Detection of hepatitis B virus DNA in mononuclear blood cells

The Southern transfer hybridisation technique was used to test mononuclear blood cells for hepatitis B virus DNA. Viral DNA sequences were detected in mononuclear cells of 10 out of 16 patients with hepatitis B virus infection and in none of 21 normal controls. Blood contamination was excluded by the absence of hepatitis B virus DNA in the corresponding serum samples in all cases. Free monomeric hepatitis B virus DNA was found in three patients positive for hepatitis Be antigen (HBeAg) and one positive for anti-HBe, and integrated hepatitis B virus DNA was present in four patients positive for anti-HBe. In two other patients the small size of the samples did not allow a distinction between free and integrated viral DNA. The state of the virus in the mononuclear cells seemed to correlate with the HBeAg or anti-HBe state, as has been noted in the liver. These results indicate that hepatitis B virus may infect mononuclear blood cells, thereby expanding the tissue specificity of this agent beyond the liver, as has been reported for pancreatic, kidney, and skin tissue. They also suggest that hepatitis B virus infection of mononuclear cells might be related to immunological abnormalities observed in carriers of the virus.     

慢性乙型肝炎病人血液单核细胞中HBV标志物的检出

本文报告在慢性乙型肝炎38例的外周血单核细胞(PBMC)和T、B淋巴细胞中检测到HBV标志物阳性29例(76.3％)。其中17例病人的PBMC中HBsAg,HBeAg和HBV-DNA阳性者分别为4,2和14例。21例病人分离出T,B淋巴细胞,其中T细胞中HBsAg,HBeAg与HBV-DNA阳性分别为2,2和1例;B细胞中分别为3,6,1例。血清HBV标志物阳性的病人其PBMC中这些标志物的检出率(13/15例)明显高于血清抗HBc和抗HBe阳性的稳定期病人(3/7例)。提示HBV可能感染和损害慢性乙型肝炎病人的淋巴细胞,这也许是乙型肝炎病人免疫功能异常的原因之一。     

乙型肝炎携带者卵巢颗粒细胞中HBV DNA的检测

目的 探讨乙型肝炎病毒在女性乙肝携带者卵巢颗粒细胞中的感染情况.方法 6例女性乙肝携带者(HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+)的卵泡液提取颗粒细胞,制成涂片.应用特异性的经地高辛标记的乙肝病毒DNA探针,利用原位杂交检测颗粒细胞涂片.显色反应采用碱性磷酸酶系统,阳性信号呈紫蓝色.结果 6例患者的颗粒细胞中有3例检测到HBV DNA阳性信号,位于细胞核.结论 乙型肝炎携带的卵巢颗粒细胞内存在HBV DNA.女性乙型肝炎携带者存在经生殖细胞向子代传播乙型肝炎的可能性.     

慢性乙型肝炎患者和乙型肝炎病毒携带者外周血T细胞亚群的变化和意义

目的分析慢性乙型肝炎患者、乙型肝炎病毒携带者和正常人外周血T细胞亚群的差异,探讨乙型肝炎的发病机制与宿主细胞免疫功能的关系。方法收集2004年2月至7月在中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院肝炎门诊就诊的的慢性乙型肝炎患者29例、HBV携带者25例及健康献血员35例的外周血,使用流式细胞仪检测T细胞亚群,分析其差异及临床意义。结果慢性乙肝患者、HBV携带者和正常对照外周血CD4+T细胞计数分别为565±192、672±148和816±259;CD8+T细胞计数分别为491±225、445±157和609±177。与正常对照组比较,慢性乙肝患者和HBV携带者外周血白细胞、淋巴细胞、T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+CD28+T细胞、CD8+CD28+T细胞计数均减少,慢性乙肝患者NK细胞计数减少;与正常对照和HBV携带者相比,慢性乙肝患者CD8+CD38+T细胞和CD4+CD45RA-记忆/效应T细胞比例显著升高,CD4+CD45RA+62L+初始T细胞比例及计数均显著减少。结论慢性乙肝患者和HBV携带者体内存在T淋巴细胞亚群失衡和细胞免疫功能紊乱,这可能与乙肝病毒感染后慢性化相关。     

Th17与Treg在乙型肝炎致病机制中的作用

Th17细胞和Treg细胞是CD4^＋T细胞的新亚群,二者在分化发育、功能发挥等方面有着密切联系,并在乙型肝炎发病机制中起着不同的作用。有研究表明,Th17／Treg平衡失调可能参与了其异常免疫反应,而导致HBV持续感染或慢性炎症的形成。本文就Th17细胞／Treg在乙型肝炎发病机制中的作用进行扼要阐述。     

Hepatic microcirculatory disturbances in patients with chronic hepatitis B

目的：观察慢性乙型肝炎的肝脏微循环变化并探讨其发生机制。方法：对141例慢性乙型肝火病人进行肝活检,活检组织行光镜观察,其中53例还进行了电镜观察。结果：慢性乙型肝炎患,包括肝功能正常存在肝脏微循环障碍,在光镜下主要表现为肝窦腔内红细胞聚集,电镜下主要表现为肝窦毛细血管化。电镜观察的53例中有26例肝窦内皮细胞中发现Wiebel-Palade小体。淋巴细胞、枯否氏细胞及肝窦内皮细胞间发生密切联系。结论：慢性乙型肝炎患存在肝脏微循环障碍。肝窦内皮细胞中出现Weibel-Palade小体可能是肝脏微循环障碍发生的关键环节。     

慢性乙型肝炎患者T细胞亚群与自然杀伤细胞活性的临床观察

目的了解慢性乙型肝炎（慢乙肝）患者细胞免疫功能状态。方法应用流式细胞术对70例慢乙肝患者进行T细胞亚群和自然杀伤细胞活性的检测。结果慢乙肝患者CD3 细胞、CD4 细胞和自然杀伤细胞（NK）活性较对照组显著减低,CD8 细胞活性增高,CD4／CK8之值减小,并与疾病程度相关。HBeAg阳性与HBeAg阴性的患者比较,各项指标值变化有显著差异。结论慢乙肝患者存在细胞免疫功能紊乱,免疫指标的监测对于判断预后、合理选择治疗方法可能有指导意义。     

Hepatitis B surface antigen-specific CD8-positive T cell clones. Antigen specificity and interleukin-2 production.

Clones of hepatitis B surface antigen-reactive CD8+ and CD4+ T cells were obtained from peripheral blood mononuclear cells (PBM) of a hepatitis B immunized individual whose PBM proliferated when cultured with hepatitis B surface antigen (HBsAg). Lymphocytes were activated by culturing for 2 weeks with HBsAg and high concentrations of interleukin-2 (IL-2), then cloned in the presence of irradiated HBsAg-activated PBM and autologous Epstein-Barr virus (EBV)-transformed B cells, together with antigen and IL-2. All clones examined proliferated in an antigen-specific manner. Of 7 clones examined by flow cytometry, 4 were CD4+, CD8-; and 3 were CD4-, CD8+. Several clones produced IL-2 activity after stimulation with hepatitis B surface antigen. Since development of CD8+ T-cell clones specific for soluble antigens is difficult, the high frequency with which CD8+ cells were cloned in these experiments suggests that the cloning strategy employed might have general use for development of CD8+ clones. Availability of hepatitis B virus specific T cell clones of different phenotypes may help elucidate mechanisms of immunotolerance in hepatitis B infection.

     

慢性乙型肝炎外周血树突状细胞的功能障碍机制的初步探讨

目的:探讨慢性乙型肝炎者树突状细胞(DCs)的功能状态及机制。方法:以直接荧光法进行表型分析、CCK8法测定DCs对同种异体淋巴细胞的刺激作用、AnnexinV/FITC法测定细胞凋亡率进行分析。结果:慢性乙型肝炎患者外周血单核细胞经诱导分化形成的DCs,与正常人相比,表达协同刺激分子CD80、CD86水平均较低;刺激同种异体淋巴细胞增殖能力也低于正常人;DCs凋亡率明显增高。结论:慢性乙型肝炎患者外周血的DCs免疫功能处于抑制状态,而HBV感染导致的DCs凋亡增多可能是引起DCs功能障碍的原因之一。     

Adr型HBV全基因转基因小鼠DC和T细胞功能的研究

目的方法 :通过对分离Adr型HBV全基因转基因小鼠的脾脏淋巴细胞和树突状细胞 ,并研究其对ConA ,HBeAg ,ConA HBeAg刺激的应答能力。结果 :发现HBV转基因小鼠对ConA的应答基本正常 ,但对HBeAg ,ConA HBeAg的应答明显低于对照组 ,说明HBV转基因小鼠DC和T细胞对HBV存在特异性的免疫耐受。     

Th细胞极化群体在慢性乙型肝炎病毒感染中的作用

目的　了解慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者外周血中辅助性T细胞（Th）内干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-4（IL-4）和转化生长因子-β（TGF-β）的表达情况,以测定Th1/Th2 /Th3细胞的百分数,探明Th细胞各极化群体在慢性HBV感染中的作用.方法　常规分离外周血单个核细胞（PBMC）,在佛波脂（PMA）、钙离子导入剂伊屋诺霉素Ionomycin、细胞内转运阻断剂莫能星Monensin的刺激下,采用流式细胞分析术（FACS）对慢性HBV感染者外周血单个Th细胞内IL-4、IFN-γ和TGF-β的表达进行分析.结果　正常对照组,2.3%-18.6%的CD4+T细胞为Th1细胞,0.9%-9.2%为Th2细胞；0.7%-7.1%的细胞仅表达TGF-β, 为Th3细胞.在慢性HBV感染者外周血单个CD4+T细胞中,以Th0细胞居多；而Th1细胞则随着慢性乙型肝炎肝脏炎症活动的加剧而明显增多,在炎症活动明显的慢性乙型肝炎,其Th1百分数明显高于炎症活动呈静止状态的慢性乙型肝炎；Th2细胞在慢性HBV感染的不同阶段则较为恒定(P>0.05),但明显高于对照组(P<0.05).Th3细胞的百分数则随着肝组织炎症活动的加剧,其比例也明显减少(P<0.05),在无症状携带者（AsC）组,Th3细胞的百分数远高于慢性乙型肝炎组及对照组(P<0.05) .Th3细胞重叠于Th2细胞之中.结论　Th1细胞类因子与炎症活动呈正相关,Th2细胞可能与HBV感染的慢性化相关联.而Th3细胞与Th2细胞协同发挥负性免疫调节作用,并可能与慢性HBV感染的免疫耐受状态相关联.     

Th细胞极化群体在慢性乙型肝炎病毒感染中的作用

目的　了解慢性乙型肝炎病毒 (HBV)感染者外周血中辅助性T细胞 (Th)内干扰素 γ(IFN γ)、白细胞介素 4 (IL 4 )和转化生长因子 β(TGF β)的表达情况 ,以测定Th1/Th2 /Th3细胞的百分数 ,探明Th细胞各极化群体在慢性HBV感染中的作用。方法　常规分离外周血单个核细胞 (PBMC) ,在佛波脂 (PMA)、钙离子导入剂伊屋诺霉素Ionomycin、细胞内转运阻断剂莫能星Monensin的刺激下 ,采用流式细胞分析术 (FACS)对慢性HBV感染者外周血单个Th细胞内IL 4、IFN γ和TGF β的表达进行分析。结果　正常对照组 ,2 3% - 18 6 %的CD4 + T细胞为Th1细胞 ,0 9% - 9 2 %为Th2细胞 ;0 7% - 7 1%的细胞仅表达TGF β ,为Th3细胞。在慢性HBV感染者外周血单个CD4 + T细胞中 ,以Th0细胞居多 ;而Th1细胞则随着慢性乙型肝炎肝脏炎症活动的加剧而明显增多 ,在炎症活动明显的慢性乙型肝炎 ,其Th1百分数明显高于炎症活动呈静止状态的慢性乙型肝炎 ;Th2细胞在慢性HBV感染的不同阶段则较为恒定 (P >0 0 5 ) ,但明显高于对照组 (P<0 0 5 )。Th3细胞的百分数则随着肝组织炎症活动的加剧 ,其比例也明显减少 (P <0 0 5 ) ,在无症状携带者(AsC)组 ,Th3细胞的百分数远高于慢性乙型肝炎组及对照组 (P <0 0 5 )。Th3细胞重叠于Th2细胞之中。结     

Wa细胞膜上与乙型肝炎病毒的preS1特异性结合的受体样蛋白

本文对与乙型肝炎病毒外周蛋白ｐｒｅＳ１特异结合的Ｂ细胞来源的Ｗａ细胞膜受体样蛋白进行了研究，用麦芽糖结合蛋白－ｐｒｅＳ１－直链淀粉树脂亲和层析柱分离得到了与ｐｒｅＳ１特异性结合的Ｗａ细胞膜受体样蛋白质，抗麦芽糖结合蛋白－ｐｒｅＳ１的单克隆抗体Ｆ３５．２５结合Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证实确系膜蛋白与ｐｒｅＳ１的特异性结合，十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示，Ｗａ细胞膜上存在有三种不同的受体样蛋白，分子量分别为６００００，５６０００和４８０００．这表明在非肝细胞膜中也可能存在乙型肝炎病毒的特异性受体和直接感染途径。     

Th17/Treg细胞失衡与乙肝病毒感染相关性肝病的关系

HBV感染相关性肝病是我国乃至全世界的一种常见性传染性疾病、发病率高、病程长、预后差,目前乙肝相关性肝病发病机制并不完全明确,HBV持续感染与机体免疫应答紧密相关,同时HBV的持续感染是引起宿主免疫调节紊乱,导致不能有效清除病毒、病情迁延不愈的原因之一,加之Th17/Treg细胞失衡可能参与了乙肝相关性肝病异常免疫反应,从而导致乙肝相关性肝病炎症慢性化、肝组织纤维化、肝硬化和癌变的形成。本文就Th17/Treg细胞失衡与乙肝相关性肝病的相互关系进行了综述和展望。     

慢性乙肝患者外周血单个核细胞上TRAIL受体的表达及意义

目的:检测肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的受体在慢性乙肝患者外周血单个核细胞上的表达,并探讨其意义。方法:通过RT鄄PCR和流式细胞术,分别从RNA水平和蛋白水平检测30例慢性乙肝患者和20例正常人外周血单个核细胞TRAIL各受体的表达。结果:RT鄄PCR和流式细胞术均显示:死亡受体DcR1在慢性乙肝患者的表达显著低于正常对照组穴P<0.05雪熏其余受体的表达在两组间差异无显著性。慢性乙肝患者TRAIL各受体RNA水平的表达在各临床分期差异无显著性穴P>0.05雪;各受体的表达与患者的临床指标(ALT、AST、TBIL等肝功指标及血清HBV鄄DNA等乙肝病毒复制指标)无相关性。结论:HBV感染可引起外周血单个核细胞死亡受体DcR1的表达下调鸦这可能是HBV感染后的外周血单个核细胞凋亡过强并引起HBV感染慢性化的机制之一。     

应用显微图象计量方法研究肝硬变与病毒性肝炎的关系

乙型肝炎与非甲非乙型肝炎均可引起肝硬变,但这两型肝炎引起的肝硬变间有无差别,本文应用显微图象计量方法,免疫组化,组化方法进行研究.结果表明,乙型肝炎是引起混合结节型肝炎的主要原因之一,非甲非乙型肝炎引起的多属小结节型肝硬变。     

慢性乙型肝炎外周血自然杀伤细胞的变化及其与HLA-Cw基因型的关系

目的〓〖HTK〗探讨慢性乙型肝炎外周血自然杀伤细胞（NK细胞）和活化NK细胞数量的变化及其与HLA-Cw基因型的关系。〖HTW〗方法〓〖HTK〗采用流式细胞术检测30例急性乙型肝炎发病期患者、51例慢性乙型肝炎患者及41例正常对照外周血NK细胞和活化NK细胞的数量,并通过序列特异性寡核苷酸分型(PCR-SSO)技术进行HLA-Cw的基因分型。〖HTW〗结果〓〖HTK〗急性肝炎组的NK细胞和活化NK细胞的数量均较正常对照组增高［(22.62±3.70)% vs (19.03±4.91)%,(65.28±14.45)% vs (53.88±14.01)%,P＜0.05］,慢性乙型肝炎组的NK细胞和活化NK细胞的数量均较正常对照组降低［(14.36±1.07)% vs (19.03±4.91)%,(47.14±5.67)% vs (53.88±14.01)%,P＜0.05］,且急性肝炎组与慢性乙型肝炎组间差异有统计学意义（P＜0.01）;急性肝炎组与正常对照组间HLA-Cw位点各等位基因的基因型无统计学差异（P＞0.05）,HLA-Cw*03在慢性乙型肝炎组中基因频率明显高于正常对照组（P＜0.05）,且与活化NK细胞数量呈显著负相关（γ=-0.394,P＜ 0.05）。〖HTW〗结论〓〖HTK〗慢性乙型肝炎患者NK细胞功能低下,HLA-Cw*03基因型可能是通过影响NK细胞而导致HBV感染持续存在的原因之一。     

核苷类抗病毒药物阻断乙肝病毒母婴传播的研究进展

核苷类抗病毒药物能降低孕妇血中乙肝病毒载量,核苷类抗病毒药物联合新生儿接种乙肝免疫球蛋白(HBIG)、乙肝疫苗,阻断乙肝病毒母婴传播效果比新生儿单纯接种HBIG、乙肝疫苗的效果更好。孕妇和胎儿安全性等问题尚需深入研究。慢性乙型肝炎和携带病毒的孕妇可以考虑服用核苷类抗病毒药物,提高阻断乙肝病毒母婴传播的效果。     

慢性重症乙型病毒性肝炎2家系HLA-DRB1*1301(2)基因的遗传传递

目的:探讨影响重症乙型肝炎发生的宿主遗传背景因素,分析慢性重症乙型肝炎发生的基本规律,为慢性乙型肝炎患者的早期预防和诊断提供理论基础。方法:选择2例重症乙型肝炎患者,对其家系进行调查,并对家系成员进行HLA-DRB1* 1301(2)基因检测和HBV DNA全基因组克隆分析。结果:HLA-DRB1*1301(2)基因在子代传递过程中,其中1例重症乙型肝炎患者亲代和子1代均未发生重症肝炎;另1例重症乙型肝炎患者,亲代和子1代均有病毒持续存在。HBV DNA全基因组测序分析未见特殊变异。结论:在重症乙型肝炎发生中,除乙型肝炎病毒变异因素外,HLA-DRB1* 1301(2)等位基因可能起到重要作用,宿主多基因因素也可能参与了慢性乙型肝炎重症化的发生。     

人CD5+B细胞的研究进展

CD5 + B细胞由早期的前体细胞发育而来 ,不依赖骨髓 ,是一类具有重要功能的 B细胞亚群。在多种自身免疫性疾病和 B淋巴细胞系恶性肿瘤患者体内均有 CD5 + B细胞数量和 (或 )功能的异常。在艾滋病、肝炎、精神分裂症及肝损伤后再生过程中也有 CD5 + B细胞的异常改变 ,提示 CD5 + B细胞可能具有广泛的临床意义