尿液AQP2在先天性肾积水患儿中的检测和意义

目的研究单侧先天性肾盂输尿管连接处梗阻（pyeloureteric junction obstruction，PUJO）肾积水患儿尿液水通道蛋白2（Aquaporins-2，AQP2）测定在肾脏浓缩功能评价中的意义。方法选取12例正常儿童，26例单侧先天性PUJO肾积水患儿，其中轻度14例，重度12例，均经彩超、静脉。肾盂造影证实，并排除其它泌尿系统疾病；在严格设定条件下，收集正常对照组术前和梗阻解除术后第3天患肾24h尿液，同时收集术中。肾盂尿液，测定尿渗透压，并用酶联免疫吸附法（ELISA）测定尿液中AQP2。结果与正常对照组比较，积水组术中尿液AQP2和尿渗透压明显下降（P〈0．05），且重度积水组术中尿液AQP2与轻度积水组相比，明显降低（P〈0．05），但重度积水组和轻度积水组术中尿渗透压相比无显著差异（P〉0．05）；梗阻解除后，轻、重度积水组术中尿液AQP2与术后第3天相比，无显著差异（P〉0．05），而术后第3天两组尿渗透压却明显下降／P〈0．05），术后第3天重度积水组与轻度积水组尿液AQP2和尿渗透压相比较，显著下降（P〈0．05）；正常对照组与轻、重度积水组术后第3天尿液AQP2和尿渗透压之间存在一定相关性。结论小儿单侧先天性PUJO尿液AQP2和尿渗透压较正常对照组显著降低，且二者之间存在一定相关性。尿液中AQP2下降可能和尿液浓缩功能改变有关。     

先天性肾积水患儿尿液水通道蛋白1表达的意义

目的研究先天性肾积水患儿尿液水通道蛋白1(AQP1)的表达情况及其临床意义。方法选取26例不同程度肾积水患儿作为试验组。其中轻度组7例,中度组10例,重度组9例。均经彩超、电子计算机X射线断层扫描技术(CT)或MRI证实,并排除其他泌尿系统疾病。对照组选取10例无泌尿系统疾病的儿童。在严格选定条件下,收集试验组患儿术前晨尿、术中肾盂尿液、梗阻解除术后第3、7天患肾晨尿,同时收集对照组患儿晨尿,采用间接ELISA法测定其尿液AQP1水平。结果与对照组比较,中、重度积水组患儿术前尿液中AQP1水平均明显下降(Pa<0.05),且重度积水组尿液AQP1水平与中度积水组比较,明显降低(P<0.05);轻度积水组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。试验组术后第3天尿液AQP1水平与术中比较,差异无统计学意义(P>0.05),术后第7天尿液AQP1水平与术中比较均明显上升,但仍低于对照组(Pa<0.05)。对照组、试验组术前及术后第7天尿液AQP1水平与尿渗透压呈正相关,实验组术中及术后第3天尿液AQP1水平和尿渗透压之间无相关性。结论尿液AQP1水平可能是新型的评价先天性肾积水患儿肾浓缩功能的指标之一。     

小儿肾积水肾盂成形术后尿理化性质和尿水通道蛋白2改变的研究

目的 探讨小儿单侧先天性肾盂输尿管连接处梗阻(pyeloureteric junction obstruction,PUJO)肾积水术后1周内尿理化性质和尿水通道蛋白2(aquaporins-2.AQP2)的变化.方法 选取14例符合Grignon法四、五级标准的小儿单侧先天性PUJO.肾积水患儿;经肾盂成形术后给予严格设定的补液标准,收集术后第一、三、五、七天积水侧肾脏和对侧无积水肾脏24 h尿液,分别测定排尿量、渗透压、Na+和肌酐,并用酶联免疫吸附法(ELISA)测定尿液中AQP2水平.结果 相对于对侧无积水肾脏,积水侧肾脏梗阻解除术后1周内尿液AQP2显著降低.尿量明显增多.尿渗透压显著降低,Na+排泄分数显著增加;同时术后1周内双侧肾脏尿液AQP2、排尿量和尿渗透压有升高趋势,而积水侧肾脏Na+排泄分数有减少的趋势;积水侧.肾脏术后第五、七天的尿液AQP2.排尿量和尿渗透压较第一天均显著增加(P<0.05).对侧无积水肾脏术后第五、七天的尿液AQP2和尿渗透压较第一天也显著增加(P<0.05).其余指标在术后小同天数之间差异无统计学意义(P>0.05).结论小儿单侧先天性PUJO解除术后1周内积水侧.肾脏的尿液AQP2和尿渗透压均较对侧尤积水肾脏尿液显著减少.提示梗阻解除后尿液中AQP2可能和尿液浓缩能力改变有关.     

小儿肾积水肾脏病理改变与水通道蛋白表达的相关研究

目的 探讨小儿先天性积水肾脏(hydronephrotic kidney,HnK)不同病理改变水通道蛋白(aquaporins,AQPs)1～4及其mRNA的表达情况.方法 收集26例接受肾盂成形术和肾造瘘术的肾盂输尿管连接部狡窄(PUJO)患儿的肾组织标本,按其病理学变化程度分为轻度肾积水组(12例,病理学分级Ⅱ-Ⅲ级)和重度肾积水组(14例,病理学分级Ⅳ-Ⅴ级)2组.10例正常肾脏组织标本来自于肾母细胞瘤周围正常肾组织.免疫组织化学技术检测AQP1～4在正常肾脏和积水肾脏中的表达与定位,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测AQP1～4 mRNA在正常肾脏和积水肾脏中的表达水平.结果 免疫组化显示先天性积水肾脏中AQP1～4表达强度弱于正常埘照组肾脏;半定量RT-PCR显示重度肾积水中AQP1～4的相对表达量显著低于轻度肾积水和正常肾组织(P均<0.01).结论 小儿先天性积水肾脏中AQP1～4蛋白及其mRNA水平的表达均下调,且随积水肾脏病理改变稃度而变化,AQP1～4表达水平的变化可能在先天性肾积水的病理发展过程中发挥一定作用.     

先天性肾盂输尿管连接部梗阻患儿积水肾脏中水通道蛋白1-4的表达

目的 观察先天性肾盂输尿管连接部梗阻患儿积水肾脏中水通道蛋白l-4(aquaporin,AQP1-4)的表达及其与积水程度之间的关系.方法 收集22例接受肾盂成形术和肾造瘘术的先天性肾盂输尿管连接部狭窄(pyeloureteral junction obstruction,PUJO)患儿的肾组织标本,并将其按照静脉肾盂造影(intravenous pyelography,IVP)显影时间的长短分为两组.轻度肾积水组(10例;IVP60min内显影)和重度肾积水组(12例,IVP 60min内不显影).8例正常肾组织标本来自于肾母细胞瘤周围正常肾组织.免疫组织化学技术检测AQPl-4在正常肾脏和积水肾脏中的表达与定位.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测AQP1-4 mRNA在正常肾脏和积水肾脏中的表达水平.结果 AQP1阳性着色主要分布于肾小球毛细血管内皮细胞、近曲小管的上皮细胞及髓袢降支细段上皮细胞胞质,AQP2阳性着色主要分布于肾脏集合管上皮细胞胞膜和胞质,AQP3阳性着色主要分布于肾脏集合管主细胞的基底侧,AQP4阳性着色主要分布于肾内髓集合管上皮细胞基底侧.而积水肾脏AQP1-4表达均有不同程度下降.RT-PCR显示重度肾积水中AQPl-4的相对表达量显著低于轻度肾积水和正常对照组(AQP1:0.194±0.118比0.598±0.092比0.858±0.122;AQP2:0.247±0.089比0.566±0.105比0.976±0.134;AQP3:0.426±0.126比0.741±0.074比1.006 ±0.084;AQP4:0.171±0.115比0.420±0.081比0.739±0.201;P＜0.01).结论 AQP1-4在先天性PUJO患儿积水肾组织中的表达水平降低,且随着积水程度的加重而下降,表明其在肾积水发展的过程中可能与肾脏浓缩稀释功能的下降有一定的关系.     

先天性肾积水患儿肾脏水通道蛋白表达与肾实质厚度和肾小球滤过率的相关性

目的：探讨先天性肾积水患儿肾脏水通道蛋白AQP1-4 的表达与肾实质厚度和肾小球滤过率（GFR）变化之间的关系。方法：利用Western blot检测AQP1-4蛋白在10例先天性肾积水患儿(年龄62.3±18.3个月)10个肾组织和6例来自肾母细胞瘤手术切除患儿的正常肾脏组织(年龄62.7±17.1个月)中的相对表达量。同时对患侧肾脏肾实质厚度和GFR进行评估。积水肾脏AQP1-4表达与GFR以及肾实质厚度之间进行Pearson相关分析检验。结果：肾积水组AQP1-4蛋白相对表达均明显低于正常组（P＜0.05）。B超测量术前积水侧肾脏肾实质厚度平均为4.59±2.25 mm。99mTc-DTPA 测定积水侧肾脏GFR较对侧肾脏明显下降（40±12 mL/min vs 105±20 mL/min, P＜0.05）。积水组肾脏中AQP1-4蛋白相对表达量与肾实质厚度之间呈正相关,与患侧肾脏GFR之间亦呈正相关。积水侧肾脏肾实质厚度与GFR之间呈正相关。结论：先天性积水患儿肾脏AQP1-4蛋白表达下降,其表达量与肾实质厚度和肾脏GFR的变化呈正相关。     

99mTc-DTPA肾动态显像在小儿先天性肾积水的应用

目的探讨肾功能临床相关指标对小儿先天性肾积水的诊断价值.方法用99mTc-DTPA核素动态显像测定68只患肾和14只正常肾的肾小球滤过率(GFR),并与年龄及血清尿素氮(BUN)、血清肌酐(SCr)、血红蛋白(Hb)进行相关性分析.结果 GFR与正常儿童年龄呈正相关(r=0.428,P＜0.05);中、重度肾积水患儿GFR与Hb呈正相关(分别为r=0.341、P＜0.05,r=0.635、P＜0.01);GFR与BUN只在重度肾积水呈负相关(r=-0.559,P＜0.05);GFR与SCr呈显著负相关(r=-0.445,P＜0.01);中、重度肾积水肾功能显著性下降(P＜0.05,P＜0.001),轻度积水肾与正常肾肾功能无显著性差异(P＞0.05).结论 GFR与SCr是检测小儿先天性肾积水肾功能的理想指标;BUN不适于肾积水的早期诊断;临床诊断明确的小儿先天性肾积水应早期手术治疗,以防止肾功能下降至失代偿而造成局部和全身性损害.     

正常和肾积水胎儿肾脏水通道蛋白1-3的表达

目的 探讨正常和肾积水胎儿肾脏水通道蛋白1-3(AQP1-3)在孕中、晚期表达的差异.方法 收集本院母亲身体健康,因其他原因而引产的21例正常胎儿(孕中期12例,孕晚期9例)和9例孕晚期肾积水胎儿肾脏标本;应用免疫组织化学方法检测各组肾脏AQP1-3的定位与表达.同时采用Westem Blot检测正常和肾积水胎儿肾脏AQP1-3蛋白表达水平.同期收集本院8例成人因肾癌行肾切除术远离肿瘤的正常肾脏组织作为AQP1-3表达阳性对照.结果 免疫组化结果显示AQP1阳性染色主要分布于肾小球毛细血管内皮细胞、近曲小管的上皮细胞及髓袢降支细段上皮细胞胞质;AQP2阳性染色主要分布于肾脏集合管上皮细胞胞膜和胞质;AQP3阳性染色主要分布于肾脏集合管主细胞的基底侧.经Image-Pro Plus图像分析软件统计分析,孕中期肾脏AQP1-3表达分别为0.375±0.056、0.278±0.031和0.312±0.050,均弱于孕晚期组(分别为0.483±0.062、0.356±0.048和0.501±0.068),肾积水组AQP1-3表达分别为0.308±0.051、0.247±0.039和0.282±0.056,也均弱于同孕期正常胎儿,且胎儿肾脏AQP1-3表达均弱于成人对照组(分别为0.626±0.084、0.432±0.049和0.687±0.058,P＜0.05).Western Blot同样显示正常孕晚期胎儿AQP1-3蛋白表达量(0.96±0.07、0.94±0.06和0.95±0.05)显著高于孕中期(0.82±0.05、0.76±0.04和0.79±0.04),且高于同孕期肾积水组表达量(0.54±0.04、0.42±0.03和0.53±0.04,P＜0.05).结论 胎儿积水肾脏AQP1-3的表达水平较正常胎儿明显降低提示胎儿积水肾脏浓缩稀释功已经受损.     

β2-MG测定对评价小儿先天性肾积水肾功能损害的意义

目的研究小儿先天性肾积水血、尿β2-微球蛋白(β2-microglobulin，β2-MG)测定对评价肾功能损害的意义。方法通过放射免疫法测定先天性肾积水患儿和正常儿童血、尿β2-MG的水平，比较观察组与对照组之间血、尿β2-MG水平差异。结果轻度肾积水患儿尿β2-MG含量较对照组明显升高，但血清β2-MG水平与对照组比较无显著性差异，中、重度肾积水患儿血、尿β2-MG含量与对照组比较明显升高。不同程度肾积水患儿间血、尿β2-MG含量比较有显著性差异。结论尿β2-MG是反映肾小管功能的灵敏指标，轻度先天性肾积水患儿尿β2-MG含量明显升高，提示轻度肾积水患儿已存在肾小管功能损害，血β2-MG含量较对照组无明显升高提示肾小球功能尚在正常范围，轻、中、重度肾积水患儿血、尿β2-MG含量有显著差异，提示不同程度肾积水肾功能损害程度不同，本研究证明，血、尿β2-MG水平对反映小儿先天性肾积水造成的肾功能损害具有较高的敏感性.     

水通道蛋白2在脓毒症大鼠肾脏的表达及意义

目的 探讨水通道蛋白2(AQP2)在脓毒症大鼠肾脏的表达及对水代谢调节的意义.方法 将6周龄Wistar大鼠64只,随机分为假手术组和手术组各32只,采用盲肠结扎穿孔法(CLP)复制脓毒症模型.每组分为3、6、12和24 h 4个亚组,各8只,分别留取尿液、血液、肾脏标本.观察尿量、尿渗透压和肾功能,HE染色光镜观察肾脏病理变化,采用实时定量PCR方法检测AQP2 mRNA表达,免疫组织化学方法检测AQP2的蛋白表达.结果 手术组大鼠术后3 h尿量减少、尿渗透压增高,6 h后尿量逐渐增多、尿渗透压降低;血肌酐和尿素6 h开始升高,24 h达高峰;随术后时间延长肾脏病理损害加重,主要表现为肾小管上皮细胞之间间隔消失,细胞核消失;肾小球球襻融合,细胞结构不清;间质可见点灶状炎性细胞侵润.AQP2 mRNA的表达在术后3 h增高,12、24 h明显减低;AQP2蛋白表达在术后12 h下降,24 h最低,较假手术组均有显著性差异(P<0.05).结论 AQP2参与脓毒症时肾脏水代谢的调节,AQP2表达下调导致脓毒症尿浓缩功能障碍的主要病理机制之一.     

双侧输尿管梗阻后大白鼠肾脏水通道蛋白2的变化

目的选择大白鼠模拟双侧输尿管梗阻模型,检测其肾脏水通道蛋白2(AQP2)的变化,以期从分子水平上阐明泌尿系梗阻解除后排尿量增多的病理生理改变。方法选取3个月雄性慕尼黑大白鼠(MunichWistarRats)12只,体重225g左右,随机分为实验组(n=6)及对照组(n=6),实验组行双侧输尿管梗阻24h后解除梗阻,对照组仅行输尿管游离而不结扎。每日观察体重、饮水量、食量、尿量变化,3d后取出肾标本,左肾全肾、右肾分离出内髓后行免疫杂交试验,检测水通道蛋白2(AQP2)的变化。结果解除输尿管梗阻后,实验组体重迅速下降(P<0.001),并排出大量低渗性尿液,渗透压明显低于对照组(P<0.05),术后每日排出尿量显著增高(P<0.001);血浆渗透压增高(312±4.71vs301±0.45mmol/L,P<0.05)。全肾及内髓检查,发现AQP2明显降低(P<0.01),而以集合管为主的内髓更为敏感。结论泌尿系梗阻影响肾脏对尿液的重吸收和浓缩功能,排出大量低渗尿液,同时体重明显下降,体内脱水严重;AQP2表达减少是肾脏集合管重吸收水分少、尿液浓缩功能差的主要原因。     

血管紧张素Ⅱ对幼鼠输尿管梗阻后AQP2表达变化的调控

目的 通过观察血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,ANG Ⅱ受体阻滞剂坎地沙坦对双侧输尿管梗阻(bilateral ureteral obstruction,BUO)幼鼠肾脏水通道蛋白2(aquaporin 2,AQP2)表达的影响,探讨ANG Ⅱ对梗阻肾脏功能和AQP2的调控作用。方法 24只慕尼黑幼鼠随机分为BUO组、坎地沙坦干预组(BUO+ CAN)和对照组(Sham),每组n=8只。BUO组和BUO+ CAN组均行双侧输尿管结扎,并采用微型泵分别给以生理盐水和坎地沙坦,Sham组仅游离输尿管但不结扎,24h后解除梗阻并继续观察48h后收集血液和肾脏标本,采用免疫印记技术检测肾脏AQP2表达水平。结果 梗阻解除后BUO组与Sham组相比尿量显著增高,(92±7)μl·min-1 ·kg-1比(25±3)μl· min-1·kg-1、尿渗透压显著降低,(636±55) mosmol/kgH2O比(1 853±163) mosmol/kgH2O、血浆渗透压和血浆醛固酮均显著增高,分别为(336±10) mosmol/kgH2O比(303±7)mosmol/kgH2O和(4.1±0.2)nmol/L比(1.4±0.1)nmol/L;肾脏AQP2表达下调到Sham组17％各组比较差异有统计学意义,P＜0.05。BUO+ CAN组与BUO组相比尿量显著减少,(55±5)μl·min-1 ·kg-1比(92±7)μl·min-1 ·kg-1,尿渗透压显著增高(783±47) mosmol/kgH2O比(636±55) mosmol/kgH2O,血浆醛固酮含量显著降低(2.8±0.5) nmol/L比(4.1±0.2)nmol/L,肾脏AQP2表达增高,各组比较差异有统计学意义,P＜0.05。结论 ANG Ⅱ受体拮抗剂可通过阻止AQP2下调纠正水代谢紊乱,保护肾功能,提示ANG Ⅱ通过调节肾脏AQP2表达参与输尿管梗阻后肾脏水代谢变化。     

过敏性紫癜肾炎患儿白三烯表达水平的临床及病理研究

目的 探讨白三烯(LTs)在过敏性紫癜肾炎(HSPN)发生发展中的作用,为临床使用LTs拮抗剂治疗HSPN提供科学实验依据.方法 收集患儿及健康对照儿童共77例,分成3组,HSPN组34例(18例进行肾穿刺活检术),过敏性紫癜(HSP)组27例,健康对照组16例.分别采集血清和尿液,采用酶联免疫吸附试验法检测各组血清、尿液白三烯B4(LTB4)水平;酶免疫分析法检测各组尿液白三烯E4(LTE4)水平;间接免疫荧光法检测18例进行肾穿刺活检术HSPN患儿肾组织中白三烯C4(LTC4)合酶表达,以3例薄基底膜病、4例临床诊断单纯性血尿(光镜和电镜基本正常)活检标本作对照组;检测HSPN组患儿24 h尿蛋白.结果 (1)HSPN组血清、尿液LTB4及尿液LTE4水平分别为(1164.33 ±300.28)、(841.19 ±115.23)和(1252.31 ±251.62)ng/L,高于HSP组[分别为(559.60 ±180.23)、(574.42±101.17)和(805.93 ±185.52)ng/L]及对照组[分别为(211.95±67.72)、(227.33 ±76.12)和(149.51 ±33.66)ng/L](P均＜0.01);(2)随HSPN病理分级加重,HSPN组血清、尿液LTB4及尿液LTE4水平有升高趋势;(3)随尿蛋白水平的增加,HSPN血清、尿液LTB4及尿液LTE4表达水平逐渐增加(P＜0.01或P＜0.05);(4)与对照组相比,HSPN各组肾活检组织LTC4合酶荧光强度均增强,该荧光表达与其病理分级呈密切正相关.结论 LTs参与并促进HSPN的发生发展,其在肾脏表达水平与HSPN病理分级及尿蛋白排泄密切相关.     

超声诊断先天性肾盂积水最终发展趋势的相关性研究

目的观察产前超声诊断先天性肾盂积水肾盂前后径（anteroposterlor renal pelvic diameter,APD）等数值的变化规律,探讨APD等相关数据在判断生理性或病理性肾盂积水中的临床价值。方法随访观察2011年4月至2013年2月69例行产前超声检查诊断为胎儿先天性肾盂积水患儿的临床资料,根据发展趋势分为生理性肾盂积水和病理性肾盂积水,并对两组积水APD值等相关数据进行比较分析。结果69例（73只肾）中,生理性肾盂积水55例（57只肾）,积水多在产后1—6个月消失。病理性肾盂积水14例（16只肾）,其中肾盂输尿管部梗阻12例（14只肾）,膀胱输尿管部梗阻2例,未发现其它泌尿系统畸形。两组积水在胎儿性别、积水侧别、积水发生时间及孕30～33周前APD、肾皮质厚度（renal parenchyma thickness,RPT）、肾盏形态上比较,P〉0．05,差异无统计学意义。在孕30～33周及孕30～33周后APD、RPT、肾盏形态上比较,P〈0．05,差异有统计学意义。结论胎儿先天性肾盂积水最终发展趋势与胎儿性别、积水侧别、积水发生时间及孕30～33周前APD、RPT、肾盏形态无相关性;与孕30～33周及孕30—33周后APD、RPT、肾盏形态有相关性。在定期随访过程中,生理性肾盂积水多于产后1～6个月恢复正常,病理性肾盂积水的各项指标呈渐进性发展,需及时手术治疗。