人CD4分子cDNA的克隆及序列分析

目的：克隆人的CD4基因，为进一步研究病毒感染CD4^ 细胞的分子机制奠定基础。方法：用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出SupT1细胞株的编码CD4蛋白分子全长的基因，克隆至质粒pAS2—1中，并转入大肠杆菌DF15α。通过Amp抗性筛选、PCR及限制性内切酶EcoRⅠ，BamH Ⅰ双酶切等鉴定重组质粒并测定其中编码CD4片段的核苷酸序列。结果：克隆出编码CD4蛋白分子全长的cDNA，测序结果与文献报道进行同源比较，序列基本一致。结论：本实验成功克隆了编码人CD4蛋白全长的cDNA片段。     

献血员和正常人群中CD4：CD8倒置的警钟

试图弄清献血员和正常人群中ＣＤ４：ＣＤ８的倒置是否潜在早期感染。方法：２０－２９岁男性献血员外周血，经淋巴细胞分离液分离后获取淋巴细胞。与ＳＥＧ共同培养前后的淋巴细胞荧光染色后，用流式细胞测定技术分析细胞亚群。     

红斑狼疮皮损中CD4^＋和CD8^＋T细胞的表达

目的检测红斑狼疮皮损区T淋巴细胞亚群CD4 和CD8 T细胞的表达情况。方法采用免疫组织化学法对红斑狼疮皮损区淋巴细胞进行检测,并与正常皮肤作对照。结果红斑狼疮患者皮损CD4 T细胞百分数明显高于正常对照组。CD8 T细胞百分数明显低于正常对照组。结论红斑狼疮患者可能存在CD4 T细胞活性增强,CD8 T细胞功能抑制,从而导致免疫紊乱而发病。     

HIV与CD4、CD8的相关性分析

目的 研究HIV/AIDS患者外周血的CD4、CD8及病毒载量的相关性,并探讨其临床意义.方法 用流式细胞仪检测164例HIV/AIDS患者外周血的CD4、CD8及病毒载量,分析它们之间的相互关系.结果 CD4与病毒载量(LV)的结果比较显示随着CD4计数的上升病毒载量下降,但是CD4数值在200～400之间的区间内LV与CD4呈正比;CD4与CD8的结果比较显示从总体上观察CD4、CD8表现为正相关性,但是在CD4的200～400的区间CD8没有表现出明显的上升趋势;CD8与LV的结果显示在CD8数值的400～800的某一区间段CD8与LV呈正比,总体表现与病毒载量的关系十分复杂.结论 在艾滋病的发病过程中与CD4、CD8及病毒载量密切相关,CD4数值在200～400区间内,CD8与LV均表现为与其他区间不同变化规律.     

康艾注射液对晚期肝癌患者外周血CD4、CD4/CD8、 CD19、CD16/56表达的影响

原发性肝癌(primary carcinoma of liver)是我国最常见的恶性肿瘤之一,其起病隐匿,恶性程度高,患者发病时大多已属中晚期,失去手术及介入治疗机会,同时肝癌对化疗和放疗不敏感,且它们在抑制肿瘤细胞同时亦对患者的免疫功能有很大的影响。因此,姑息治疗是目前晚期肝癌主要治疗方案。研     

实验用猕猴CD3、CD4、CD8、CD20细胞阳性率的测定

CD3、CD4、CD8、CD20是重要的白细胞分化抗原,对于T细胞、B细胞的识别、黏附、分化具有重要作用.CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋、CD20^＋细胞阳性率是基础免疫学和临床免疫学研究的重要指标.     

CIN患者外周血CD4、CD8T淋巴细胞的表达及意义

目的探讨宫颈上皮内瘤变（CIN）不同级别的患者外周血T淋巴细胞亚群的CD4^＋、CD8^＋细胞数量的变化及与临床意义。方法采用流式细胞术分析128名CINI一Ⅲ级的患者与30例正常人静脉血CD4^＋、CD8^＋、以及CD4^＋／CD8^＋比值以及之间相关性，并对36例CIN治疗后随访。结果CINI组与正常组之间CD8值（P〉0，05）无显著差别；CINⅠ、CINⅡ与正常组CD4，CINI与CINⅡ，CINⅡ与CINⅢ的CD8差别有显著性（P〈0．05）；其他组之间都有高度显著的差异（P〈0．01）。且随CD4数量减低CD8相对增加，CD4／CD8减低；随访结果疗效显著的，CD4^＋、CD8^＋、CD4^＋／CD8^＋比值都有明显增加。疗效差的CD4^＋，CD4^＋／CD8^＋比值较治疗前减少，预后不佳。结论CD4^＋、CD8^＋细胞表达的数量随CIN患者病情变化而改变，对临床调节免疫力，提高疗效及预后的判断有重要的指导意义。     

结节性红斑患者皮损处CD4、CD8表达的变化及意义

目的:分析结节性红斑患者皮损处CD4、CD8表达的变化及意义.方法:采用MaxVisionTM免疫组织化学染色法检测49例结节性红斑患者皮损组织(疾病组)及10例正常皮肤组织(对照组)CD4、CD8的表达情况.结果:疾病组CD4阳性率为100.00％,明显高于对照组(P<0.01).疾病组、对照组CD8分子阳性率分别比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:结节性红斑患者皮损处存在T细胞亚群的失衡,考虑CD4+T细胞介导的细胞免疫在结节性红斑的发病中具有重要作用.     

胃癌患者外周血T淋巴细胞CD4、CD25、CD8和CD28的表达及临床意义

机体发生肿瘤时免疫系统能产生抗肿瘤免疫应答，其中细胞免疫在抗肿瘤免疫应答中发挥着重要作用。但是，许多肿瘤仍能在机体内继续生长。甚至使人体死亡。肿瘤细胞如何逃避宿主免疫系统的攻击，或是通过何种机制影响机体不能产生有效的抗肿瘤免疫应答，机制相当复杂，涉及到肿瘤细胞本身和宿主免疫系统的多个方面。     

CD28噬菌体展示载体的构建及鉴定

目的：构建CD28分子胞外区噬菌体展示载体，并对其展示的CD28抗原性进行检测。方法：采用RT-PCR方法扩增CD28胞外区，将其重组于噬菌粒栽体pComb3HSS，构建的重组载体与辅助噬菌体VCSMl3共转染受体菌，使CD28胞外区展示在噬菌体表面。用ELISA和流式细胞仪检测展示在噬菌体上CD28的抗原性。结果：成功构建了CD28的重组噬菌体展示载体pComb3HSS．CD28。噬菌体展示的CD28可与抗CD28抗体结合，也可与Jurkat T细胞表面的CD28竞争性结合抗CD28的抗体。结论：噬菌体展示的CD28具有抗原性。     

CD34+细胞的WT1表达及其意义

目的：观察CD34^ 细胞分化过程中WT1表达水平的变化，探讨WT1作为白血病基因标志物的可行性。方法：以免疫磁珠从脐带血中分取CD34^ 细胞，以IL－3及GM－CSF促使其向髓系分化，采用半定量RT－PCR法检测分化过程中WT1表达的变化，比较CD34^ 细胞，K562，AML－M5等WT1的表达水平。结果：CD34^ 细胞的WT1表达水平不低于K562细胞及AML－M5白血病细胞，CD34^ 细胞在向髓系分化过程的0d或第1d表达水平较高，随即迅速降低至不可检测水平。以去除CD34^ 细胞的脐血细胞对K562细胞倍比稀释后再以RT－PCR检测WT1表达，当敏感度达10^-3时，1／10正常骨髓及2／5脐带血亦可检测出WT1表达。结论：正常CD34^ 细胞有较高水平的WT1表达，细胞分化早期WT1表达的迅速降低可能是正常造血细胞分化的必要环节，WT1作为白血病基因标志物有缺陷，会出现假阳性。     

小鼠B7-2基因的克隆、测序及其重组质粒的构建

目的：克隆小鼠B7-2基因编码区的cDNA序列,并构建其表达载体。方法：利用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法,以小鼠脾细胞mRNA为模板,扩增获得B7-2基因,与pMD-18T连接做全自动测序,并利用基因重组技术构建包含B7-2基因的表达质粒pcDNA3.1-CMV-B7-2及pcDNA3.1-Egr-B7-2。结果：经测序证实获得的B7-2基因与文献报道的基本一致,并成功地构建了表达质粒。结论：成功克隆了B7-2的编码基因,并成功构建了表达载体pcDNA3.1-CMV-B7-2及pcDNA3.1-Egr-B7-2。     

分泌性中耳炎患儿腺样体组织中CD4+、CD8+及CD4 +/CD8+值的表达

目的 探讨儿童肥大腺样体T淋巴细胞亚群免疫失衡与反复发作性分泌性中耳炎的关系.方法 72例反复发作性分泌性中耳炎患儿腺样体组织及34例非反复发作性分泌性中耳炎患儿腺样体组织.采用免疫组化方法检测上述二组T淋巴细胞CD4 +、CD8+的表达及CD4+/CD8 +值,统计分析二组之间是否有差别.结果 反复发作性分泌性中耳炎患儿腺样体组织中CD4+ 、CD8+细胞数及CD4+/CD8+ 分别为41.9±9.07,20.45±7.08,2.10±0.17;较非反复发作组17.4±6.85,13.02±5.88,1.33±0.11有显著性差异(P <0.05);其中CD4+细胞数明显多于CD8+细胞数.结论 反复发作性分泌性中耳炎的形成与T淋巴细胞亚群免疫失衡有关.     

分泌性中耳炎患儿腺样体组织中CD_4~+、CD_8~+表达及CD_4~+/CD_8~+值的变化

目的探讨儿童肥大腺样体T淋巴细胞亚群免疫失衡与反复发作性分泌性中耳炎的关系。方法72例反复发作性分泌性中耳炎组患儿及30例单纯腺样体肥大组患儿腺样体组织,采用免疫组化方法检测T淋巴细胞CD+4、CD+8的表达并计算CD+4/CD8+值,分析2组间是否有差异。结果反复发作性分泌性中耳炎组患儿腺样体组织中CD4+、CD+8细胞数及CD+4/CD+8值分别为42±9,20±7,2.10±0.17,高于单纯腺样体肥大组16±8,11±6,1.39±0.15,差异有统计学意义(P<0.01);其中CD+4细胞数明显多于CD+8细胞数。结论反复发作性分泌性中耳炎的形成与T淋巴细胞亚群免疫失衡有关。     

微囊化CEA转基因细胞疫苗对小鼠免疫功能的影响

目的：探讨微囊化癌胚抗原(CEA)转基因细胞疫苗免疫小鼠后,对小鼠免疫功能的影响。方法：采用³H-TdR掺入法,测定ConA诱导荷瘤小鼠脾淋巴细胞的增殖作用;采用³H-TdR后标记法,测定荷瘤小鼠脾淋巴细胞NK细胞毒;以ELISA法测定小鼠脾淋巴细胞IL-2和IFNγ细胞因子水平;利用流式细胞术检测CEA疫苗免疫对小鼠脾T淋巴细胞亚群CD3、CD4、CD8百分率,CD4/CD8比值和NK细胞的影响;采用RT-PCR方法检测IL-2、IFNγ mRNA的表达水平。 结果：微囊化CEA疫苗免疫可以有效增强ConA诱导的小鼠淋巴细胞增殖能力,促进IL-2、IFNγ的产生以及增强NK细胞的细胞毒活性（P<0.05,P<0.01,P<0.05）;微囊化CEA疫苗能提高荷瘤小鼠CD4/CD8比值及NK细胞数（P<0.05,P<0.05）;促进脾细胞中细胞因子IL-2、INFγ mRNA的表达。 结论：微囊化CEA转基因细胞疫苗具有增强荷瘤小鼠免疫功能的作用,提示该疫苗可作为有效的抗CEA阳性肿瘤的治疗性疫苗。     

人角蛋白K6acDNA的克隆及其在E.coli中的表达

目的：克隆并表达人角蛋白K6a cDNA。方法：从人角质形成细胞中提取RNA,以RT－PCR法扩增人角蛋白K6a(1.7kb)cDNA。测序正确,将该片段克隆入表达载体pRSETB中,用IPTG诱导表达。结果：获得了角蛋白K6a（1.7kb)cDNA片段,并在大肠杆菌中获得高效表达。结论：获得了人角质蛋白K6a(1.7kb)cDNA片段及其原核表达产物,对研究人角蛋白K6a功能有重要意义。     

雷公藤多甙对哮喘患者细胞因子的调控作用

目的：探索雷公藤多甙（TⅡ）对哮喘患者外周血单个核细胞（PBMCs）白细胞介素－4（IL－4）mRNA表达的影响。方法：采用逆转录－聚合酶链反应方法,测定TⅡ治疗前后哮喘患者PBMCsIL－4mRNA的表达情况,并与激素治疗组对照。结果：TⅡ治疗后,哮喘患者PBMCsIL4mRAN表达低于治疗前水平（P＜0．05）。并与激素治疗组对照无显著性差异（P＞0．10）。结论：TⅡ在基因转录水平抑制哮喘患者IL－4的表达,具有抗炎作用。     

人肥胖基因的克隆与原核表达载体的构建

目的：克隆人肥胖基因瘦素蛋白（leptin）编码区cDNA序列，并构建其原核表达载体。 方法：在人体脂肪组织中提取mRNA，利用RT-PCR扩增人肥胖基因，将其插入pMD18-T载体，经双酶切、鉴定后将肥胖基因片段亚克隆入pET-28a表达载体，提取质粒。将阳性重组质粒转化表达受体菌E.coliBL21(DE3)，经IPTG诱导肥胖基因表达产物,以聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测产物蛋白。 结果：经测序证实获得的肥胖基因序列与相关文献报道一致，其表达产物的相对分子质量约为20 000。 结论：利用pMD18-T克隆载体和pET-28a表达载体可以有效地在原核生物中表达重组人类瘦素蛋白。     

人β-防御素-3基因的克隆和序列测定

目的 克隆人β-防御素－3的基因。方法 提取人皮肤组织的总RNA，反转录为cDNA作为模板，采用PCR的方法克隆人β－防御素－3基因。PCR产物连接入pGEM-T-EASY载体，转化DH－5α受感态细胞，蓝白筛选，对酶切及PCR鉴定含有目的片段的克隆进行测序。结果 获得预期大小的PCR产物，经序列鉴定证实为人β－防御素－3基因。结经 获得了人β-防御素－3基因。     

激活素受体相互作用蛋白4的基因克隆

目的：克隆新的与激活素受体ⅡA（ActRⅡA）相互作用蛋白,即激活素受体相互作用蛋白4 （ActRIP4）基因。方法：应用ActRIP2基因片段作为探针,从小鼠cDNA文库中钓取ActRIP4 cDNA;采用哺乳细胞双杂交进一步确定ActRIP4 与ActRⅡA的相互作用;RT-PCR检测ActRIP4 mRNA在组织中的表达情况。结果：克隆的ActRIP4基因全长691bp,ORF区编码 118个氨基酸残基;ActRIP4与ActRⅡA具有特异性结合作用;天然的ActRIP4 mRNA在小鼠多种组织中表达。结论：ActRIP4属于ActRIP家族新成员,可以与ActRⅡA相互作用,可能在多种组织中介导激活素受体信号传导过程。