海嘧啶注射剂对SGC-7901人胃癌细胞凋亡的实验研究

目的：揭示海嘧啶的抗肿瘤作用机理。方法：采用流式细胞仪测定海嘧啶对人胃癌细胞凋亡及细胞周期的影响，采用激光扫描共聚焦技术观测海嘧啶对人胃癌细胞内[Ca^2 ]i的影响及[Ca^2 ]i变化时Ca^2 的来源，结果：海嘧啶可诱导肿瘤细胞凋亡，升高肿瘤细胞内[Ca^2 ]i浓度，[Ca^2 ]i升高来源于细胞外钙内流和细胞内钙释放，结论：海嘧啶的抗肿瘤作用机理为诱导肿瘤细胞凋亡,通过开放细胞膜钙通道和引起细胞内钙释放两条途径升高肿瘤细胞内[Ca^2 ]i，启动细胞凋亡机制，从而诱导肿瘤细胞凋亡。     

薄荷醇通过调节角质形成细胞内钙离子浓度而产生促透作用北大核心CSCD

目的研究薄荷醇促透作用的可能机制。方法原代培养人角质形成细胞,考察薄荷醇对KC细胞连接紧密性的影响,流式细胞术测定对KC细胞内Ca^(2+)浓度的影响,试剂盒法测定对KC细胞内Ca^(2+)-ATP酶活性、PLC活性、PKC活性和ATP含量的影响,考马斯蓝染色测定对KC微丝骨架结构的影响。结果与空白对照组相比,薄荷醇能明显降低KC间连接紧密性、Ca^(2+)-ATP酶活性和ATP含量,增加细胞内Ca^(2+)浓度、PLC活性和PKC活性,KC细胞间隙明显增加。与200μmol·L^(-1)薄荷醇组相比,联合使用PLC阻滞剂U73122和钙离子通道阻滞剂硝苯地平后,均能增加KC间连接紧密性,降低胞内Ca^(2+)浓度。结论薄荷醇通过增加KC胞内Ca^(2+)浓度发挥促透作用,这与其增强PLC活性、促进外源性Ca^(2+)内流有关。     

茶多酚对肺癌PG细胞生长的调控研究

目的：探讨茶多酚对人PG细胞生长的影响。方法：采用MTT法体外观察不同浓度茶多酚对PG细胞的杀伤作用；应用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪分析，检测用药后PG细胞内Ca^2 浓度，CD44V6表达和细胞增殖周期分布的变化。结果：3个浓度的茶多酚对PG2细胞的有杀伤作用，呈剂量依赖分析。细胞增殖受到明显抑制，使细胞阻滞于G0／G1期，不能进入S期及G2／M期，细胞增殖指数明显下降。细胞内Ca^2 浓度与对照组相比，逐渐上升；CD44V6表达水平则呈逐渐下降。结论：茶多酚对PG细胞的生长具有抑制作用，其作用机制与改变细胞内Ca^2 浓度和CD44V6表达有关。     

广枣总黄酮对心肌细胞内游离钙浓度的影响

目的：研究广枣总黄酮（TFC）对心肌细胞内游离钙浓度的影响。方法：以大白鼠作为受试动物，随机分为6组，其中4组为TFC等比剂量（6，12，24，48mg/kg）给药组，用灌胃法给药15d后测定其心肌细胞内Ca^2 浓度；另两组分别为阳性对照组和阴性对照组。结果：用药组大鼠心肌细胞内Ca^2 浓度降低，与阴性对照组比较差异显（P＜0．01），且Ca^2 浓度降低的程度与TFC剂量呈正相关。结论：TFC能降低心肌细胞内Ca^2 浓度可能是广枣在临床被用于治疗心脏病症的机理。     

海洋硫酸多糖911抗氧化性及其作用机理的初步探讨——911的抗氧化与抗艾滋病的关系

本文采用UVB照射细胞引起细胞氧化损伤的方法,观察了海洋硫酸多糖911的抗氧化活性,同时检测了细胞内Ca^2 浓度的变化。结果表明,911能明显地保护细胞免受损伤,同时增加细胞内Ca^2 浓度。推测抗氧化性是911抗艾滋病的双一重要机制。     

缬沙坦对高血压左室肥厚及外周淋巴细胞中Ca^2＋的影响

目的 探讨缬沙坦对高血压左室肥厚（LVH）及心肌细胞内Ca^2 浓度的影响。方法 采用缬沙坦与咪哒普利两组治疗,观察两组高血压伴LVH病人治疗前后外周淋巴细胞内Ca^2 浓度及LVMI（左室重复指数）的变化。结果 两组皆能减少LVMI及Ca^2 浓度呈正相关。结论 缬沙坦能明显减少高血压左室肥厚的LVMI及外周淋巴细胞中的Ca^2 浓度。     

J—894对人体血小板激活时胞浆内游离钙浓度的影响

细胞内游离钙浓度在细胞反应的调节中作为第二信使起很重要的作用。本文实验采用荧光钙指示剂quin-2测定血小板胞浆内游离钙浓度[Ca^2 ]i的变化。结果表明在1mmol/L外钙的存在下，凝血酶（0.3U/ml）使血小板[Ca^2 ]i增高4－5倍。但在外钙缺乏的情况下，凝血酶使血小板[Ca^2 ]i增加较少，似科凝血酶增加[Ca^2 ]i，部分是通过释放内钙，但主要是通过钙内.J-894通过减少钙内流和释放明显抑制凝血酶引起的血小板[Ca^2 ]i的升高，剂量与效应相关。提示J－894可能是一种钙通道阻滞剂。     

龙葵碱对HepG2细胞线粒体膜电位及细胞内[Ca^2＋]i的影响

目的：观察龙葵碱对HepG2细胞线粒体膜电位及细胞内[Ca^2＋]i的影响，揭示龙葵碱诱导细胞凋亡的机制。方法：采用AO／EB双染HepG2细胞，激光共聚焦扫描显微镜观察细胞形态学改变；TMRE单染HepG2细胞，激光共聚焦扫描显微镜观察细胞线粒体膜电位的改变；Fluo-3／AM单染HepG2细胞，激光共聚焦扫描显微镜观察细胞内[Ca^2＋]i的改变；TMRE和Fluo-3／AM双染HepG2细胞，激光共聚焦扫描显微镜同时观察细胞线粒体膜电位和细胞内[Ca^2＋]i的改变。结果：形态学实验表明0．0032μg／mL、0．016μg／mL龙葵碱使细胞外周呈微弱皱缩状改变，0．08、0．4、2μg／mL龙葵碱使HepG2细胞出现大量碎片及凋亡小体等典型的细胞凋亡形态，即龙葵碱能够诱导HepG2细胞凋亡；TMRE单染激光共聚焦测定表明龙葵碱能够降低HepG2细胞膜电位；Fluo-3／AM单染激光共聚焦测定表明龙葵碱能够升高肿瘤细胞内[Ca^2＋]。浓度；TMRE和Fluo-3／AM双染激光共聚焦观察表明龙葵碱在降低线粒体膜电位的同时能够升高细胞内[Ca^2＋]i浓度。结论：龙葵碱能够诱导HepG2细胞凋亡，其机制为降低HepG2细胞膜电位，开放细胞膜PT通道，使细胞内Ca^2＋顺浓度梯度转运，从而升高细胞内Ca^2＋浓度启动细胞凋亡机制。     

布比卡因对大鼠心室肌细胞内钙的影响

目的：运用激光扫描共聚焦显微镜观察不同浓度的布比卡因对KCI诱导的大鼠心室肌细胞内游离钙离子浓度（[Ca^2＋]。）的影响，进而探讨布比卡因心肌抑制作用的可能机制。方法：培养新生SD大鼠心室肌细胞，将培养的心室肌细胞随机分为4组．分别为对照组（C组）、10μmol／L布比卡因组（B2组）、50μmol／L布比卡因组（岛组）、100μmol／L布比卡因组（取组）。各组细胞均用钙荧光指示剂Fluo-3／AM染色，运用激光扫描共聚焦显微镜动态观察单个心室肌细胞内钙荧光强度（fluorescent intensity．FI）的变化。结果：与对照组比较10μmol／L的布比卡因对KCl诱导的大鼠心室肌细胞内钙FI变化无明显影响（P〉0.05），50μmol／L和100μmol／L的布比卡因则明显抑制KCl诱导的钙离子跨膜内流（P〈0．05）；抑制程度B2组〉B2组（P〈0．05）。结论：低浓度的布比卡因对KCl诱导的大鼠心室肌细胞内[Ca^2＋]i的变化无明显影响，高浓度则明显抑制钙离子跨膜内流。布比卡因呈浓度依赖性抑制兴奋收缩耦联时心室肌细胞内游离钙离子内流，可能是其心肌抑制作用的原因之一。     

榄香烯抑制表皮生长因子诱导的晶状体上皮细胞增殖的信号转导机制

目的：研究榄香烯（elenene，Ele）抑制重组人表皮生长因子（recombinant human epidermal growth factor，rhEGF）诱导的晶状体上皮细胞（lens epithelium cell，LEC）增殖时对细胞内钙（Ca^2＋）、环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate，cAMP）、环磷酸鸟苷（cyclic guanosine monophosphate，cGMP）的影响，探讨其抑制增殖的细胞信号转导机制。方法：采用rhEGF诱导LEC增殖后，用荧光分光光度法检测LEC内钙离子浓度（[Ca^2＋]i）、放射免疫分析法检测LEC内cAMP和cGMP含量，探讨Ele的影响。结果：（1）Ele组LEC内[Ca^2＋]i；比增殖组显著增高（P〈0．01）；（2）增殖组LEC内cAMP浓度比对照组明显下降、cGMP浓度比对照组明显升高（P〈0．01）；（3）Ele组LEC内cAMP浓度比增殖组显著升高、cGMP浓度比增殖组显著降低（P〈0．01）。结论：Ele抑制LEC增殖的作用是通过细胞内[Ca^2＋]i、cAMP和cGMP信号系统及多条信号转导途径的相互作用实现的，这可能是Ele抑制LEC增殖、防治后发性白内障的细胞和分子生物学机制。     

血管紧张素Ⅱ对大鼠肾入球小动脉细胞内钙离子浓度的影响及Losartan的拮抗作用

目的探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对肾小球入球小动脉细胞内钙离子浓度（[Ca^2＋]i）的影响与高血压肾小动脉重建的关系及Losartan的治疗作用。方法细胞培养：大鼠肾小球入球小动脉细胞随机分为4组。对照组：不加AngⅡ处理;AngⅡ组：加入终浓度为0.1μmol.L^-1AngⅡ;Losartan组：加入终浓度为50μmol.L^-1Losartan;AngⅡ＋Losartan组：同时加入Losartan 50μmol.L^-1AngⅡ0.1μmol.L^-1负载后上机检测[Ca^2＋]i。结果细胞培养显示AngⅡ引起了细胞收缩变化,表现为胞突变细变短,胞突回缩,胞体变圆,细胞长度与直径均明显缩小。Losartan处理组较AngⅡ组细胞形态变化减轻且Losartan对AngⅡ增高RASMCs内[Ca^2＋]i有明显抑制作用。结论 AngⅡ可引起肾小球入球小动脉细胞内[Ca^2＋]i的上升,导致细胞收缩,因此Ca^2＋超载可能是肾素-血管紧张素系统起作用的重要环节。Losartan可抑制细胞内Ca^2＋超载。     

丙泊酚脑保护作用研究进展

研究显示,丙泊酚具有一定的脑保护作用。丙泊酚的脑保护作用可能与其抗氧化特性、抑制细胞内钙超载、调节γ-氨基丁酸受体、抑制细胞凋亡等机制有关。本文就近年丙泊酚脑保护作用及其机制的研究进展作一综述。     

谷氨酸对牛大脑中动脉平滑肌细胞胞浆静息Ca^2＋和ATP触发的Ca^2＋内流的影响

目的：观察谷氨酸对牛脑中动脉平滑肌细胞有无直接的激动作以及对ATP触发的Ca^2 内流有无影响？方法：采用Fura-2荧光法测定胞浆内Ca^2 变化技术。在培养的乳牛大脑中动脉平滑肌细胞上观察药物作用。结果：谷氨酸（10－200μmol.L^-1）不能增加或减少细胞胞浆静息游离Ca^2 浓度（[Ca^2 ]i)和ATP触发的Ca^2 内流（谷氨酸：10－400μmol.L^-1）。结论：谷氨酸对大脑中动脉平滑肌细胞信息Ca^2 水平和Ca^2 内流均无直接的影响。谷氨酸可能没有直接与脑血管张力的调节。     

神经生长因子对新生大鼠脑细胞内游离钙浓度的影响

目的 观察神经生长因子（NGF）对分离的新生大鼠脑细胞内游离钙浓度（[Ca^2 ]i)的影响。方法 以Fura-2/AM为细胞内钙离子的荧光指示剂，测定谷氨酸（Glu)及过氧化氢（H2O2）诱导的新生大鼠脑细胞内[Ca^2 ]i，观察NGF对此影响。结果 新生大鼠脑细胞内静息[Ca^2 ]i 208±22nmol/L,NGF对神经细胞静息[Ca^2 ]i无明显影响，NGF 1－100μg/L能剂量依赖地抑制Glu和H2O2引起的[Ca^2 ]i升高，其IC50分别为42．5和27．3μg/L。结论 NGF通过降低[Ca^2 ]i的水平来保护大脑皮质神经元抗谷氨酸毒性及过氧化氢损伤。     

尼莫地平对急性缺血性脑损伤的干预机制

目的：探讨尼莫地平对急性缺血性脑损伤的保护作用。方法：将局灶性脑缺血模型大鼠分为假手术组，缺血组及尼莫地平干预组。测定脑组织PLA2活力，脑细胞内游离Ca^2 浓度，脑含水量及脑组织PLA2表达量的改变。结果：尼莫地平可使缺血后脑细胞内游离Ca^2 浓度，PLA2活性及脑组织含水量明显降低。但对脑缺血后脑组织PLA2mRNA表达降低不明显。结论：尼莫地平能抑制PLA2活性，降低细胞内游离Ca^2 浓度，减轻脑水肿病理改变，对缺血性脑细胞损害有一定保护作用。     

粉防己碱对培养乳牛基底动脉平滑肌细胞内游离钙浓度的影响

目的：研究粉防己碱对培养乳牛基底动脉平滑肌细胞游离钙浓度（[Ca^2 ]i)的影响。方法：利用AR－CM－MIC阳离子测定系统,采用Fura 2-AM为指示剂,测量单个细胞内[Ca^2 ]i。结果：粉防己碱10－100μmol/L对培养乳牛基底动脉平滑肌细胞静息[Ca^2 ]i无明显影响。在细胞外钙为1．3mmol/L,粉防己碱可浓度依赖性地抑制KC1引起[Ca^2 ]i的升高。咖啡因10mmol/L可诱导一次[Ca^2 ]i瞬间快速升高,随后自发回复到静息水平,粉防己碱10和30μmol/L对咖啡因诱导的[Ca^2 ]i瞬间升高没有作用,但高浓度（100μmol/L）粉防己碱抑制了[Ca^2 ]i瞬间升高。在细胞外钙为1.3mmol/L,苯肾上腺素10μmol/L可引起双相[Ca^2 ]i变化,包括快速升高相和持续升高相。在细胞外钙为零,苯肾上腺素仅引起[Ca^2 ]i的快速升高相。粉防己碱可浓度依赖性地抑制苯肾上腺素引起[Ca^2 ]i快速升高相。结论：在培养乳牛基底动脉平滑肌细胞,粉防己碱可能通过影响电压依赖性和苯肾上腺素受体介导的钙通道而抑制钙内流。高浓度粉防己碱也可能影响肌浆网钙释放或钙摄取。     

TAT-tCNTF 对CD 诱导HUVEC 细胞损伤的作用研究（摘要）

目的探讨TAT—tCNTF对细胞松弛素D（cD）诱导人脐静脉内皮细胞（HuvEc）损伤作用的影响。方法CCK-8法检测TAT—tCNTF对CD致HUVEC生长抑制的作用；荧光显微镜检测CD诱导HUVEC的F—actin的变化，以及在TAT—tCNTF作用下对细胞微丝的影响；荧光显微镜和流式细胞术检测CD和TAT—tCNTF作用后细胞内Ca^2＋浓度；Westernblot检测CD和TAT—tCNTF作用后F—actin的蛋白水平的变化。结果在1μg·ml^-1。的CD作用HUVEC后，细胞表现出明显的生长抑制，而在0．05～10μg·ml^-1。浓度范围内，TAT—tCNTF促进HUVEC的生长，并可改善CD对HUVEC的损伤，TAT—tCNTF组与CD＋TAT—tCNTF组细胞活动度具有明显差异；荧光显微镜下检测到经CD作用后细胞F-actin分布减少，而经TAT—tCNTF作用后细胞F-actin分布密集；采用Fluo4-AM荧光探针标记细胞内Ca^2＋浓度，荧光显微镜和流式细胞术检测到TAT—tCNTF能够降低经CD损伤HUVEC后的细胞内Ca^2＋浓度升高；FCM检测显示，CD组的MFI相对于对照组明显增加，而CD＋TAT—tCNTF组MFI较CD组明显降低。Westernblot显示各组之间的F—actin表达量没有明显改变。结论TAT—tCNTF对CD致内皮细胞的损伤有改善和逆转作用，其改善机制可能与增加细胞活性和维持细胞骨架有关。     

钙诱发乳腺癌细胞G1期调节蛋白的水解反应及其差异的观察

目的 观察Ca^2 诱发乳腺肿瘤细胞G1期调节蛋白——周期蛋白依赖性激酶(cyclindependent kinase2,CDK2)、周期蛋白E、周期蛋白D3的水解反应过程及其差异,以初步探讨Ca^2 代谢失调影响肿瘤生物学性状的机制。方法 将不同浓度CaCl2与乳腺肿瘤细胞裂解液共同孵育(25℃)不同时间后,通过蛋白印迹分析法观察细胞裂解液G1期调节蛋白的水解反应过程及差异。结果 适当浓度的Ca^2 (500μM)能诱发CDK2产生微弱的蛋白水解,周期蛋白D3则不受影响,但Ca^2 可迅速诱发周期蛋白E的水解反应、形成大量低分子产物;Ca^2 诱发产生的周期蛋白E低分子产物较稳定、不易降解。结论 乳腺肿瘤细胞Ca^2 代谢失调可引起G1期调节蛋白的选择性有限水解,形成大量的低分子周期蛋白E,从而对肿瘤的生物学特性产生影响。     

尼莫地平对人结肠癌细胞系HCT增殖的影响及机制探讨

目的：研究钙拮抗剂尼莫地平对人结肠癌细胞系HCT生长的影响及探讨其相应的机制。方法：MTT法检测不同剂量尼莫地平对HCT细胞生长的影响。探讨经尼莫地平作用的HCT细胞是否发生凋亡；用流式细胞术检测凋亡细胞亚二倍体峰；DNA凝胶电泳检测HCT细胞DNA的梯度条带；瑞士－姬姆萨染色观察HCT细胞的形态学变化，激光共聚焦扫描显微镜检测在尼莫地平作用下HCT细胞内钙离子的浓度及分布状态的变化。结果：MTT法示尼莫地平可抑制人结肠癌细胞系HCT的生长。流式细胞术检测显示，尼莫地平作用后，HCT细胞亚二倍体峰面积增大，且凋亡细胞数呈剂量依赖性，高剂量尼莫地平组可见典型的DNA的梯度条带；细胞形态呈现细胞的胞膜泡化，胞质浓缩，染色质断裂等变化。Fluo-3荧光标记显示尼莫地平作用于HCT细胞后，细胞内Ca^2 浓度[Ca^2 ]i升高，PI荧光标记的细胞核型发生变化。结论：尼莫地平作为钙拮抗剂对结肠癌HCT细胞系的生长有抑制作用；其机制可能是通过细胞凋亡作用的。     

化学性缺氧致大鼠脑细胞[Ca^2＋]i和脑红蛋白表达变化及阿司匹林干预研究

目的：观察化学性缺氧状况下大鼠脑细胞[Ca^2＋]i和脑红蛋白（NGB）表达的变化及阿司匹林（ASA）对其变化的干预,并初步探讨其作用机制。方法：连二亚硫酸钠致原代培养大鼠脑细胞缺氧,用荧光探针Flou-3负载和NGB荧光免疫组化技术双标,激光共聚焦显微镜动态观察。结果：[Ca^2＋]i和NGB表达与缺氧持续时间有关,随缺氧时间的延长,荧光强度随之增高;经ASA预防性干预,两种荧光强度增高缓慢,其增高程度明显低于单纯缺氧组;治疗性干预,用药早期两种荧光强度增高明显,其增高程度与单纯缺氧组变化相近,后期则增高缓慢,其增高程度明显低于单纯缺氧组。[Ca^2＋]i浓度和NGB表达呈正相关。结论：ASA对原代培养大鼠脑细胞化学性缺氧损伤具有保护作用,其作用可能与ASA抑制细胞内Ca2^＋超载有关;NGB的表达可能是受到Ca2^＋-CaM复合物的调节;ASA预防性用药的早期保护作用明显优于治疗性用药。