丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒的诊断性能评价

目的 通过与Ortho3．0丙型肝炎病毒（HCV）抗体诊断试剂盒比较，分析评价EIAgenHCV抗体诊断试剂盒（EIAgen）的诊断性能。方法应用考核试剂EIAgen和参比试剂Ortho3．0HCV抗体诊断试剂盒对2881份样本进行检测，检测结果不一致时，应用重组免疫印迹试验（RIBA）确证试剂RIBAHCV3．0或核酸试验（NAT）确证试剂进行确证，以对结果进行综合分析。结果2881份样本中，考核试剂及参比试剂检测结果均为阳性，且参比试剂的测量值／临界值（S／CO）≥3．8，或检测结果符合确证试验阳性结果的阳性标本为274份，考核试剂及参比试剂检测结果均为阳性且参比试剂的S／CO〈3．8为59份，阴性标本2539份，不确定的9份被剔除。考核试剂检测真阳性274份，无假阴性结果；真阴性2527份，假阳性12份。考核试剂敏感度为100％，高于参比试剂的98，91％；特异度为99．53％，略低于参比试剂的99．88％。考核试剂对部分国内常见HCV基因型（1a型、1b型、2a型、3型和6型）样本27份，均为真阳性，敏感度为100％，对于非HCV感染的病毒性肝炎、自身免疫性疾病及妊娠样本具有良好的特异度，特异度均为100％。溶血、脂血样本对考核试剂检测结果无影响。考核试剂阳性预测值为95．80％，阴性预测值为100％，准确性为99．57％。考核试剂S／CO≥5．9的样本301份，其中用参比试剂检测S／CO≥3，8占88．70％；考核试剂S／CO〈5．9的29份，其中用参比试剂检测S／CO〈3．8占86．21％。结论EIAgen敏感度100％，特异度较好，是一种优秀的检测抗-HCVEIAgen试剂，尤其适用于阳性样本的筛选。采用EIAgen试剂检测样本，当S／CO≥5．9时，样本的阳性预测值较高。     

国产抗丙型肝炎抗体检测试剂盒灰区范围的设置

目的设置上海地区临床实验室常用的4种国产抗丙型肝炎病毒(HCV)抗体(简称抗HCV)检测试剂的灰区范围。方法收集抗HCV临床初检阳性样本656例,分别用荣盛、新波、科华和科美4家国产抗HCV检测试剂进行复检,分别计算初检不同S/CO值范围的复检率;选择抗HCV初、复检结果不一致的弱阳性样本338例,采用确认试验[重组免疫印迹法(RIBA)]进行确认,对RIBA结果为不确定的样本采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测HCV RNA。以RIBA和HCV RNA结果作为金标准,绘制受试者工作特征(ROC)曲线,探讨其最佳临界S/CO值。以95%真阳性和95%真阴性S/CO值确定4种国产抗HCV检测试剂阴、阳性灰区范围。结果 4种国产抗HCV检测试剂的阴性复检符合率均90%,S/CO值均12.01;阳性复检符合率均95%。荣盛、新波、科华及科美4种国产试剂检测抗HCV的最佳临界S/CO值分别为1.31、2.48、3.22和4.32。分别以95%真阳性率和95%真阴性率确定4种国产抗HCV检测试剂的阳性和阴性临界值,得出荣盛、新波、科华及科美4种国产抗HCV检测试剂S/CO值的灰区范围分别为0.6~1.3、0.7~2.5、0.7~4.0和0.7~4.3。结论确认了上海地区4种常用国产抗HCV检测试剂的最佳临界S/CO值,为临床提供了4种抗HCV检测试剂的灰区范围。     

抗-HCV CLIA检测S/CO值与确证试验结果的相关性探讨

目的：探讨抗丙型肝炎病毒（HCV）抗体化学发光标记免疫分析法（CLIA）检测S/CO值与确证试验阳性的相关性。方法采集用CLIA检测抗-HCV 样本测定值/临界值（S/CO）在0.9～12之间的标本124例,S/CO值〉12.0的标本25例。以重组免疫印迹法（RIBA）最终确认。结果抗-HCV S/CO值在0.9～1.0之间的共20例,RIBA法确证阳性的0例,阴性的15例（占75%）,不确定的5（占15%）例;1.1～5.0之间的共92例,RIBA法确证阳性的5例（5.4%）,阴性的65例（占70.7%）,不确定的22（占23.9%）例;5.1～12.0之间的共12例,RIBA法确证阳性的3例（25%）,阴性的5例（占41.7%）,不确定的4（占33.3%）例。S/CO值〉12.0时,25例标本中RIBA法确证阳性的20例（80%）,阴性的2例（占8%）,不确定的3（占12%）例。 CLIA法检测HCV抗体的敏感性和特异性分别为100%和16.53%。结论抗HCV用CLIA法检测 S/CO值时,RIBA确证的阳性率随着S/CO值的增加显著升高（P〈0.05）。对CLIA法结果S/CO偏低的样本应慎重,综合分析,合理解释,不确定病例随访,必要时用RIBA法进一步验证,避免假阳性。     

抗HCV抗体灰区样本的处置方案和产生原因分析及临床提示

目的探讨抗丙型肝炎病毒(HCV)抗体灰区样本产生的原因和处置方案及临床提示。方法采用5种国产试剂[4种试剂为间接酶联免疫吸附试验(ELISA)、1种试剂为双抗原夹心法]和1种进口试剂(化学发光法)检测血清中抗HCV抗体,结果不一致且在灰区范围内的样本再用重组免疫印迹法(RIBA)检测确认,并对RIBA测定结果为不确定的样本用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)测定HCV RNA。对12例处于窗口期的特殊样本分析HCV RNA的拷贝数和基因型。结果除F试剂外,其他5种抗HCV抗体检测试剂的复检阴性符合率均≥90%;复检阳性符合率随着初检S/CO值的增大而增高,当S/CO值15.01时,6种抗HCV抗体检测试剂的复检阳性符合率均95%。采用6种抗HCV抗体检测试剂分别检测36例灰区样本,单种试剂检测的假阴性率为27.8%~94.4%;2种国产试剂随机组合后检测的假阴性率为8.3%~61.1%;2种国产试剂加进口试剂组合后假阴性率降至5.6%~22.2%;2种国产试剂加国产双抗原夹心法试剂组合后假阴性率降至2.2%~13.9%。6种试剂检测12例特殊样本抗HCV抗体的结果为阴性或部分处于厂家规定的灰区范围内,RIBA确认结果为阴性或不确定,而HCV RNA为弱阳性。12例特殊样本中有8例RNA基因分型为1b型,4例为无分型。结论对于抗HCV抗体检测试剂灰区结果,建议至少采用2种不同的初筛试剂组合对样本进行复检;必要时可引入双抗原夹心法或进口试剂作为复检的补充。为减少窗口期样本的漏检,建议将HCV RNA检测作为补充试验。     

梅毒螺旋体筛查反应性献血者S/CO值与真阳性的相关性研究

目的探讨献血者梅毒抗体(抗-TP)初筛反应性结果的S/CO值与真阳性的相关性,为制定合理的初筛梅毒反应性献血者归队策略提供数据支撑。方法采用2种抗-TP酶联免疫吸附试验(ELISA)国产试剂进行献血者血清标本初筛试验,反应性献血者(包括单试剂反应性、双试剂反应性和灰区反应性)血清标本进行梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)确证评价。采用SPSS 20.0软件绘制抗-TP S/CO值ROC(receiver operating characteristic)曲线,分析各S/CO值区间的阳性预测值,灵敏度和特异性最佳的S/CO值临界点。结果 1)抗-TP初筛反应性献血者血清样本110例,TPPA阳性61例,阴性43例,6例不确定。2) 2种ELISA试剂与TPPA真阳性符合率分别为66.30%、77.22%,真阴性符合率为100%、96.77%。3) ROC分析:A试剂抗-TP初筛试验阳性预测值≥95%的S/CO值为8.99,敏感度为1,特异性为0.959;B试剂抗-TP初筛试验阳性预测值≥95%的S/CO值为4.99,敏感度为1,特异性为0.939。结论根据本研究结果,当两种试剂筛查的S/CO值分别≥9或者≥5时,可以直接判为阳性,无需追踪;当初筛S/CO值分别9和5时,进一步做确证试验,判断是否为真阳性。本研究中,61例TPPA为阳性的献血者直接屏蔽,43例阴性和6例不确定献血者可继续追踪确定是感染状态。     

无偿献血者抗-HCV筛查与RIBA补充实验情况的综合分析

目的评估献血人群抗-HCV ELISA试剂的初筛效果、重组免疫印迹试验(RIBA补充实验)和HCV RNA核酸检测的情况,以探索无偿献血人群抗-HCV的筛查效果。方法收集2013年5月31日-2015年1月20日118 350例标本,采用2个不同厂家抗-HCV ELISA初筛试剂检测,初筛有反应性的标本(S/CO≥0.75)采用RIBA的方法进行补充实验,RIBA补充实验不确定结果的标本进行核酸检测。结果 2种初筛酶免试剂检测结果的阳性符合率为64.6%,阴性符合率为99.9%,总符合率为99.9%。北京万泰抗-HCV抗体诊断试剂盒检测阳性标本93.3%分布于S/CO≥10.0以上,上海科华抗-HCV抗体诊断试剂盒检测阳性标本91.3%分布于S/CO≥7.0以上。2种初筛试剂单边阳性的结果中,RIBA补充实验总阳性结果的比例为2.7%,不确定结果的比例为18.4%,阴性结果的比例为78.9%,北京万泰试剂单边阳性对应有2例RIBA阳性结果,上海科华试剂单边阳性对应有1例RIBA阳性结果,2种试剂检测性能具有一定的互补性。初筛单边阳性及RIBA补充实验结果为不确定的标本核酸检测均为阴性。RIBA阳性标本条带分析结果中,Core、NS3、NS4.1、NS4.2、NS5条带所占的比例分别为35.4%、33.9%、14.9%、2.4%、13.4%;RIBA不确定结果中,仅有Core、NS3 2种条带,比例为49.2%、50.8%。结论在献血人群中抗-HCV ELISA试剂检测存在生物学上的假阳性,一定程度上造成血液资源的浪费,选择灵敏度高、特异性好的初筛试剂,辅以RIBA补充实验,对于保证输血安全具有非常重要的意义。     

一种国产HCV RIBA试剂性能评价

目的评价国产丙型肝炎病毒抗体重组免疫印迹(HCV RIBA)试剂在检测anti-HCV阳性献血者中应用价值。方法采用国产RIBA试剂对107例进口酶联免疫吸附试验(ELISA)检出的抗-HCV阳性样本进行补充实验。平行HBV/HCV/HIV三联单样本核酸定性检测HCV RNA,对RIBA试剂性能进行评价。结果 RIBA阳性检出率50.47%(54/107),RIBA阳性样本中HCV RNA检出率为59.26%(32/54)。随着RIBA结果中条带数增加,HCV RNA检出率增加。RIBA试剂NS3抗原条带检出率最高(90.91%),33例HCV RNA阳性样本NS3均为阳性,阳性符合率100%,两者中等相关性(Spearman相关系数rs=0.486,P0.01),52.85%NS3阳性样本未检测出HCV RNA(37/70),结果一致性较差(Kappa=0.382,P0.001)。22例RIBA阳性/HCV RNA无反应性样本中2例HCV RNA定量检测阳性,另一进口抗-HCV酶免检测试验结果阳性。结论国产RIBA试剂作为检测献血者HCV感染补充实验具有一定应用价值。RIBA可疑结果可以检出部分极低载量HCV RNA样本。     

2个酶免疫分析系统检测抗HCV抗体的重复性和诊断阈值分析

目的分析2个酶免疫分析系统检测抗丙型肝炎病毒(HCV)抗体的重复性和阳性预测值≥95%时的信号/临界值(S/CO)比值。方法分别用Addcare ELISA 1100全自动酶免疫分析系统(简称Addcare系统)和TECAN+FAME组合系统,以间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗HCV抗体,重组免疫印迹分析(RIBA)确认抗HCV抗体。收集高、中、低3个水平的样本,在一批检测内重复检测20次(孔),计算分析内精密度;在10 d以上时间内单次(孔或管)重复进行20批检测,计算分析间精密度。收集202份血清,以RIBA确证试验结果为金标准,用受试者工作特征(ROC)曲线分别确定2个检测系统检测抗HCV抗体的最佳诊断阈值(S/CO比值),并分别确定2个检测系统检测抗HCV抗体的阳性预测值≥95%时的S/CO比值的范围。结果 Addcare系统和TECAN+FAME组合系统检测抗HCV抗体的分析内变异系数(CV)分别为5%、8%、10%和3%、7%、8%,分析间CV分别为8%、12%、15%和6%、10%、13%。2个酶免疫分析系统检测抗HCV抗体的最佳诊断阈值(S/CO比值)分别为3.20和2.90。2个酶免疫分析系统检测抗HCV抗体的阳性预测值≥95%时的S/CO比值范围分别为≥2.41和≥2.57。结论国产Addcare系统和进口TECAN+FAME组合系统检测的结果重复性好,符合率高。酶免疫分析系统ELISA检测抗HCV抗体具有各自最佳的S/CO比值,且S/CO比值与确证试验阳性有一定的相关性,可用S/CO比值预测抗HCV抗体阳性。研究确定酶免疫分析系统检测抗HCV抗体最佳诊断阈值和阳性预测值≥95%时的S/CO比值有助于提高检测结果的可靠性,减少须进行确证试验的样本数。     

抗-HCV RIBA确证试验结果分析

目的　对酶免抗 HCV试剂检测结果不确定的血液样品 ,通过抗 HCVRIBA确认实验来确定 ,有助指导采供血机构的试剂选用。方法　收集省内各中心血站及中心血库在抗 HCV筛查中 ,国产与进口试剂检测结果不符的样本 ,用ChironRIBAHCV3.0SIA试剂进行确认试验。结果　收集到的 5 3份样品 ,经抗 HCVRIBA确认 ,均为阴性和不确定 ,无一例阳性 ,其中进口试剂阴性 ,国产试剂阳性 ,RIBA阴性的有 19例 ,RIBA不确定的有 14例 ;进口试剂阳性 ,国产试剂阴性 ,RIBA阴性的有 14例 ;RIBA不确定的有 6例。 2 0例RIBA不确定的样本中 ,c10 0 p阳性有10例 ,c33c阳性的有 5例 ,c2 2p阳性的有 5例。结论　以RIBA进行确认 ,酶免抗 HCV国产试剂和进口试剂均存在不同程度的假阳性。建议对于不确定的样本跟踪随访。     

利用RIBA实验确定VITROS抗-HCV检测试剂CUT-OFF值的分析

目的采用重组蛋白免疫印迹分析(RIBA)实验设置该实验室常用的VITROS全自动免疫分析仪进行丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)检测试剂的CUT-OFF值。方法收集抗-HCV阳性标本217例,其中吸光度比临界值(S/CO)8.0有101例,占46.5%,S/CO3.0的极低阳性共69例,占31.8%,拟用RIBA对S/CO8.0的样本进行确认,从而确定抗-HCV的S/CO值与RIBA结果之间的相关关系,以此来建立该实验室CUT-OFF值。对61例S/CO8.0(包括S/CO3.0共49例,3.0～8.0共12例)进行了RIBA确认实验。结果根据RIBA结果可分为3组,31例阴性、21例阳性和9例不确定。其S/CO值分别为阴性组1.67±0.41,阳性组4.41±2.72,不确定组2.64±0.38,不确定组和阳性组的S/CO值比较,差异有统计学意义(P0.05)。抗-HCV的S/CO值与RIBA结果之间呈正相关。根据受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析抗-HCV的CUT-OFF值为2.10,ROC曲线下面积(AUC)可达0.94,特异度为92.4%,灵敏度为85.2%。结论VITROS抗-HCV的S/CO值与RIBA结果间呈正相关,S/CO值越高,RIBA确认阳性的比例越高;当CUTOFF值为2.10时,可以排除大多数的假阳性结果,是一个合适的临界值。