慢性乙型肝炎患者外周血CD8+T淋巴细胞表面程序性死亡受体-1表达上调的意义

程序性死亡受体-1(PD-1)主要表达于活化的淋巴细胞和单核细胞,尤其是体内活化的T淋巴细胞表面[1],负性调节其活化、增殖和细胞因子的产生[2-3],使人类免疫缺陷病毒(HIV)[4]、HCC[5]、HBV[6-7]等慢性感染过程中患者的病毒特异性CD8+细胞毒性T淋巴细胞(CTL)功能受到抑制,从而造成持续性感染状态.     

慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞凋亡与HBVDNA及Th1/Th2类细胞因子的关系

研究活化诱导的外周血单核细胞凋亡 (AICD)在乙型肝炎慢性化中的作用以及与HBVDNA和Th1/Th2的关系。分离 2 5例慢性乙型肝炎患者与 10例健康人外周血单个核细胞 (PBMC) ,在PHA的刺激下培养 ,经流式细胞仪检测凋亡 ,ELISA检测细胞因子IFN -γ、IL - 4、IL - 10。经过PHA诱导的PBMC凋亡率乙型肝炎组明显高于正常对照组 (P <0 0 1)。在慢乙肝组中 ,随着HBVDNA的上升 ,凋亡比率升高 ,IL - 4与凋亡成正相关 ,有统计学差异(P <0 0 0 1)。AICD可能在乙型肝炎感染慢性化与形成免疫耐受过程中起到重要作用 ,HBVDNA与AICD有关 ,IL -4促进AICD的发生     

HIV/AIDS患者外周血程序性死亡受体-1的表达及临床意义

目的 探讨HIV感染及抗病毒治疗对程序性死亡受体-1(programmed death-1, PD-1)表达的影响。方法 根据是否接受抗病毒治疗将61例HIV/AIDS患者分为治疗组及未治疗组,并以35例健康者作为对照。利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术探究基因PD-1 mRNA在人外周血单个核细胞(PBMC)中的表达;通过双夹心抗体ELISA法测定血清中可溶性PD-1(sPD-1)表达水平。并比较不同CD4⁺ T淋巴细胞数的HIV/AIDS患者血清sPD-1的差异。结果 未治疗组、治疗组、健康组研究对象PBMC中PD-1 mRNA的相对表达量均数分别为0.337 8±0.064、0.578 2±0.073和0.771 5±0.124,健康组与未治疗组差异极显著,健康组与治疗组、治疗组与未治疗组之间差异显著(P=0.031、P=0.043);未治疗组、治疗组、健康组血清sPD-1浓度分别为42.22±2.21 ng/mL、38.24±2.79 ng/mL和29.88±1.41 ng/mL。健康组与未治疗组、治疗组,治疗组与未治疗组分别具有显著性差异(P=0.008、P=0.040和P=0.020)。差异性分析结果表明,未治疗组、治疗组CD4⁺T淋巴细胞数<350 个/mm³患者血清sPD-1水平均显著高于CD4⁺T淋巴细胞数>350 个/mm³患者。结论 抗病毒治疗在一定程度上使高水平sPD-1表达下调以促使PD-1/PD-L1通路的恢复,从而促进机体免疫重建。监测PD-1 mRNA及sPD-1的表达在HIV的辅助诊断和推断病情发展上具有一定的价值。     

IL-6对肝细胞癌患者CD8+T淋巴细胞程序性死亡受体1表达和功能的影响

目的观察血浆IL-6及程序性死亡受体(PD-1)在肝细胞癌(HCC)患者外周血CD8~+T淋巴细胞中的表达,评估IL-6对HCC患者CD8~+T淋巴细胞中PD-1表达和功能的影响。方法纳入2019年1月—2019年9月期间在陕西省人民医院或空军军医大学第二附属医院(第四军医大学唐都医院)就诊的HCC患者44例(HCC组),同时纳入年龄和性别匹配的健康对照者19例(HC组),采集外周血,分离血浆和外周血单个核细胞,分选CD8~+T淋巴细胞,ELISA法检测血浆IL-6水平,流式细胞术检测PD-1在CD8~+T淋巴细胞中的表达水平。使用IL-6中和抗体刺激分选的CD8~+T淋巴细胞24 h,CCK-8法检测细胞增殖,ELISA法检测培养上清IFNγ和TNFα水平,实时定量PCR法检测穿孔素、颗粒酶B和颗粒溶素mRNA相对表达量,Western blot法检测STAT3和Src磷酸化水平。计量资料两组间比较采用t检验或配对t检验;计数资料组间比较采用χ~2检验。结果 HCC组患者血浆IL-6水平较HC组显著升高~([(99.67±20.92) pg/m L vs (81.05±16.76) pg/m L,t=3.427,P=0.001 1])。虽然CD3~+CD8~+T淋巴细胞比例在HCC组和HC组患者之间的差异无统计学意义(P 0.05),但PD-1~+CD8~+细胞比例在HCC组患者中显著升高(3.79%±1.36%vs 2.20%±0.47%,t=5.335,P 0.000 1)。使用IL-6中和抗体抑制HCC组患者CD8~+T淋巴细胞的IL-6虽不影响细胞增殖,但可降低PD-1表达(2.67%±0.91%vs 3.33%±1.12%,t=2.177,P=0.035),增加IFNγ分泌~([(13.50±3.82) pg/m L vs (10.82±1.37) pg/m L,t=3.170,P=0.002 8]),穿孔素和颗粒酶B mRNA相对表达量亦显著升高(t值分别为6.161、14.140,P值均0.000 1),同时伴有磷酸化STAT3水平降低(P 0.000 1)。结论抗人IL-6中和抗体可能通过增加穿孔素和颗粒酶B水平、增强细胞因子分泌以及抑制PD-1表达增强HCC患者CD8~+T淋巴细胞的功能。     

不同疾病阶段乙型肝炎病毒感染者的树突状细胞功能及血清细胞因子表达水平

目的 探讨HBV感染后不同疾病阶段(免疫耐受期、肝炎活动期、非活动携带状态)者断面的树突状细胞(DC)亚群功能和血浆细胞因子水平的差异及其可能的原因.方法 30例HBV感染后不同疾病阶段者,分为免疫耐受组、肝炎活动组和非复制携带组,每组10例;另选10名健康人作为对照组.收集研究对象外周血,检测白细胞介素(IL)-12、IL-10、干扰素(IFN)α、IFN γ、肿瘤坏死因子(TNF)α的表达水平,分析髓样树突状细胞(mDC)和浆细胞样树突状细胞(pDC)的功能(以IL-12含量代表mDC的功能,以IFN α含量代表pDC功能)及其他细胞因子在不同组别间表达水平的差异.细胞因子表达水平的比较,总的HBV感染组与健康对照组比较用t检验,4组间两两比较用秩和检验.结果 HBV感染组IL-12总含量及单个核mDC IL-12含量均低于对照组[分别为(153.12±159.30)pg/ml比(338.48±142.92)pg/m和(9.48±9.57)fg比(15.10±6.25)fg,F值分别为0.225和0.684,P值均＜0.01],两组IFN α总含量及单个核pDC IFN α含量差异无统计学意义[分别为(575.87±477.02)pg/ml比(662.37±356.06)pg/ml和(85.14±68.44)fg比(62.11±627)fg,F值分别为1.467和1.804,P直均＞0.05].组间两两比较结果显示,健康对照组IL-12总含量[(338.48±142.92)pg/ml ]高于其他3组(Z值分别为-3.039、-2.967和-2.949,P值均＜0.01),单个核mDC IL-12含量[(15.10±6.25)fg]也高于其他3组(Z值分别为-3.027、-2.671和-2.863,P值均＜0.01);健康对照组IFN α总含量为(662.37±365.06)pg/ml,单个核pDC IFN α含量为(62.11±27.04)fg,均高于肝炎活动组(Z值分别为-3.016和-3.176,P值均＜0.01).HBV感染不同组别中,仅IFNα水平[分别为(86.17±12.02)pg/ml、(91.76±39.64)pg/ml和(139.32±207.35)pg/ml]高于健康对照组[(53.30±23.92)pg/ml],差异有统计学意义(Z值分别为-2.967、-2.896和-3.054,P值均＜0.01).结论 HBV感染后,DC功能和IFN α水平存在不同程度的异常,但是HBV不同转归期DC功能无明显差异.DC功能缺陷和IFN α水平异常可能是HBV感染慢性化的原因之一.     

慢性乙型肝炎病毒感染者外周血T辅助细胞1,2型因子的表达

目的 了解慢性乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＣＤ＾＋４Ｔ细胞内Ｔ辅助细胞１,２型（Ｔｈ１／Ｔｈ２）因子,干扰素－γ（ＩＦＮ－γ）和白细胞介素－４（ＩＬ－４）的表达情况,以测定Ｔｈ０／Ｔｈ１／Ｔｈ２细胞的百分数,探明Ｔｈ１／Ｔｈ２细胞在慢性ＨＢＶ感染中的作用。方法 常规分离ＰＢＭＣ,在佛波二酯（ＰＭＡ）,Ｉｏｎｏｍｙｃｉｎ,Ｍｏｎｅｎｓｉｎ的刺激下,采用流式细胞检测仪（Ｆ     

慢性乙型肝炎重叠急性戊型肝炎3种血清细胞因子表达及意义

目的分析慢性乙型肝炎重叠急性戊型肝炎患者血清γ-干扰素（IFN-γ）、白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-10（IL-10）的表达及临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定慢性乙型肝炎重叠急性戊型肝炎患者（重叠组）、急性戊型肝炎患者（AHE组）、慢性乙型肝炎患者（CHB组）和健康体检者（对照组）的血清IFN-γ、IL-2、IL-10水平;分别采用实时荧光PCR和ELISA方法测定重叠组和CHB组的乙肝病毒（HBV）基因定量（HBV DNA）和HBV血清标记物;同时检测重叠组、AHE组和CHB组的主要肝功能指标。结果 重叠组IFN-γ高于CHB组和对照组,IL-10低于CHB组和对照组,IL-2高于CHB组（P〈0.05）;CHB组IL-10高于其他3组（P〈0.05）。重叠组丙氨酸氨基转移酶（ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）、血清总胆红素（TBIL）高于CHB组,胆碱酯酶（CHE）、白蛋白（ALB）、凝血酶原活动度（PTA）低于CHB组（P〈0.05）。重叠组乙型肝炎e抗原（HBeAg）和HBV DNA阴性率高于CHB组（P=0.00）。重叠组组中HBV-DNA阴性者IFN-γ、IL-2水平高于HBV-DNA阳性者,IL-10水平低于HBV DNA阳性者（P〈0.01）。结论 IFN-γ、IL-2、IL-10参与慢性乙型肝炎重叠急性戊型肝炎肝细胞免疫损伤过程;IFN-γ、IL-2、IL-10可作为判断重叠感染后肝细胞损伤程度的指标;重叠感染后IFN-γ、IL-2可能影响HBV的复制。     

HBeAg导致慢性乙型肝炎患者外周血Th1/Th2型细胞因子失衡

目的 探讨HBeAg对慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血单个核细胞(PBMC)功能的调节作用. 方法 以重组的HBeAg体外刺激CHB患者和健康志愿者的PBMC,用流式细胞术和酶联免疫吸附试验法检测其刺激前后Th1/Th2型细胞因子的变化情况,并观察HBeAg对CHB患者PBMC表面细胞程序性死亡受体(PD)1及其配体(PD-L)1表达的影响.两组间资料比较采用独立样本t检验; PD-1/PD-L1表达水平与HBV DNA拷贝数的相关性采用Spearman相关分析.结果 HBeAg刺激后可使HBeAg阴性CHB患者和健康志愿者CD3+CD4+T淋巴细胞内干扰素(IFN)γ表达水平(0.17％±0.08％与0.17％±0.04％)明显低于未刺激组(0.30％±0.16％与0.32％±0.12％),t值分别为-2.382和-4.190,P值均＜0.01;培养上清液中白细胞介素(IL)-6、IL-10和肿瘤坏死因子α含量明显高于未刺激组(HBeAg阴性CHB患者的t值分别为2.504,3.583和4.324,健康志愿者t值分别为3.542,6.246和5.273,P值均＜0.01).HBeAg刺激PBMC后,HBeAg阴性CHB患者和健康志愿者CD14+细胞表面PD-L1表达水平分别为13.02％±4.98％和3.10％±2.47％,明显高于未刺激组的5.89％±1.56％和0.97％±0.83％,t值分别为4.815和3.454,P值均＜0.05.基础状态下在HBeAg阳性CHB患者外周血中,CD3+CD4+T淋巴细胞内IFNγ表达水平为0.23％±0.09％,明显低于HBeAg阴性CHB患者和健康志愿者的0.34％±0.15％和0.35％±0.09％(t=-3.177,P＜0.01 ; t=-4.541,P＜0.01);而IL-4表达水平为0.39％±0.16％,明显高于HBeAg阴性CHB患者和健康志愿者的0.26％±0.12％和0.23％±0.12％,t值分别为3.382和4.393,P值均＜0.01.基础状态下在HBeAg阳性CHB患者外周血中,CDB+T淋巴细胞表面PD-1和PD-L1表达水平明显高于HBeAg阴性CHB患者及健康志愿者(P值均＜ 0.01),CD14+T淋巴细胞表面PD-L1表达水平显著高于HBeAg阴性患者和健康志愿者,t值分别为5.092和5.473,P值均＜0.01 ; HBeAg阴性CHB患者外周血中CD3+T淋巴细胞表面PD-L1表达水平明显高于健康志愿者(t=3.214,P＜0.01).结论 HBeAg可以明显抑制Th1型细胞因子IFN γ的产生,促进Th2型细胞因子IL-6和IL-10分泌,上调外周血PBMC表面PD-1/PD-L1的表达,从而有利于形成对HBV感染的免疫耐受.因此,HBeAg可能是造成慢性HBV感染者体内免疫耐受的重要因素之一.     

冠心病患者外周血调节性T细胞及程序性死亡受体-1表达的意义

目的:通过观察冠心病患者调节性T细胞(Tregs)和树突状细胞(DCs)数量和程序性死亡受体-1(PD-1)及其配体(PD-L1)的表达变化,探讨其功能状态,为动脉粥样硬化及不稳定斑块形成的病因及免疫疗法提供思路。方法:入选冠心病患者39例,其中稳定型心绞痛(SA)23例、急性冠状动脉综合征(ACS)16例;20例非冠心病患者为对照组。采用流式细胞术测定各组外周血CD4+CD25hi CD127low PD-1+Treg数量和CD11c+PD-L1+DC数量;用ELISA法测定血清IL-2水平。结果:外周血Treg数量在ACS组、SA组和对照组间差异无统计学意义;ACS组Treg PD-1表达率和DC、PD-L1表达率与SA组和对照组相比明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:PD-1/PD-L1表达下调提示Treg和DC免疫抑制功能缺陷,可能是促进动脉粥样硬化病变进展及不稳定斑块形成的因素。     

HBV携带者外周血中辅助性T淋巴细胞1/辅助性T淋巴细胞2相关细胞因子的研究

目的：研究慢性HBV携带者外周血中辅助性T淋巴细胞1（Th1）/辅助性T淋巴细胞2（Th2）相关细胞因子白细胞介素2（IL-2）、白细胞介素4（IL-4）及γ干扰素（γ-IFN）随患者体内病毒含量变化时的变化及其意义。方法：通过荧光定量方法检测86名慢性HBV携带者体内的病毒载量,而后根据病毒载量值将患者分为HBV DNA阴性组、HBV DNA低载量组、HBV DNA高载量组;通过ELISA方法检测86名慢性HBV携带者及39名正常人血清中IL-2、IL-4及γ-IFN的含量。结果：各患者组外周血清中IL-2的含量比正常组增高,且HBV DNA低载量组、HBV DNA高载量组与正常组比较,差异有统计学意义（F=3.055,P=0.031）;各患者组外周血清中IL-4的含量比正常组增高,HBV DNA高载量组与正常组比较,差异有统计学意义（F=2.486,P=0.064）;各患者组外周血清中γ-IFN的含量与正常组相比,差异无统计学意义（F=0.063,P=0.976）。结论：慢性HBV携带者体内存在Th1/Th2平衡紊乱,且可能Th1存在免疫功能障碍是形成的机制之一。     

乙型肝炎肝硬化患者外周血T细胞PD-1和PD-L1表达水平及意义

目的探讨乙型肝炎肝硬化患者外周血T淋巴细胞程序性死亡分子-1(PD-1)及其主要配体PD-L1的表达情况。方法在50例乙型肝炎肝硬化患者和25例健康体检者,使用流式细胞仪检测外周血T细胞PD-1和PD-L1表达;采用荧光定量核酸扩增及测序法检测血清HBV DNA载量。结果对照组和肝硬化组外周血T细胞PD-1阳性表达率分别为11.93±1.23%和33.13±3.38%(P<0.05),PD-L1阳性表达率分别为10.59±1.88%和32.47±2.18%(P<0.05);Child-Pugh A级(30.58±2.99%和32.19±1.44%)、B级(34.61±1.43%和33.46±2.58%)和C级(34.2±2.31%和31.76±2.33%)患者外周血T细胞PD-1和PD-L1表达率无显著性相差(P>0.05);在肝硬化患者,T细胞表面PD-l和PD-Ll表达水平与血清HBV DNA载量呈明显正相关(r2=0.8326和:r2=0.643,P<0.05)。结论肝硬化患者外周血T细胞PD-1和PD-L1表达水平明显上调,且与血清HBV DNA载量呈明显正相关,提示T细胞高表达的PD-1可能通过与其配体PD-L1作用而抑制T细胞免疫应答,并导致病毒感染持续。     

自身免疫性肝炎患者外周血CD8+T细胞PD-1表达水平变化

目的 探讨自身免疫性肝炎（AIH）患者外周血CD8⁺T细胞程序性死亡因子（PD-1）表达水平的变化。方法 随机选取我院收治的AIH患者25例和健康志愿者25例,使用流式细胞仪进行检测外周血CD8⁺T 淋巴细胞PD-1分子和PD-1分子受体（PD-L1）表达水平。结果 与健康人比,AIH血CD8⁺T细胞PD-1/PD-L1表达阳性百分比分别为（2.6±0.1）%和（2.1±0.8）%,明显高于健康人【（0.5±0.2）%和（0.4±0.1）%,P<0.01）;10例男性AIH患者血CD8⁺T细胞PD-1/PD-L1表达阳性百分比分别为（1.4±0.5）%和（2.3±0.6）%,显著低于15例女性患者【（3.8±0.8）%和（2.5±0.5）%）,P<0.05）;经皮质激素治疗4 w,25例AIH患者获得病情缓解。AIH患者在缓解期PD-1/PD-L1表达水平分别为（3.3±0.2）%和（2.8±0.3）%。结论 AHI患者外周血CD8⁺T细胞PD-1表达水平升高,与疾病活动可能存在密切的关系。     

Programmed death-1 expression is associated with the disease status in hepatitis B virus infection

AIM： TO define the potential role of programmed death-i/programmed death-ligand （PD-1/PD-L） pathway in different hepatitis B virus （HBV） infection disease status; we examined the expression of PD-1 on antigen specific CD8＋T cells in peripheral blood of patients with chronic hepatitis B （CriB） and acute exacerbation of hepatitis B （AEHB） infection.
METHODS： The PD-1 level on CD8＋ T lymphocytes and the number of HBV specific CD8＋ T lymphocytes in patients and healthy controls （HCs） were analyzed by staining with pentameric peptide-human leukocyte antigen2 （HLA2） complexes combined with flow cytometry. Real-time quantitative polymerase chain reaction （PCR） was used to measure the serum HBV- DNA levels.
RESULTS： The level of PD-1 expression on total CD8＋ T cells in CHB patients （13.86% ± 3.38%） was significantly higher than that in AEHB patients （6.80%± 2.19%, P 〈 0.01） and healthy individuals （4.63% ± 1.23%, P 〈 0.01）. Compared to AEHB patients （0.81% ± 0.73%）, lower frequency of HBV-specific CD8＋ T cells was detected in chronic hepatitis B patients （0.37% ± 0.43%, P 〈 0.05）. There was an inverse correlation between the strength of HBV-specific CD8＋ T-cell response and the level of PD-1 expression. Besides, there was a significant positive correlation between HBV viral load and the percentage of PD-1 expression on CD8＋ T cells in CriB and AEHB subjects （R = 0.541, P 〈 0.01）. However, PD-1 expression was not associated with disease flare-ups as indicated by alanine aminotransferase （ALT） levels （R = 0.066, P 〉 0.05）.
CONCLUSION： Our results confirm previous reports that HBV specific CD8＋T-cell response in the peripheral blood is more intense in patients with AEHB than in chronic hepatitis B wlth persistent viral infection. Moreover, there is a negative correlation between the level of PD-1 and the intensity of virus specific CD8＋ T cell response.     

PD-1表达与慢性乙型肝炎病毒感染病理的相关性分析

目的研究程序性死亡因子-1(programmed death1,PD-1)与慢性乙型病毒性肝炎病理的相关性,探讨PD-1在慢性HBV感染病情进展中的作用。方法对84例慢性乙型病毒性肝炎患者行肝组织活检,肝组织标本经10%福尔马林液固定、石蜡包埋切片后,以HE染色评判肝组织炎症活动度(G)和肝纤维化程度(S)。采用免疫组织化学染色SP法检测肝组织中PD-1的表达,以红色为阳性表达区域,每张切片在高倍镜下(400×)选取5个不连续视野进行图像采集,采用Image-Pro Plus6.0图像分析系统进行测量分析,以积分光密度(integral optical density,IOD)值表示PD-1在肝组织中的表达水平。结果 PD-1表达强度与肝组织炎症活动度及纤维化程度均呈正相关,相关系数分别为0.898(P0.001)、0.700(P0.001)。肝组织炎症活动度G0～G4级组间,PD-1的表达差异均有统计学意义(P0.05)。肝组织纤维化S2期与S3期、S3期与S4期间PD-1的表达,差异无统计学意义(P0.05),其余各纤维化分期之间PD-1的表达,差异均有统计学意义(P0.05)。结论肝组织内的PD-1表达水平与CHB患者肝脏炎症及纤维化发生、进展呈正相关。测定PD-1的IOD值有助于辅助评判肝组织炎症活动度及肝纤维化程度,可以作为评判肝炎病理情况的参考指标。     

慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗过程中程序性死亡分子1及其配体表达的变化

目的 探讨慢性乙型肝炎患者在抗病毒治疗过程中程序性死亡分子1(PD-1)及其主要配体PD-L1表达的变化情况及其与HBeAg/抗-Hbe血清学转换的关系.方法 对10例人类白细胞抗原(HLA)-A2阳性的HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者予以替比夫定抗病毒治疗24 周,分别于治疗的0、12周和24周随访,检测HBV DNA水平、外周血单个核细胞(PBMC)表面PD-1和PD-L1表达水平、HBV特异性T淋巴细胞数量与其表达PD 1水平,及PBMC体外培养上清液中干扰素(IFN)γ水平.其中HBV DNA定量采用荧光定量PCR法检测;PBMC自新鲜血分离,部分PBMC加入重组HBcAg体外培养7d,加入HBV抗原表位肽五聚体复合体;PD-1和PD-L1阳性细胞、CD8'T淋巴细胞以及CD8和PD-1双阳性细胞用流式细胞仪检测;IFN γ水平用酶联免疫吸附试验检测.比较不同时间点PBMC表面PD-1和PD L1表达水平、HBV特异性CD8'T淋巴细胞数量及其PD-1表达水平、PBMC培养上清液中IFN γ水平.对抗病毒治疗前后对应指标数值的变化采用配对t检验分析.结果 治疗前HBV DNA水平为5.16～8.77 log10拷贝/ml,治疗24周时,7例HBV DNA水平低于检测下限,3例仍可检测到,但明显低于基线水平.2例HBeAg/抗-Hbe血清学转换,2例HBeAg阴转,6例仍维持HBeAg阳性.0、12周和24周PBMC表面PD 1表达水平分别为52.1%±17.0%、39.1%±18.2%和23.4%±16.3%(24周和0周比较,P＜0.01);PD-L1分别为45.6%±15.4%、34.6%±16.2%和20.9%±9.5%(24周和0周,P＜0.01;24周和12周比较P＜0.05);HBV特异性T淋巴细胞上PD-1表达水平分别为76.2%±10.4%、66.5%±15.4%和49.5%±25.3%(24周和0周比较,P＜0.01;12周和0周比较,P＜0.05;24周和12周比较,P＜0.05);HBV特异性T淋巴细胞分别为1.3%±0.5%、1.5%±1.0%和2.2%±1.5%; IFN γ水平(pg/ml)分别为91.7±82.1、99.4+93.5和109.0+86.6.24周HBeAg/抗-Hbe血清学转换者上述指标变化明显大于无HBeAg/抗-Hbe血清学转换者.结论 直接抑制HBV复制能降低PD-1、PD-L1表达水平,并增加HBV特异性CD8'T淋巴细胞的数量和功能.早期PD-1快速下降和HBV特异性T淋巴细胞数量及功能的恢复与早期HBeAg/抗-Hbe血清学转换的关系有待于进一步研究.     

恩替卡韦治疗后慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞表面程序性死亡受体1表达与HBeAg血清学转换的关系

目的 动态观察慢性乙型肝炎患者恩替卡韦抗病毒治疗后不同时期外周血T淋巴细胞(简称T细胞)表面程序性死亡受体1(PD-1)表达的变化,并探讨其与HBeAg血清学转换间的关系.方法 对20例HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者予以恩替卡韦抗病毒治疗并随访51周,根据HBeAg是否发生血清学转换分为:HBeAg未转换组(14例),HBeAg转换组(6例).分别于治疗前(基线,T0)、治疗2～4周(T1)、治疗5～10周(T2)、治疗11～20周(T3)、治疗21～30周(T4)、治疗31～51周(T5)收集外周血,流式细胞术检测CD4+、CD8+T细胞表面PD-1的表达水平,实时荧光定量PCR检测血清HBV DNA载量,同时检测血清ALT水平.正态分布资料采用独立样本t检验,非正态分布者采用Mann-Whitney U检验比较组间差异,相关性分析采用Pearson相关分析.结果 治疗前两组患者血清HBV DNA载量分别为(7.54±0.67)log10拷贝/ml、(7.30±0.79)log10拷贝/ml(P＞0.05),ALT水平为(187.26±184.15)U/L、(272.17±215.07)U/L(P＞0.05),外周血CD4+T细胞表面PD-1表达水平为6.04%±3.71%6.77%±2.88%(P＞0.05),CD8+T细胞表面PD-1表达水平为6.39%±3.33%、8.88%±2.84%(P＞0.05).恩替卡韦抗病毒治疗后两组患者血清HBV DNA载量、ALT水平的下降与CD4+、CD8+T细胞表面PD-1表达的下调呈显著正相关(r=0.212,P=0.05;r=0.377,P＜0.01;r=0.279,P＜0.05;r=0.347,P＜0.01).在相同的随访时间段内,HBeAg转换组血清HBV DNA载量、ALT水平及外周血CD4+、CD8+T细胞表面PD-1表达的下降率均高于HBeAg未转换组,且两组间△ T0～T1、△T0～T2期HBV DNA的下降率及△T0～T2、△T0～T3期CD8+T细胞表面PD-1表达的下降率差异有统计学意义(分别为49.9%对比37.3%,56.7%对比47.4%,70.1%对比-4.2%,66.9%对比24.5%,P值均＜0.05).结论 HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者经恩替卡韦抗病毒治疗后,外周血CD8+T细胞表面PD-1表达的快速下调与血清HBV DNA相似,可作为预测后期HBeAg血清学转换的指标之一.

Abstract：

Objective To observe longitudinally the expression of Programmed death 1 (PD-1) on peripheral blood T cells in chronic hepatitis B patients underwent antiviral treatment with entecavir (ETV)and to explore the relationship between PD-1 expression and HBeAg seroconversion.Methods Twenty HBeAg positive patients underwent antiviral treatment with ETV were followed up for 51 weels.14 patients remained HBeAg positive and 6 patients achieved HBeAg seroconversion.Peripheral blood was collected at six time points:T0:baseline,T1:2-4week;T2:5-10week;T3:11-20week;T4:21-30week:T5:31-51week.PD-1 expressions on T cells were assessed by flow cytometry.Serum HBV DNA loads were determined by real-time fluorescent quanttative polymerase chain reaction (PCR) and serum ALT levels were examined at the same time.Results At baseline,serum HBV DNA load of patients without HBeAg seroconversion and with HBeAg seroconversion were (7.54 ± 0.67) log10 copies/ml and (7.30 ± 0.79) log10 copies/ml(P ＞ 0.05),the ALT levels were (187.26 ± 184.15) U/L and (272.17 ± 215.07) U/L (P ＞ 0.05),PD-1 exprissions on CD4+ T cells were 6.04% ± 3.71% and 6.77% ± 2.88% (P ＞ 0.05),PD-1 exprissions on CD8+ T cells were 6.39% ± 3.33% and 8.88% ± 2.84% (P ＞ 0.05).After ETV treatment,serum HBV DNA loads and ALT levels both decreased gradually,which was positively correlated with PD-1 expressions on CD4+ and CD8+ T cells (r = 0.212,P = 0.05;r = 0.377,P ＜ 0.01;r = 0.279,P ＜ 0.05;r = 0.347,P ＜ 0.01 ).During the same monitoring period,the HBV DNA loads,ALT levels and PD-1 expressions on T cells of the patients with HBeAg seroconversion decreased significantly as compared with the patients without HBeAg seroconversion.Besides,the decrease of HBV DNA loads during period △ T0-T1 and △ T0-T2 and PD-1 expressions on CD8+ T cells during period △ T0-T2 and △ T0-T3 were significantly different between these two kinds of patients (49.9% vs 37.3%,P ＜ 0.05;56.7% vs 47.4%,P ＜ 0.05;70.1% vs -4.2%,P ＜ 0.05;66.9% vs 24.5%,P ＜ 0.05).Conclusion The rapid decrease of PD-1 expression on peripheral CD8+ T cells after antiviral treatment with ETV is positvely correlated with the decrease of serum HBV DNA loads and may be used as a predictive index for HBeAg seroconversion in HBeAg positive patients.     

抗病毒治疗慢性丙型肝炎患者T细胞表面程序性死亡1和程序性死亡配体1的表达

目的 观察慢性丙型肝炎(CHC)患者抗病毒治疗24周时外周血CD4+和CD8+T淋巴细胞(T细胞)表面表面程序性死亡1 (PD-1)和程序性死亡配体1(PD-L1)表达水平,分析其与抗病毒治疗临床转归的关系.方法 24例CHC患者,均采用聚乙二醇干扰素α-2a (Peg-IFN α-2a)每周皮下注射一次,联合利巴韦林800 ～ 1200 mg/d,治疗24 ～ 48周.采用流式细胞术和实时荧光定量检测患者治疗前、治疗4、12、24周外周血CD4+和CD8+T细胞表面PD-1、PD-L1表达水平和外周血HCV RNA,全自动生化分析仪检测ALT.采用SPSS16.0软件.两样本计量结果分析采用t检验,治疗前后的计量结果采用重复测量的单因素或两因素方差分析,所有检验为双侧检验. 结果 CHC患者治疗后4周HCV RNA阴性者19例,CD4+和CD8+T细胞表面PD-1的表达率在治疗前分别为18.6％±6.1％和16.6％±13.8％,治疗24周时分别为10.3％±7.7％和9.4％±4.6％,治疗前后比较,PD-1的表达明显下降,F值为12.406和4.955,P值为0.002和0.039,差异有统计学意义.CD8+T细胞表面PD-L1的表达率在治疗前为17.5％±13.7％,治疗4、12、24周时分别为25.9％±11.1％、29.6％±15.1％、32.0％±15.7％,治疗后明显升高,F值分别为9.063、8.365、9.736,P值均＜0.01.治疗4周时,HCV RNA阳性者5例,仅发现CD8+T细胞表面PD-L1的表达治疗24周(39.2％±15.6％)与治疗前(17.4％±16.7％)比较明显升高,F=10.292,P=0.033.持续病毒学应答者20例:CD4+T细胞表面PD-1的表达在治疗4、12、24周分别为14.4％±7.5％、14.0％±6.9％、10.7％±7.6％,治疗前为20.2％±7.5％,与治疗前比较明显下降,F值分别为6.133、5.541、14.780,P＜0.05或P＜0.01.CD8+T细胞表面PD-1的表达在治疗12、24周分别为10.2％±4.6％和10.1％±4.9％,治疗前为16.8％±13.4％,治疗前后比较,PD-1的表达在治疗后明显下降,F值为4.964和4.613,P值均＜0.05.CD8+T细胞表面PD-L1的表达在治疗12、24周分别为30.8％±16.6％和35.2％±16.5％,治疗前为19.0％±14.5％,治疗后明显升高,F=6.442,P=0.020和F=12.349,P=0.002.复发组4例,各治疗时间点PD-1和PD-L1与治疗前比较,差异无统计学意义.结论 快速有效的抗病毒治疗可以下调CHC患者外周血CD4+和CD8+T细胞表面PD-1的表达,上调CD8+T细胞表面PD-L1的表达.CHC患者外周血CD4+和CD8+T细胞表面PD-1和PD-L1表达水平的变化可能与患者抗病毒治疗临床转归存在关系.     

PD-1/PD-L通路对乙型肝炎病毒感染结局的影响

程序性死亡因子-1(programmed death 1,PD-1)是可以表达在T淋巴细胞膜表面的负向协同刺激分子受体,他与PD-1配体(programmeddeath 1 ligand,PD-L)形成通路后,可以减弱T淋巴细胞免疫反应,甚至导致T淋巴细胞功能衰竭.近来研究表明PD-I/PD-L通路的形成可以影响HBV...