慢性丙型肝炎患者外周血单核细胞中丙型肝炎病毒RNA正,负链的…

选择ＨＣＶ基因组５＇非编码区的两对引物，利用逆转录巢式ＰＣＲ技术对３５例慢性丙型肝炎患的血清中正链ＨＣＶ ＲＮＡ、ＰＢＭＣ中正、负莲ＨＣＶ ＲＮＡ进行检测。结果血清中正链ＨＣＶ ＲＮＡ阳性率为６２．９％（２２／３５），ＰＢＭＣ中正链ＨＣＶ ＲＮＡ的阳性率为５４．３％（１９／３５），负链ＨＣＶ ＲＮＡ的阳性率为３４．３％（１２／３５）。同时对第２次ＰＣＲ的阳性产物进行限制性片段长度多态性分析（ＲＦ     

不同感染途径丙型肝炎患者HCV基因分型

目的探讨江苏省丙型肝炎病毒(HCV)基因型的分布及其与感染途径、肝功能等因素的关系。方法按照Simmonds分型方法对505例不同感染途径的丙型肝炎患者进行HCV基因型分型检测并分析年龄、性别、肝功能以及感染途径与HCV基因型的关系。结果505例HCV RNA阳性标本中,1a型8例(1.6%),1b型348例(68.9%),2型24例(4.8%),3型40例(7.9%),1b/2混合型67例(13.3%),1b/3混合型13例(2.6%),2/3混合型4例(0.8%),1a/1b混合型1例(0.2%);不同性别、年龄人群HCV基因型分布差异均无统计学意义(均P>0.05);不同HCV基因型人群丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)水平差异均无统计学意义(均P>0.05);不同感染途径人群HCV基因型分布差异有统计学意义(χ² =73.348,P <0.001)。结论江苏省丙型肝炎患者HCV基因型以1b型为主,1a型HCV在中国大陆地区流行程度有扩大趋势,HCV基因型与其感染途径有关。     

聚合酶链反应检测血浆及外周血单个核细胞中HCV—RNA的意义

目的 为提高丙型肝炎病毒ＲＮＡ（ＨＣＶ－ＲＮＡ）的率。方法 采用套式逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术,检测２００例抗－ＨＣＶ阴性,ＡＬＴ反复异常,临床疑似丙型肝炎患的血浆及外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果 ５２例患血浆中检出ＨＣＶ－ＲＮＡ,阳性率为２６％,７８例患ＰＢＭＣ中检出ＨＣＶ－ＲＮＡ,阳性率为３９％,其中两同时双阳性有２２例,阳性率为１１％。结论 同步检测丙     

逆转录多聚酶链反应技术及其在丙型肝炎病毒核酸检测中的研究进展

多聚酶链反应（PCR）技术首先由Mullis于1985年发明建立。1990年,Weiner 等将该技术用于丙型肝炎病毒核酸（HCV RNA）的检测。     

丙型肝炎病毒成外周血单个核细胞中复制状态的研究

采用套式逆转录ＰＣＲ方法检测２６例题内型肝炎及丙型肝炎病毒携带者的血清，外周血清单个核细胞及其末次洗液中的ＨＣＶＲＮＡ。结果２６例血清中正链ＨＣＶＲＮＡ全部阳性；外周血单个核细胞中正链ＨＣＶＲＮＡ２２例阳性、负链ＨＣＶＲＮＡ１５是性；末次洗液中正链ＨＣＶＲＮＡ全部阴性。说明ＨＣＶ不仅感染ＰＢＭＣ而且在其中复制，与丙型肝炎的复发、慢性化及干扰素治疗的疗效不佳有关。     

慢性丙型肝炎患者自身抗体检测分析

自1989年Esterban首次在自身免疫性肝炎患者血清中检出丙型肝炎病毒(HCV)以来,HCV感染与自身免疫的关系受到众多学者的关注〔1〕。研究丙型肝炎与自身免疫的关系,将有助于探讨HCV的发病机制,对于丙型肝炎的临床治疗具有重要意义。本实验通过对117例慢性丙型肝炎患者血清中自身抗体的检测,比较与HCVRNA的关系,从而评价其在丙型肝炎诊断及治疗中的作用。1对象与方法1.1对象117例慢性丙型肝炎患者血清均来自2002～2005本院住院患者,其中男78例,女39例,年龄11～74岁,平均49.05岁,均符合第五届全国传染病与寄生虫病会议制订的肝炎诊断标准…     

聚合酶链反应检测血浆及外周血单个核细胞中HCV-RNA的意义

目的　为提高丙型肝炎病毒 RNA（HCV- RNA）的检出率。方法　采用套式逆转录聚合酶链反应 （RT- PCR）技术 ,检测 2 0 0例抗 - HCV阴性 ,AL T反复异常 ,临床疑似丙型肝炎患者的血浆及外周血单个核细胞 （PBMC）中 HCV- RNA。结果　 5 2例患者血浆中检出 HCV - RNA,阳性率为2 6 % ,78例患者 PBMC中检出 HCV- RNA ,阳性率为 39% ,其中两者同时双阳性有 2 2例 ,阳性率为 11%。结论　同步检测丙型肝炎患者血浆及 PBMC中 HCV- RNA,在避免漏诊 ,提高临床诊断率及指导医生治疗方面是很有必要的 ,同时在研究其发病机理中有着一定意义。     

人工合成丙型肝炎病毒核心区多肽检测抗－HCV的初步研究

应用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测人工合成ＨＣＶ核心区多肽（ＨＣＶ－Ｐ（２５））的抗原性，结果表明：Ｐ（２５）优于参照ＣＰ（１０）和ＳＰ序列合成的多肽片段，与美国第二代抗－ＨＣＶＥＬＩＳＡ试剂盒比较，敏感度为９２．５９％．特异度为９４．４４％，总符合率为９３．３３％。用其检测输血后肝炎，其结果与国内第二代抗－ＨＣＶＥＬＩＳＡ基本相同．但优于Ｃ１００－３．且重复性和线性均较好。因此．可单独或合并非结构区抗原用于抗－ＨＣＶ检测     

ELISA联合RT-nPCR检测慢性丙型肝炎病毒感染者结果分析

目的对比酶联免疫吸附试验(ELISA)和逆转录套式聚合酶链反应(RT-nPCR)检测慢性丙型肝炎病毒感染者血清抗-HCV和HCVRNA结果。方法2005年5月对河北赵县某农村单采血浆还输血细胞HCV感染者133人及健康对照52人共185人采集空腹静脉血。该感染人群于1990年前单采血浆还输血细胞时感染、1993年被现场调查、血清生化指标及病原学标志检查确诊为HCV感染者、2002年追踪调查仍明确诊断者。用ELISA法检测抗-HCV,用RT-nPCR检测HCVRNA。结果①185份血清标本中,抗-HCV和HCVRNA均阳性者92份,占49.73%;抗-HCV阴性、HCV-RNA阳性者18份,占9.73%;抗-HCV阳性、HCV-RNA阴性者22份,占11.89%,两者均阴性53份,占28.65%。两种方法检测结果一致符合率为78.38%[(92+53)/185],检测不一致率差异无显著性(配对χ2=0.40,P>0.05);②ELISA法检测慢性HCV感染者的灵敏度为82.71%,特异度为92.31%,漏诊率为17.29%;RT-nPCR检测的灵敏度为81.20%,特异度为96.15%,漏诊率为18.80%,两种方法检测灵敏度差异无显著性(χ2=0.102,P>0.05);③并联试验检测其灵敏度为96.75%,特异度为88.76%,其灵敏度明显高于单一ELISA法82.71%(χ2=9.62,P<0.01)。结论单独用ELISA法检测抗-HCV约有17%的漏检率,同时用RT-nPCR检测HCVRNA,可明显提高HCV感染者的阳性检出率。     

丙型肝炎病毒F蛋白的发现及其特性

目的丙型肝炎病毒(HCV)F蛋白是近年来在感染HCV的患者血清中发现的一种蛋白，是由HCV核心蛋白编码序列在翻译时发生核糖体读码框移化(-2／ 1)产生的，主要位于胞浆中，与内质网相连，推测它在此发挥功能；F蛋白能诱导宿主的体液免疫应答及T淋巴细胞介导的特异性细胞免疫应答。本文就有关HCV F蛋白的发现及其特性进行综述。     

我国部分地区丙型肝炎病毒5’端部分基因序列的比较

目的：测定我国部分地区丙型肝炎病毒（HCV）分离株的5’端部分cDNA序列,研究其基因型以及变异特点,为丙型肝炎的治疗和预后判断提供参考依据。方法：用反转录套式聚合酶链反应（RT-nPCR)法和5’NCR区引物对我国部分地区9株HCV RNA阳性血清进行扩增,坟增产物为256bp,将其纯化连接到PGEM-T载体上,然后进行测序,并与已发表的50株HCV全序列的相应序列比较,并用种系发生法分析。结果：该9株HCV5’NCR核苷酸序列的同源性为93.0%-99.6%,其中7株之间的同 源性为98.8%-99.6%,另两株为99.6%。同其它50株同源性比较结果提示,7株属1b型,2株属2a型,种系发生法分析也支持这一结果。变异分析结果表明,同一亚型的核苷酸变异特点相似。结论：该9株HCV分离株分属1b型和2a型,该区同源性较高,但同一亚型的核苷酸变异特点相似。     

HCV-RNA的荧光定量PCR检测

丙型肝炎病毒（HCV）感染是导致慢性肝炎的主要原因,据估计约80%的HCV感染会发展为慢性化,其中近20%的患有可能进一步发展成肝硬化,而肝硬化患发展成肝癌的机率为1.5%～4%.因此,对于HCV感染的早期诊断和治疗非常重要.近几年采用荧光定量聚合酶链反应法（Fluorescent Quantitative Polymerase Chain Reaction,FQ-PCR）对丙型肝炎的早期诊断、治疗期间抗病毒药物的疗效评价、感染人群的普查以及污染源的检测均有较高的使用价值.本研究应用FQ-PCR方法定量检则132例慢性丙型肝炎患血清中HCV-RNA的水平并与丙氨酸氨基转移酶（ALT）浓度及抗-HCV滴度进行比较,以探讨HCV-RNA定量检测的实际应用意义.     

丙型肝炎肝硬化患者单核细胞促炎因子与抑炎因子的表达

目的了解丙肝肝硬化患者单核细胞促炎因子与抑炎因子的表达。 方法选取2016年1月至2017年5月因丙肝肝硬化入住新疆维吾尔自治区人民医院感染内科的35例患者为丙肝组，健康体检者18例为对照组。常规检测两组患者生化、血脂、血常规等基线资料，提取外周血单核细胞予以培养并提取DNA，测定TNF-α、IL1-β、IL-12-β、IL-10、TGF-β和IL-4 mRNA转录水平及病例组血清HCV-RNA载量。 结果丙肝组中ALT、AST和TG水平高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；丙肝组中ALB、WBC和PLT低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者的TNF-α、IL1-β、IL-12β和IL-4水平无统计学意义(P>0.05)，IL-10和TGF-β的表达有统计学意义(P<0.05)。HCV-RNA载量与TNF-α、IL-12β呈正相关(r＝0.452，0.442；P<0.05)，与IL-10和TGF-β呈负相关(r＝－0.431，－0.437，P<0.05)。丙肝组TNF-α与IL1-β、IL-12-β表达呈正相关(r＝0.531，0.766，0.448，P<0.05)，TNF-α与IL-10、TGF-β呈负相关(r＝－0.732，－0.749，P<0.05)；IL1-β与IL-10、TGF-β呈负相关(r＝－0.438，－0.448，P<0.05)；IL-12-β与IL-10、TGF-β呈负相关(r＝－0.996，－0.999，P<0.05)。IL-10和TGF-β的表达呈正相关(r＝0.999，P<0.05)。 结论丙肝肝硬化患者单核细胞高表达IL-10和TGF-β。     

对套式多聚酶链反应检测丙型肝炎病毒核酸效果的评价

用套式多聚酶链反应和普通ＰＣＲ法检测丙型肝炎病毒核酸比较。ＮＰＣＲ溴化乙锭染色法结果与＾Ｐ标记探针核实结果完全一致，无漏检，也无假阳性，可不用＾Ｐ标记探针核实。ＮＰＣＲ法的敏感性为普通ＰＣＲ溴化乙锭染色法的２倍，为普通ＰＣＲ加探针法的１．１７倍。     

RNA干扰技术抗乙型、丙型肝炎病毒的新进展

乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）感染引起的慢性肝病严重影响人类健康,而防治此类严重肝病的关键在于抗病毒治疗,RNAi作为一种有效抵抗外来病毒入侵的机制,其在抗肝炎病毒上的应用有着巨大的前景,本文就近年来在RNAi抗HBV、HCV方面的研究进展进行综述.     

丙型肝炎患者外周血单核细胞中细胞因子信号传导因子的mRNA表达及意义

目的 探讨慢性丙型肝炎患者外周血单核细胞(PBMC)中细胞因子信号抑制因子表达及意义,为促使机体产生细胞免疫提供依据.方法 选取2010年6月-2012年3月就诊于温州医学院附属第三医院的50例慢性丙型肝炎患者为慢性丙型肝炎组,同时选取38例健康体检者为对照者组,抽取丙型肝炎患者和正常人的静脉血,用ELISA方法检测血清中细胞因子IL-2、IFN-γ的水平;RT-PCR法检测外周血单核细胞内SOCS1、SOCS3的mRNA表达.结果 慢性丙型肝炎组PBMC内的SOCS1和SOCS3的表达较对照组高(P＜0.05);外周血血清中IL-2和IFN-γ的水平均较对照组显著下降(P＜0.01).结论 丙型肝炎病毒上调PBMC内SOCS1和SOCS3水平可能使病毒逃避机体抗病毒反应.     

我国部分地区丙型肝炎病毒5′端部分基因序列的比较

目的 :测定我国部分地区丙型肝炎病毒 (HCV)分离株的 5′端部分cDNA序列 ,研究其基因型以及变异特点 ,为丙型肝炎的治疗和预后判断提供参考依据。方法 :用反转录套式聚合酶链反应 (RT -nPCR)法和 5′NCR区引物对我国部分地区 9株HCVRNA阳性血清进行扩增 ,扩增产物为 2 56bp ,将其纯化连接到PGEM -T载体上 ,然后进行测序 ,并与已发表的 50株HCV全序列的相应序列比较 ,并用种系发生法分析。结果 :该 9株HCV5′NCR核苷酸序列的同源性为93.0 %～ 99.6% ,其中 7株之间的同源性为 98.8%～ 99.6% ,另两株为 99.6%。同其它 50株同源性比较结果提示 ,7株属 1b型 ,2株属 2a型 ,种系发生法分析也支持这一结果。变异分析结果表明 ,同一亚型的核苷酸变异特点相似。结论 :该 9株HCV分离株分属 1b型和 2a型 ,该区同源性较高 ,但同一亚型的核苷酸变异特点相似。     

应用聚合酶链反应探讨丙肝病毒在胆石症患者胆囊组织中的表达

目的 探讨感染丙肝病毒在胆石症患者胆囊组织中的表达.方法 应用聚合酶链式反应技术（PCR）,对32例慢性丙肝伴胆石症患者的石蜡包埋胆囊标本进行HCV-RNA检测.结果 32例慢性丙肝伴胆石症患者的胆囊标本HCV-RNA阳性检出率为40.63%,20例非胆石症患者的胆囊标本HCV-DNA阳性检出率为15%.结论 提示丙肝病毒可在胆石症患者胆囊组织中表达,用PCR技术检测石蜡包埋的HCV-RNA是一种简便、可靠的方法.     

丙型肝炎病毒基因组不同区域的蛋白抗原性探讨

根据丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）蛋白的可亲性、柔韧性和亲水性合成了２３个除ＮＳ２区外覆盖几乎所有ＨＣＶ抗原位点区域（Ｃ、Ｅ、ＮＳ１、ＮＳ２、ＮＳ３）的多片段，从中筛选出一具较高抗原性的Ｃ区多肽ＳＰ１４，建立了较高灵敏度和特异度的抗ＨＣＶ检测方法。ＨＣＶＣ区多肽抗原性最高，依次分别为Ｅ／ＮＳ１、ＮＳ４、ＮＳ５区，ＮＳ２区抗原性最低。ＨＣＶ蛋白氨基酸位点５－２３、６５－８１、３８１－３９８、３８１－４８２、４８４－４８９、１６９４－１７３５、２３６０－２３８９处存在７个线性抗原决定簇位点。     

蒙古国人丙型肝炎患者HCV RNA检测及基因型的研究

目的通过检测丙型肝炎病毒基因分型,探讨蒙古国抗-HCV阳性患者血清中HCV基因型流行株特征。方法采用基因芯片法对蒙古国183例抗-HCV阳性患者血清标本进行基因型检测,同时检测相关病毒学及肝功能生化指标,分析基因型分布特点和临床意义。结果 183例抗-HCV阳性患者中HCV RNA阳性134例(73.2%),其中基因1b型68例(50.7%),2a型59例(44.0%),并有少量的1a、3a、1b+2a和其它3例混合型。结论抗-HCV阳性并非HCV感染直接标志,蒙古国感染HCV患者的基因型以1b和2a型为主,比例基本相当;基因型在性别上人群分布差异无统计学意义。