慢性乙型肝炎肝组织HBsAg和HBcAg的免疫组化检测及其意义

应用PAP和ABC法分别对54例慢性乙肝肝组织中HBaAg和HBcAg进行检测,分析了两种抗原在肝组织中的存在状态与肝脏病理变化及血清HBV复制指标间的关系。发现肝组织中HBV抗原检出率与肝炎病变程度呈负相关(P<0.05)。三种病理类型肝组织中,HBsAg均以胞浆型为主;膜型HBsAg主要见于CAH.ASH和CPH时,HBcAg以核型表达为主,面CAH时以浆膜型为主。膜型HBsAg和浆膜型HBcAg表达区易见到肝细胞坏死及炎性细胞浸润。还发现肝组织中HBcAg的检出与血清HBcAg和HBV-DNA密切相关(P<0.005)。上述结果提示:①肝细胞损伤可能并非HBV直接作用,而是机体针对HBV的免疫反应所致;膜型HBsAg和浆膜型HBcAg可能是肝细胞免疫损伤的靶抗原。②肝组织内HBcAg的存在是HBV复制标志。     

抗HBe阳性慢性肝炎患者的HBV感染状态研究

本文结合肝内HBsAg与HBcAg的表达情况对15例抗-HBe阳性慢性肝炎患者进行了肝细胞内HBV DNA原位杂交分析。发现其HBV感染状态可分为3种类型;①HBV活动复制型(4例,26.7％),肝内HBV DNA、HBsAg、HBcAg三者或HBsAg、HBcAg阳性;②HBV不完全复制或表达型(8例,53.3％),肝内HBV DNA、HBsAg阳性;③HBV非复制型(3例,20.0％),肝内HBV DNA及HBV标志均阴性。提示:在血清HBeAg向抗-HBe转换的病例中,HBV感染状态不尽相同,部分患者仍存在HBV活动性复制,少数病例的HBV复制已停止,半数病例处于由活动性复制相向非复制相过渡阶段。     

慢性肝病,肝癌及癌旁组织的免疫组织化学和组织化学研究

作者应用PAP组织化学法和组织化学染色法,对39例慢性肝病(CLD)、8例肝癌(HCC)和癌旁组织HBsAg、HBcAg表达和分布与CLD病变活动性的关系,以及乙肝病毒(HBV)与HCC发生的关系进行了探讨,并观察了CLD中网状纤维和胶原纤维的改变。发现慢活肝和活动性肝硬变以浆膜HBcAg和胞膜HBsAg表达为主,与活动性病变关系密切,观察到网状纤维较早出现于碎屑状坏死区。同时发现癌旁肝组织HBsAg和HBcAg检出数较高,且常见于双核肝细胞内,而肝癌为阴性。结果提示:浆膜HBcAg和胞膜HBsAg可能为CLD肝细胞免疫损伤的主要靶抗原,是引起CLD病变反复活动、呈慢性化的主要原因之一。结果也提示:HBV感染与HCC发生的关系极为密切。     

血清和肝组织内HBV复制状态与肝脏病变活动性关系的研究

经病理确诊的47例乙型肝炎患者血清中HBV DNA、HBeAg的检出率在各型肝炎之间无显著性差异(P>0.05)。肝组织HBsAg检出率为76.6％,其形态呈包涵体型、弥漫型和膜型为主分布者分别是36.1％、55.6％和8.3％。HBsAg呈弥漫型分布者各类型肝炎之间无显著性差异(P>0.05),提示肝细胞内HBsAg的表达仅反映HBV复制,而与肝组织病变无关。肝组织HBcAg检出率为27.7％,其形态呈核型和浆型分布者分别占38.5％和61.5％,浆型主要见于炎症明显的肝细胞内,而核型刚见于病变较轻的肝细胞中,反映了HBcAg的表达与肝组织活动性病变有关。     

重型慢性活动性肝炎患者急性加重的病因探讨

为探讨慢性活动性肝炎患者急性加重的病因,对15例患者进行肝细胞内HBV DNA(乙肝病毒脱氧核糖核酸)原位杂交研究,同时检查血清与肝内HBV标志及肝内HDAg。发现:①60.0％(9/15)患者存在HBV活动性复制或HBV复制重新激活,观察到表达浆膜型HBcAg肝细胞多紧紧毗邻肝细胞坏死灶;②20.0％(3/15)患者肝内HBsAg或(和)HBVDNA阳性,虽无HBcAg表达,但见到浆膜型HBsAg表达或含HBV DNA肝细胞与肝细胞坏死灶关系密切的表现:③13.3％(2/15)患者有HDV二重感染;④1例患者缺乏HBV感染标志。表明慢性活动型肝炎急性加重主要与HBV活动性复制、HBV复制重新激活或HBV感染持续存在有关,其次是HDV二重感染,少数病例可能存在HAV或HCV的重叠感染。     

血清HBV标志或HBsAg阴性慢性肝炎患者肝内HBV DNA原位杂交分析

本文采用原位杂交及免疫组化方法对23例血清HBV标志或HBsAg阴性慢性肝炎患者的HBV感染状态进行了研究。发现肝内乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA),HBsAg,HBcAg的检出率分别为43.48％、38.89％.16.67％;肝内有HBV感染依据者占65.22％,表明半数以上的血清HBV标志或HBsAg阴性患者肝内仍然存在HBV复制或基因表达。含HBV DNA的肝细胞及表达HBsAg,HBcAg的肝细胞大多毗邻灶状坏死和(或)碎屑样坏死灶,提示HBV复制及其产物表达与患者的慢性化、活动性坏死性炎症密切相关。     

肝细胞内HBV DNA、基因产物表达及其与肝细胞坏死灶的关系

应用原位分子杂交方法分析慢性乙肝患者肝细胞内乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBVDNA)。发现肝内HBV DNA复制部位往往与HBsAg或HBcAg表达部位相同;HBsAg与HBcAg同时在肝内表达时,数量多不均衡,提示编码HBsAg与HBcAg基因数量或复制活性不同;且观察到含HBV DNA的肝细胞数明显超过表达HBsAg、HBcAg的肝细胞数,提示胞浆HBV DNA一部分可能处于复制期,另一部分为非复制期:肝内HBV DNA复制与HBsAg、HBcAg表达对应的部位常紧紧毗邻肝细胞坏死灶,两者频率相似。     

慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平与肝组织病理及免疫组化水平的关系

目的探讨慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平与肝组织病理及免疫组化水平的关系。方法检测76例慢性乙型肝患者血清及肝组织外周血HBsAg，如BeAg和HBV DNA水平，常规病理和肝组织内的HBsAg，HBcAg。结果外周血中HBeAg阳性的患者中有91．49％HBV DNA阳性，而在如BeAg阴性的患者中，有58．62％的患者HBV DNA阳性，只有慢性乙型肝炎轻度患者的血清HBV DNA水平与其他各组差异有显著性（P〈0．05），而其余各组之间HBV DNA的复制水平均无明显差异，中度以上的血清HBV DNA多呈高水平分布。所有样本肝组织的HBsAg均为阳性，从肝组织不同HBsAg表达强度下，HBcAg表达的趋势来看，HBcAg有随着HBV DNA量的增加而表达增强的趋势。结论患者血清HBV DNA水平的变化可以反映HBV的复制水平而不能反应肝脏损伤程度。同时肝组织内的HBsAg检测更适合于低水平HBV感染的患者。     

肝细胞不典型增生与肝硬化和HBV的关系

用组织学和免疫组织化学方法探讨116例肝组织中的肝细胞不典型增生(LCD)发生率和乙型肝炎病毒(HBV)抗原的表达情况。发现肝细胞癌(HCC)伴肝硬化的LCD发生率为21/30(70％);单纯肝硬化为2/10(20％);HCC不伴肝硬化1/12(8.33％);正常对照1/64(1.56％)。试验组52例中46例呈HBsAg阳性,其中24例有LCD(52.17％)。而6例HBsAg阴性肝组织中均未发现LCD(P<0.05)。52例中22例HBcAg呈阳性反应,其中14例有LCD(63.64％);30例HBcAg阴性,10例有LCD(33.33％),前者LCD发生率明显高于后者(P<0.05)。结果还发现,HBsAg和HBcAg阴性肝硬化组织中LCD发生率(65.71％;77.78％)明显高于HBsAg和HBcAg阴性的肝硬化及HBsAg、HBcAg阳性的非肝硬化病例(P<0.01,P<<0.05)。表明LCD的发生与肝硬化和HBV均有关。     

PCR证明肝癌细胞有HBV—DNA复制

用恰跨过HBV-DNA的DR1、DR2两个缺刻的特制引物对21例肝癌及其癌旁组织作巢式PCR。其目的基因为HBV的复制模板cccDNA。同时作HBsAg、HBcAg免疫组化。结果4例癌组织、6例癌旁组织呈cccDNA阳性，其PCR产物在335bp处，条带清晰；阴性对照呈阴性，首次发现肝癌细胞内有cccDNA，证明了肝癌细胞有HBV复制模板，有复制。该4例cccDNA阳性中其癌细胞的HBsAg、HBcAg阳性率亦显著高于cccDNA阴性者。此外。HBV复制可发生于各种不同分化的肝癌细胞。     

HBeAg阳性母亲流产胎儿肝及肝外脏器HBV标志的检测

应用免疫金银染色法和原位核酸杂交技术同步检测9例HBsAg和HBeAg均阳性母亲流产胎儿的肝、胸腺、脾、胰中的HBsAg、HBcAg和HBV-DNA.结果,在肝(5例)、胸腺(1例)、脾(3例)、胰(2例)中测出HBsAg及HBV-DNA.其中2例胎肝细胞并呈HBcAg阳性,但在胸腺、脾、胰中未检出HBcAg.HBsAg分布主要为胞浆型,也见有膜型;HBV-DNA及HBcAg主要分布于胞浆内,偶见于核内.此种分布特点,提示HBV处于复制相.在肝脏中,HBsAg、HBcAg及HBV-DNA除见于胞浆外,还见于造血灶中造血细胞内.上述结果表明,HBV已感染胎儿肝脏、胸腺、脾脏、胰腺以及肝内造血细胞.     

慢性肝炎肝组织HBsAg及HBcAg表达与肝血管病变的关系

目的 研究慢性乙型肝炎(CHB)肝组织HBsAg，HBcAg表达类型及分布部位与肝血管和肝窦病变的关系。方法 选160例HBsAg，HBcAg免疫组化阳性的肝组织及31例CHB首、末2次随访的肝活检样品进行观察。结果 肝组织HBsAg及HBcAg表达有以下特点：①肝细胞HBsAg阳性主要分布于近血管区域，而强阳性者多分布于小血管、血管束及扩张的肝窦周围；②肝窦壁、肝血管内皮细胞、胆管上皮细胞HBsAg阳性与纤维化及肝硬变有关；③血清HBeAg，HBV-DNA与肝组织HBcAg一致者占74％，血清HBeAg及肝组织HBcAg转阴者末次肝活检肝血管病变改善。结论 循环中HBV以配体形式与肝血管及肝窦内皮细胞膜受体结合并在其中复制，引起炎症反应，进而破坏其结构，致一系列肝组织的病变。     

乙肝病人胃十二指肠粘膜HBsAg、HBcAg与胃部病变、血清HBVM的关系研究

目的：研究乙肝病毒与胃十二指肠粘膜病变及血清HBVM的关系。方法：应用HE染色、SP兔疫组化法检测63例乙肝病人胃十二指肠粘膜的HBsAg、HBcAg；应用酶标法检测其血清HBsAg、HBcAg，地高辛探针法检测HBV－DNA。结果：63例乙肝病人胃十二指肠粘膜均有不同程度的病理改变，以慢性浅表性胃炎多见，其次为溃疡病；胃十二指肠粘膜单项HB－sAg阳性率约31．7％，单项HBcAg阳性率约22．2％，一项以上阳性率约42．9％；胃十二指肠粘膜HBVM与病变程度有关，与血清相应的HBVM、HBV-DNA无关。结论：HBV可侵犯胃十二指肠粘膜，可能发生原位复制引发病理损伤。胃十二指肠粘膜HBsAg、HBcAg检测可作为判断HBV在体内复制、分布状态的新指标。     

肝内HBcAg与血清学指标的关系及慢性乙型肝炎发病机理的探讨

作者用ABC法和D-PAP法检测了59例慢性乙型肝炎患者肝内HBcAg及血清HBV-DNA、抗-HBe。结果,肝内HBcAg的检出和含量与肝损伤呈负相关趋势,提示CAH肝损伤程度不直接与HBV复制有关,且表明血清HBV-DNA能很好地反映肝内HBcAg存在情况,在血清中已出现抗-HBe的病人中可检出肝内HBcAg(39％)及血清HBV-DNA(45％),所以不能认为抗-HBe是HBV复制停止及传染性减弱的指标。     

肝细胞浆内HBV DNA与HBV感染状态关系的探讨

在原位杂交研究的基础上,本文对慢性乙肝患者胞浆型HBV DNA及肝内其它乙肝指标进行综合分析。发现胞浆型HBV DNA可分3种类型:①肝内同时有核衣壳蛋白(HBcAg)与包膜蛋白(HBsAg)表达,此与HBV复制的产物表达特征一致;②肝内仅有HBsAg表达,此与HBVDNA和宿主基因组整合后的表达特点相似;③肝内HBsAg、HBcAg表达均缺如,可能代表一种HBV非复制状态。由此表明在HBV非复制期,出现胞浆HBV DNA杂交信号可能系DNA RNA杂交体所致。     

晚期日本血吸虫病合并HBV感染的临床和病理研究

采用双桥PAP法检测155例晚期血吸虫病(晚血)患者肝内HBsAg和HBcAg,结果88例(56.8％)HBsAg或(和)HBcAg阳性,肝内HBAg阳性组的肝脏病理变化和临床表现显著比阴性组严重,晚血患者发生的门脉性肝硬化大多数与合并HBV感染有关。提示合并HBV感染可以明显加重晚血患者的临床表现和肝脏病变,甚至是晚血患者发生门脉性肝硬化的主要原因。     

各型乙型肝炎肝组织内HBV抗原的免疫组化检测

本文采用单克隆抗体，以较灵敏的免疫组化方法——IGSS法和ABC法检测了65例各型乙型肝炎患者肝活检组织中的HBsAg和HBcAg。两种方法的灵敏性近似。HBsAg 65例检出43例（66.1％），粗膜型HBsAg的检出与病情活动和严重程度一致。HBcAg 59例检出17例（28.8％），核型、浆型和膜型HBcAg均被检出，浆、膜型HBcAg的存在可能反映了病变的活动性。     

乙型肝炎核心抗原检测及意义的探讨

目的 探讨HBcAg检测的意义。方法 对临床常规乙型肝炎两对半的ELISA方法检测的结果 与HBcAg的检测进行比较。结果 共检测120例标本,HBsAg、HBeAg、HBcAg均阳性时,HBcAg的阳性率为85％;HBsAg、HBeAg为阳性时,HBcAg的阳性率为100％。结论 开展HBcAg的检测可以更全面准确地反映HBV的感染程度及复制情况。     

乙型肝炎病毒在卵巢组织中的表达、定位及临床意义

目的 通过对乙型肝炎病毒(HBV)感染者卵巢组织中HBsAg、HBcAg和HBV DNA的检测来观察HBV在卵巢组织中表达与定位情况.方法 对26例血清学HBV标志阳性的卵巢肿瘤患者用免疫组化方法检测卵巢活检组织HBsAg、HBcAg的表达;应用PCR技术对免疫组化阳性病例进一步检测卵巢组织HBVDNA.结果 26例卵巢组织中HBsAg阳性9例,HBcAg阳性9例,阳性率均为34.6%.总阳性率为46.2%(12/26);其中HBsAg和HBcAg同时阳性6人,占23.1%.阳性信号呈棕褐色细颗粒状弥漫分布.HBV血清学标志多项阳性者卵巢组织中HBsAg、HBcAg的检出率与HBV血清学标志单项阳性者差异无显著性.12例免疫组化阳性患者检出卵巢HBV DNA的有7例,阳性率为58.3%.结论 HBV感染者卵巢组织中可检出HB-sAg、HBcAg和HBV DNA,卵巢组织中HBsAg、HBcAg受血清HBV的变化影响小,与肝炎病变不呈平行关系.说明HBV可以感染与定位到卵巢组织,卵巢组织中检出HBV丰富和扩充了经典的母婴传播机制.     

杭州地区乙型肝炎患者血清中丁型肝炎抗体的检测

本文应用EIA法对184例HBsAg阳性的各型乙肝患者血清标本作了抗-HD的检测,结果3例抗-HD阳性,检出率为1.63%(3/184).其中慢活肝3.23%(1/31);慢迁肝2.86%(1/35);HBsAg无症状携带者0.85%(1/118).慢性肝炎患者中抗-HD检出率高于HBsAg携带者,可能提示HDV感染与乙肝慢性化密切相关,并发现检出的3例HDV感染者,其HBV复制指标受到不同程度抑制.