红毛五加多糖对体外人胃癌细胞基因及细胞因子表达的影响

目的 探讨红毛五加多糖对胃癌的防治作用机制。方法 采用流式细胞仪检测其对癌基因及细胞因子蛋白表达的影响。结果 抑癌基因bax和细胞因子TGFβ1蛋白表达增加,而原癌基因bcl-2蛋白表达降低。结论 该多糖可能是通过抑制原癌基因,激活抑癌基因和细胞因子,从而诱导胃癌细胞凋亡。     

红毛五加多糖对体外人胃癌细胞的抑制作用及其作用机制研究

目的 研究红毛五加多糖对胃癌细胞的抑制作用及其作用机制。方法 检测细胞群体倍增时间以了解该多糖对胃癌细胞增殖的影响;使用流式细胞仪检测该多糖对抑癌基因ｐ５３、Ｆａｓ及Ｆａｓ－Ｌ蛋白的表达的影响。结果 红毛五加多糖３个样品均使胃癌组织群体倍增时间延长,且使抑癌基因ｐ５３蛋白表达增高;且ＡＧＰⅡ还使抑癌基因Ｆａｓ及Ｆａｓ－Ｌ蛋白表达增高。结论 该多糖抑制胃癌细胞的增殖,其抑癌机制与抑癌基因ｐ５３、Ｆａ     

珠子参体外诱导人肝癌细胞凋亡效应及机制研究

目的观察珠子参体外诱导人肝癌细胞凋亡效应并初探其分子机制。方法体外细胞培养采用人肝癌细胞株SMMC-7721,分为对照(BL)组、珠子参(PJ)组、二甲基亚砜(DMSO)组及5-FU组,采用电镜观察作用后肝癌细胞超微结构改变;流式细胞仪检测肝癌细胞周期和凋亡率;RT-PCR法检测癌基因c-myc、c-fos和抑癌基因p53、p21表达的变化。结果与对照组比较,电镜下珠子参组SMMC-7721细胞染色质浓缩,分解成大小不一有膜包绕团块,内含有新月形DNA物质及细胞器,形成凋亡小体;周期分析可见G0/G1期细胞阻滞,阻止了细胞向S期的转换,并引起细胞凋亡,凋亡率达38.34%;RT-PCR半定量分析珠子参能降低癌基因c-myc表达(P<0.05),增高抑癌基因p53和p21表达(P<0.05)。结论珠子参能诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡,部分作用机制可能与阻滞细胞停留在G0/G1,降低癌基因c-myc和c-fos表达,增高抑癌基因p53和p21表达有关。     

HPV-16 E6 siRNA与hIL-24基因联合诱导人宫颈癌Ca Ski细胞的凋亡

目的：观察HPV-16 E6 siRNA与hIL-24基因体外共转染，联合诱导人宫颈癌CaSki细胞凋亡的效应。方法：HPV-16 E6 siRNA与hIL-24基因的质粒载体分别以单独或联合的方式转染入宫颈癌CaSki细胞，随后利用RT—PCR技术检测细胞中HPV-16E6癌基因的mRNA水平变化；Western blot分析细胞中抑癌蛋白p53水平的变化；流式细胞技术分析细胞凋亡情况。结果：经HPV-16 E6 siRNA和hIL-24转染后细胞后HPVE6癌基因的mRNA水平均下降，其中联合转染组显著下降（P〈0，05）；抑癌蛋白p53水平均增高，其中联合转染组显著增高，细胞凋亡率均升高，其中联合转染组显著升高（P〈0．05）。结论：HPV-16 E6siRNA与hIL-24基因分别转染宫颈癌CaSki细胞后，均能抑制CaSki细胞中HPV-16E6癌基因的表达，使抑癌蛋白p53恢复活性，诱导宫颈癌CaSki细胞凋亡；两者联合别具有协同效应，能显著提高肿瘤细胞凋亡率。     

红毛五加多糖诱导体外人吸癌细胞凋亡的研究

目的 探索红毛五加多糖的体外抑癌机制。方法 采用体外细胞培养方法观察细胞形态学改变,采用流式细胞术检测细胞亡百分比及细胞周期改变。结果 红毛五加多糖使胃癌细胞出现凋亡的形态学改变。该多糖作用后在细胞周期直方图上出现凋亡峰,0．1mmol/L红毛五加多糖样品Ⅱ（AGPⅡ）作用36h、红毛加五多糖样品Ⅲ（AGPⅢ）作用48h后,凋亡细胞分别占11．2％和15．5％,并使细胞周期明显滞于G0／G1,具有时间一效应关系,且AGPⅡ的作用效果较AGPⅢ更为明显。结论 该多糖的抑癌机制与诱导细胞凋亡作用有关。     

白杨素对人胃癌SGC-7901细胞增殖与凋亡的影响

 目的 探讨白杨素（Chrysin,ChR）诱导人胃癌SGC-7901细胞株凋亡的作用及机制。方法 分别用10、20、40、80μM的ChR处理人胃癌细胞株SGC-790148h,采用MTT比色法检测ChR对SGC-7901细胞的增殖抑制效应;采用丫啶橙（AO）染色、流式细胞术检测ChR诱导SGC-7901细胞凋亡的发生;应用Western-blot法检测凋亡相关基因NF-κB、Bcl-2、Bax的蛋白表达,并用计算机图像分析软件进行半定量分析。结果 MTT比色法显示的10～80μM的ChR在体外对人胃癌SGC-7901细胞有增殖抑制率为：9.71%～53.64%,该作用呈浓度依赖性;AO染色荧光显微镜观察ChR在体外能诱导人胃癌SGC-7901细胞发生凋亡,出现早期凋亡细胞及凋亡小体;流式细胞术检测结果显示：ChR呈浓度依赖性地诱导SGC-7901细胞凋亡,凋亡率为2.35%-20.8%;Western-blot检测结果显示：凋亡相关基因Bcl-2、NF-κB蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调。结论 ChR对体外培养人胃癌细胞具有增殖抑制和诱导凋亡作用,呈浓度依赖性。ChR对人胃癌细胞增殖抑制和诱导凋亡作用机制可能与其抑制NF-κB活化、下调Bcl-2蛋白表达和上调Bax蛋白表达相关。     

红花多糖抑制PI3K/Akt信号通路诱导人胃癌细胞凋亡的研究

目的 探讨红花多糖通过抑制PI3K/Akt信号通路调控胃癌细胞凋亡的机制。方法 MTT比色法观察SPS对人胃癌SGC-7901细胞体外增殖的抑制作用,流式细胞仪(FCM)分析细胞凋亡,实时荧光定量RT-PCR法和Western Blot法检测蛋白激酶B(Akt)基因及蛋白的表达情况。结果 红花多糖在一定范围内以剂量依赖方式和时间依赖方式抑制SGC-7901胃癌细胞生长。流式细胞仪检测,SGC-7901细胞经红花多糖处理24 h,其早期凋亡率、细胞坏死或晚期凋亡率显著增加,呈现明显的剂量依赖性。Real-time PCR和Western Blot检测发现,SPS处理的细胞Akt基因及蛋白表达量明显下降。结论 红花多糖对人胃癌SGC-7901细胞体外增殖具有明显的抑制作用,该抑制作用具有一定的时间依赖性和剂量依赖性;红花多糖能够下调Akt mRNA表达,降低Akt和p-Akt蛋白的表达量,抑制Akt通路发挥抗肿瘤作用。     

抑癌蛋白与胃癌细胞增殖和凋亡的关系

为了探讨抑癌蛋白对胃癌细胞增殖和凋亡的影响，以阐明胃癌恶性生长的可能机理，选择８８例手术切除的胃溃疡和胃癌的蜡块标本，将ＢｒｄｕＴＰ掺入到ＤＮＡ的断端，结合抗Ｂｒｄｕ抗体放大信号，再用免疫组化的方法检测组织中的凋亡细胞。同时采用免疫组化方法检测这些组织中的ｐ２１、ｐ５３及ＰＣＮＡ的表达。结果显示，胃癌组织中的细胞增殖水平高而凋亡细胞减少。癌巢中很少有凋亡细胞。胃溃疡组织中凋亡的细胞明显多于胃癌组织。ｐ５３蛋白在胃癌中的检出率为３８．０％。ｐ２１蛋白在胃粘液腺癌及低分化、未分化型腺癌中检出率很低。结果表明，尽管胃癌组织中发现抑癌基因ｐ５３突变蛋白的表达水平增高，但并不能促使胃癌细胞的增殖，却可以增加癌细胞的凋亡。胃粘液腺癌和低分化、未分化型腺癌的抑癌蛋白ｐ２１的表达水平低下可能是该类癌细胞过度增生的原因之一。胃癌细胞凋亡机制障碍和增殖失控是胃癌细胞增生失控的基础     

X刀治疗大鼠C6脑胶质瘤诱发凋亡及抑癌基因p16蛋白的表达

 目的　为了探讨经X刀照射诱导C6脑胶质瘤凋亡及其抑癌基因p16蛋白的表达。方法　建立大鼠C6脑胶质瘤模型 ,经X刀照射后 ,采用TUNEL法检测细胞凋亡 ,免疫组化SABC方法检测抑癌基因p16蛋白表达的变化。结果　治疗组凋亡阳性细胞数明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ;p16基因在蛋白水平表达率也高于对照组 (P <0 .0 5 )。结论　X线可诱导C6脑胶质瘤细胞发生凋亡 ,抑癌基因 p16在辐射诱导凋亡中起重要的作用。     

维生素E琥珀酸酯通过氧化应激诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

目的：研究维生素E琥珀酸酯（vitamin E succinate,VES）是否可通过氧化应激来诱导胃癌细胞凋亡及其可能机制。方法：分别用5、10和20μg/ml的VES处理胃癌SGC-7901细胞24h,同时设阴性对照组和甘露醇（活性氧抑制剂）预处理组。通过流式细胞技术、共聚焦技术和Western blot方法,检测了VES诱导SGC-7901细胞线粒体氧化损伤及细胞凋亡的情况,用相应的检测试剂盒检测细胞内活性氧和Ca^2＋含量变化情况。结果：不同浓度的VES对SGC-7901细胞均有诱导凋亡的作用。表现为随VES浓度的增加,SGC-7901细胞凋亡数量呈现增加的趋势,且SGC_7901细胞内活性氧含量及钙离子水平呈现增加的趋势,而线粒体膜电位逐渐下降。活性氧抑制剂甘露醇（1mmol/L）对VES诱导的胃癌细胞凋亡,和细胞内活性氧、钙浓度的增高及膜电位的降低均有显著抑制作用（P〈0.05）。随VES浓度的增加,SGC7901细胞内Bax蛋白的表达呈现上升的趋势,而Bcl-2蛋白的表达呈现下降趋势。甘露醇可显著降低胃癌SGC-7901细胞Bax蛋白的表达水平,同时增加Bcl-2蛋白的表达（P〈0.05）。结论：VES可显著促进胃癌细胞凋亡,并且随着VES剂量的增加,VES诱导胃癌细胞凋亡的作用越强。细胞内活性氧含量增加、细胞内钙超载所导致的线粒体氧化损伤作用可能是VES诱导细胞凋亡的机制之一。     

盐酸小檗碱对人胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究盐酸小檗碱对人胃癌细胞及永生化胃上皮细胞增殖和凋亡的影响,初步探讨其中可能的分子机制。方法：利用不同浓度的小檗碱处理胃癌细胞系MKN-45和SGC-7901细胞,以及永生化胃上皮细胞系GES细胞,采用MTT法测定细胞活力,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡（PI标记）,Western blot检测细胞周期和凋亡相关蛋白的表达。结果：MTT结果显示与空白对照组相比,小檗碱处理后,细胞增殖速度明显受到抑制（P〈0.05）,并呈浓度依赖性,其中50μg/ml处理组最大抑制率为81.3%,这种抑制作用对胃癌细胞更为明显。流式细胞仪检测表明,小檗碱在较低浓度（10μg/ml）时即可诱导胃癌细胞出现G0/G1阻滞,S期细胞百分比减少和细胞凋亡（P〈0.05）,这种作用呈时间和浓度依赖性。Western blot结果提示小檗碱处理后,胃癌细胞Bcl-2蛋白表达水平降低,Bax及p53蛋白表达水平明显上调。结论：小檗碱可抑制胃癌细胞增殖,诱导胃癌细胞凋亡,其机制与阻滞细胞周期进展以及调控凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和p53密切相关。     

RhoA小干扰RNA对胃癌AGS细胞基因表达谱的影响

目的：应用RhoA小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）转染胃癌细胞系AGS细胞，采用高通量基因芯片技术，筛选基因表达谱的变化，为进一步研究RhoA信号转导通路奠定基础。方法：用pSilencer3．1载体构建RhoA／siRNA重组质粒。Effectene转染试剂转染AGS细胞，空载体pSilencer3．1转染对照组。应用G418筛选转染细胞系，获得稳定转染细胞；美国Agilent基因芯片检测细胞基因表达谱变化。结果：基因芯片检测全基因组，发现表达上调的有1151个基因，表达下调的有1079个基因，涉及信号转导、细胞周期、细胞凋亡等相关信号分子。生物信息学分析显示，与细胞凋亡有关的caspase家族，以及细胞周期调控基因存在明显的差异表达。结论：基因芯片结果提示干扰RhoA表达后，与凋亡和增殖有关的分子在RhoA介导的肿瘤细胞异常增殖信号转导中起着重要的调控作用，为下一步研究其信号调控网络机制提供重要的信息。     

Caspase-8和Bcl-2在PIG11诱导HepG2细胞凋亡中的作用

目的：利用本实验室已建立PIG11蛋白稳定低表达的HepG2细胞株和PIG11蛋白稳定高表达HepG2细胞株,研究Caspase-8和Bcl-2在PIG11诱导HepG2细胞凋亡中的作用,进一步探讨PIG11基因表达对HepG2细胞凋亡的机制。方法：细胞培养,分组：HepG2细胞、pLXSN-PIG11-HepG2（pLXSN-PIG11转染建立PIG11蛋白高表达HepG2细胞）、pLXSN-HepG2（pLXSN空载体转染HepG2细胞）、miR-PIG11-HepG2（miRNA干扰PIG11蛋白低表达HepG2细胞）、miR-HepG2（干扰空载体HepG2细胞）。Hoechst33342染色荧光和PI染色流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。Western blot检测Caspase-8蛋白、Bcl-2蛋白的表达情况。结果：Hoechst 33342染色荧光显微镜下pLXSN-PIG11-HepG2细胞组可见核染色质浓缩,核碎片,荧光增强,以及凋亡小体。PI染色流式细胞仪检测结果显示：HepG2细胞、miR-PIG11-HepG2细胞、miR-HepG2细胞、pLXSN-PIG11-HepG2细胞、pLXSN-HepG2细胞的凋亡率分别为5.72%±0.81%、1.34%±0.71%、5.10%±0.40%、34.83%±2.29%、5.34%±0.60%。PIG11高表达的pLXSN-PIG11-HepG2细胞组凋亡率比其它各组增高（P〈0.01）,PIG11低表达的miR-PIG11-HepG2细胞组凋亡率降低（P〈0.01）。Western blot检测结果显示PIG11高表达的pLXSN-PIG11-HepG2细胞Caspase-8蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调（P〈0.01）,PIG11低表达的miR-PIG11-HepG2细胞Caspase-8蛋白的表达下调,Bcl-2蛋白表达上调（P〈0.01）。结论：PIG11蛋白高表达能诱导HepG2细胞凋亡,其机制可能与Caspase-8蛋白及Bcl-2蛋白表达相关。     

干扰素-α增强胃癌细胞对TRAIL的敏感性及其机制研究

目的：观察IFN-α对TRAIL诱导胃癌细胞凋亡的影响,并探讨ERK信号通路在此过程中的作用及其可能的机制。方法：MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪PI染色检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测蛋白的表达。结果：IFN—α预处理可协同TRAIL抑制胃癌SGC7901细胞增殖。单独用IFN-仅或TRAIL处理SGC7901细胞,仅有少量的细胞发生凋亡,IFN-α和TRAIL联合用药细胞凋亡明显增加（P〈0．01）。IFN—α能上调DR4和P—ERK的表达,抑制ERK的活性能部分逆转IFN-α和TRAIL协同诱导的胃癌细胞凋亡和DR4表达的上调。结论：IFN—α能增强TRAIL诱导的胃癌细胞凋亡,其机制可能通过激活ERK信号通路,进而上调DR4的表达有关。     

Ad-PTEN体外对SGC-7901胃癌细胞生长的抑制作用

目的：探讨腺病毒介导的PTEN基因表达体外对SGC-7901胃癌细胞生长抑制作用及其分子机制。方法：将携有PTEN基因的复制缺陷型腺病毒载体（Ad-PTEN）感染SGC-7901胃癌细胞,用RT-PCR法检测Ad-PTEN在细胞中的表达,光学显微镜及荧光显微镜下观察Ad-PTEN感染细胞前后形态的变化,MTT法检测Ad-PTEN对SGC-7901胃癌细胞生长的抑制作用,用流式细胞术（FCM）检测SGC-7901胃癌细胞凋亡率。RT-PCR分析Bax、Bcl-2、p53、Survivin细胞凋亡相关基因的表达。结果：Ad-PTEN基因组感染SGC-7901胃癌细胞后,RT-PCR结果显示PTEN目的基因能在SGC-7901胃癌细胞中转录,其表达可明显抑制该胃癌细胞的生长,并诱导细胞凋亡。其凋亡机制可能与Bax/Bcl-2比值、p53基因表达上调、Survivin下调有关。结论：重组腺病毒Ad-PTEN具有抑制SGC-7901胃癌细胞生长和诱导细胞凋亡的作用。     

不同级别胃黏膜上皮内肿瘤和胃癌组织sFas／mFasmRNA表达比的改变及意义

目的：研究Fas基因的两种拼接异构蛋白基因表达在胃黏膜瘤变形成与发展过程中的变化,在基因水平上探讨Fas系统的表达与胃上皮组织瘤变及免疫逃逸形成的关系,评估胃镜下活检的胃黏膜组织进行Fas基因检测的临床价值和意义。方法：采用半定量RT—PCR法,对胃镜下活检的30例正常胃黏膜组织,30例胃黏膜低级别上皮内肿瘤,20例高级别上皮内肿瘤和30例胃癌组织检测sFas／mFasmRNA表达比。结果：sFas／mFasmRNA表达比在正常胃黏膜组织为0．47±0．07,低级别上皮内肿瘤组织为0．55±0．05,高级别上皮内肿瘤组织为0．22±0．04,胃癌组织为0．19±0．03,正常胃黏膜上皮组织的sFas／mFasmRNA表达比低于低级别上皮内肿瘤（P〈0．01）,低级别上皮内肿瘤sFas／mFasmRNA表达比明显高于高级别上皮内肿瘤组（P〈0．001）,高级别上皮内肿瘤组表达明显高于胃癌（P〈0．001）。结论：正常胃黏膜及瘤变胃黏膜组织FasmRNA以可溶型FasmRNA（sFasmRNA）为主,伴少量的膜型FasmRNA（mFasmRNA）,胃黏膜不同级别上皮内肿瘤和胃癌组织sFas／mFas表达比的强度各不相同,胃黏膜瘤变过程中的Fas基因表达形式具有可修饰性并伴有凋亡易感性的改变,胃镜下Fas基因表达形式的检测,有望指导临床在瘤变发生的早期,即免疫逃逸阶段这一基因水平上提早预知。     

干扰素-α通过上调DR5和抑制Akt的活性增加胃癌细胞对TRAIL的敏感性

目的：观察IFN-α对TRAIL诱导胃癌细胞凋亡的影响,并对死亡受体DR5和PI3K/Akt通路在此过程中的作用机制进行探讨。方法：MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪PI染色检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测蛋白的表达。结果：IFN-α预处理可协同TRAIL抑制胃癌MGC803细胞增殖。单独用IFN-α或TRAIL处理MGC803细胞,仅有少量的细胞发生凋亡,IFN-α和TRAIL联合用药细胞凋亡明显增加（P〈0.01）。IFN-α能上调DR5的表达,抑制Akt的磷酸化。结论：IFN-α能增强TRAIL诱导的胃癌细胞凋亡,其机制可能与其上调DR5的表达和抑制Akt的活性有关。     

Prohibitin Induces Apoptosis in BGC823 Gastric Cancer Cells Through the Mitochondrial Pathway

Prohibitin (PHB), an evolutionarily-conserved protein, has been found to be over-expressed in gastriccancer and be closely related with tumor malignancy. In this study, to investigate the relationship between PHBexpression and cell apoptosis in the BGC823 gastric cancer cell line, low and high expression PHB in BGC823cells was accomplished using RNA interference technology and gene transfer techniques. Cell proliferation, cellcycling, apoptosis, Bax, Bcl-2 and Cyt.c protein expression and the activation of Caspase-3,9 were assessed after48h. Over-expression of PHB gene in BGC823 cells resulted in slow cell growth, cell arrest in G2 phase, and anincreased apoptosis ratio while the opposite was found for PHB under-expressing cells. In PHB over-expressingcells, the expression of Bax gene was increased, the expression of Bcl-2 was decreased, the activation level ofCaspase-3, 9 was increased, but the activation level of Caspase-8 demonstrated no change. These results indicatethat PHB induced apoptosis through the mitochondrial pathway.     

ATM在人胃癌细胞系的表达及其在细胞DNA损伤中的作用

目的：研究DNA损伤剂对ATM基因缺陷和正常的胃癌细胞系的作用机制。方法：Western—blot方法检测6株胃癌细胞系ATM蛋白的表达情况,并用DNA损伤剂顺铂作用于ATM基因缺陷的MKN28细胞系和ATM基因正常的BGC823细胞系,采用Western—blot、DNAladder、Hoechest33258／PI双荧光染色等方法观察凋亡相关激酶的表达和细胞的应答反应。结果：Western—blot显示,ATM蛋白在胃癌细胞系MGC803、MKN28、MKN45、SGC7901的表达水平显著低于BGC823和AGS细胞系,BGC823细胞在CDDP作用后,ATM蛋白表达水平升高,磷酸化chkl和chk2活性24小时后增强,而Cdc25C表达减少;MKN28细胞中G2期检测点蛋白ATM、P—chkl、P—chk2表达较低,Cdc25C表达较高,但在CDDP作用前后无明显变化。MKN28细胞在DNA损伤剂作用后出现显著凋亡,而BGC823细胞在DNA损伤剂作用48小时后未见显著凋亡。结论：ATM在细胞周期的多个环节均有凋控作用,特别是在细胞周期检测点和DNA损伤的修复中有重要的监视和启动作用。     

Midkine shRNA对胃癌SGC7901细胞增殖与凋亡的影响

目的：研究shRNA干扰midkine对胃肿瘤细胞SGC7901生物学特性的影响。方法：构建midkine基因的特异性小RNA干扰质粒,采用脂质体2000转染SGC7901细胞,检测细胞的增殖和克隆形成能力以及细胞凋亡情况。结果：与对照组相比,转染重质粒后1—5天,SGC7901细胞增殖明显受到抑制（P〈0．01）,细胞形成克隆数明显降低（P〈0．01）,并且有明显的亚二倍体峰出现（P〈0．05）。结论：针对midkine基因的特异性小RNA干扰质粒在体外能有效抑制人胃癌细胞SGC7901 midkine表达,细胞增殖及克隆形成能力减弱,细胞凋亡增加,为midkine基因靶向治疗提供一定的实验依据。