黏脂贮积症Ⅱ型α/β和Ⅲ型α/β家系的溶酶体酶学分析

目的分析总结黏脂贮积症(mucolipidosis, ML)Ⅱ型α/β和Ⅲ型α/β溶酶体酶酶学检测的特点, 为选择酶学检测指标提供依据。方法检测两例确诊为ML Ⅱ型α/β和Ⅲ型α/β患者及10例健康个体血浆及白细胞中的多种溶酶体酶活性, 比较患者与健康个体的差异;分别以"mucolipidosis"及"黏脂贮积症"为关键词, 检索PubMed、CNKI、万方数据库, 分析总结已报道的ML Ⅱ型α/β和Ⅲ型α/β的酶学检测结果。结果两例患儿血浆中多种溶酶体酶活性与健康个体相比均明显增高, 程度由高至低分别为:芳基硫酸酯酶A(arylsulphatase A, ASA)和α-L-艾杜糖醛酸酶(α-iduronidase, IDUA)(20倍以上)、β-葡萄糖醛酸酶(β-glucuronidase, GUSB)(10倍以上)、β-D半乳糖苷酶(β-galactosidase-1, GLB1)和α-半乳糖苷酶(α-galactosidase A, GLA)(5倍以上)、α-N-乙酰葡萄糖胺酶(α-N-acetylglucosaminidase, NAGLU)(2倍), 葡萄糖脑苷酯酶(gluc...     

GM2神经节苷脂沉积症发病的分子机理研究

目的：探讨GM2神经节苷脂沉积症发病的分子机理。方法：培养患者皮肤成纤维细胞，进行酶学、Western印迹杂交和免疫细胞化学分析。结果：4例GM2神经节苷脂沉积症患者成纤维细胞内β-氨基已糖苷酶（hexosaminidase,Hex）活性均显著降低，分别为正常人的12％、3％、15％和6％；两例Sandhoff病Hex成熟的α、β-亚基（αm、βm）明显减少，但婴儿型与成年型减少的程度不同，1例Tay-Sachs病只有αm明显减少，1例GM2激活蛋白缺陷症αm、βm与正常人无差异；4例患者成纤维细胞内均有不同程度的GM2神经节苷酯的堆积。结论：GM2神经节苷脂沉积症的发病与HEXA、HEXB、GM2A基因突变引起相应蛋白表达、成熟障碍有关。     

绒毛、羊水及白细胞中β-葡萄糖苷酸酶微量测定法的研究及其正常值

本文对绒毛、羊水及白细胞中β-葡萄糖苷酸酶（GUSB）的动力学特性进行了详细研究,发现GUSB56℃稳定,10mm01/LCa~(2 )~和1.5mol/L的乙二醇可分别提高酶活性15—22％和31—47％。因此我们建立了一个以PNP—β—D—Gr为底物的确定这些组织中GUSB活性的微量比色法。当用此方法确定绒毛GUSB活性时,灵敏度提高4.5倍以上。应用上述改良后的方法测定了34例绒毛、32例白细胞和25例羊水GUSB活性,其正常值分别为1155.42±366.38,514.77±118.31和28.09±10.59nmol/mg Prot.hr。     

失血性休克大鼠血浆纤维连接蛋白含量(减少)与溶酶体酶的关系

失血性休克大鼠(n=12)随休克进展,血清溶酶体酶(以β-葡萄糖醛酸酶作代表,简称β-G)含量增高,血浆纤维连接蛋白(Fn)含量降低,3h时后Fn含量降低值与β-G浓度间呈显著正相关(r=0.8938,P<0.05)。将溶酶体酶(含β-G及多种蛋白水介酶)与Fn混合作体外孵育,20分钟后发现,溶酶体酶中β-G溶度达333.33μ/ml时,混合液中Fn含量明显降低(P<0.05)。作者认为,溶酶体酶的升高是引起休克晚期血浆Fn降低的重要原因之一。     

肥胖大鼠海马内TNF-α、胰岛素降解酶、PPARγ和Aβ的表达及其作用

目的: 检测肥胖大鼠海马内肿瘤坏死因子 α(tumor necrosis factor α,TNF-α)、胰岛素降解酶(insulin-degrading enzyme,IDE)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor γ,PPARγ)和淀粉样β肽(amyloid β-peptide,Aβ)水平,探讨TNF-α对肥胖大鼠海马内IDE和Aβ的影响,观察TNF-α、Aβ与PPARγ的关系。方法: 建立肥胖(obesity, OB)大鼠模型;葡萄糖氧化酶法检测大鼠血糖水平,放射免疫法测血浆胰岛素水平;实时荧光定量PCR检测大鼠海马内TNF-α、淀粉样β蛋白前体 (amyloid β-protein precursor,APP)、PPARγ及IDE的mRNA水平;蛋白免疫印记技术及免疫组织化学染色法检测大鼠海马内TNF-α、Aβ₄₂(由APP降解产生)、PPARγ及IDE的蛋白表达。结果: OB组大鼠血糖较正常组无明显差别,胰岛素明显升高并存在胰岛素抵抗(P<0.05);实时荧光定量PCR结果显示肥胖大鼠海马内TNF-α和APP mRNA水平较正常组升高(P<0.01),而PPARγ和IDE mRNA表达减少(P<0.01);蛋白免疫印记技术及免疫组织化学法检测与实时荧光定量PCR结果一致。结论: 肥胖时大鼠海马内存在炎性改变,TNF-α表达升高,IDE和PPARγ表达减少,Aβ沉积增加。IDE作为Aβ的重要降解酶,其表达减少是Aβ沉积的关键因素;PPARγ作为调控IDE转录的核转录因子,在本实验肥胖大鼠海马内表达下降,提示IDE生成减少可能与PPARγ作用下降有关。     

芳基硫酸酯酶A活性降低对神经精神异常的影响——大量病例的调查

芳基硫酸酯酶A(ASA)是一种溶酶体酶,能分解硫酸酯产生脑苷酯和无机硫。至少有五个不同的等位基因决定了ASA的产生和活性,正常人为正常基因的纯合子,另有三种不同的突变基因纯合子(ASA-/AS     

α3β2与α3β4烟碱型乙酰胆碱受体α和β亚基不同配比的药理活性研究

目的:比较α和β亚基不同配比形成α3β2和α3β4烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)敏感性的差异。方法:体外转录获得α和β亚基的cRNA,采用显微注射将3种不同配比(α∶β分别为1∶10、1∶1和10∶1)的cRNA注入非洲爪蟾卵母细胞,利用双电极电压钳检测受体表达情况。利用激动剂乙酰胆碱(ACh)和拮抗剂α-芋螺毒素Reg IIA(α-CTx Reg IIA)检测在3种配比条件下形成受体药理活性的差异。结果:对于α3β2 nAChR亚型,在3种配比情况下,ACh的半数有效浓度(EC50)分别为91.2μmol/L、104.4μmol/L和130.6μmol/L,α-CTx Reg IIA的半数抑制浓度(IC50)分别为40.2 nmol/L、36.4 nmol/L和42.3 nmol/L。对于α3β4 nAChR亚型,在3种配比情况下,ACh的EC50分别为44.0μmol/L、110.0μmol/L和230.0μmol/L,α-CTx Reg IIA的IC50分别为226.8 nmol/L、71.5 nmol/L和49.4 nmol/L。结论:α3和β4亚基比例的改变会导致α3β4 nAChR结构和药理活性的改变。α3和β2亚基比例的改变对α3β2 nAChR结构和活性没有影响。     

胎盘病理学检查发现黏脂贮积症Ⅱ型1例

黏脂贮积症Ⅱ型(mucolipidosis type Ⅱ)是一种罕见而严重的常染色体隐性遗传病, 是溶酶体贮积症的一种类型。1例"宫内生长受限"的患儿胎盘病理学检查发现特征性的绒毛合体滋养细胞弥漫性空泡化, 提示患儿溶酶体贮积症, 随后对患儿进行相关生化指标检测、酶学活性测定及全外显子基因检测, 结合临床表现, 证实其为伴有GNPTAB基因c.1090C>T纯合突变的黏脂贮积症Ⅱ型。本文旨在强调胎盘病理学检查对早期诊断黏脂贮积症Ⅱ型的重要作用。     

慢性牙周炎患者血浆β-防御素-3和血清CD、TNF-α检测的临床意义

目的:探讨慢性牙周炎患者血浆β-防御素-3和血清胞苷脱氨酶(CD)、TNF-α水平的变化及临床意义。方法:应用放射免疫分析、酶联法和生化法对40例慢性牙周炎患者血清β-防御素-3和血清CD、TNF-α的检测,并与35名正常健康人作比较。结果:慢性牙周炎患者血浆β-防御素-3水平非常显著地低于正常人组(P<0.01),而血清CD、TNF-α水平呈显著负相关(r=-0.3782、-0.4012,P<0.01)。结论:慢性牙周炎患者血浆β-防御素-3水平的降低和血清CD、TNF-α水平的增高可能是侵袭性牙周炎的危害因素。     

子宫内膜异位症与肿瘤坏死因子TNFα-308G/A和TNFβG252A基因多态性的关系

目的探讨肿瘤坏死因子TNFα-308G/A和TNFβG252A基因多态性与子宫内膜异位症的关系。方法运用多聚酶链反应技术检测100例子宫内膜异位症及100例正常人肿瘤坏死因子TNFα-308G/A和TNFβG252A基因多态性。结果TNFα-308G/A和TNFβG252A各种基因型频率在患者组与正常对照组之间的差异无统计学意义(P0.05)。结论肿瘤坏死因子TNFα-308G/A和TNFβG252A基因多态性与子宫内膜异位症无明显相关。     

肿瘤坏死因子α致HUVECs内皮型一氧化氮合酶降解

目的研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是否可以通过细胞内蛋白质降解途径引起人脐静脉内皮细胞(HUVECs)内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的蛋白量减少。方法建立原代HUVECs培养,选取TNF-α不同浓度(0.01、0.1、1和10 ng/m L)、不同时间(24、48和72 h)处理HUVECs;溶酶体抑制剂氯化铵(NH4Cl)、caspase抑制剂(caspase inhibitor)和泛素-蛋白酶体抑制剂(MG-132)预处理HUVECs 1.5 h后加入TNF-α(1 ng/m L)共处理24 h,Western blot方法检测HUVECs中eNOS蛋白表达。结果与对照组比较,1 ng/m L TNF-α处理细胞24 h,eNOS蛋白量明显减少(P0.01);MG-132与TNF-α共处理组,eNOS蛋白量明显增加(P0.01)。结论 TNF-α可以通过泛素-蛋白酶体途径引起eNOS蛋白降解。     

GM_2-神经节苷脂沉积病的命名

GM_2-神经节苷脂沉积病(GM_2G)的生化缺陷是由于溶酶体的β-氨已糖酶(HEX)活性降低引起的。正常情况下,HEX的活性是由三种功酶A、B和S所决定的,HEX的同功酶A、同功酶B和同功酶S各具有两种不同的多肽链(α-链和β-链),决定这两种多     

Ac-HF对Aβ1-42致大鼠皮质原代神经元损伤的保护作用及对α分泌酶活性的影响

目的 探讨贯叶金丝桃素乙酸酯(hyperforin acetate,Ac-HF)对β淀粉样肽(Aβ)1-42毒性损伤大鼠原代培养大脑皮层神经元的作用及对α分泌酶活性的影响及可能机制.方法 采用大鼠原代培养皮层细胞,用MTT法观察Ac-HF对Aβ1-42毒性损伤后的神经细胞活力的影响.用ELASA检测其对α分泌酶活性及可溶性淀粉样前体蛋白(sAPPα)分泌的影响,应用Western blot检其对淀粉样前体蛋白(APP)及解聚金属蛋白酶(a disintegrin and metalloproteinas,ADAM)10表达的影响;并观察Calphostin C(Cal.C)对Ac-HF这些作用的影响.结果 0.1～10.0 μmol/L Ac-HF无细胞毒性(P＞0.05),1.0～50.0 μmol/L Ac-HF可增加Aβ1-42毒性损伤的大鼠皮层神经细胞的活力(P＜0.05),0.1～10.0 μmol/L Ac-HF可使α分泌酶活性增加,sAPPα分泌增多,对APP蛋白表达无影响,使ADAM10表达增多,PKC抑制剂Calphostin C(Cal.C)可抑制Ac-HF对α分泌酶的活性,sAPPα分泌及ADAM10表达的影响.结论 1.0～10.0 μmol/L Ac-HF对Aβ1-42毒性损伤的大鼠皮层神经细胞有保护作用,Ac-HF可通过增加α分泌酶活性及sAPPα分泌产生保护作用,这一作用可能是通过激活PKC通路增加ADAM10表达.     

IL-33刺激原代培养的小鼠骨髓来源肥大细胞脱颗粒并分泌IL-1β、IL-6及TNF-α

目的检测白细胞介素33(IL-33)对小鼠骨髓来源肥大细胞(BMMC)脱颗粒及细胞因子分泌的影响。方法原代培养小鼠BMMC,用(0、10、20、50)ng/m L的IL-33进行刺激,分别收集细胞及培养上清。Western blot法检测c-Kit表达水平;于收集的各IL-23处理组培养上清中分别加入β己糖胺酶底物,通过底物与β己糖胺酶反应所得产物吸光度值,间接测定上清中β己糖胺酶含量。ELISA测定细胞上清液中组织胺含量评估肥大细胞脱颗粒情况;ELISA检测培养细胞上清液中IL-1β、IL-6及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平。结果 IL-33促进BMMC的c-Kit表达。不同剂量的IL-33作用于BMMC 30 min后,可浓度依赖性地促进β己糖胺酶及组织胺的释放。IL-33作用于BMMC 24 h可促进IL-1β分泌,以50 ng/m L IL-33时作用最显著;IL-33可促进IL-6分泌,以50 ng/m L浓度时作用最显著;IL-33可促进TNF-α分泌,以20 ng/m L浓度时作用最显著。结论 IL-33可刺激BMMC脱颗粒,并分泌IL-1β、IL-6及TNF-α。     

单/双酶标记鸡尾酒抗体AMACR/p63/34βE12在前列腺穿刺组织鉴别诊断中的对比观察

前列腺穿刺标本良恶性鉴别诊断是临床病理诊断工作的难点之一.近年来通过应用α-甲酰基辅酶A消旋酶(AMACR)、34βE12、p63抗体分别检测前列腺癌细胞和基底细胞,提高前列腺癌诊断的准确性已得到普遍认同[1～5].Jiang等[6]在2005年首先使用混合型AMACR/p63/34βE12抗体和双酶标记法检测前列腺癌,国内也有单酶标记鸡尾酒抗体AMACR/p63/34βE12检测前列腺癌的报道[7,8],但单酶标记与双酶标记鸡尾酒抗体两种试剂染色的比较研究尚未见报道.我们采用单酶标记的鸡尾酒抗体和双酶标记的混合型抗体标记前列腺穿刺标本,以评价两种方法在前列腺癌的鉴别诊断中的应用价值.     

β地贫CD41-42突变杂合子复合缺失型α地贫双重杂合子的基因检测与血液学分析

目的了解β地中海贫血(地贫)CD41-42(-TCTT)杂合子(β41-42杂合子)复合缺失型α地贫双重杂合子在本地区β41-42杂合子个体中的检出情况及其临床血液学表现.方法分别采用单管多重PCR与反向点杂交法检测缺失型α地贫与β地贫基因,常规进行血细胞分析及其它地贫筛查试验.结果 144例β41-42杂合子有8例同时复合缺失型α地贫杂合子,其中7例(4.9%)携带有α地贫1基因(αα/--SEA),1例(0.69%)携带有缺失型HbH基因(-α3.7/--SEA).7例复合α地贫1患者的MCV均都高于另外136例单纯的β41-42杂合子的MCV平均值(63.53fl); 而对携带有HbH基因的样本进行pH8.6与6.5的血红蛋白电泳时都无法找到HbH区带.结论诊断β41-42杂合子复合α地贫双重杂合子的患者时,如只依赖其临床表现和常规的实验室检查结果作为筛查诊断的指标,容易会出现有病患的α或β地贫基因漏诊的情况.     

PPARα在心血管疾病中作用机制的研究进展

过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptors,PPARs)有3种类型:过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferator-activated receptorsα,PPARα),过氧化物酶体增殖物激活受体β/δ(peroxi...     

葡萄糖氧化酶诱导的氧化应激抑制α4β2烟碱型乙酰胆碱受体电流

目的探究葡萄糖氧化酶(GO)引起的氧化应激对α4β2烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)电流的影响。方法在HEK293T细胞共转染α4和β2质粒48 h后进行实验。分为对照组(control组)、3.5 k U/L的GO处理组(GO组)、3.5 k U/L的GO与450 k U/L的过氧化氢酶(CAT)共处理组(CAT组)。使用DCFH-DA荧光探针以及激光共聚焦显微镜来检测活性氧(ROS)的产生;采用全细胞膜片钳检测α4β2 nAChR的电流变化,给予1、10和30μmol/L ACh检测受体功能,给予10μmol/L ACh检测电流变化。结果全细胞膜片钳记录到呈ACh剂量依赖性的电流;GO处理HEK293T细胞1 h后可显著地增强细胞活性氧的水平(P0.001);对照组电流在10次给药中均保持稳定,GO组的电流在连续10次的ACh给药下逐渐降低(P0.01);CAT组反转GO引起的α4β2 nAChR电流下降(P0.01)。结论GO引起的氧化应激状态导致α4β2 nAChR电流逐渐下降,α4β2 nAChR电流的下降与ROS的增多密切相关。     

趋化因子CX3CL1对β-淀粉样蛋白1-42激活的小胶质细胞IL-1β、TNF-α和NO表达的影响

目的探讨趋化因子CX3CL1对β-淀粉样蛋白1-42(β-amyloid peptide1-42,Aβ1-42)激活的小鼠小胶质细胞(N9)分泌TNF-α、IL-1β和一氧化氮(NO)的影响。方法用一定质量浓度的CX3CL1作用于经Aβ1-42激活的小鼠小胶质细胞,收集细胞培养上清,通过一氧化氮(NO)试剂盒检测培养上清中NO浓度的变化,利用ELISA法检测培养上清中TNF-α和IL-1β质量浓度的变化。结果与对照组相比,Aβ1-42能够明显上调小胶质细胞TNF-α、IL-1β和NO的表达,且具有剂量依赖性;其中,Aβ1-42浓度为10μmol/L时,IL-1β、TNF-α、NO的表达量均达到最高,与对照组(未用Aβ1-42干预)相比,分别升高约2倍、13倍、9倍,差异具有统计学意义(P0.05);趋化因子CX3CL1能够明显降低Aβ1-42诱导的小胶质细胞TNF-α、IL-1β和NO的表达量,分别下降了约38%、24%、45%,且差异有统计学意义(P0.05)。结论趋化因子CX3CL1对Aβ1-42激活的小胶质细胞产生的TNF-α、IL-1β和NO的表达具有抑制效应,提示趋化因子CX3CL1可能通过抗炎作用而对神经系统具有保护作用。     

oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物促进A7r5细胞钙化及炎症因子表达

目的探讨氧化低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体(oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体)复合物对大鼠血管平滑肌A7r5细胞钙化、炎症因子表达的影响以及Toll样受体4(TLR4)在其中的作用。方法分别用oxLDL、 oxLDL/β2GPI复合物、β2GPI/抗β2GPI抗体复合物、 oxLDL/抗β2GPI抗体复合物、 oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物干预刺激大鼠A7r5细胞系不同时间,采用或不采用TLR4抑制剂TAK-242处理。茜素红染色观察细胞钙化结节,实时荧光定量PCR和Western blot法检测平滑肌蛋白22α(SM22α)和RUNX家族转录因子2(RUNX2)的mRNA和蛋白水平, ELISA检测细胞培养上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平; A7r5细胞给予TNF-α刺激后,进一步检测SM22α和RUNX2 mRNA和蛋白水平的变化。结果 oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物能够促进A7r5细胞钙化结节增多, SM22α表达减少而RUNX2明显上升,促进炎症因子TNF-α的表达, TLR4抑制剂能够缓解这一现象;外加不同浓度的TNF-α能够使A7r5细胞SM22α表达下降, RUNX2表达增加。结论 oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物促使A7r5细胞表达炎症因子TNF-α增加,并由此促进细胞发生钙化,同时使细胞由收缩表型向成骨表型发生转变,TLR4参与这一过程。