PD-L1及TGF-β在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的 探讨在非小细胞肺癌(NSCLC)中PD-L1及TGF-β表达水平,及其与NSCLC临床病理参数和术后无病生存期(DFS)的关系.方法 收集81例NSCLC标本,采用免疫组化方法检测术后肿瘤组织中PD-L1、PD-1、Foxp3+和TGF-β蛋白的表达水平.结果 81例患者中PD-L1阳性表达为46例(56.8%),阴性表达35例(43.2%).TGF-β阳性36例(44.4%),阴性45例(55.6%).PD-1阳性33例(40.7%),阴性48例(59.3%);Foxp3+阳性44例(54.3%),阴性37例(45.7%).NSCLC中PD-L1蛋白表达与各临床病理参数无明显相关性.单因素分析发现T分期、TGF-β表达、PD-L1表达影响.SCLC术后DFS,具有统计学差异(P<0.05),多因素分析发现T分期、TGF-β表达、PD-L1表达是影响NSCLC术后DFS的独立因素(P<0.05).PD-L1阳性表达组术后DFS为(21.000±1.429)个月,阴性表达组为(14.500±1.615)个月,两组有统计学差异(χ2=6.930,P=0.008).TGF-β阳性组PFS为(14.500±0.813)个月,阴性组为(21.000±1.639)个月,两组有统计学差异(χ2=8.71,P=0.003).结论 非小细胞肺癌中PD-L1及TGF-β蛋白是预测NSCLC术后DFS的重要指标,且PD-L1表达越高预示术后DFS越长,而TGF-β则表达越高,预示术后DFS越短.     

CD4~+CD29~+T细胞含量及其免疫检查点水平与非小细胞肺癌患者的化疗效果及远期存活率的关系

目的分析CD4~+CD29~+T细胞含量及细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)、程序坏死因子1(PD-1)及程序坏死因子配体1(PD-L1)免疫检查点表达水平与非小细胞肺癌患者的化疗效果及远期存活率的关系。方法选取2015年1月至2017年1月沧州市中心医院收治的100例非小细胞肺癌患者;采用流式细胞术检测患者血中CD4~+CD29~+T、CTLA-4~+T、PD-1~+T及PD-L1~+T细胞水平;随访2年,记录患者生存情况,分为存活组79例,死亡组21例;依照RECIST Version 1.1标准对患者化疗效果进行评估,并按此分为缓解组54例,进展组46例。比较各组的CD4~+CD29~+T、CTLA-4~+T、PD-1~+T及PD-L1~+T细胞水平,分析以上各细胞水平与患者疗效及远期存活率之间的相关关系。结果化疗缓解组CD4~+CD29~+T、CTLA-4~+T及PD-1~+T细胞水平均高于进展组[(22.74±1.92)%vs.(18.04±2.15)%、(28.91±1.24)%vs.(20.13±1.77)%、(26.29±1.19)%vs.(18.94±1.64)%],PD-L1~+T细胞水平低于进展组[(17.22±1.07)%vs.(22.73±1.25)%],差异均有统计学意义(P0.05);存活组CD4~+CD29~+T、CTLA-4~+T及PD-1~+T细胞水平均高于死亡组[(22.11±1.17)%vs.(14.81±1.64)%、(28.32±1.24)%vs.(11.90±1.93)%、(25.88±2.01)%vs.(11.73±2.06)%],PD-L1~+T细胞水平低于死亡组[(16.41±2.72)%vs.(24.81±2.11)%],差异均有统计学意义(P0.05)。CD4~+CD29~+T、CTLA-4~+T、PD-1~+T细胞水平与患者疗效及远期存活率呈正相关(P0.05),PD-L1~+T细胞水平与患者疗效及远期存活率呈负相关(P0.05)。结论非小细胞肺癌患者血中CD4~+CD29~+、CTLA-4~+、PD-1~+T细胞水平与化疗效果及远期生存呈正相关,PD-L1~+T细胞水平与其呈负相关关系。     

Ⅲ-Ⅳa期鼻咽癌LMP特异性T细胞免疫反应与临床分析北大核心CSCD

目的探讨Ⅲ-Ⅳa期鼻咽癌EB病毒潜伏膜蛋白(LMP)1、LMP2特异性T细胞免疫反应及临床意义,为鼻咽癌免疫治疗提供思路和依据。方法收集新疆医科大学附属肿瘤医院2018年2月至2020年10月初治的59例鼻咽癌患者,应用LMP抗原刺激外周血单核细胞,胞内细胞因子染色及流式细胞术研究CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞白细胞介素(IL)-2、IL-13、干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)4种细胞因子的表达,并结合临床资料分析。结果鼻咽癌患者外周血T细胞对LMP1、LMP2反应阳性率存在差异。T_(3)-T_(4)期鼻咽癌患者LMP1特异性CD4^(+)T细胞阳性率明显高于T_(1)-T_(2)期患者(51.0%∶10.0%,P=0.042),LMP1和LMP2、CD4^(+)T细胞和CD8^(+)T细胞间部分细胞因子表达也存在差异。生存分析显示,2、3年OS率为91.5%、88.2%,2、3年PFS率为83.3%、75.3%;单因素分析提示吸烟史、男性、LMP1刺激CD4^(+)T细胞IL-13阳性表达是疾病的进展的危险因素(P=0.026、0.045、0.006);多因素分析显示LMP1刺激CD4^(+)T细胞IL-13阳性表达与吸烟史是局部晚期鼻咽癌患者PFS的独立危险因素(P=0.017、0.019)。结论LMP在鼻咽癌患者外周血中产生特异性T细胞免疫反应,不同T细胞亚群表达存在差异。LMP1、LMP2特异性T细胞免疫反应与原发肿瘤大小、转移淋巴结体积有关。LMP1刺激CD4^(+)T细胞IL-13阳性表达和吸烟史影响疾病的进展。     

艾迪注射液辅助化疗对中晚期非小细胞肺癌患者CD4^＋CD25^hiCD127^low调节性T细胞表达的影响

目的探讨艾迪注射液辅助化疗对中晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者外周血CD4^＋CD25^hiCD127^low高调节性T（Treg）细胞表达的影响。方法60例NSCLC患者随机分为化疗加艾迪注射液组（观察组）和单纯化疗组（对照组）,采用流式细胞术（FCM）和酶联免疫吸附法（ELISA）分别于化疗前后检测外周血中CD4^＋CD25^hiCD127^lowTreg细胞和血清TGF-β1、IL-10水平,同期选取20名健康体检者为健康对照组。结果NSCLC患者外周血中CD4^＋CD25^hiCD127^low Treg细胞占CD;淋巴细胞的比例为（5．77±1．50）％,与健康对照组（3．84±0．96）％相比差异有统计学意义（P=0．000）;血清中IL-10和TGF-β1表达水平[（24．09±6．74）、（197．76±43．76）ng／m1]明显高于健康对照[（19．39±5．73）、（141．13±32．17）ng／ml]（P=0．006,P=0．002）。对照组化疗后CD4^＋CD25^hiCD127^low Treg细胞水平显著降低（P=0．048）,细胞因子IL-10、TGF-β1的表达水平[（22．25±6．79）、（184．85±49．11）ng／ml]与化疗前[（24．37±8．10）、（197．16±44．57）ng／ml]相比差异无统计学意义（P=0．276,P=0．314）。观察组化疗后CD4^＋CD25^hiCD127^low Treg细胞和细胞因子IL-10、TGF—β1表达水平[（4．36±1．19）％,（20．16±4．73）、（165．42±39．57）ng／ml]与化疗前[（5．78±1．50）ng／ml,（23．81±5．15）、（198．35±43．68）ng／m1]相比降低,差异有统计学意义（P=0．000,P：0．006,P=0．003）。结论中晚期NSCLC患者外周血中Treg细胞表达水平增高,艾迪注射液配合化疗可以降低NSCLC患者的Treg细胞水平,改善机体免疫状态。     

化疗对非小细胞肺癌患者外周血中CD8+CD28-T细胞表达的影响

目的 观察非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血中CD8+ CD28-T细胞的表达水平,研究化疗对CD8+ CD28-T细胞表达的影响及意义.方法 采用流式细胞仪检测70例初治NSCLC患者外周血CD8+ CD28-T细胞表达水平,以60例健康体检者作为对照,分析CD8+ CD28-T细胞与肺癌生物学及临床特征间的关系.观察30例NSCLC患者在给予长春瑞滨联合顺铂(NP)、吉西他滨联合顺铂(GP)两方案前后CD8+ CD28-T细胞表达的变化情况.结果 NSCLC患者CD8+ CD28-T细胞的表达率为(59.003±15.329)％,明显高于健康对照组(41.036±15.435)％,差异有统计学意义(t=35.904,P=0.001).CD8+ CD28-T细胞的表达与性别(F=1.374,P=0.697)、病理类型(F=0.779,P=0.509)及临床分期(F=0.070,P=0.933)无关,与年龄(F=15.038,P=0.001)有关.NP组化疗前后的CD8+ CD28-T细胞的表达率分别为(58.793±12.510)％和(55.293±14.637)％,差异有统计学意义(t=2.017,P=0.044).GP组化疗前后的CD8+ CD28-T细胞的表达率分别为(60.700±16.401)％和(54.127±13.924)％,差异有统计学意义(t=3.007,P=0.009).结论 CD8+ CD28-T细胞在NSCLC患者外周血中高表达,化疗可下调CD8+ CD28-T细胞的表达,为探讨NSCLC化疗联合免疫治疗提供了新的参考.     

非霍奇金淋巴瘤患者外周血髓样抑制细胞的鉴定及其临床意义

目的 探讨非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者外周血中髓样抑制细胞(MDSC)的表达情况及其临床意义.方法 收集2014年1月至2015年2月吉林省肿瘤医院69例NHL患者和21名健康人外周血,采用流式细胞术,通过抗CD11b、CD33、CD14、人类白细胞抗原(HLA)-DR等不同荧光抗体组合来鉴定MDSC的细胞表面标志,应用免疫磁珠技术富集MDSC后采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测精氨酸酶1(Arg-1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧合酶2(COX-2)的表达,采用体外增殖实验检测T细胞功能,分析MDSC水平与NHL患者临床病理特征的相关性.应用t检验和方差分析统计数据.结果NHL患者外周血中存在高水平的CD11b+CD14+CD33+细胞群,细胞形态属于单个核细胞.NHL患者和健康对照组CD11b+CD14+CD33+MDSC比例分别为(42±10)％和(34±11)％,差异具有统计学意义(t=0.300,P=0.005).CD11b+CD14+CD33+细胞和CD11b+CD14+CD33-细胞中Arg-1、COX-2和iNOS的相对表达量分别为0.12±0.04和1.00±0.25(t=6.095,P=0.024),3.03±0.45和1.00±0.78(t=7.766,P=0.016),0.29±0.11和1.00±0.04(t=1.987,P=0.209).该群细胞具有抑制T细胞增殖的能力.MDSC在不同国际预后指数(IPI)评分的患者中表达水平差异有统计学意义(F=2.536,P=0.049),在不同性别、年龄、病理类型、临床分期、血清乳酸脱氢酶、体力状况评分及β2微球蛋白的患者中表达水平差异均无统计学意义(均P<0.05).结论NHL患者外周血中存在高水平CD11b+CD14+CD33+细胞,表达髓样细胞特征性蛋白,具有抑制T细胞增殖的功能,符合MDSC特性,其水平与IPI评分有关.MDSC可能作为一种新的生物标志物用于NHL临床实践.     

肺癌患者调节性T细胞与NK细胞活化受体NKG2D的相关性及其临床意义

目的 分析肺癌患者外周血中CD+4 CDHi25 CDLo127调节性T细胞及自然杀伤细胞(NK细胞)活化受体NKG2D的表达水平之间的关系,探讨其在肿瘤免疫逃逸机制中的作用及临床意义.方法 选择70例肺癌患者,均经病理确诊.采用流式细胞术(FCM)检测患者外周血中CD+4 CDHi25 CDLo127调节性T细胞、NK细胞及NKG2D表达水平,并以50名健康人为对照.结果 肺癌患者外周血中CD+4 CDHi25 CDLo127调节性T细胞比例较健康对照组明显升高[(8.4±4.1)％与(6.7±1.7)％],差异有统计学意义(t=3.09,P＜0.05);肺癌组NK细胞比例与健康对照组比较[(15.6±8.3)％与(17.2±4.2)％],差异无统计学意义(t=-1.33,P＞0.05);肺癌组NKG2D较健康对照组明显降低[(83.3±4.9)％与(87.4±2.9)％],差异有统计学意义(t=3.16,P＜ 0.05).CD+4 CDHi25 CDLo127调节性T细胞与NKG2D呈负相关性(r=-0.302,P＜0.05).结论 在肺癌患者外周血中调节性T细胞可能通过下调NKG2D,参与肿瘤免疫逃逸机制,二者可作为评估肺癌患者免疫功能状态及预后的参考指标.     

RNAi干扰黑色素瘤细胞Notch1基因表达对小鼠肿瘤免疫机制影响

目的 探讨靶向Notch1的siRNA抑制恶性黑色素瘤Notch通路对小鼠机体抗肿瘤免疫的影响.方法 采用RNA干扰小鼠黑色素瘤细胞B16F1 Notch1基因的表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测转染前后肿瘤细胞分泌免疫抑制因子转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的变化.制作小鼠黑色素瘤模型,在肿瘤生长过程中瘤内注射si-Notch1,记录肿瘤生长情况,手术切除肿瘤组织,流式细胞术检测肿瘤组织中gp100抗原特异性CD8+T细胞的比例,ELISA法比较各组肿瘤匀浆上清中IFN-γ和免疫抑制因子TGF-β的含量变化,免疫组化法分析肿瘤组织中FoxP3+Treg细胞的数量.结果 siNotch1转染后,成功下调了黑色素瘤细胞Notch1基因的表达.ELISA实验结果显示,转染后siNotch1组、siNC组和mock组细胞上清TGF-β分泌量分别为(0.665±0.242)、(1.413±0.153)和(1.623±0.111) ng/mL,F=40.237,P=0.000 48;VEGF的分泌量分别为(399.9±79.42)、(397.3±107.0)和(388.6±136.8) ρg/mL,差异无统计学意义,F=0.015,P=0.986;IL-10的分泌量为(38.93±12.45) 、(41.84±9.85)和(45.81±9.36) ρg/mL,差异无统计学意义,F=0.525,P＝0.604.siNotch1瘤内注射之后,小鼠肿瘤生长明显减慢.流式细胞术检测结果显示,siNotch1组、siNC组和mock组gp100抗原特异性CD8+T细胞的比例分别为(5.54±1.68)％、(2.43±1.09)％和(2.57±1.16)％,F＝12.643,P=0.000 25.免疫组化结果显示,FoxP3平均阳性细胞数分别为23.13±6.75、38.63±10.68和41.75±12.10,F=7.802,P=0.003.肿瘤组织匀浆ELISA结果显示,siNotch1组、siNC组和mock组IFN-γ的浓度分别为(10.047±1.775)、(4.121±1.379)和(3.698±1.253)ng/mL,F＝45.660,P＝0.000 23;TGF-β的浓度分别为(3.738±1.203)、(7.663±2.114)和(7.545±2.080)ng/mL,F=11.687,P=0.000 39.结论 siNotch1抑制黑色素瘤细胞Notch通路后,可以降低其分泌TGF-β的含量,从而降低其对淋巴细胞的抑制作用,增加肿瘤组织中gp100抗原特异性CD8+T细胞的浸润,促进IFN-γ的分泌,降低Treg细胞的比例,增强机体抗肿瘤免疫功能.     

食管癌患者CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞的检测及意义

目的：探讨CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞在食管癌局部及全身免疫中的作用。方法：流式细胞仪检测97例食管癌患者外周血和20例肿瘤组织的CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞比例,比较不同病理类型、不同分期等食管癌患者外周血及肿瘤局部组织的CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞的分布变化。结果：食管癌患者肿瘤组织CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞比例为（18.97±2.38）%,高于患者外周血比例〔（17.57±3.99）%〕,差异无统计学意义,t=1.511,P〉0.05;食管癌患者肿瘤组织及外周血中CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞占CD4＋ T淋巴细胞的比例,均高于同期健康对照组患者外周血的比例（9.35±1.41）%,差异有统计学意义,t值分别为12.111和8.332,P值均〈0.01。CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞水平与临床分期（F=9.384）、有无淋巴结转移（t=2.326）有关,P值均〈0.05。结论：食管癌患者全身及肿瘤局部均存在免疫异常,推测CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞可能参与了食管癌的发生与发展。     

非小细胞肺癌组织PD-L1的表达及其与临床因素的关系

目的:探索程序性死亡配体1 (programmed death-ligand 1,PD-L1)在中国非小细胞肺癌(non-small cell lung carcinoma,NSCLC)患者肿瘤组织中的表达水平及影响因素.方法:免疫组织化学法检测2008年4月至2014年8月天津医科大学肿瘤医院122例NSCLC初治患者肿瘤组织中PD-L1、PD-1和CD3+T细胞表达情况,采用x2和kruskal-wallis检验分析PD-L1表达在临床因素中分布差异性,用Person检验和Spearman检验分析PD-L1表达与EGFR基因型、CD3+T细胞数量及淋巴细胞PD-1表达的相关性,以及原发灶与淋巴结PD-L1表达相关性.结果:所有患者原发灶肿瘤细胞PD-L1表达百分比中位值1.5％(0～93.2％),PD-L1表达在TNM分期分布上有统计学差异(P =0.003),与TNM分期呈显著正相关(r=0.273,P=0.002),与性别、年龄、有无吸烟史、肿瘤最大径、病理类型、CEA水平分布无显著相关(P ＞0.05);PD-L1表达水平与CD3+T细胞数量、淋巴细胞PD-1表达水平无相关性,PD-L1表达阴性、低表达和高表达与表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变亦无显著相关(P ＞0.05);48例有淋巴结转移的NSCLC患者原发灶与相应转移淋巴结肿瘤细胞PD-L1表达水平无统计学相关性(P＞0.05).结论:NSCLC患者原发灶肿瘤细胞PD-L1表达在TNM分期分布上有差异,与CD3+T细胞数量、淋巴细胞PD-1表达水平、EGFR基因突变情况无相关性;原发灶与相应转移淋巴结之间肿瘤细胞PD-L1的表达亦没有相关性.     

胃癌组织中T细胞亚群及其ICOS分子的表达及意义

目的探讨胃癌组织中T细胞共刺激分子ICOS及其亚群的表达及意义。方法应用流式细胞术检测38例胃癌和21例健康人（对照组）外周血T细胞亚群及其共刺激分子ICOS的表达。结果胃癌组与对照组比较：CD3^＋T细胞表达（53．61±13．84）％和（72.07±7．83）％,P〈0．01;CD3^＋CD4^＋T细胞表达（29．84±9．71）％和（38．79±5．08）％,P〈0．01;CD3^＋ICOS^＋T细胞表达（25．80±10．56）％和（O．82±0．98）％,P〈0．01;CD3^＋CD8^＋ICOS^＋T细胞表达（1.57±1．99）％和（0．02±0．04）％,P〈0．01;CD3^＋CD8^＋ICOS^-T细胞表达（16．06±6．94）％和（20．56±6．54）％,P〈0．05。胃癌组患者手术前和手术后1周外周血T细胞亚群的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论胃癌患者T细胞数量明显减少,T细胞共刺激分子ICOS表达增高,CIM’T细胞显著减少。     

Tim-3在恶性黑色素瘤患者外周血CD8+T细胞上的表达及临床意义

目的:本研究应用流式细胞术检测恶性黑色素瘤患者外周血CD8+T细胞中T细胞免疫球蛋白及黏蛋白-3(Tim-3)的表达情况,探讨Tim-3在恶性黑色素瘤进展中的作用.方法:应用流式细胞仪检测42例恶性黑色素瘤患者及38例健康体检者外周血CD8+T细胞上Tim-3的表达,同时分析其与恶性黑色素瘤患者临床病理特征的关系.结果:Tim-3在恶性黑色素瘤患者及健康体检者外周血CD8+T细胞中均有不同程度的表达,恶性黑色素瘤组Tim-3表达量为(15.89±6.49)％,健康对照组的表达量为(3.27±2.16)％,差异具有统计学意义(P＜0.01).Tim-3在CD8+T细胞中的表达水平与恶性黑色素瘤患者有无溃疡、淋巴结转移、临床分期、远处转移有关(P＜0.01),而与性别、年龄、Breslow分度无关(P＞0.05).结论:Tim-3在恶性黑色素瘤患者外周血CD8+T细胞上高水平表达,其表达水平与临床分期呈正相关,并有望成为恶性黑色素瘤早期预测及治疗的重要靶标.     

程序性死亡受体1和程序性死亡受体配体1在非小细胞肺癌组织中的表达情况及临床意义

目的探讨程序性死亡受体1(PD-1)和程序性死亡受体配体1(PD-L1)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达情况及临床意义。方法选择150例NSCLC患者的NSCLC组织及其癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测两种组织中PD-1 mRNA和PD-L1 mRNA的相对表达量。采用免疫组织化学染色法检测NSCLC组织中PD-1和PD-L1的表达情况,分析PD-1和PD-L1表达情况与患者临床特征的关系。采用流式细胞术检测NSCLC组织和癌旁组织中CD4^+-PD-1、CD8^+-PD-1、CD14^+-PD-L1、CD68^+-PD-L1的表达水平。结果NSCLC组织中PD-1 mRNA和PD-L1 mRNA的相对表达量分别为(5.03±1.92)和(4.95±1.09),分别高于癌旁组织的(1.72±0.81)和(1.25±0.24),差异均有统计学意义(P﹤0.05)。TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期、低分化、有淋巴结转移、有远处转移的NSCLC患者NSCLC组织中PD-1和PD-L1的高表达率均明显高于TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期、高+中分化、无淋巴结转移、无远处转移的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。NSCLC组织中CD4^+-PD-1、CD8^+-PD-1、CD14^+-PD-L1、CD68^+-PD-L1的表达水平均明显高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。结论PD-1和PD-L1在NSCLC组织中高表达,可能成为一种新的生物标志物,PD-1/PD-L1信号通路可能参与了NSCLC的免疫逃逸过程,对其逃逸机制进行研究可以为NSCLC患者的临床治疗提供新靶点。     

化疗联合DC-CIK细胞免疫治疗在转移性乳腺癌中的疗效观察

目的 比较TA方案(多西他赛+表柔比星)和TA方案联合树突细胞(DC)-细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)的免疫治疗方案在转移性乳腺癌(MBC)中的疗效和不良反应.方法 分析2011年1月至2013年1月在我院接受治疗的43例MBC患者的临床资料.根据治疗方案的不同将患者分为单纯治疗组(TA方案,对照组,22例)和联合治疗组(TA方案+DC-CIK细胞免疫治疗,观察组,21例).比较两组患者的治疗疗效、临床症状改善状况、不良反应以及治疗前后患者外周血T细胞免疫表型改变.结果 观察组患者的治疗总有效率(85.7％)高于对照组(63.6％),差异具有统计学意义(x2=4.949,P=0.026).不良反应中白细胞下降发生率最高,观察组为76.2％,对照组为59.1％,差异无统计学意义(x2=0.858,P=0.36).治疗后观察组患者疲倦乏力、食欲不振和失眠盗汗的发生率均低于对照组(23.8％∶54.5％,x2=4.246,P =0.04;19.0％∶54.5％,x2=5.795,P =0.02;19.0％∶50.0％,x2=4.532,P=0.03).治疗后观察组患者的CD3+T细胞(60.4±12.3∶47.4±12.8,t=3.393,P＜0.01)、CD3 +/CD4+ (41.7 ±9.6∶ 28.1±10.5,t =5.442,P ＜0.01)、CD4+/CD8+ (1.5 ±0.2∶1.0±0.2,t=8.195,P＜0.01)、NK细胞(27.3±5.9∶15.3±6.1,t=6.643,P＜0.01)、NK T细胞(14.7±1.4∶6.0±1.2,t=11.020,P＜0.01)均显著高于对照组.结论 相对于单纯TA方案,TA化疗方案联合DC-CIK细胞免疫治疗在MBC中疗效更佳,可以显著改善患者的免疫功能,并未增加不良反应.     

肺癌患者外周血白细胞介素-17+CD4+T细胞和白细胞介素-17+CD8+T细胞表达的意义

目的 检测白细胞介素(IL)-17+CD4+T(Th17)细胞和IL-17+CD8+ T(Tc17)细胞在肺癌患者外周血中的表达水平,探讨二者在肺癌免疫中的作用及临床意义.方法 采用流式细胞术(FCM)检测60例肺癌患者及40例健康对照者外周血中Th17和Tc17细胞占CD;T细胞的比例.结果 肺癌组外周血中Th17细胞[(1.795±0.623)％]和Tc17细胞[(0.865±0.357)％]比例分别高于对照组[(1.405±0.256)％、(0.640±0.204)％],(t=28.944,P＜ 0.001;t=14.051,P＜ 0.001).两组内Th17细胞与Tc17细胞的表达水平均呈正相关(肺癌组r=0.770,P＜0.05;对照组r=0.532,P＜0.05).Th7细胞和Tc17细胞表达均与临床分期有关(F值分别为4.882、3.633,均P＜0.05),但与病理类型无关(均P＞0.05).结论 肺癌患者体内Th17细胞和Tc17细胞表达升高,二者可能参与了肺癌的发生、发展;Th17与Tc17细胞的表达水平可作为评价肺癌患者免疫功能状态的新指标,能为病情监测提供参考.     

趋化因子CXCL5调控NF-κB与Wnt/β-catenin信号通路抑制肿瘤免疫促进胃癌的机制研究CSCD

目的探讨CXC趋化因子配体-5(CXCL5)促进胃癌的作用及其潜在分子机制。方法纳入胃癌患者83例,另选取健康者40例作为对照。比较两者的血清CXCL5水平;比较癌组织及癌旁正常组织中CXCL5与CXCR2的表达。检测CXCL5对胃癌细胞ERK/MAPK、PI3K/AKT、NF-κB及Wnt/β-catenin信号通路的影响。用对照与过表达CXCL5的MFC细胞建立胃癌移植瘤模型,记录肿瘤生长和小鼠生存曲线;检测各组小鼠移植瘤中CXCL5、p-NF-κB与p-β-catenin的表达及CD4^+T、CD8^+T与CD56^+CD16^+NK细胞数量。结果胃癌患者的血清CXCL5水平较健康者显著升高(P<0.05)。癌组织中CXCL5与CXCR2的表达较癌旁正常组织显著升高(P<0.05)。CXCL5能显著增加SNU216与MFC细胞p-NF-κB与p-β-catenin的表达(均P<0.05)。与对照组小鼠相比,过表达CXCL5组小鼠的肿瘤体积显著增高(P<0.05),生存期显著降低(P<0.05),癌组织中CXCL5、p-NF-κB与p-β-catenin的表达显著升高(P<0.05),癌组织中CD4^+T、CD8^+T与CD56^+CD16^+NK细胞数量均显著降低(均P<0.05)。结论 CXCL5可能通过调控NF-κB与Wnt/β-catenin信号通路抑制肿瘤免疫从而发挥促进胃癌的作用。     

miR-205对肾上腺皮质癌SW-13细胞转移潜能影响的研究

目的:通过调控miR-205在肾上腺皮质癌(ACC)细胞株SW-13中的表达,探讨miR-205对SW-13细胞生物学行为的影响。方法:通过基因重组技术构建pcDNA3.1(+)-miR-205重组质粒并合成miR-205的反义寡核苷酸作为反向对照,调控miR-205在肾上腺皮质癌SW-13细胞中表达,实时荧光定量PCR法验证miR-205表达情况;分别采用MTS、EdU、TUNNEL及Transwell小室法,检测过表达及抑制miR-205对增殖、凋亡及侵袭的影响。结果:在转染pcDNA3.1(+)-miR-205及miR-205反义寡核苷酸后,SW-13细胞中miR-205分别上调了63.2倍(P=0.001)及下调了86.3%(P=0.002)。MTS结果显示,在24、48、72和96h时,miR-205上调后SW-13细胞增殖率下降了(10.50±1.80)%、(23.67±4.80)%、(30.9±5.40)%和(38.34±6.20)%,P值分别为0.041、0.014、0.016和0.032;miR-205下调后增殖率提高了(25.31±3.20)%、(32.51±4.60)%、(40.15±4.10)%和(38.34±6.20)%,P值分别为0.032、0.026、0.022和0.013。TUNNEL结果显示,pcDNA3.1(+)-miR-205组SW-13细胞凋亡数为(46±4)个,pcDNA3.1(+)组为(25±3)个,P=0.001 9;anti-miR-205转染组为(11±2)个,空白组为(25±3)个,P=0.002 5。Transwell侵袭实验显示,pcDNA3.1(+)-miR-205组穿过小室膜细胞数为(43±8)个,pcDNA3.1(+)组为(120±15)个,P=0.001 4;anti-miR-205转染组为(118±14)个,空白组为(220±20)个,P=0.001 9。结论:miR-205通过抑制细胞增殖、侵袭并促进凋亡在ACC SW-13细胞中起抑癌作用;成功构建pcD-NA3.1(+)-miR-205真核表达质粒,为进一步研究miR-205在SW-13细胞中的基因调控机制奠定基础。     

Netrin-1在类风湿关节炎滑膜组织中的表达及作用研究

目的探讨Netrin-1在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜组织中的表达及作用。方法收集2012年7月至2017年10月来我院就诊的RA患者;免疫组化检测滑膜组织中Netrin-1的表达和B细胞的比例;流式检测外周血中调节性B细胞(Breg)的比例;收集RA患者的外周血,采用人淋巴细胞分离液分离外周血中的淋巴细胞,流式检测CD19+IL-10+Breg的比例。结果免疫组化的结果显示,RA组CD19+B细胞的数目显著高于对照组[(64.24±7.41) vs.(4.40±1.34)] mm2,差异有统计学意义(t=7.471,P0.001)。相关性分析的结果显示Netrin-1的表达与B细胞的数目,有明显的负相关性(r=-0.8049,P0.001)。流式结果显示,RA组外周血中CD19+B细胞的比例显著高于对照组[(2.64±0.38)vs.(1.73±0.22)]%,差异有统计学意义(t=4.013,P0.001)。RA组CD19+IL-10+Breg数目显著低于对照组[(1.86±0.38) vs.(6.58±0.87)%,差异有统计学意义(t=6.526,P0.001)。相关性分析的结果显示Netrin-1的表达与外周血中Breg比例具有显著的正相关性(r=0.7256,P0.001)。体外实验结果显示,Netrin-1低浓度组及Netrin-1高浓度组B细胞比例均显著低于RA组[(16.27±3.45) vs.(7.33±1.02) vs.(4.24±0.68)]%,差异有统计学意义(t=3.320,P=0.029;t=4.858,P=0.008)。Netrin-1低浓度组及Netrin-1高浓度组Breg比例均显著高于RA组[(2.23±0.25) vs.(3.57±0.39) vs.(4.61±0.86)]%,差异有统计学意义(t=4.899,P0.001;t=6.887,P0.001)。结论 Netrin-1在RA滑膜组织中低表达,Netrin-1可能通过促进Breg的分化,对RA的治疗具有一定的作用。     

胃癌组织中T细胞及其亚群ICOS分子的表达及其意义

目的探讨胃癌组织中T细胞共刺激分子ICOS及其亚群的表达及意义。方法应用流式细胞术检测38例胃癌和21例健康人（对照组）外周血T细胞亚群及其共刺激分子ICOS的表达。结果胃癌组与对照组比较：CD3^＋T细胞表达（53．61±13．84）／（72．07±7．83）％,P〈0．01;CD3^＋CD4^＋T细胞表达（29．84±9．71）／（38．79±5．08）％。P〈0．01;CD3^＋ICOS^＋T细胞表达（25．80±10．56）／（0．82±0．98）％,P〈0．01;CD3^＋CD8^＋ICOS^＋T细胞表达（1．57±1．99）／（0．02±0．04）％,P〈0．01;CD3^＋CD8^＋ICOS^-T细胞表达（16．06±6．94）／（20．56±6．54）％,P〈0．05。胃癌组患者手术前和手术后1周外周血T细胞亚群的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论胃癌患者T细胞数量明显减少,T细胞共刺激分子ICOS表达增高,CD4^＋T细胞显著减少。     

Cx43对乳腺癌细胞侵袭和迁移及细胞间隙通讯的影响

目的:探讨Cx43对乳腺癌侵袭、迁移以及细胞间隙通讯功能的影响。方法:用脂质体转染法将Cx43质粒、Cx43 siRNA及阴性对照转染入人乳腺癌细胞株MDA-MB-231。细胞黏附实验、Transwell试验检测细胞黏附、侵袭和迁移能力。分子生物学方法检测MMP-2、MMP-9、BRMS-1的表达。荧光染料传输实验检测不同Cx43表达的细胞间隙通讯的功能。结果:细胞黏附实验结果表明相较于野生型细胞,Cx43 siRNA组黏附能力（0.43±0.07）降低（t=20.801,P=0.002）,Cx43质粒组黏附能力（1.63±0.26）增高（t=5.917,P=0.027）。Transwell实验表明相较野生组,Cx43质粒组侵出小室的细胞数增加（侵袭:1.25±0.04,t=16.339,P=0.004;迁移:1.33±0.02,t=22.770,P=0.002）,而Cx43 siRNA组侵出小室的细胞数减少（迁移:0.84±0.04,t=11.139,P=0.008;侵袭:0.79±0.04,t=5.743,P=0.029）。分子生物学检测发现Cx43质粒组MMP-2、MMP-9表达增高,BRMS-1表达降低,而Cx43 siRNA组MMP-2、MMP-9表达降低,BRMS-1表达增高。染料传输实验证实相较野生组传输能力,Cx43质粒组传输作用增强;Cx43 siRNA组细胞间的传输作用减弱。结论:Cx43对乳腺癌细胞侵袭及迁移能力存在正调控。这一调控能力可能通过GJIC实现。