTT结果显示,经过槲皮素处理24 h后,各组细胞活力分别为86.92 ±3.953)%(20 μmol/L组)、(66.54 ±3.932)%(40 μmol/L组)和(52.21 ±2.970)%(80 μmol/L组),均低于空白对照组的(98.35 ±1.230)%;经过槲皮素处理48 h后,各组细胞活力分别为(65.19 ±7.071)%(20 μmol/L组)、(47.04 ±8.881)%(40 μmol/L组)和(29.71 ±6.505)%(80 μmol/L组),均低于空白对照组的(96.97 ±1.788)%.;此外,槲皮素40 μmol/L+顺铂10 μg/mL联合作用于C33A细胞24h后,细胞活力下降为(31.12 ±2.835)%;48 h后,细胞活力下降为(17.86 ± 3.182)%,同空白对照组相比均出现了明显的下降,(31.12 ±2.835)%;48 h后,细胞活力下降为(17.86 ±3.182)%(P<0.05).细胞周期检测结果显示,槲皮素可增加C33A细胞G0/G1期数量,减少S期数量.Western blot 结果显示,槲皮素可下调C33A细胞Cyclin D1蛋白的表达,还可上调Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达.结论 槲皮素通过下调Cyclin D1蛋白的表达可以抑制C33A细胞的活力和增殖,槲皮素通过上调Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达,可以诱导C33A细胞的凋亡.     

槲皮素联合顺铂对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨槲皮素单独及联合顺铂对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法选取对数生长期的卵巢癌SKOV-3细胞作为研究对象,实验分6组:阴性对照组(生理盐水),槲皮素低(25μmol/L)、中(50μmol/L)、高剂量组(100μmol/L),顺铂组(10μmol/L),联合组(槲皮素50μmol/L+顺铂10μmol/L)。采用MTT法检测不同浓度槲皮素单独及联合顺铂对SKOV-3细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡率;免疫细胞化学法检测槲皮素作用于SKOV-3细胞Bcl-2及MtP53蛋白表达水平的变化。结果与阴性对照组相比,槲皮素可明显抑制SKOV-3细胞的增殖,并具有显著的时间和剂量依赖关系,槲皮素高剂量组在72 h的抑制率可达63.49%(P<0.05);流式细胞仪分析发现槲皮素可使G0/G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少(P<0.05),提示其将细胞周期阻滞于G1期;槲皮素还可明显诱导SKOV-3细胞凋亡,高剂量组的凋亡率可达29.51%;槲皮素作用后,Bcl-2及MtP53表达则明显降低(P<0.05)。结论槲皮素在体外可抑制SKOV-3细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,其机制可能与降低凋亡相关蛋白MtP53和Bcl-2的蛋白表达水平有关;槲皮素与顺铂联用有协同作用。     

芒果甙对柔红霉素致大鼠心肌毒性细胞中铁调节蛋白表达的影响

目的:探讨铁调节蛋白1(IRP1)及铁调节蛋白2(IRP2)在芒果甙保护柔红霉素致大鼠心肌细胞毒性作用中的表达及其意义。方法:以4μmol/L柔红霉素单用或联合应用25～200μmol/L芒果甙为处理因素作用于大鼠心肌细胞24,48h及72h,应用qRT-PCR法检测各组心肌细胞IRP1、IRP2mRNA表达。结果:25～200μmol/L芒果甙模型组在干预24h后IRP1、IRP2表达水平较柔红霉素组(4μmol/L)降低,干预48,72h后,二者表达较柔红霉素组升高。结论:芒果甙能改变柔红霉素致大鼠心肌毒细胞中铁调节蛋白的表达水平,对细胞内铁代谢产生影响。     

苯乙基异硫氰酸酯对良性前列腺上皮细胞增殖凋亡的影响及相关机制研究

目的 探讨苯乙基异硫氰酸酯(phenethyl isothiocyanate,PEITC)对人类良性前列腺上皮细胞(benign prostatic hyperplasia cell line,BPH-1)增殖与凋亡的影响及其相关机制。方法 体外培养人永生化前列腺上皮细胞,给予6、12、24 μmol/L PEITC或等量溶剂二甲基亚砜,分别作用6、12、24 h。采用CCK-8检测前列腺上皮细胞活性; Annexin V及PI标记,流式细胞技术检测PEITC处理24 h后 BPH-1细胞凋亡及坏死比例;Western blotting测定PEITC处理24 h后BPH-1细胞中X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis,XIAP)及自噬相关蛋白5-12 (Atg5-12)表达变化;RT-PCR检测PEITC处理24 h后BPH-1细胞中XIAP mRNA表达情况。结果 1) BPH-1细胞经过6、12、24 μmol/L PEITC处理6 h后,细胞相对活性分别为71.22%、48.90%、13.57%;处理12 h后分别为52.57%、42.37%、10.11%;处理24 h后分别为36.73%、25.88%、8.39%;处理36 h后分别为33.57%、25.83%、13.06%,呈现浓度依赖性和时间依赖性。2) BPH-1细胞在 6、12、24 μmol/L PEITC 处理24 h后,细胞凋亡率分别为19.5%、30.4%、40.1%;与对照组相比,12、24 μmol/L处理组差异均具有统计学意义(P<0.05)。 3) BPH-1 细胞在6、12、24 μmol/L PEITC处理24 h后,XIAP 蛋白表达量及 mRNA 表达量均下调,Atg5-12蛋白表达量下调,并呈现剂量依赖性。结论 PEITC可抑制前列腺上皮细胞增殖,通过下调BPH-1中XIAP mRNA而降低XIAP蛋白表达,促进前列腺上皮细胞的凋亡并呈现出剂量依赖性;同时PEITC下调了自噬相关蛋白Atg5-12;PEITC对凋亡与自噬的调节可能存在相关性。     

姜黄素对人结肠癌Lovo细胞VEGF表达的影响

目的 研究姜黄素体外对人结肠癌Lovo细胞血管内皮生长因子VEGF表达的影响。方法不同浓度（0μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L）姜黄素处理2013年8月—2014年2月中南大学提供的人结肠癌细胞株Lovo24 h后,用Real-time PCR检测姜黄素对人结肠癌细胞株血管内皮生长因子VEGF m RNA表达的变化,用Western blot法检测姜黄素对人结肠癌细胞株VEGF蛋白表达的变化。结果人结肠癌Lovo细胞经过姜黄素处理24 h后,5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L姜黄素组VEGF m RNA及蛋白的表达均明显下降,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论姜黄素能下调人结肠癌Lovo细胞VEGF的表达,并呈剂量依赖,这可能是姜黄素抑制结肠癌Lovo细胞增殖及侵袭性的机制之一。     

羟基喜树碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨羟基喜树碱在体外对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响,为乳腺癌的临床用药提供实验依据。方法：将不同浓度（10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L）的羟基喜树碱作用于人乳腺癌MCF-7细胞48 h,并设不加羟基喜树碱溶液的MCF-7细胞作为对照组,用MTT法测定MCF-7细胞的增殖情况,用Hoechst33258染色检测MCF-7细胞的凋亡情况,以RT-PCR检测羟基喜树碱对MCF-7细胞Casepase-3 mRNA表达的影响。结果：与对照组比较,50μmol/L、100μmol/L及200μmol/L羟基喜树碱对细胞增殖均有抑制作用（P〈0.05、P〈0.01）,尤以200μmol/L的抑制作用最明显,其抑制率呈浓度依赖性增加。荧光显微镜观察显示,100μmol/L及200μmol/L羟基喜树碱处理组中可见典型的凋亡形态学改变。与对照组比较,各羟基喜树碱处理组中MCF-7细胞Caspase-3 mRNA表达水平均升高（P〈0.05、P〈0.01）,并呈浓度依赖性升高趋势。结论：羟基喜树碱可在体外抑制MCF-7细胞增殖,并通过Caspase-3途径诱导细胞凋亡,达到抑制肿瘤细胞生长的作用。     

雷帕霉素增强Ishikawa细胞化疗敏感性实验研究

目的:研究雷帕霉素(RA)单独或联合阿霉素、顺铂及紫杉醇对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响,为临床应用RA治疗子宫内膜癌提供理论依据。方法:应用10μmol/L RA与各1/2的半数抑制浓度(IC50)量的阿霉素、顺铂及紫杉醇联合,细胞克隆形成法和流式法检测细胞存活率和凋亡率;RT-PCR法检测RA、阿霉素、顺铂及紫杉醇对细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)mRNA表达影响;Western blot法检测10μmol/L RA作用6,12,24h后细胞Bcl-2蛋白表达水平。结果:RA联合化疗可显著提高各组化疗药的作用效果,降低细胞存活率,诱导细胞凋亡,与单纯化疗组相比有统计学差异(P<0.05);RA可显著降低宫颈癌细胞mTOR基因mRNA水平,抑制Bcl-2蛋白表达。结论:RA通过抑制mTOR通路,降低抗凋亡蛋白Bcl-2表达,提高化疗药物对子宫内膜癌细胞的杀伤作用。     

Quercetin in combating H2O2 induced early cell apoptosis and mitochondrial damage to normal human keratinocytes

Background Oxidative stress plays an important role in the pathogenesis of epidermal diseases. This study aimed to investigate the effects of quercetin on the anti-oxidative response and on mitochondrial protection in cultured normal human keratinocytes. Methods Cultured HaCaT cells were treated with different concentrations of H202 （0, 50, 100, 250, 500 pmol/L） for different periods of time （0.5, 1, 2, 4 hours） to establish an oxidative stress model. The cultured HaCaT cells were randomly assigned to control, H2O2, and quercetin＋H2O2 groups. For the quercetin groups, the cells were treated with different concentrations of quercetin （0, 10, 25, 50 umol/L） before exposure to H2O2. Morphological changes of the cells were observed under an inverted microscope and an electron microscope. The cell viability was detected by the MIF method. The cell apoptosis （AnnexinV/propidium iodide double stain） and mitochondrial membrane potential （△ψm） changes were detected by flow cytometry. Results An oxidative stress model of HaCaT cells was established under a suitable concentration （250 umol/L） and treated time of H2O2 （2 hours）. The cell viability and △ψm decreased in a concentration-dependent and time-dependent manner while the percentage of apoptotic cells significantly increased in the H2O2 groups compared with the control group （P 〈0.05）. The cell viability and △ψm of the quercetin treated group increased （P 〈0.05） and the percentage of apoptotic cells decreased at concentrations of 1-50 umol/L quercetin （P 〈0.01） compared with H2O2 treated group. Conclusion Quercetin can relieve the cell damage and apoptosis from H2O2 induced injury to HaCaT cells by anti-oxidation and mitochondrial protection.