HSP表达在炎症反应综合征中的作用与意义

热休克蛋白(HSPs)是生物体面临不利生存环境中快速表达的一类保护性蛋白家族，具有修复和维护细胞功能的作用。在炎症反应综合征(SIRs)病理过程中，机体细胞均有HSP表达，并通过分子伴侣、抗凋亡及抗炎机制发挥保护作用。本文对不同组织细胞HSP表达对SIRS发展及转归的意义作一综述。     

热休克蛋白27、70与恶性肿瘤

热休克蛋白(heat shock protein,HSP)广泛存在于生物体内,是一类在进化上高度保守的细胞应激蛋白.其中HSP27和HSP70在抗凋亡过程中发挥重要的作用,在多种肿瘤细胞中异常高表达,尤其是腺癌起源的肿瘤.HSP27和HSP70在恶性肿瘤的发生、发展中的作用及其机制是近年来研究的热点,有望对肿瘤的治疗提供新的平台.     

热休克蛋白27在脊髓缺血再灌注的防护作用

热休克蛋白27(heat shock protein,HSP27)属于热休克蛋白家族中的小分子量家族,本文在回顾收集大量相关文献的基础上,分析了HSP27在脊髓缺血再灌注损伤中的表达意义和机制,阐明了HSP27具有抑制NO的生成、维持细胞蛋白稳定和加速细胞损伤修护的功能,同时HSP27还具有抗细胞凋亡、保护线粒体、抑制核转录因子活化等相关作用。进一步表明了热休克蛋白27在脊髓缺血再灌注中的保护作用。     

苦参素对大鼠急性脊髓损伤后热休克蛋白47表达的影响

目的探讨苦参素治疗大鼠急性脊髓损伤(SCI)的机制。方法用30只Wistar大鼠制作钳夹型SCI模型,随机分成正常组、假手术组、SCI组、对照组和治疗组,在SCI后3d及每周评价BBB评分,并在第8周用免疫组化方法分析脊髓中热休克蛋白47(HSP47)的表达情况。结果正常组和假手术组Wistar大鼠脊髓组织低表达胶质细胞酸性蛋白(GFAP)和HSP47,高表达神经丝蛋白(NF),在SCI后GFAP和HSP47表达明显提高(P<0.05),NF表达明显降低(P<0.05)。苦参素治疗后,GFAP和HSP47表达降低(P<0.05),NF表达升高(P<0.05)。结论苦参素对Wistar大鼠SCI具有治疗作用,很可能通过抑制HSP47的表达发挥治疗作用。     

热休克蛋白27在大鼠急性胰腺炎中的表达及其对细胞间连接的影响

目的探讨热休克蛋白27(HSP27)在轻型急性胰腺炎(MAP)及重症急性胰腺炎(SAP)大鼠模型中的表达及其对腺泡细胞间连接的影响。方法雄性Wistar大鼠90只,随机分3组:A组为SAP组,B组为MAP组,C组为对照组。3组动物于成模后1,3,8h分批处死。检测血清淀粉酶(SAM),计算胰腺系数;Western-blot半定量分析HSP27蛋白和磷酸化蛋白含量;RT-PCR半定量分析HSP27 mRNA表达;透射电镜观察细胞间连接的变化。结果A,B组SAM水平升高,但B组明显低于A组(P<0.05);A组胰腺系数迅速升高并持续增长,间质水肿严重(P<0.05),细胞间连接损伤;B组间质水肿比A组轻(P<0.05),细胞连接比较稳定;A,B两组HSP27蛋白及其mRNA表达均显著高于对照组(P<0.05),B组明显高于A组(P<0.05);B组HSP27磷酸化蛋白(Ser78)含量显著高于对照组和A组(P<0.05),A组与对照组比较无明显差异(P>0.05)。结论细胞间连接破坏是急性胰腺炎的共同特征,但SAP损伤更严重,可能与细胞间连接调控因子HSP27及其磷酸化表达相对下降。提示HSP在AP发生、发展中具有重要作用。     

shRNA介导的热休克蛋白70敲低对人结肠癌细胞在裸鼠体内生长的影响

目的:探讨热休克蛋白70(HSP70)敲低对结肠癌细胞在裸鼠体内生长的影响。方法:构建两种干扰HSP70的shRNA(HSP70 shRNA-1和HSP70 shRNA-2)质粒表达载体,分别转染到结肠癌HT29细胞,并以空质粒转染(阴性对照)和未转染的HT29细胞(空白对照)为对照,用RT-PCR和Western blot方法检测各组HT29细胞HSP70基因和蛋白的表达;将HSP70shRNA-2转染、空质粒转染及未转染的HT29细胞分别接种至裸鼠皮下建立移3组植瘤模型,观察肿瘤生长情况,3周后剥离瘤块,用HE染色、免疫组化和TUNEL法分别检测移植瘤组织形态学、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及细胞凋亡情况。结果:RT-PCR和Western blot结果显示HSP70 shRNA-1和HSP70 shRNA-2均能明显抑制HT29细胞HSP70基因和蛋白的表达,且HSP70 shRNA-2的抑制作用更为明显,空质粒转染对HSP70的表达无明显影响;与空白对照组比较,HSP70 shRNA-2转染组裸鼠移植瘤生长明显较明显减慢(P<0.01),瘤组织中心出现明显坏死,PCNA表达明显降低,细胞凋亡率明显增加(P<0.01),而空质粒转染组无明显上述改变(P>0.05)。结论:HSP70沉默能抑制结肠癌HT29细胞裸鼠移植瘤的生长,促进细胞凋亡,HSP70可能是治疗结肠癌有效靶点。     

热休克蛋白在子宫颈癌中的表达及其意义

目的探讨热休克蛋白(heat shock proteins,HSPs)在子宫颈癌组织中的表达情况及意义。方法采用PT—PCRH和免疫印迹法检测HSPs在子宫颈癌组织及正常子宫组织中的蛋白和mRNA的表达水平。结果癌组织中HSP70、HSP86及αB晶状体蛋白表达较正常组织明显增多(P<0.05),且HSP70表达最高(P<0.01)。结论 HSP70在子宫颈癌组织中表达显著增高。     

Ezrin shRNA联合HSP70对骨肉瘤细胞凋亡和增殖的影响

 目的 探讨Ezrin基因沉默联合热休克蛋白（heat shock protein, HSP）70诱导的免疫杀伤对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法 采用人成骨肉瘤MG63细胞系作为研究对象,将人HSP70和Ezrin-shRNA的DNA片段分别克隆至含CMV和pU6双启动子的表达载体pGFP-V-RS中构建含HSP70和Ezrin-shRNA的真核表达载体pGFP-V-RS-shRNA和pGFP-V-RS-shRNA-HSP70。重组质粒分别转染入细胞,筛选出稳定表达的细胞克隆。荧光显微镜观察细胞形态及转染效果;荧光定量RT-PCR及蛋白印迹western blot检测稳定转染细胞株Ezrin和HSP70基因及蛋白水平的变化;采用MTT、流式细胞术检测细胞增殖、凋亡能力变化,Western blot检测凋亡及周期相关蛋白表达量变化;MTT法检测HSP70刺激产生特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对靶肿瘤细胞的杀伤作用。结果 荧光图像及基因和蛋白表达分析证实,首次成功构建同时沉默Ezrin和过表达HSP70的特异性载体。较单纯沉默Ezrin,同时过表达HSP70会在一定程度上减弱沉默Ezrin蛋白促进细胞凋亡和抑制增殖的效果,但与对照细胞相比,M63细胞凋亡率仍明显上升,自11.01%±0.22%上升至24.28%±0.50%,增殖速度则自395.14%±2.24%减少至310.00%±2.83%。另外,Western blot检测发现Ezrin-shRNA可促进凋亡基因Bax的表达,相反可降低抗凋亡基因Bcl-2和细胞周期蛋白Cyclin D1的表达。而Ezrin-shRNA/HSP70组较Ezrin-shRNA组促Bax表达和降低Bcl-2、细胞周期蛋白Cyclin D1表达有所减弱,但较阴性对照组仍有明显效果。MG63细胞的CTL细胞毒杀伤效应显示各效靶浓度下CT+IL-2+HSP70组的杀伤活性高于CT+IL-2组,最高达56.33%±1.95%。结论 同时沉默Ezrin、过表达HSP70既可以促进骨肉瘤细胞凋亡抑制其增殖,并利用HSP70诱导的CTL,增强对靶肿瘤细胞的杀伤作用。     

热休克蛋白72肽结合区对肾小管上皮间质转分化的影响

目的 探讨热休克蛋白72肽结合区在肾小管上皮间质转分化(EMT)过程中的作用和可能机制.方法 应用质粒转染方法分别诱导热休克蛋白72(HSP72)野生型、肽结合区缺失型(HSP72-△PBD)和肽结合区(PBD)的表达.用转化生长因子β1(TGF-β1)刺激大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)48 h,Western印迹和免疫荧光染色检测细胞E-钙黏蛋白(cadherin),α-平滑肌肌动蛋白(SMA),HSP72和Smad3/磷酸化(p)-Smad3蛋白表达.结果 TGF-β1(10 μg/L)刺激NRK-52E细胞48 h后上调α-SMA和下调E-cadherin蛋白表达水平.Western印迹及细胞免疫荧光显示,过表达HSP72和PBD能明显减轻TGF-β1诱导的NRK-52E细胞E-cadherin蛋白表达下调和α-SMA蛋白表达上调,而过表达HSP72-△PBD不能改变上述蛋白的表达.此外,过表达HSP72和PBD显著抑制Smad3的磷酸化.结论 HSP72抑制Smad3活化和EMT的发生可能与PBD的功能有关.     

神经肽Y剌激肾动脉平滑肌热休克蛋白表达的实验研究

目的　以热休克蛋白 70 (HSP 70 )作为神经肽Y (NPY )刺激肾动脉平滑肌细胞增殖活动为信号 ,探讨高血压肾动脉重塑中发挥的作用。方法　应用快速微量MTT比色法和荧光免疫组织化学定量技术观察神经肽Y作用下肾动脉平滑肌细胞 (VSCM )增殖活动中HSP70表达作用。结果　神经肽Y可刺激体外培养肾动脉平滑肌细胞的增殖 ,其增殖度 (MTT A值 )和细胞内因损伤产生的HSP 70表达明显高于对照组 (P <0 .0 5 )。结论　神经肽Y可影响肾动脉平滑肌细胞增殖 ,而HSP 70表达水平是肾动脉平滑肌细胞增殖的重要信号。     

热休克蛋白70和27在非小细胞肺癌中的表达和临床意义

目的研究热休克蛋白(heatshockprotein,HSP)70和27在非小细胞肺癌(nonsmallcelllungcancer,NSCLC)组织中的表达,探讨HSP70和HSP27与NSCLC细胞的组织学类型、分化和转移之间的关系。方法采用免疫组化SP法检测60例NSCLC标本中HSP70和HSP27的表达情况。结果NSCLC中HSP70和HSP27的表达与肿瘤细胞组织学类型无关。HSP70和HSP27的表达正相关。HSP70的表达与肿瘤细胞分化程度和淋巴结转移明显相关,HSP27的表达则无关。结论HSP70在NSCLC中的高表达与肿瘤细胞的分化和转移明显正相关,提示HSP70可以作为NSCLC辅助诊断和估计预后的指标。而HSP27尽管在多种恶性肿瘤中发挥促进细胞恶变的作用,但在NSCLC中的作用需要进一步研究。     

HSP70在阿霉素致HepG2细胞凋亡中的作用

目的 探讨HSP70在阿霉素(Doxorubicin)所导致的肝癌细胞(HepG2)凋亡中的作用。方法 采用Western blot检测细胞内HSP70水平;应用MTT法检测不同浓度阿霉素作用下的HepG2细胞的活力;流式细胞术用于检测阿霉素作用后HepG2细胞的凋亡率。(Annexin V-FITC及PI双染)结果 HepG2细胞在热应激处理后HSP70表达增加,且与温度、受热时间及恢复时间有关;HepG2/ADM耐药细胞株的HSP70表达明显高于亲本细胞HepG2;HSP70表达越高,细胞对阿霉素敏感性越低,细胞存活率与HSP70水平呈明显正相关,相关系数为0.9678(t=0.0069＜0.01);在1ug/ml、3ug/ml浓度阿霉素作用下,HSP70高表达的HepG2细胞凋亡率为1.53％、3.71％,而对照组为3.61％、5.33％。结论 HSP70对阿霉素导致的HepG2细胞凋亡有一定抑制作用,HSP70高表达可以降低细胞对阿霉素的敏感性。     

抑制热休克蛋白70表达对Eca-109细胞生长的影响

目的：观察热休克蛋白70（HSP 70）反义寡核苷酸阻断食管癌Eca-109细胞的HSP 70表达及对细胞增殖和凋亡的影响。方法：应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot技术检测HSP 70反义寡核苷酸(10μmol/L)转染Eca-109细胞后, 其HSP 70基因mRNA和蛋白表达的变化。观察HSP 70反义寡核苷酸转染对肿瘤细胞的生长抑制效应及转染后细胞凋亡率和细胞周期分布的改变。结果：HSP 70反义寡核苷酸可阻断Eca-109细胞HSP 70 mRNA和蛋白的表达;转染后48h和72h，生长抑制率分别为25.5%和35.4%;HSP 70反义寡核苷酸组细胞凋亡率明显高于HSP 70正义寡核苷酸组和未转染组（P<0.05）。结论： HSP 70反义寡核苷酸能抑制Eca-109细胞的生长并诱导其发生凋亡。     

热休克蛋白70、90α在严重多发伤中的表达及意义

目的 研究热休克蛋白70(HSP70)、热休克蛋白90α(HSP90α)在严重多发伤患者外周血白细胞中的表达规律及意义.方法 采用Western blotting检测严重多发伤后患者(ISS评分≥16)外周血白细胞中HSP70、HSP90α蛋白的表达高峰期,以及检测严重多发伤经治疗后痊愈患者、严重多发伤因MODS死亡患者外周血HSP70、HSP90α蛋白在高峰期的表达情况.同时记录患者的预后.结果 严重多发伤患者伤后72 h HSP70、HSP90α蛋白均表达明显升高,而经治疗后痊愈患者表达明显增强,因MODS死亡的患者表达相对增强.结论 HSP70、HSP90α表达强弱对于严重多发伤患者预后生存情况有密切关系.     

热休克蛋白90抑制剂对PC-3M细胞杀伤效应的研究

目的:观察热休克蛋白90(HSP90)抑制剂对前列腺癌PC-3M细胞增殖活性、细胞周期和凋亡的影响,初步探讨其作用机制.方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同浓度的HSP90抑制剂对PC-3M细胞增殖的影响;采用细胞免疫化学测定HSP90抑制剂对PC-3M细胞HER-2表达的影响;采用流式细胞分析术(FCM)检测细胞凋亡和细胞周期.结果:高浓度(500 nmol/L)HSP90抑制剂可杀伤PC-3M细胞,低浓度(10、50、125、250 nmol/L)条件下则主要发挥生长抑制作用.HSP90抑制剂可使PC-3M细胞HER-2表达水平降低,并在500 nmol/L浓度时诱导细胞凋亡.结论:HSP90抑制剂较为明显地抑制PC-3M细胞生长,并在高浓度时杀伤癌细胞;其作用机制可能与下调HER-2的表达有关.     

谷氨酰胺抑制人外周血单个核细胞细胞因子表达的机制

目的 探讨谷氨酰胺抑制人外周血单个核细胞(PBMCs)细胞因子表达的分子机制.方法 Ficoll密度梯度离心法提取健康志愿者新鲜PBMCs,将分离得到的细胞分为两部分.第一部分细胞分为六部分,分别用不同浓度的Gln(0、8、15 mmol/L)预处理0.5 h及2.0 h后,再用10 g/L内毒素刺激4.0 h,留取细胞及上清.第二部分细胞分为A、B、C三组,将热休克蛋白(HSP)阻断剂Quercetin(200 μmol/L)加入A组及B组中,作用0.5 h;再将谷氨酰胺8 mmol/L加入A组和C组中;1.0 h后在三组中均加入10 g/L内毒素刺激4.0 h,留取细胞及上清.酶联免疫吸附(ELISA)测定上清中PBMCs肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-10(IL-10)的表达,免疫印迹(Western Blot)技术检测细胞内HSP70的表达情况.对指标检测结果进行统计学分析.结果 8 mmol/L及15 mmol/L谷氨酰胺预处理0.5 h后能够明显增加HSP70的表达(P<0.05),8 mmol/L谷氨酰胺预处理2.0 h后能明显增加HSP70的表达(P<0.05).同时TNF-α和IL-10表达受抑(P<0.05);使用HSP70阻断剂Quercetin后,HSP70表达量明显下降,同时TNF-α和IL-10表达增加(P<0.05).结论 谷氨酰胺抑制内毒素刺激下PBMCs细胞因子的表达与HSP70介导有关.     

Survivin和热休克蛋白27在胰腺癌组织中的表达及关系

目的:探讨Survivin和热休克蛋白27(HSP27)在胰腺癌组织中的表达及二者的相关性。方法:用免疫组织化学法检测59例胰腺癌及癌旁组织中Survivin与HSP27的表达,比较其阳性表达率及Survivin表达与HSP27表达的关系。结果:Survivin在胰腺癌中阳性表达率为74.6%,而在癌旁组织中未见表达(P<0.01);Survivin表达与胰腺癌的分化程度、临床分期及淋巴结转移无相关性;HSP27在胰腺癌中的表达率为66.1%,明显高于癌旁组织22.8%(P<0.01),并且与胰腺癌的分化程度相关,但与临床分期及淋巴结转移无关;胰腺癌组织中Survivin与HSP27的表达有相关性。结论:Survivin和HSP27在胰腺癌中过度表达,提示二者在胰腺癌的发生发展中起重要作用;Survivin和HSP27通过抗凋亡机制协同参与胰腺癌的发生。     

谷氨酰胺对脂多糖诱导鼠心肌细胞损伤的保护作用

目的 观察谷氨酰胺(Gln)对脂多糖(LPS)诱导鼠心肌细胞损伤的保护作用及可能机制.方法 乳鼠心肌细胞原代培养分成四组:G组,给予5 mM Gln; GL组,给予5 mM Gln+4μg/ml LPS;L组,给予4μg/ml LPS;C组(对照组)给予等量双蒸水.细胞干预处理6 h后,测定各组心肌细胞生存率、心肌细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)活力、心肌细胞热休克蛋白(HSP)70及胞核热休克因子(HSF)-1蛋白水平和心肌细胞核HSF-1转录活性.结果 四组心肌细胞生存率差异无统计学意义.GL组、L组细胞培养液LDH活力明显高于C组(P<0.05),L组高于GL组.G、GL、L组细胞HSP 70蛋白表达水平、细胞核HSF-1蛋白表达水平及转录活性明显高于C组(P<0.05),GL组明显高于G组和L组(P<0.05).结论 Gln减少LPS诱导鼠心肌细胞的损伤,可能与Gln增加心肌细胞核内HSF-1水平及转录活性,进而促进HSP70蛋白表达有关.     

热休克蛋白70-2基因沉默诱导大鼠精原细胞凋亡及其机制

目的 探讨热休克蛋白(HSP)70-2基因沉默对精原细胞的影响及其机制.方法 构建HSP70-2特异的短发夹RNA(shRNA)质粒载体,并转染大鼠精原细胞;应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HSP70-2 mRNA表达,Western blot检测HSP70-2、Cyclin DI、bcl-2和box蛋白表达,应用流式细胞术分析细胞周期和凋亡.结果 HSP70-2基因沉默组的HSP70-2蛋白表达量为0.93±0.13,明显低于阴性对照组1.31±0.10(P<0.01);流式细胞术检测结果显示,与转染Scrambled的阴性对照组比较,转染pGenesil-1-HSP70-2重组质粒组的PC3细胞在G1期出现明显细胞周期阻滞和细胞凋亡,G1期阻滞细胞比例为(80.09±2.37)%,凋亡率为(7.44±2.41)%,而阴性对照组分别为(61.85±2.31)%和(1.09±0.57)%(P<0.05).与阴性对照组比较,转染后细胞bcl-2、Cyclin D1表达水平显著降低,而bax表达水平升高.结论 HSP70-2基因沉默能诱导精原细胞凋亡,其机制可能是通过Cyclin D1蛋白调节细胞周期并通过上调box蛋白表达促进细胞凋亡.     

热休克蛋白70 mRNA在膀胱癌中的表达及与细胞凋亡的关系

目的　探讨热休克蛋白 70 (HSP 70 )mRNA在膀胱移行细胞癌中的表达及与细胞凋亡的关系。　方法　应用原位杂交法对 6 0例膀胱癌组织中HSP 70mRNA进行检测 ,原位DNA末端标记法 (TUNEL)检测细胞凋亡情况。　结果　 6 0例标本中 ,HSP 70mRNA阳性表达率为 5 6 .7% (34/ 6 0 )。HSP 70mRNA表达随肿瘤分级增高而增加 (P <0 .0 5 ) ;G1,G2 和G3 各级间两两比较 ,HSP 70mRNA表达差异也有显著性意义 (P <0 .0 5 )。随着肿瘤分期增高 ,HSP 70mRNA表达随之增加 (P <0 .0 5 ) ;Ⅰ ,Ⅱ和Ⅲ各期间两两比较 ,差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。肿瘤细胞凋亡指数 (AIs)随恶性程度的增高显著降低 (P <0 .0 5 ) ;HSP 70mRNA表达率和AIs呈负相关 (rs=- 0 .6 85 ,P <0 .0 5 )。　结论　HSP 70mRNA表达随膀胱癌恶性程度增加显著增高 ,细胞凋亡则显著降低 ,提示HSP 70表达能够抑制膀胱癌细胞的凋亡。