重组CHO细胞培养过程中代谢产物对细胞分泌HBsAg的影响

为了获得重组CHO细胞培养的最佳条件，使其能连续高效表达HBsAg，以含不同量谷氨酰胺的DMEM溶液培养重组CHO细胞，测定了不同阶段氨基酸、氨、乳酸含量及HBsAg滴度。结果表明谷氨酰胺的分解产物氨与乳酸均能抑制细胞的生长和分泌HBsAg，减少细胞培养液中的谷氨酰胺用量可使HBsAg分泌量增加。     

硫酸化魔芋葡甘低聚糖的抗乙肝病毒作用

目的体外观察硫酸化魔芋葡甘低聚糖(HOGS)抗乙肝病毒(HBV)的作用。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和ELISA法,研究HOGS对HepG2-2.2.15细胞细胞毒性作用及其分泌HBsAg、HBeAg的影响。采用荧光探针定量PCR检测HOGS对HepG2-2.2.15细胞HBV-DNA复制的影响。结果HOGS在0.125~1mg/mL浓度范围对HepG2-2.2.15细胞没有明显的细胞毒性作用,细胞的半数中毒浓度(TC50)为1.4753mg/mL;并且可明显抑制HepG2-2.2.15细胞HBsAg的分泌,其半数有效浓度(IC50)为0.0268mg/mL,治疗指数达5.52;对HBV-DNA也有一定的抑制作用。结论HOGS具有一定的体外抗HBV作用。     

用牛乳头状瘤病毒载体在小鼠细胞中稳定表达含前S2蛋白的HBsAg

adr亚型乙型肝炎病毒(HBV)DNA的BglⅡ大片段(2.8千个碱基)含有HBsAg的前S2和S区。将其插入含有新霉素抗性基因(新霉素磷酸转移酶基因)的牛乳头状瘤病毒载体。该载体还含有SV40拼接和聚(A)附加信号以及小鼠金属硫因启动子。将该DNA重组体转染小鼠C127细胞,建立起一个分泌大量含有前S2蛋白的22nmHBsAg颗粒的稳定的转化细胞系(MS128)。该细胞系以1～4μg/ml/天(18μg/10~7细胞/天)的平均速度分泌HBsAg,并稳定持续51天。分泌的HBsAg颗粒具有多聚人血清白蛋白(pHSA)受体。用免疫沉淀法和聚丙烯酰胺凝胶电泳分析显示,分泌物有22K、26     

甘草酸抗乙肝病毒的作用机理

甘草的主要成分在日本广泛用于治疗慢性乙型肝炎。它改善肝功能,有时也可使肝炎完全治愈。本文考察了甘草酸在体外对乙肝表面抗原(HBsAg)(向细胞外)分泌的影响,并对其作用机理作了阐明。甘草酸抑制 HBsAg 的分泌,并使之在PLC/CRF/S 细胞中积蓄且呈剂量相关。在     

能表达 HBsAg 的感染性牛痘病毒重组体

本文作者将乙型肝炎病毒 HBsAg 基因插入牛痘病毒基因组中,构成一种具有感染性的基因重组牛痘病毒。该重组病毒感染细胞后能合成并分泌 HBsAg,接种家兔后能迅速产生抗-HBs。首先将含有牛痘病毒胸苷激酶(TK)基因的 DNA 片段克隆到大肠杆菌质粒中,此     

用杆状病毒双穿梭载体表达系统表达HCV结构基因及HCV病毒样颗粒装配的初步观察

利用长RT-PCR技术，一次性克隆出HCV的结构基因C、E1、E2及部分5’UTR，经测序，验证了其正确性。将克隆基因插入杆状病毒双穿梭载体系统的转移载体，经转座并转染sf9细胞，得到重组病毒Bmhce，经SDS-PAGE和ELISA测定，表明HCV结构基因在重组病毒感染的SO细胞中表达；另外，电镜观察发现在重组病毒感染的SO细胞质的空泡(vesicle)中有HCV样颗粒的存在，说明HCV结构基因表达产物在SO细胞中组装出病毒样颗粒。     

基于IL-13/STAT6信号通路研究祛风宣痹方对哮喘气道黏液高分泌的影响

目的：探讨祛风宣痹方对哮喘小鼠气道黏液分泌及IL-13/STAT6信号通路的影响。方法：采用卵清蛋白（OVA）致敏建立小鼠哮喘模型。将24只Balb/c雌性小鼠随机分为对照组、哮喘组、祛风宣痹方组，祛风宣痹方组给予祛风宣痹方治疗，对照组和哮喘组给予等量生理盐水灌胃。采用肺组织HE染色、PAS染色观察肺组织病理形态变化以及气道黏液分泌，免疫组化实验观察黏蛋白MUC5AC、p-STAT6蛋白表达情况，ELISA实验检测小鼠血清中IL-13的含量。IL-13处理A549细胞模拟黏蛋白分泌病理模型（IL-13组），再加入祛风宣痹方进行干预（IL-13+祛风宣痹方组）；采用免疫荧光技术检测A549细胞中MUC5AC和p-STAT6的表达情况。结果：体内实验发现，与哮喘组相比，祛风宣痹方组小鼠肺组织中炎症细胞浸润及黏液高分泌情况均有明显改善，气道表面细胞MUC5AC、p-STAT6蛋白表达有所降低（P < 0.05）；小鼠血清中IL-13含量也明显减少（P < 0.01）。体外实验发现，与对照组相比，IL-13组A549细胞中MUC5AC及p-STAT6蛋白表达明显升高（P < 0.01），而IL-13+祛风宣痹方组细胞中MUC5AC及p-STAT6蛋白表达相对于IL-13组呈现明显下降趋势（P < 0.05）。结论：祛风宣痹方可减轻哮喘气道黏液高分泌，其作用机制可能与抑制IL-13/STAT6信号通路相关。     

1H-1,2,3-三氮唑乙酸酯衍生物的合成与体外抗乙肝病毒活性研究

目的 设计合成1H-1,2,3-三氮唑环衍生物，并测定其体外抗乙肝病毒活性。方法 以取代吲哚为原料，经取代、环加成反应得到14个目标化合物，通过¹H-NMR、¹³C-NMR和MS方法对化合物的结构进行表征，以HepG2.2.15为细胞模型进行抗乙肝病毒体外活性实验，测试化合物在体外对乙肝病毒e抗原(HBeAg)和乙肝病毒表面抗原(HBsAg)分泌的影响。结果与结论其中4个目标化合物能较好地抑制HBeAg和HBsAg的分泌，化合物2-(4-((5-氯-1H-吲哚-1-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙酸乙酯(IC₅₀=75.41μmol·L^-1,SI=9.23)能较好抑制HBV DNA。吲哚5号位含有吸电子基团卤素原子的化合物对抑制乙肝病毒的分泌效果较好。     

异香豆素对阿尔茨海默病Aβ蛋白的抑制作用及其机制

目的:探讨异香豆素对阿尔茨海默病Aβ的影响及其相应作用机制。方法:脂质体转染构建APP695高表达CHO细胞系;MTT实验检异香豆素对CHO/APP695的细胞毒作用;RT-PCR检测APP695的表达;Western-blot实验检测目的蛋白的表达;放射免疫法测定细胞培养上清Aβ含量;ELISA法测定γ-分泌酶活性变化。结果:RT-PCR和Western-blot检测显示CHO/APP695细胞高表达APP蛋白;0,10,20,40μmol·L-1的异香豆素处理CHO/APP695细胞24 h后,Aβ的分泌量从(16.4±1.4)pg.mL-1依次减低为(12.6±1.1),(9.4±0.8),(4.7±0.6)pg·mL-1,各组间差异有统计学意义(P<0.05);Western-blot结果显示异香豆素对CHO/APP695细胞APP蛋白的表达没有影响;ELISA测定显示10、20、40μmol·mL-1的异香豆素分别抑制了(21.4±1.6)%、(41.1±2.5)%和(73.6±5.2)%的γ-分泌酶活性;Western-blot结果显示异香豆素没有减少剪切的Notch1蛋白的表达。结论:异香豆素可以高效的抑制γ-分泌酶对APP蛋白的剪切,减少Aβ的生成,其抑制活性并不影响Notch1蛋白的剪切。