mitoKATP通道开放剂对高氧诱导人A549细胞凋亡的保护作用

目的：探讨mitoKATP通道开放剂二氮嗪对高氧诱导人A549细胞凋亡的保护作用和机制。方法：体外培养人肺泡Ⅱ型上皮细胞（A549）,随机分为对照组、高氧组（换液后通入900 mL/L氧气和50 mL/L 二氧化碳高纯混合气,10 min后密闭培养）和二氮嗪组（用终浓度为100 μmol/L的二氮嗪培养液预处理24 h再进行高氧诱导）。3组分别于处理后12、24、48 h收集细胞进行检测。倒置相差显微镜下观察A549细胞形态,流式细胞仪检测48 h的细胞凋亡,免疫组化法检测细胞内Omi/HtrA2的表达。结果：与对照组相比,高氧组细胞受损明显,形态改变,细胞凋亡率增加（P<0.05）,胞浆Omi/HtrA2表达增多（P<0.05）。与高氧组相比,二氮嗪组细胞损伤状况明显得到改善,细胞生长状况明显好转,形态明显变好;胞浆Omi/HtrA2表达减少（P<0.05）,细胞凋亡率减少（P<0.05）。结论：mitoKATP通道开放剂二氮嗪具有降低Omi/HtrA2表达和A549细胞凋亡,从而减轻高氧诱导的肺损伤的作用。     

硫氧还蛋白-2和细胞色素C在高氧暴露下A549细胞中的表达和意义

目的观察高体积分数氧（高氧）暴露后人肺泡Ⅱ型上皮细胞来源的肺腺癌A549细胞中硫氧还蛋白-2（Trx-2）和细胞色素C（Cytc）的动态表达，探讨Trx-2和Cytc表达变化在高氧肺损伤中的作用。方法复苏液氮罐中冻存的人肺腺癌A549细胞系后，加入100g／L胎牛血清的MEM培养基，置于37℃50mL／L二氧化碳（CO2）饱和湿度培养箱中培养。然后体外传代培养A549细胞，待其生长至接近融合状态时，随机分为高氧组和空气组，每组18瓶A549细胞（50mL培养瓶）。高氧组持续暴露于常压高氧中，氧体积分数为900mL／L，CO2体积分数为50mL／L；空气组仍置于50mL／L CO2培养箱中。二组分别于高氧或空气暴露12、24、48h后提取A549细胞总RNA，半定量反转录聚合酶链反应检测Trx-2和Cytc mRNA水平；蛋白印迹法检测A549细胞Trx-2蛋白的表达变化。结果1.与空气组比较，高氧组24h Trx-2 mRNA的表达显著增强（P〈0．05）；48h Trx-2 mRNA的表达减弱，二组比较无显著性差异（P〉0．05）。2．与空气组比较，高氧组12h Cytc mRNA的表达显著增强（P〈0．05）；24h Cytc mRNA的表达减弱，二组比较无显著性差异（P〉0．05）；48h显著减弱（P〈0．05）。3．与空气组比较，高氧组12h Trx-2蛋白的表达显著增强（P〈0．05）；24h仍增强，二组比较无显著差异（P〉0．05）；48h显著减弱（P〈0．05）。结论高氧暴露可诱导A549细胞中Trx-2和Cytc异常表达，提示Trx-2对高氧肺损伤线粒体可能起重要的保护作用，Cytc在高氧肺损伤细胞凋亡发生发展中起重要作用。     

高体积分数氧暴露下A549细胞中小窝蛋白-1与转化生长因子-β1的表达及其相互关系

目的 观察高体积分数氧(高氧)暴露后肺腺癌A549细胞中小窝蛋白-1(CAV-1)和转化生长因子(TGF)-β1的动态表达,探讨CAV-1和TGF-β1表达变化在高氧肺损伤中的作用.方法 复苏液氮罐中冻存的A549细胞系,体外传代培养,待其在37℃、50 mL/L二氧化碳(CO2)饱和湿度培养箱中生长至接近融合时,随机分为对照组和高氧组.每组18瓶A549细胞.高氧组换液后通入3 L/min的950 mL/L氧气和50 mL/LCO2高纯混合气,10 min后密闭培养.对照组仍置于50 mL/L CO2培养箱中.2组分别于12 h、24 h、48 h后在倒置相差显微镜下观察A549细胞形态并照相.采用免疫荧光双染检测CAV-1、TGF-β1表达.结果 对照组CAV-1高表达(44.25±3.23),TGF-β1低表达(10.18±2.74);高氧组随通氧时间延长,CVA-1表达逐渐减弱(12 h:35.25±1.88,24 h:20.75±1.68,48 h:9.86±2.80),TGF-β1表达逐渐增强(12 h:17.32±1.50,24 h:26.51±1.82,48 h:41.94 ±4.47).对照组及高氧组12 h、24h、48 h CAV-1的阳性表达与TGF-β1的阳性表达呈负相关(r=-0.91、-0.62,-0.53、-0.88,P均＜0.05).结论 CAV-1表达降低通过减弱对TGF-β1受体的抑制作用,激活TGF-β1信号通路,导致高氧肺损伤.     

降钙素基因相关肽调控细胞外信号调节激酶减轻高体积分数氧对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的损伤作用

目的 探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对高体积分数氧(高氧)暴露下胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞( AECⅡ)氧化损伤的影响,及其作用是否由细胞外信号调节激酶(ERK)所介导.方法 原代分离培养孕21 d胎鼠AECⅡ,培养12 h待细胞贴壁后分为6组:空气组、空气CGRP组、空气CGRP拮抗剂组、高氧组、高氧CGRP组、高氧CGRP拮抗剂组.空气组和高氧组分别在氧体积分数为210 mL·L-1的空气或850 mL·L-1的氧气中培养18 h.CGRP组和CGRP拮抗剂组分别在空气或高氧暴露前加入CGRP或同时加入CGRP和其受体拮抗剂CGRPS-37,终浓度分别为10-8 mol·L-1和10-7 mol·L-1.用免疫比浊法测定培养液LDH、AKP和丙二醛(MDA)水平,流式细胞术测定细胞内活性氧(RoS)水平,荧光显微镜检测胞质表面活性蛋白C(SP-C)的表达情况,Western blot检测磷酸化ERK1,2(p-ERK1/2)的表达水平.结果 高氧组MDA、LDH、AKP、ROS及p-ERK1/2水平均明显高于空气组[(2.29±0.10) μmol ·L-1 vs (1.06 ±0.14)μmol·L-1,( 58.79±5.01)U·L-1 vs(25.92±3.68)U·L-1,(24.63±2.92)U·L-1 vs (10.34±1.78)U·L-1,47.74±3.35 vs 25.96±5.04,1.21±0.06 vs 0.45±0.05,Pa＜0.01],而细胞内SP-C表达则明显低于空气组(22.75±3.31 vs 43.50±4.42);与高氧组及高氧CGRP拮抗剂组比较,高氧CGRP组MDA、LDH、ROS及AKP水平显著降低,而p-ERK1/2及SP-C的表达水平则明显增高(Pa＜0.01).空气组、空气CGRP组、空气CGRP拮抗剂组组间MDA、LDH、ROS、AKP及SP-C表达水平比较差异均无统计学意义;空气CGRP组p-ERK1/2表达水平明显高于空气组及空气CGRP拮抗剂组(Pa＜0.01).结论 CGRP可减轻高氧对AECⅡ的氧化损伤,其作用机制可能是通过ERK的活化来介导.     

SiRNA抑制高氧暴露下A549细胞硫氧还蛋白-2表达及其与肺细胞代谢和凋亡的关系

目的研究小分子干扰RNA(SiRNA)抑制高氧暴露下人肺腺癌A549细胞硫氧还蛋白-2(Trx-2)表达及其与肺细胞代谢和凋亡的关系,探讨高氧肺损伤的发病机制和防治措施。方法体外传代培养A549细胞系,待其生长至接近亚汇合状态时,将体外化学合成Trx-2序列特异性的SiRNA通过Lipofectamine2000转染A549细胞。将细胞随机分为无干扰空气组、无干扰高氧组、干扰后空气组、干扰后高氧组4组。高氧组持续暴露于常压高浓度氧(92%O2,5%CO2)中;空气组仍置于5%CO2培养箱中。4组分别于高氧或空气暴露12、24、48 h提取A549细胞总RNA。采用半定量RT-PCR测定Trx-2、三磷酸腺苷合成酶6,8(ATPase 6、8)及细胞色素C(CytC)mRNA的表达;Western-blot检测Trx-2蛋白表达;流式细胞术检测高氧和沉默Trx-2对A549细胞凋亡的影响。结果序列特异性SiRNA可抑制Trx-2表达,SiRNA-1、SiRNA-2、SiRNA-3 3组Trx-2蛋白表达均受到抑制,SiRNA-1组抑制效率最高(79.51%)。与无干扰空气组相比,无干扰高氧组12 h CytC和24 h Trx-2 mRNA的表达增高,48 h CytC mRNA的表达降低(P<0.05)。与干扰后空气组相比,干扰后高氧组24、48 h Trx-2 mRNA的表达减弱,但在12、24 h CytC mRNA表达水平升高(P<0.05)。与无干扰空气组相比,无干扰高氧组12、48 hATPase 6 mRNA的表达增高,24、48 h ATPase 8 mRNA的表达增高(P<0.05)。与干扰后空气组相比,干扰后高氧组24、48 h ATPase 6,8 mRNA的表达减弱(P<0.05)。干扰后高氧组24、48 h A549细胞凋亡百分数明显高于干扰后空气组(P<0.05)。结论高氧暴露和沉默Trx-2导致A549细胞ATPase 6,8表达下调和CytC表达升高,表明能量代谢障碍和细胞凋亡参与高氧肺损伤发病过程,Trx-2对高氧肺损伤线粒体起重要的保护作用。     

PKCβ/P66Shc氧化应激通路在高氧诱导人肺泡上皮细胞活性氧簇产生中的作用

目的探讨PKCβ/P66Shc氧化应激通路在高氧诱导的肺泡上皮细胞(A549)活性氧簇(ROS)产生中的作用及其抑制剂对高氧诱导的A549细胞损伤的保护作用。方法体外培养A549细胞系,随机分为对照组、高氧组和LY333531组。对照组细胞置于含5%CO2培养箱中;以3 L/min速度向高氧组细胞中通入950 m L/L O2和50 m L/L CO2的高纯混合气,10 min后密闭培养;LY333531组细胞于高氧诱导前用终浓度为10μmol/L的PKCβ抑制剂LY333531预处理24 h。采用Western blot检测A549细胞中PKCβ、Pin1、P66Shc和P66Shc-Ser36蛋白的表达变化。激光共聚焦显微镜检测P66Shc的线粒体转位率、线粒体ROS产生及线粒体膜电位的变化。结果与对照组相比,高氧组A549细胞内PKCβ、Pin1、P66Shc和P66Shc-Ser36蛋白表达均显著增加(P0.05);LY333531组Pin1、P66Shc和P66Shc-Ser36的表达明显低于高氧组,但仍高于对照组(P0.05)。与对照组相比,高氧组细胞P66Shc的线粒体转位率和ROS生成水平明显增加(P0.05);LY333531组P66Shc转位率和ROS生成水平明显低于高氧组,但仍高于对照组(P0.05)。与对照组相比,高氧组线粒体膜电位明显下降(P0.05);LY333531组线粒体膜电位较高氧组升高,但仍低于对照组(P0.05)。结论高氧能诱导肺泡上皮细胞内PKCβ表达增多,线粒体ROS产生增多,膜电位下降。LY333531能抑制PKCβ蛋白的表达,从而减轻高氧诱导的A549细胞的损伤。     

胰岛素样生长因子-1对高氧诱导的A549细胞凋亡的影响

目的：胰岛素样生长因子-1(IGF-1）具有促进细胞分化、抑制细胞凋亡等多种生物学活性。该研究旨在探讨IGF-1对高氧诱导的A549细胞凋亡的影响及其抗凋亡机制。方法：将传代培养的A549细胞暴露于高氧环境,并以不同浓度IGF-1（1、10、100 ng/mL）干预48 h,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,Annexin V-FITC／PI双染流式细胞术检测细胞凋亡变化,同时用流式细胞仪检测凋亡调控相关蛋白（Bax、Bcl-2）表达水平的变化。结果：高氧组细胞存活率为（51±3）%,IGF-1干预组细胞存活率随着IGF-1药物浓度的递增逐渐升高,中、高剂量IGF-1干预组细胞存活率分别为（64±3）%和（88±4）%,与高氧组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。高氧组A549细胞凋亡率为(38.3±5.4)%,较空气组（2.4±0.9）%明显增多;高氧组Bcl-2的蛋白表达水平为（72±5）%,较空气组（91±4）%明显下降;高氧组Bax的表达水平为（54±6）%,较空气组（3±2）%明显升高,差异均有统计学意义（P<0.05)。与高氧组比较,IGF-1干预组细胞凋亡率随着药物浓度的增加逐渐下降,分别为（16.1±4.7）%、（9.2±2.8）%和（6.9±2.5）%,差异有统计学意义（P<0.05)。与高氧组比较,IGF-1干预组细胞Bcl-2的表达逐渐增高,分别为（79±4）%、（94±4）%和（100±5）%,而Bax的表达逐渐下降,分别为（26±4）%、（5±2）%和（4±2）%,差异均有统计学意义（P<0.05)。结论：高氧明显抑制A549细胞的增殖,促进其凋亡;IGF-1具有促进A549细胞增殖,通过调节凋亡调控蛋白Bcl 2和Bax表达,抑制高氧诱导的A549细胞凋亡的作用。     

核因子红细胞系2相关因子2抑制铁死亡对高氧肺损伤的影响

目的观察不同条件下人肺微血管内皮细胞(HPMEC)中核因子红细胞系2相关因子2(Nrf2)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达变化, 探讨Nrf2抑制铁死亡在减轻高氧肺损伤(HLI)过程中的作用。方法采用HPMEC建立高氧暴露模型。将HPMEC按照简单随机分组分为4组:对照组、高氧组(氧体积分数950 mL/L)、铁死亡抑制剂组(氧体积分数950 mL/L, 10 μmol/L Ferrostatin)及Nrf2抑制剂组(氧体积分数950 mL/L, 10 μmol/L ML385), 分别在24 h、48 h使用细胞活性检测试剂盒测定细胞活性, 荧光活性氧(ROS)试剂盒检测各组细胞内ROS水平, 应用实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测Nrf2、GPX4的mRNA及其蛋白表达水平。2组间比较采用两样本t检验;多组间比较采用单因素方差分析。结果 1.与对照组相比, 高氧组HPMEC细胞活性降低, 细胞内ROS含量增加, 24 h及48 h GPX4 mRNA(24 h:0.750±0.010比1.010±0.160, 48 h:0.690±0.050比1.000...     

高浓度氧对早产鼠II型肺泡上皮细胞增殖和细胞周期的影响

目的探讨高浓度氧(简称高氧)对早产鼠II型肺泡上皮细胞(AECII)增殖和细胞周期的影响。方法原代培养早产大鼠AECII,建立高氧细胞损伤模型。血球计数板计数法对培养细胞计数,台盼蓝拒染法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期和Ki67表达。结果空气组AECII在培养后其数目不断增加,高氧组给氧后48和72h,细胞数目减少、细胞活力降低。高氧使G0/G1期细胞比例显著增多,S和G2/M期细胞比例明显减少。高氧组给氧后24、48及72h,Ki67阳性细胞的表达率及荧光指数较同时间点空气组均明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论原代培养的早产大鼠AECII暴露在高氧环境中发生G1期阻滞,Ki67表达减少,细胞增殖受抑,这种增殖受抑与早产儿慢性肺损伤的发生密切相关。     

高浓度氧对早产鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞增殖和细胞周期的影响

目的探讨高浓度氧（简称高氧）对早产鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞（AECⅡ）增殖和细胞周期的影响。方法原代培养早产大鼠AECⅡ，建立高氧细胞损伤模型。血球计数板计数法对培养细胞计数，台盼蓝拒染法检测细胞活力，流式细胞术检测细胞周期和Ki67表达。结果空气组AECⅡ在培养后其数目不断增加，高氧组给氧后48和72h，细胞数目减少、细胞活力降低。高氧使G0／G1期细胞比例显著增多，S和G2／M期细胞比例明显减少。高氧组给氧后24、48及72h，Ki67阳性细胞的表达率及荧光指数较同时间点空气组均明显降低（P〈0．05或P〈0．01）。结论原代培养的早产大鼠AECⅡ暴露在高氧环境中发生G1期阻滞，Ki67表达减少，细胞增殖受抑，这种增殖受抑与早产儿慢性肺损伤的发生密切相关。     

沉默Pin1表达抑制高氧诱导人肺泡上皮细胞凋亡

目的　研究沉默Pin1表达对高氧诱导人肺泡上皮细胞(A549细胞)凋亡的影响。方法　在体外常规培养A549细胞, 随机分为对照组、高氧组、空载体组和Pin1-shRNA组, 以3 L/min速度向各处理组细胞中通入95% O2和5% CO2的高纯混合气10 min。培养24 h后, 倒置相差显微镜下观察细胞形态; 流式细胞术检测细胞凋亡率; SP细胞免疫化学法检测细胞凋亡相关蛋白XIAP和Caspase-9表达; 荧光显微镜检测细胞线粒体活性氧簇(ROS)及线粒体膜电位。结果　高氧组和空载体组细胞均生长状态差, Pin1-shRNA组活细胞数量较高氧组和空载体组多, 但比对照组少。与对照组相比, 高氧组和空载体组细胞凋亡率增加、Caspase-9表达增加、XIAP表达降低、ROS含量增加、线粒体膜电位下降(均P<0.05)。而Pin1-shRNA组与高氧组和空载体组相比, 细胞凋亡率下降、Caspase-9表达降低、XIAP表达增加、ROS含量降低、线粒体膜电位升高(均P<0.05), 但与对照组相比差异亦有统计学意义(均P<0.05)。结论 抑制人肺泡上皮细胞Pin1表达可减轻高氧诱导的细胞凋亡。     

罗格列酮对新生大鼠高氧肺损伤的保护作用

目的：探讨PPAR-γ配体罗格列酮在新生大鼠高氧肺损伤中的保护作用。方法：取新生Sprague-Dawley大鼠96只,随机分为对照组、高氧组和罗格列酮治疗组。对照组在空气中饲养,后两组暴露在85%～90%氧气中。治疗组给予罗格列酮腹腔内注射每日1次（2 mg/kg）。3组于实验第1、3、7、14 d各处死8只大鼠并取其肺组织,行苏木精-伊红染色观察其病理形态改变,同时取其肺泡灌洗液（BALF）,检测其中的丙二醛（MDA）含量及白细胞计数。结果：对照组在各时间点均未见明显病理性改变;高氧组3 d时肺泡上皮细胞肿胀,肺泡腔内可见大量炎性渗出液,14 d时肺泡减少,肺间质增厚,肺泡发育受阻;与高氧组相比,罗格列酮治疗组炎症反应表现较轻,肺泡发育障碍有所缓解。与对照组相比,高氧组3 d时辐射状肺泡计数(RAC)明显下降（P<0.05）,MDA和白细胞计数明显增高（P<0.05）,这种变化一直持续至14 d（P<0.05）;与高氧组相比,罗格列酮治疗组3、7、14 d各亚组RAC明显增高（P<0.05）,MDA和白细胞计数水平较低（P<0.05）。结论：高氧肺损伤时出现肺部的急性炎症反应和肺泡发育受阻,罗格列酮对高氧肺损伤可能具有保护作用。     

一氧化氮吸入对新生鼠高氧肺损伤时表面活性蛋白A和肺甘露糖结合力的影响

目的：通过观察吸入一氧化氮(iNO)对新生大鼠高氧肺损伤时表面活性蛋白A(SP-A)和肺组织甘露糖结合力(MBA)的影响,探讨iNO对高氧肺损伤保护作用的可能机制。方法：新生大鼠随机分为对照组(空气);高氧组(>95%O2,6d);NO组(空气+10ppmNO,24h);高氧+NO组(>95%O2,6d+10ppmNO,24h)。观察暴露后2d和6d肺组织病理变化,肺SP-AmRNA基因表达、蛋白含量和MBA的变化。结果：高氧组病理损伤明显,暴露后2d时SP-A的mRNA含量(0.81±0.04vs1.53±0.25)和蛋白表达(59.45±18.37vs89.77±16.41)比对照组减少,6d时分别比对照组增加(0.81±0.02vs0.63±0.03),(93.57±13.71vs47.73±21.69),(P<0.05)。高氧+NO组暴露后2d时病理损伤比高氧组明显减轻,SP-AmRNA(0.55±0.91)比对照组和高氧组降低,SP-A蛋白表达(55.12±17.53)比对照组降低(P<0.01);6d时SP-A蛋白表达(67.33±18.59)比高氧组降低(P<0.05)。甘露糖结合力在暴露后2d时NO组比对照组增加(0.821±0.133vs0.580±0.158)、高氧+NO组比高氧组增加(0.430±0.175vs0.738±0.141)(P<0.05)。结论：小剂量NO吸入可降低高氧肺组织SP-A蛋白表达的升高,增加肺组织的MBA,减轻肺组织的病理损伤。     

高氧暴露对新生鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞转分化水平的调节作用

目的 研究体内及体外高氧暴露对Ⅱ型肺泡上皮细胞(typeⅡalveolar epithelial cells,AEC Ⅱ)转分化水平的影响,旨在阐明支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)肺上皮损伤的发生机制.方法 新生Wistar大鼠生后随机分为对照组(吸入空气)和模型组(吸入氧浓度为85％),于7d、14 d、21 d进行动物模型肺组织取材并分离AECⅡ.细胞标本检测Ⅰ型肺泡上皮细胞(type Ⅰalveolar epithelial cells,AEC Ⅰ)特异性标志物水通道蛋白5(aquaporin 5,AQP5)及AECⅡ标志物表面活性蛋白C(surfactant protein C,SP-C)表达.从正常新生鼠肺分离的AECⅡ在体外原代培养24h后随机分为常氧组(21％ O2)和高氧组(85％ O2),培养48 h后收集细胞,应用免疫荧光双标染色观察AQP5和SP-C表达及定位,Western blot方法检测AQP5和SP-C蛋白表达水平,荧光实时定量PCR方法检测AQP5和SP-CmRNA表达水平.结果 BPD模型组大鼠AECⅡ中AQP5蛋白表达从7d开始较对照组增多,SP-C蛋白表达从14 d开始较对照组减少.模型组中AQP5 mRNA从7d开始表达增多,SP-C mRNA从7d开始表达减少(P＜0.05),且随高氧暴露时间延长两组间差异更加显著.由正常新生鼠肺分离的AECⅡ进行体外原代培养后,免疫荧光双染可见高氧组较常氧组AQP5表达增多,SP-C表达减少,双染细胞明显增多.蛋白和mRNA定量检测结果均提示高氧组较常氧组AQP5表达增多,SP-C表达减少(P＜0.01).结论 无论体内还是体外高氧暴露下,AECⅡ特异性标志物SP-C表达下调,而AEC Ⅰ特异性标志物AQP-5表达上调,提示AECⅡ过度转分化参与高氧肺损伤后的修复过程.     

需肌醇酶1介导的内质网应激通路参与高氧所致早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡

目的探讨需肌醇酶1(IRE1)介导的内质网应激通路与高氧暴露肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)凋亡的关系。方法原代培养早产大鼠AECⅡ,随机分为空气组和高氧组,建立高氧细胞损伤模型。在24、48及72h收集细胞,倒置相差显微镜观察细胞形态变化;AnnexinV/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR及Westernblot分别检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、IRE1、X盒结合蛋白1(XBP1)及C/EBP同源蛋白(CHOP)m RNA及蛋白表达;免疫荧光检测CHOP表达。结果随着给氧时间延长,高氧组AECⅡ伸展呈不规则形,出现空泡样改变;高氧组AECⅡ凋亡率与同时间点空气组比较明显增加(P0.05);随着氧暴露时间延长,高氧组GRP78、IRE1、XBP1及CHOPm RNA及蛋白表达升高,且较同时间点空气组明显上升(P0.05);高氧组CHOP荧光强度高于同时间点空气组。高氧组CHOP蛋白表达与AECⅡ凋亡率、IRE1及XBP1蛋白表达呈显著正相关(r=0.97、0.85、0.88,均P0.05)。结论高氧所致AECⅡ凋亡可能是通过激活IRE1-XBP1-CHOP通路来实现。     

泛素蛋白酶体抑制剂MG-132对高氧肺损伤大鼠肺上皮细胞凋亡的影响

目的 观察泛素蛋白酶体抑制剂MG-132对高氧肺损伤大鼠肺上皮细胞凋亡的影响并初步探讨相关机制.方法 实验采用完全随机设计.将26只SD大鼠分为4组:高氧组(n=8)、高氧+MG-132组(n=8)、空气对照组(n=5)、MG-132对照组(n=5).成功制备高氧肺损伤大鼠模型后,观察肺组织病理学改变,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化法检测Bax、Bcl-2蛋白的表达并计算Bcl.2/Bax值.结果 高氧组SD大鼠肺组织可见明显急性炎症反应.高氧组、高氧+MG-132组的凋亡指数分别为66.76±7.64、34.78±4.40,明显高于空气组与MG-132对照组(14.48±1.75、12.88±1.95),但高氧+MG-132组的凋亡指数要低于高氧组,差异有显著性(P<0.05).高氧+MG-132组Bcl-2/Bax值(1.22±0.15)高于高氧组(0.87±0.11),差异有显著性(P<0.05).结论 高氧诱发肺组织细胞发生凋亡,蛋白酶体抑制剂MG-132可以通过调节Bcl-2与Bax的表达减轻高氧引起的细胞凋亡.     

基质金属蛋白酶-8及其组织抑制因子-1在高氧致新生鼠肺纤维化中的基因表达及其意义

目的：近年来研究发现细胞外基质（ECM）的过度沉积与肺纤维化发生密切相关，而ECM合成与降解在新生儿慢性肺疾病的肺纤维化发生、发展中作用如何尚不清楚。本文着重研究基质金属蛋白酶-8（MMP-8, Ⅰ型胶原的降解酶）及其组织抑制因子-1（TIMP-1）基因在高氧致新生鼠肺损伤中的表达，并探讨其在纤维化中的作用。方法：80只足月新生大鼠依吸氧浓度（FiO2）随机分为高氧组（FiO2＝0.90）和对照组（FiO2＝0.21）,每组均为40只。采用高浓度氧诱导新生鼠肺损伤模型，应用酶联免疫吸附法（ELISA）、免疫组织化学及反转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术，动态研究MMP-8及TIMP-1 mRNA表达，并同时观察肺组织Ⅰ型胶原蛋白的表达强度及其含量变化。结果：实验后14 d 和21 d的高氧组肺组织中，Ⅰ型胶原蛋白表达和Ⅰ型胶原水平均高于对照组， 差异有显著性意义。 而实验后14 d 和21 d，高氧组肺组织MMP-8 mRNA表达降低，TIMP-1 mRNA表达增高，与对照组比较差异有显著性意义。结论：高氧通过下调MMP-8及上调TIMP-1基因表达，导致ECM降解减少，过量ECM沉积于肺组织, 这可能是高氧致肺纤维化的机制之一。［中国当代儿科杂志，2007，9（1）：1-5］