肾疏宁对MsPGN大鼠肾小球系膜基质的影响

目的 :观察肾疏宁对MsPGN大鼠肾小球系膜基质中ColⅣ、FN的影响。方法 :综合运用口服牛血清白蛋白 ,尾静脉注射葡萄球菌肠毒素 ,定期注射弗氏佐剂 ,复制了大鼠MsPGN模型 ,利用免疫组化观察肾疏宁对MsPGN大鼠肾小球系膜基质中ColⅣ、FN的影响。结果 :模型组系膜基质中ColⅣ、FN表达明显增多 ,肾疏宁组和肾炎康复片组的表达则明显减少 ,其中肾疏宁组尤为显著。结论 :肾疏宁可能通过减少肾小球系膜区的FN及ColⅣ的表达而达到治疗MsPGN的目的     

肾疏宁对肾小管间质损害大鼠FN、ColⅢ、PAI-1 mRNA的作用

目的:观察肾疏宁对肾小管间质损害大鼠FN、ColⅢ、PAI-1mRNA表达的影响。方法:在系膜增生性肾炎(MsPGN)模型基础上,延长造模时间至12~16周,使其自然发展成肾小管间质损害模型,观察肾疏宁对肾小管间质FN、ColⅢ、PAI-1mRNA表达的影响,并设苯那普利为阳性对照组。结果:第12~16周末,造模各组肾小管间质FN、ColⅢ、PAI-1mRNA表达量均明显升高(P<0.05或P<0.01),肾疏宁组、苯那普利组均显著低于模型组(P<0.05或P<0.01),第12周末,肾疏宁组与苯那普利组比较无统计学差异(P>0.05),而第16周末,肾疏宁组明显低于苯那普利组(P<0.01)。结论:肾疏宁能抑制细胞外基质的合成,促进其降解,从而保护肾小管间质损害。     

肾疏宁对肾小管间质损害大鼠FN、ColⅢ、PAl-1mRNA的作用

目的：观察肾疏宁对肾小管间质损害大鼠FN、colm、PAl—lmRNA表达的影响。方法：在系膜增生性肾炎（MsPGN）模型基础上。延长造模时间至12～16周，使其自然发展成肾小管间质损害模型，观察肾疏宁对肾小管间质FN、colm、PAl—lmRNA表达的影响，并设苯那普利为阳性对照组。结果：第12～16周末，造模各组肾小管间质FN、ColⅢ、PAI-1mRNA表达量均明显升高（P〈0．05或P〈0．01），肾疏宁组、苯那普利组均显著低于模型组（P〈0．05或P〈0．01），第12周末，肾疏宁组与苯那普利组比较无统计学差异（P〉0．05），而第16周末，肾疏宁组明显低于苯那普利组（P〈0．01）。结论：肾疏宁能抑制细胞外基质的合成，促进其降解，从而保护肾小管间质损害。     

霉酚酸对高糖环境下肾小球系膜细胞外基质的影响

目的：通过检测霉酚酸酯（MMF）的代谢产物霉酚酸（mycophenolic acid,MPA）对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞（mesangial cells,MCs）增殖、转化生长因子-β1（transformation growth factor-β1,TGF-β1）和细胞外基质的主要成分：纤维连接蛋白（fibrin,FN）、层黏连蛋白（laminin,LN）和胶原Ⅳ（typeⅣ collagen,ColⅣ）分泌的影响,探讨MPA对糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）的保护机制。方法：四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法测定高糖及高糖加入不同浓度MPA（1～10μmol/L）后对大鼠MCs增殖的影响,ELASE的方法测定各组24h、48h、72hFN、LN、ColⅣ的表达,荧光定量多聚酶链反应的方法检测各组标本中TGF-β1 mRNA的表达,并进行统计学分析。结果：高糖可以诱导MCs增殖及TGF-β1、FN、LN、ColⅣ的表达,MPA抑制高糖环境下MCs增殖和FN、LN和ColⅣ分泌并呈剂量时间依赖性,MPA可以呈剂量依赖性抑制高糖环境下MCs分泌TGF-β1,各组之间有统计学差异（P〈0.05）。结论：MPA可以通过抑制高糖环境下MCs的增殖和TGF-β1的分泌,从而抑制系膜外基质增多、系膜区扩张,有效阻止细胞外基质积聚,从而防止肾小球硬化,延缓DN的发展。     

肾疏宁对体外培养大鼠腹膜间皮细胞AQP1表达的影响

目的：探讨肾疏宁对体外培养大鼠腹膜间皮细胞水通道蛋白1表达的影响。方法：原代培养大鼠腹膜间皮细胞、鉴定后传至第3代后分为5组：空白血清组、1.5%腹膜透析液组、4.25%腹膜透析液组、1.5%腹膜透析液＋肾疏宁含药血清组、4.25%腹膜透析液＋肾疏宁含药血清组。分别采用ELISA酶联免疫法、荧光定量PCR检测水通道蛋白1的表达。结果：1.5%PDS组、4.25%PDS组、1.5PDS%＋肾疏宁含药血清组、4.25%PDS＋肾疏宁含药血清组各组均与空白血清组比较AQP1表达指数均增高（P〈0.05）。结论：证明肾疏宁含药血清有上调体外培养大鼠腹膜间皮细胞上水通道蛋白1的表达的作用。     

肾小球硬化中肾小管间质细胞表型转化及肾疏宁的干预作用

目的 :探讨肾小球硬化大鼠肾小管上皮细胞及间质成纤维细胞的表型转化情况及中药复方肾疏宁的作用。方法 :SD大鼠随机分为假手术组、模型组、模型组 +肾疏宁治疗组、模型组 +苯那普利治疗组。采用单侧肾切除并阿霉素尾静脉注射的方法建立大鼠肾小球硬化模型 ,8周末光镜及透射电镜观察肾组织病理 ,免疫组织化学染色法观察大鼠肾小管上皮细胞及间质成纤维细胞α -平滑肌肌动蛋白 (alphasmoothmuscleactin ,α -SMA)和转化生长因子 - β1(transforminggrowthfactorβ1,TGF - β1)表达情况 ,用计算机病理图像分析软件检测肾小管间质α -SMA和TGF - β1染色阳性相对面积 ,和肾间质纤维化相对面积。同时观察肾疏宁对肾小球硬化大鼠体重、尿蛋白、血总蛋白、白蛋白、尿素氮、肌酐的影响。结果 :假手术组大鼠肾小管间质α -SMA少量表达 ,TGF - β1微量表达 ,肾小球硬化模型组大鼠肾小管间质α-SMA明显阳性表达 (P <0 .0 1) ,TGF - β1显著阳性表达 (P <0 .0 1) ,肾小管间距加宽 ,肾间质纤维化和大量淋巴细胞和单核细胞浸润 ,血白蛋白、总蛋白明显降低 (P <0 .0 1) ,尿蛋白、血尿素氮、肌酐明显升高(P <0 .0 1) ,肾疏宁治疗组和苯那普利治疗组 2 4h尿蛋白排泄量、血尿素氮、肌酐明显降低 (P <0 .0 1) ,肾小管间质     

肾疏宁对大鼠系膜增生性肾炎的肾小管间质损害的形态学影响

目的 :观察中药肾疏宁对系膜增生性肾炎 (MsPGN )的肾小管间质损伤的影响。方法 :制作大鼠MsPGN模型。予肾疏宁治疗并以肾炎康复片为对照组 ,观察肾脏形态学及 2 4h尿蛋白定量。结果 :肾疏宁能明显减轻MsPGN大鼠的蛋白尿 ,减轻肾组织病理病变尤其是肾小管间质损伤 ,且对损伤的肾组织有修复作用。与模型组相比 ,有显著性差异 (P <0 .0 1) ,与肾炎康复片组相比 ,有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;与正常组相比 ,无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 :肾疏宁能降低尿蛋白、保护肾功能、减轻MsPGN的肾小球病变及肾小管间质损伤。     

金雀异黄素对5/6肾切除鼠肾脏的保护作用

目的：探讨金雀异黄素对5/6肾切除鼠肾脏的保护作用。方法：将5/6肾切除鼠分为金雀异黄素组（Gen）和对照组（Con）,同时设假手术组（Sham）为正常对照。检测各组术前、术后第4、8周各组尿蛋白、血肌酐、尿素氮、血白蛋白、总蛋白等指标,观察第8周肾组织的病理改变情况,采用Rajj半定量方法值评估肾小球硬化指数。应用免疫组化方法检测肾组织中纤维连接蛋白（FN）和Ⅳ型胶原（ColⅣ）原沉积情况。分别采用RT-PCR法和WesternBlot法检测肾组织中转化生长因子-β1（TGF-β1）mRNA转录以及蛋白质表达情况。结果：与对照组相比,金雀异黄素组尿蛋白排泄量明显减少,血肌酐、尿素氮水平下降（P〈0.01）。肾小球硬化程度减轻,肾小球内FN和ColⅣ沉积显著减少。TGF-β1mRNA及其蛋白质表达明显减弱（P〈0.05）。结论：金雀异黄素对5/6肾切除鼠肾脏病变有部分保护作用,其机制可能与其减少细胞外基质（ECM）蓄积、抑制TGF-β1的表达有关。     

MTT检测肾疏宁含药血清对大鼠腹膜间皮细胞的作用

目的：以获取肾疏宁含药血清干预大鼠腹膜间皮细胞的最佳药物剂量及时间。方法：采用胰酶消化的方式体外培养大鼠腹膜间皮细胞鉴定成功后分组（空白血清组、不含药大鼠血清组、肾疏宁低剂量组、肾疏宁中剂量组、肾疏宁高剂量组）后采用MTT检测方法检测肾疏宁含药血清时大鼠腹膜间皮细胞的作用。结果：含药血清低、中、高剂量组两两比较差异有统计学意义（P〈O．001）;肾疏宁含药血清是细胞OD值的影响因素;空白血清组、不含药大鼠血清组与肾疏宁低剂量组两两比较差异无统计学意义（P〉0．05）;不同作用时间的（P〈0．001）,故认为不同作用时间也是OD值的影响因素。12h与24h时间段比较,差异有统计学意义（P〈0．01）;12h与36h时间段比较,差异有统计学意义（P〈0．01）;24h与36h时间段两两比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：肾疏宁含药血清作用于大鼠腹膜问皮细胞后,MTT检测其OD值,剂量组以肾疏宁中剂量组最有意义,作用时间以24h最有意义。     

肾纤康汤对系膜增生性肾小球肾炎患者血清层粘连蛋白及Ⅳ型胶原的影响

目的：探讨经验方肾纤康汤对系膜增生性肾小球肾炎（Mesangial Proliferative Glomerulonephritis MsPGN）患者血清细胞外基质（Extacelluar Matrix ECM）成分的抑制作用。方法：60例MsPGN患者随机分成肾炎对照组、苯那普利组和肾纤康组，治疗前后采用放射免疫法检测血肖层粘连蛋白（Laminin LN）和Ⅳ型胶原（Collagen Ⅳ Col-Ⅳ）并观察各组差异。结果：MsPGN患者血清LN、Col-Ⅳ水平显著高于健康对照组（P＜0.01）。肾纤康汤能明显下调MsPGN患者血清LN和Col-Ⅳ水平（P＜0.01），其作用强度珉本那普利相近（P＞0.05）。结论：肾纤康汤能减少MsPGN患者血清LN、Col-Ⅳ的水平，其效果和作用机制有待于进一步的研究。     

Effects of Sirolimus on Human Mesangial Cells

Mesangial cell (MC) proliferation and production of extracellular matrix or loss of MC are both central findings in a number of renal proteinuric diseases. However, the role of MC as components of the glomerular filtration barrier and whether MC alterations induce changes in the glomerular filtration barrier leading to proteinuria are still matters of debate. The effects of Sirolimus (SRL) in proteinuric nephropathies is controversial: some papers have indicated a reduction and others, an increase in proteinuria after sirolimus treatment. Considering the pivotal role of MC in the pathogenesis of many chronic nephropathies, we evaluated the effect of SRL on cultured human MC. We treated primary human MC cultures with SRL, or platelet-derived growth factor (PDGF) or SRL + PDGF, or dimethylsulfoxide, the SRL vehicle, as a control. PDGF was used to activate MC. After 48 hours treatment, MC showed a significant growth increase that was significantly reduced by SRL (P < .01). Apoptosis, determined by the TUNEL assay and flow cytometry, was not modified by the treatments at 24 hours. SRL treatment increased significantly the number of α-smooth muscle actin-positive cells compared with controls (P < .05). Cells treated with SRL and SRL + PDGF showed significant changes in morphology with increased mean cell surface, perimeter, and maximum diameter (P < .01) but not protein content. Furthermore, MC treated with SRL showed decreased migration through polycarbonate membranes.The changes induced by SRL may help to explain some of the in vivo effects observed in SRL-treated patients.     

保肾片对系膜细胞机械性伸展诱导的增殖因子和细胞外基质成分的影响

目的：在肾小球硬化的进展中，肾小球内压升高是一种主要的启动因子，小球内压升高能增加系膜细胞的伸展强度。本研究探讨培养的大鼠系膜细胞中，机械性伸展对TGF－β和细胞外基质成分mRNA表达的影响，以及中药保肾片的抑制作用。方法：用机械性伸展装置刺激培养的肾系膜细胞，并在培养液中加入喂服中药保肾片大鼠的血清，用Northern blot分析TGF－β1、3及I型、Ⅳ型胶原mRNA的表达。结果：机械性伸展以时间依赖性方式刺激TGF－β1和TGF－β3的mRNA表达，同时也发现机械性伸展能诱导系膜细胞外基质的主要成分I型、Ⅳ型胶原及纤维结合素的mRNA表达亢进，中药保肾片对系膜细胞机械性伸展诱导的细胞增殖因子TGF－β1和细胞外基质主要成分I型、Ⅳ型胶原的mRNA表达具有明显的抑制作用。结果：机械性伸展刺激能够诱导产生TGF－β1、3及I型、Ⅳ型胶原mRNA表达。中药保肾片延缓慢性肾衰竭的作用机理与抑制细胞增殖因子和细胞外基质成分mRNA的表达有关。     

抑抗灵对杂交瘤细胞分泌单克隆抗体的影响

目的 :观察抑抗灵片乙醇和水相提取物对杂交瘤细胞分泌单克隆抗体的影响。　方法 :将复方中药抑抗灵的乙醇和水相提取物分别加入细胞培养液中 ,再分别加入分泌人 μ链单克隆抗体细胞株、分泌A组轮状病毒共同抗原单克隆抗体细胞株、分泌HCVC33单克隆抗体细胞株和分泌白色念珠菌胞浆抗原的单克隆抗体细胞株 ,在37℃含有 10 %CO2 培养 96h ,取培养上清测定单克隆抗体含量。　结果 :抑抗灵乙醇提取物在 8.1～ 32 .5g/L、水提取物在 46 .0～ 183.8g/L、水提取物浓缩液在 5 2 .1～ 2 0 8.2g/L范围内 ,对培养的杂交瘤细胞分泌单克隆抗体能力有明显的抑制作用。　结论 :中药抑抗灵提取物在一定的剂量范围内 ,有抑制抗体分泌细胞分泌抗体作用 ;抑抗灵的乙醇提取液的抑制作用似更加显著。     

灯盏花注射液对ET-1诱导的大鼠系膜细胞增殖的影响

目的:探讨灯盏花注射液对内皮素1(ET-1)诱导的大鼠系膜细胞(MC)增殖的影响.方法:在大鼠系膜细胞原代培养成功的基础上,应用MTT法和流式细胞仪观察灯盏花注射液对ET-1诱导的MC增殖和细胞周期的影响.结果:(1)ET-1(10-10～10-6mol/L)能以一定的剂量方式刺激MC的增殖,以10-8mol/L时作用最强;而灯盏花注射液(45、90、180、360mg/L)能以一定的量效关系抑制ET-1诱导的MC增殖.(2)ET-1(10-9～10-7 mol/L),能增加S期细胞百分数,减少G0/G1期细胞百分数;而上述不同浓度的灯盏花注射液则能增加G0/G1期细胞百分数,减少S期细胞百分数,均呈一定的量效关系.结论:灯盏花注射液能抑制ET-1诱导的系膜细胞DNA合成,延迟细胞周期进程,抑制MC增殖,从而减轻或延缓肾小球硬化进程,可能是其防治肾脏疾病的机制之一.     

高糖刺激下大鼠肾脏系膜细胞Smad7的表达及姜黄素对其表达的影响

目的：观察高糖刺激下大鼠肾脏系膜细胞（MC）smad7的表达及姜黄素对Smad7表达的影响。方法：MC分6组，对照组给予正常培养液，4组给予含30mmol／L葡萄糖的培养液，分别于6、12、24、48h后收集细胞，另1组给予含30mmol／L葡萄糖和33．33μmol／L姜黄素的培养液共孵育6h后收集细胞。分别用逆转录多聚酶链反应（RT—PCR）和Western杂交分析法检测各组系膜细胞Smad7 mRNA和蛋白的表达情况。结果：正常MC有丰富的Smad7 mRNA表达，高糖刺激后表达明显增加，于6h达到高峰，Smad7蛋白的变化趋势与mRNA相同。MC加姜黄素共孵育后，Smad7 mRNA表达增加，高糖刺激6h组加或不加姜黄素，其吸光度相对值分别为1．113±0．124、2．235±0．356，Smad7蛋白吸光度值分别为12556±1335、24336±1866。结论：高糖刺激下，系膜细胞Smad7mRNA和蛋白表达呈时间依赖性，姜黄素可诱导高糖刺激下的系膜细胞Smad7表达，从而抑制转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）目的基因的转录。     

白细胞介素-13对肾小球系膜细胞增殖及细胞周期的影响

目的：探讨白细胞介素—13(IL—13)对肾小球系膜细胞(MC)增殖及其细胞周期的影响。方法：用甲基偶氮唑法(MTT)测定MC增殖，流式细胞术分析细胞周期。结果：IL—13在1ng／ml、5ng／ml、10ng／ml、100ng／ml浓度范围呈剂量依赖性抑制5％FCS培养的和脂多糖(LPS)诱导的MC增殖，抑制率分别为19．8％和29．23％、24．35％和37．05％、30．03％和46．6％、46．93％和55．23％。IL—13作用MC48h，使MC较多滞留于G1期，而S期细胞减少。结论：IL—13通过参与细胞周期的调控而抑制MC增殖。     

Biological Effects of Lentivirus-Mediated shRNA Targeting Collagen Type I on the Mesangial Cells of Rats

Aim: To investigate the effects of lentivirus-mediated shRNA targeting collagen type I on the mesangial cells of rats and the feasibility of lentivirus-mediated shRNA delivery through renal parenchyma injection. Methods: Anti-collagen type I shRNA lentiviral vector was constructed, and rat mesangial cells were transfected with transfection enhancer (control group), blank lentiviral vectors (pSC-GFP group), and pSC-GFP/Col I lentiviral vectors (pSC-GFP/Col I group). Transfection efficiency and cell cycle were determined by flow cytometry. RT-PCR and Western blot were performed to detect the mRNA and protein expressions of Col I. Cell proliferation was evaluated by 3-(4,5)-dimethylthiahiazo-3, 5-di-phenytetrazolium-romide (MTT) assay and direct counting, and apoptosis was detected using AnnexinV/PE staining. The feasibility of renal parenchyma injection of lentiviral vectors was assessed. Results: The transfection efficiency was 75.42%. The expressions of collagen type I in pSC-GFP/Col I group was markedly decreased when compared with the other two groups. PSC-GFP/Col I group was higher than pSC-GFP group in the inhibition efficiency of mesangial cell after transfection. Results revealed that pSC-GFP/Col I transfection induced apoptosis to a certain extent. The proportion of cells in G2/M phase in pSC-GFP/Col I group and pSC-GFP group was higher than that in control group after of transfection. Moreover, cells arrested in S phase were markedly increased. Our results also revealed renal injection of lentivirus-mediated shRNA was feasible. Conclusion: Lentivirus-mediated shRNA targeting collagen type I could stably and efficiently transfect rat mesangial cells and significantly suppressed collagen type I expressions with acceptable safety. Renal injection of Col I lentivirus-mediated shRNA was also feasible.