一氧化氮合成酶mRNA在中枢和外周组织中的表达和分布

应用反转录－聚合酶链式反应（ＲｅｖｅｒｓｅＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ一ＰｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ，ＲＴ一ＰＣＲ）方法，亚克隆出大鼠小脑和肾脏ＮＯＳｃＤＮＡ，并以此为探针，通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ分析和定量ＰＣＲ方法，测定大鼠中枢和外周一些组织中ＮＯＳｍＲＮＡ的含量，证明ＮＯＳｍＲＮＡ广泛存在于中枢和外周组织中，在中枢以小脑含量为最高，在外周组织中以肾脏含量为最高；定量ＰＣＲ方法测定ＮＯＳｍＲＮＡ较Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ分析更为灵敏。     

洛汀新对阿霉素肾病大鼠肾血管紧张素Ⅱ-Ⅰ型受体基因表达的影响

目的观察血管紧张素转化酶抑制剂洛汀新对阿霉素肾病（ＡＮ）大鼠肾脏血管紧张素Ⅱ（ＡＴⅡ）浓度及受体表达的影响。方法采用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测大鼠肾组织血管紧张素Ⅱ－Ⅰ型受体（ＡＴ１Ｒ）ｍＲＮＡ表达情况，以放射免疫分析法测定血浆及肾组织ＡＴⅡ含量。结果洛汀新可降低ＡＮ大鼠血浆及肾组织ＡＴⅡ含量，使肾脏ＡＴ１ＲｍＲＮＡ表达增强。结论洛汀新对ＡＮ大鼠肾脏ＡＴ１ＲｍＲＮＡ表达的影响与降低血浆及肾组织ＡＴⅡ含量有关。     

正常SD大鼠心血管系统内皮素转换酶表达水平及意义

目的：探讨正常ＳＤ大鼠心脏及血管（动脉、静脉）内皮素转换酶（Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ－ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ Ｅｎｚｙｍｅ ＥＣＥ）ｍＲＮＡ的分布。方法：半定量ＲＴ－ＰＣＲ法检测组织中的ＥＣＥ ｍＲＮＡ,同时以甘油醛－３－磷酸脱氢酶（Ｇｌｙｃｅｒ－ａｌｄｅｌｙｄｅ－３－ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ,ＧＡＰＤＨ）作内参照。结果：正常ＳＤ大鼠心脏各部位及血管（动脉、静脉）ＥＣＥ ｍＲＮＡ的     

自发性高血压大鼠内皮素A型受体基因的表达

应用反转录－聚合酶链式反应（ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＲＴ－ＰＣＲ）方法，测定大鼠ＥＴ－Ａ型受体（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎＡｒｅｃｅｐｔｏｒＥＴＡ－Ｒ）ｍＲＮＡ在体内的分布，证明ＥＴＡ－ＲｍＲＮＡ不仅存在于血管平滑肌细胞，亦存在于内皮细胞中；而且广泛分布于脑、心、肾、肺等组织内。首次发现，在ＳＨＲ大鼠的脑、心、肾组织中，ＥＴＡ－ＲｍＲＮＡ水平明显升高，提示ＥＴＡ－Ｒ基因表达增加，亦可能是高血压发病的一个重要因素。     

细胞端粒酶活性的定性及定量分析

对Ｋｉｍ等的端粒重复序列ＰＣＲ扩增法加以改进，用ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ染色代替ＥＢ染色，建立了细胞端粒酶活性的ＰＣＲ－ＴＲＡＰ定性分析法；同时，用γ－＾３２Ｐ－ＡＴＰ标记ＴＳ引物，加入内对照ＴＳＫ１，建立了ＰＣＲ－ＴＲＡＰ定量分析法。利用上述方法，对１２株人肿瘤或非肿瘤细胞进行端端酶活性分析，结果发现，所有被检细胞株均呈端酶阳性，但其活性水平在不同细胞株间有较大差异（２３￣６５２ＴＰＧｕｎｉｔｓ）。     

细胞端粒酶活性的定性及定量分析

对Ｋｉｍ等的端粒重复序列ＰＣＲ扩增法加以改进，用ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ染色代替ＥＢ染色，建立了细胞端粒酶活性的ＰＣＲ－ＴＲＡＰ定性分析法；同时，用γ－３２Ｐ－ＡＴＰ标记ＴＳ引物，加入内对照ＴＳＫ１，建立了ＰＣＲ－ＴＲＡＰ定量分析法。利用上述方法，对１２株人肿瘤或非肿瘤细胞株进行端粒酶活性分析，结果发现，所有被检细胞株均呈端粒酶阳性，但其活性水平在不同细胞株间有较大差异（２３～６５２ＴＰＧｕｎｉｔｓ）。作者认为，细胞端粒酶活性ＰＣＲ－ＴＲＡＰ分析法，特别是定量分析法的建立，为我们真实准确地了解细胞端粒酶活性水平提供了可能，亦为下一步通过抑制端粒酶活性诱迫肿瘤细胞进入程序性死亡的肿瘤基因治疗研究奠定了基础。     

维甲酸和三氧化砷对急性早幼粒细胞性白血病细胞组织因子表 …

目的 探讨全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）和三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）在体内外对急性早幼粒细胞性白血病（ＡＰＬ）细胞组织因子（ＴＦ）表达的意义。方法 利用复钙时间测定、ＥＬＩＳＡ和ＲＴ－ＰＣＲ等方法,分别检测了ＡＴＲＡ和Ａｓ２Ｏ３治疗前后ＡＰＬ患者（２３例）骨髓单个核细胞的促凝活性、ＴＦ抗原及其ｍＲＮＡ的转录水平,同时还检测了使用ＡＴＲＡ和Ａｓ２Ｏ３处理ＡＰＬ细胞株ＮＢ４－Ｒ１细胞以及转染ＰＭＬ－ＲＡＲａ融     

白藜芦醇对糖尿病肾病大鼠ＪＡＫ／ＳＴＡＴ信号通路的影响

目的　研究白藜芦醇对糖尿病肾病大鼠ＪＡＫ／ＳＴＡＴ 信号通路的影响。方法　高糖高脂饲料喂养健康ＳＤ 大鼠８周后,用链脲佐菌素４５ｍｇ／ｋｇ腹腔注射造模。将４０只成模大鼠随机分为模型组、白藜芦醇低剂量组、白藜芦醇中剂量组、白藜芦醇高剂量组,每组１０只。白藜芦醇低、中、高剂量组分别给予１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ白藜芦醇灌胃治疗,正常组和模型组则给予等容量蒸馏水。连续灌胃４周后,以ＨＥ 染色观察肾脏组织形态学改变,并比较各组大鼠血糖、血清胆固醇、甘油三酯、尿素氮和肌酐水平。采用酶联免疫吸附法（ｅｎｚｙｍｅ-ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ,ＥＬＩＳＡ）检测血清细胞间黏附分子-１（ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅ-１,ＩＣＡＭ-１）和白介素-６（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ-６,ＩＬ-６）水平;荧光定量ＰＣＲ 法检测肾组织两面神激酶２（Ｊａｎｕｓ ｋｉｎａｓｅ２,ＪＡＫ２）、信号传导与转录激活因子３（ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｏｆ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ３,ＳＴＡＴ３）、细胞因子信号抑制物１（ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒｏｆｃｙｔｏｋｉｎｅｓｉｇｎａｌｉｎｇ１,ＳＯＣＳ１）、ＩＣＡＭ-１和ＩＬ-６的ｍＲＮＡ 水平;Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测肾组织磷酸化两面神激酶２（ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄＪａｎｕｓｋｉｎａｓｅ２,ｐ-ＪＡＫ２）、磷酸化信号传导与转录激活因子３（ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｅｒａｎｄａｃｔｉｖａｔｏｒｏｆｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ３,ｐ ＳＴＡＴ３）、ＳＯＣＳ１、ＩＣＡＭ-１和ＩＬ-６的蛋白表达。结果　经白藜芦醇治疗后,白藜芦醇各剂量组肾脏病理损伤减轻。与正常组比较,模型组大鼠血糖、血清胆固醇、甘油三酯、尿素氮、肌酐均升高（P均＜０．０５）。与模型组相比,白藜芦醇中、高剂量组大鼠血糖、血清胆固醇、甘油三酯、尿素氮和肌酐均降低（P均＜０．０５）。白藜芦醇各剂量组大鼠血清ＩＣＡＭ-１ 和ＩＬ-６均较模型组显著降低（P均＜０．０５）,且白藜芦醇中、高剂量组大鼠血清ＩＣＡＭ-１和ＩＬ-６显著低于低剂量组（P均＜０．０５）。白藜芦醇各剂量组肾组织ＪＡＫ２ 和ＳＴＡＴ３ 的ｍＲＮＡ 水平无明显变化（P＞０．０５）,而ｐ-ＪＡＫ２和ｐ-ＳＴＡＴ３的蛋白表达均较模型组下降（P均＜０．０５）;ＩＣＡＭ-１ 和ＩＬ-６ 的ｍＲＮＡ水平和蛋白表达均较模型组降低（P均＜０．０５）,而ＳＯＣＳ１的ｍＲＮＡ 水平和蛋白表达均较模型组升高（P均＜０．０５）。结论　白藜芦醇能减轻糖尿病肾病大鼠的肾脏损害,控制其血糖、血脂,降低血清尿素氮和肌酐水平,其机制可能与抑制ＪＡＫ／ＳＴＡＴ 信号通路有关。     

不同转移潜能人肺癌细胞系KAI1基因的表达

目的：探讨ＫＡＩ１基因与人肺癌细胞系转移潜能的关系。方法：利用逆转录－ＰＣＲ和Ｎｏｒｔｈｅｍ ｂｌｏｔ杂交法分析不同转移潜能人肺癌细胞系中ＫＡＩ１ ｍＲＮＡ的表达,并用聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）检测与突变的关系。结果：在高转移潜能细胞系ＰＧ中ＫＡＩ１ ｍＲＮＡ表达降低,在无转移潜能的ＰＡａ细胞中ＫＡＩ１的表达量比ＰＧ细胞高１０倍以上（积分光密度比值分别为０．７３１和０．０     

肝细胞癌癌组织α—1,3岩藻糖基转移酶各亚型mRNA的半定量 …

目的 探讨肝癌组织α－１，３岩藻糖基转移酶（α－１，３－ｆｕｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＦｕｃＴ）的各亚型Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ的ｍＲＮＡ表达及其与肝癌转移的关系。方法 应用异硫氰酸胍一步法获得无ＤＮＡ污染的ＲＮＡ，经ＲＴ－ＰＣＲ扩增后对各亚型ＦｕｃＴ ＰＣＲ产物测序鉴定并扫描定量。结果 肝癌组织未发现ＦｕｃＴ－Ⅲ、ⅤｍＲＮＡ的表达，ＦｕｃＴ－Ⅶ在癌和癌周组织的表达都很低，且两者无显著性差异。肝     

自发性高血压大鼠组织和心肾缺血组织中Na~＋／Ca~（2＋）交换体基因的表达

自发性高血压和心肾缺血组织中钙离子水平明显升高。为探讨Ｎａ＋／Ｃａ２＋交换体在其中的作用，我们应用半定量逆转录一多聚酶链反应（ＲＴ一ＰＣＲ）技术，比较了自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）部分组织、缺血时心肌和肾脏与其正常对照组织中Ｎａ＋／Ｃａ２＋交换体ｍＲＮＡ的水平。结果表明，ＳＨＲ所测组织中Ｎａ＋／Ｃａ２＋交换体ｍＲＮＡ较正常ＷＫＹ大鼠均降低。结扎４８小时引起的缺血肾脏Ｎａ＋／Ｃａ２＋交换体ｍＲＮＡ亦降低。而因异丙基肾上腺素引起的心肌缺血组织中，Ｎａ＋／Ｃａ２＋交换体基因的表达上升。     

The role of hypertension-related gene in aortic vascular smooth muscle cells from mice and rats

目的　研究高血压相关基因 (HRG 1)在心血管病发病中的作用。方法　用RT PCR和Northernblot分析HRG 1的表达。用3 H TdR掺入和组织学方法检测血管平滑肌细胞 (VSMC)的增殖。结果　Northernblot分析显示 ,HRG 1mRNA不仅可在VSMC中表达 ,亦可在大鼠多种组织中表达 (心、脑、肺、肾和肝 )。此外 ,在SHR大鼠的心、脑、肾和肝组织的HRG 1基因表达均明显低于正常WKY大鼠。半定量RT PCR和组织学分析表明 ,ApoE敲除小鼠和再狭窄动物模型的HRG 1mRNA表达减少 ,并且均可见到新生内膜形成。刺激VSMC增殖的ET ,AII和IL 1可减少VSMCHRG 1mRNA的表达。ANF ,CGRP和Adm可抑制VSMC增殖 ,增加HRG 1mRNA表达。这些作用能被相应的阻断剂或抗体所阻断或抑制。结论　HRG 1是一种与VSMC增殖相关的基因 ,它在动脉粥样硬化 ,再狭窄和高血压等心血管疾病中可能具有重要作用。     

幼龄SHR大鼠肾脏内皮素系统的改变

目的 观察幼龄高血压大鼠肾脏内皮素－1（ET－1）及其A、B受体的改变。方法 采用免疫组化和RT－PCR方法检测7周龄SHR大鼠肾脏ET－1及其A、B受体mRNA和蛋白水平。结果 与WKY对照组相比,SHR大鼠存在明显的高血压和尿钠、尿量排泄下降,血浆及肾组织中ET含量无显著异常,但是肾血管ETA受体的mRNA和蛋白水平明显升高,而肾脏ET－1及B受体的表达无改变。结论 肾血管ETA受体明显上调可能参与了幼龄高血压大鼠肾脏水钠潴留。     

自发性高血压大鼠颈动脉血管平滑肌中抑癌基因P53和原癌基因c-jun、c-fos、c-myc mRNA表达的研究

目的探讨自发性高血压大鼠颈动脉中抑癌基因P53和原癌基因c-jun、c-fos、c-myc mRNA的表达.方法用逆转录聚合酶链式反应检测两种基因的表达水平.正常雄性大鼠作为对照组.结果 SHR颈动脉中,抑癌基因P53和原癌基因c-jun、c-fos、c-myc均有高表达,较WKY差异有显著性(P<0.05).结论自发性高血压大鼠颈动脉组织中抑癌基因P53和原癌基因c-jun、c-fos、c-myc均有高表达,癌基因的活化可能与自发性高血压大鼠颈动脉血管重构有关.     

Comparison of inositol phosphates formation and gene expression of Gq alpha subunit in cultured aortic smooth muscle cells from spontaneously hypertensive and Wistar Kyoto rats

ＳＨＯＲＴＣＯＭＭＵＮＩＣＡＴＩＯＮＳＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｉｎｏｓｉｔｏｌｐｈｏｓｐｈａｔｅｓｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｉｏｎｏｆＧｑａｌｐｈａｓｕｂｕｎｉｔｉｎｃｕｌｔｕｒｅｄａｏｒｔｉｃｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｓｆｒｏ...     

自发性高血压大鼠心肾交感神经的分布状况

目的探讨自发性高血压大鼠心脏及肾脏交感神经的分布状况。方法选取6及12周龄的自发性高血压大鼠（SHR）和相应周龄的同源正常血压大鼠（WKY），以儿茶酚胺合成限速酶酪氨酸羟化酶（TH）的表达作为交感神经分布的标志，采用免疫组织化学检测TH，尾套法检测大鼠血压及心率。结果6及12周龄的SHR血压及心率高于相应周龄的WKY 鼠。6 及12 周龄的SHR心脏及肾脏TH 的表达高于相应周龄的WKY 鼠。SHR12 周龄时肾脏TH的表达高于6 周龄，心脏TH的表达在2 个周龄组差异无统计学意义。结论SHR心及肾脏交感神经纤维分布密度增加，并且随着高血压的进展，肾脏交感神经纤维分布密度有增加的趋势。     

MOBP基因在注意缺陷多动障碍大鼠前额叶皮层表达的研究

目的:探讨注意缺陷多动障碍(ADHD)动物模型SHR大鼠前额叶皮层MOBP基因表达情况,分析其在ADHD病理生理学中的意义.方法:应用RT-PCR、免疫组化、电镜技术检测该基因mRNA、蛋白表达情况以及轴突髓鞘形态变化.结果:RT-PCR结果显示SHR大鼠脑组织中MOBP mRNA表达水平(35.78±6.04)%明显低于正常对照WKY大鼠(69.41±7.43)%(P＜0.01);免疫组化结果提示SHR大鼠前额叶皮层髓鞘着色显著变浅、稀疏,着色面积占总面积比例(7.43±3.51)%较对照组WKY(14.39±5.82)%明显减少(P＜0.05);电镜观察结果显示,部分SHR大鼠髓鞘放射性结构呈直线性分布.结论:MOBP基因在SHR中的表达下调可能通过参与损害中枢神经系统髓鞘结构和功能,在ADHD病理机制中发挥作用.     

内皮素阻断对糖尿病高血压大鼠肾脏AT1受体表达的影响

目的 观察糖尿病高血压大鼠肾脏AT1受体的改变以及内皮素受体阻断剂波生坦的影响。方法 将自发性高血压大鼠建成链脲佐菌素诱导的糖尿病模型（SHR－DM）,设柳平舒组、波生坦＋氨氯地平（络活喜）组、络活喜组和非治疗组,4 一采用免疫组织化学、Western印迹法及逆转录－聚合酶链式反应（RT－PCR）方法检测肾脏AT1受体基因和蛋白表达。结果 与WKY大鼠对照组相比,SHR－DM大鼠存在明显的蛋白尿和肾功能减退,肾脏AngⅡ水平明显升高,ＡＴ１受体的mRNA和蛋白表达则显著下降。波生坦能使上述异常显著减轻。结论 糖尿病高血压大鼠肾脏ＡＴ１受体表达明显下调;波生坦可减轻ＳＨＲ－ＤＭ大鼠肾脏损害并防止ＡＴ１受体表达下调。     

西拉普利对糖尿病高血压大鼠肾脏内皮素系统的影响

目的　观察糖尿病高血压大鼠肾脏内皮素 (ET)系统的改变以及血管紧张素转换酶抑制剂 (ACEI)影响。方法　将自发性高血压大鼠建成链脲佐菌素诱导的糖尿病模型 (SHR DM ) ,设Cilazapril组、Amlodipine组和非治疗组。 4周后采用免疫组化和RT PCR方法检测肾脏ET 1及其A、B受体基因和蛋白表达。结果　与WKY对照组相比 ,SHR DM大鼠存在明显的蛋白尿和肾功能减退 ,肾脏ET 1及A受体的mRNA和蛋白表达也明显升高 ,而ETB受体的变化不显著 ,Cilazapril和Amlodipine治疗均可使肾脏ET 1降至正常水平 ,但仅Cilazapril能明显降低蛋白尿 ,改善内生肌酐清除率 ,下调ETA受体的过度表达。 结论　糖尿病高血压大鼠肾脏ET系统明显上调 ,Cilazapril较Amlodipine更具有治疗作用     

加味补阳还五汤对易卒中自发性高血压大鼠靶器官的保护作用

目的观察加味补阳还五汤对易卒中自发性高血压大鼠（SHR／SP）靶器官的保护作用。方法将20只6周龄雄性易卒中自发性高血压大鼠（SHR／SP）分成2组（每组10只）,其中一组喂含补阳还五汤的饲料为用药组,另一组常规饲养,作为对照组。同时用同龄10只WKY大鼠作为正常血压组。实验周期为3个月,观察指标为：大鼠血压,血浆NO、ET—1含量,大鼠心、脑、肾的损坏程度。结果用药纽的动物血压、靶器官（心、脑、肾）的损坏程度、血浆ET．1含量明显低于对照组,用药组大鼠血浆NO含量显著高于对照组（P〈0．01）。结论加味补阳还五汤能降低SHR／SP血压,减轻SHR／SP靶器官（心、脑、肾）的损坏程度。