RNA干扰沉默神经型钙黏素基因对人食管 癌细胞系EC9706侵袭能力的影响

 探讨RNAi沉默N-cadherin基因表达对人食管癌细胞系EC9706体外侵袭能力的影响。方法 将N-cadherin基因的RNA干扰载体pMSCVneo/N-cadherin质粒通过脂质体转染法转染人食管癌细胞系EC9706,运用G418进行抗性克隆的筛选和扩增,进而得到稳定转染的人食管癌细胞系EC9706,通过RT-PCR和Western blot检测稳定转染后的人食管癌细胞系EC9706中N-cadherin的mRNA和蛋白表达水平的变化,同时检测转染前后食管癌细胞系EC9706中MMP-9基因表达水平的变化,并通过Transwell小室体外侵袭实验检测转染前后人食管癌细胞系EC9706体外侵袭能力的变化。结果 通过G418加压筛选法得到稳定转染的人食管癌细胞系EC9706,RT-PCR和Western blot检测结果显示,稳定转染后的人食管癌细胞系EC9706中N-cadherin的mRNA和蛋白表达水平均下调,同时MMP-9基因的mRNA表达水平也随之下调;Transwell小室体外侵袭实验结果显示,伴随着N-cadherin和MMP-9表达水平的下调,人食管癌细胞系EC9706的体外侵袭能力也降低（P＜0.05）。结论 RNA干扰沉默神经型钙黏素基因可以使人食管癌细胞系EC9706的体外侵袭能力降低。     

siRNA靶向沉默MALAT-1基因对人食管癌EC9706细胞体外侵袭迁移的影响

目的:研究长链非编码RNA MALAT-1对食管癌EC9706细胞系迁移、侵袭能力的影响。方法:化学合成针对MALAT-1的siRNA,脂质体法转染EC9706细胞,转染48h后RT-PCR和Western blot检测各细胞MALAT-1在mRNA和蛋白质水平的表达。Transwell实验检测迁移、侵袭能力改变。结果:小干扰RNA下调MALAT-1表达后,RT-PCR和Western blot证实食管癌EC9706细胞中MALAT-1的表达在mRNA水平和蛋白质水平均明显下调,Transwell实验证实食管癌EC9706细胞迁移、侵袭能力下降。结论:抑制MALAT-1表达能够使食管鳞癌细胞的侵袭转移能力明显降低。     

Ezrin对食管鳞癌细胞侵袭、迁移和黏附能力的影响

[目的]探讨Ezrin对食管鳞癌细胞转移能力的影响。[方法]用脂质体转染方法将空载体和构建好的pCB6-Ezrin载体稳定转染入EC9706细胞中,经G418筛选后,通过Western blotting法检测Ezrin表达情况选择试验用细胞。通过MTT法检测EC9706细胞增殖和黏附能力的变化,通过流式细胞仪检测凋亡的变化,通过Transwell、划痕试验检测侵袭、迁移能力的改变。[结果]与对照组相比,过表达Ezrin的EC9706细胞侵袭(P<0.01)、迁移(P<0.05)和黏附能力(P<0.01和P<0.05)较空载体增强,但增殖能力和凋亡未发生显著变化(P>0.05)。[结论]Ezrin可以增强食管鳞癌细胞的侵袭、迁移和黏附能力,可能在食管癌远处转移中具有重要作用。     

miR-1269a 在食管癌组织中的表达及其对KYSE30 细胞恶性生物学行为的影响

[摘要] 目的：探讨miR-1269a 在食管癌组织中的表达及其对KYSE30 细胞恶性生物学行为的影响,并研究其可能的作用机制。方法：选取90 例在河北医科大学第四医院通过手术切除的食管癌组织标本,并收集正常食管永生化上皮细胞和食管癌细胞系,应用qPCR 实验检测癌组织和细胞系miR-1269a 的表达水平。将miR-1269a 的mimics 和inhibitor 分别转染食管癌细胞KYSE30 后,用MTS、Transwell 和克隆形成实验分别检测miR-1269a 对KYSE30 细胞增殖、侵袭、迁移和克隆形成能力的影响。通过生物信息学软件预测miR-1269a 的靶基因,并通过WB实验和双荧光素酶报告基因实验验证miR-1269a 对靶基因的调控作用。转染SOX6 质粒后,采用MTS、Transwell 和克隆形成实验分别检测SOX6 对KYSE30 细胞的增殖、侵袭、迁移和克隆形成能力的影响,并利用回复实验进一步验证结果。结果：食管癌组织中miR-1269a 的表达水平显著高于癌旁组织（P<0.05）;与正常食管上皮细胞相比,食管癌细胞系中miR-1269a 的表达水平显著升高（P<0.05 或P<0.01）。miR-1269a mimics 转染组KYSE30 细胞的增殖、侵袭、迁移和克隆形成能力显著高于mimics NC组（P<0.05 或P<0.01）;inhibitor 转染组KYSE30 细胞的增殖、侵袭、迁移和克隆形成能力显著低于inhibitor NC组（P<0.05 或P<0.01）。miR-1269a 可与SOX6 的3’UTR区相结合,且过表达miR-1269a 后,KYSE30细胞的SOX6 表达水平和荧光素酶报告基因的活性均显著降低（P<0.05）。回复实验表明,高表达miR-1269a 可以促进食管癌细胞增殖、侵袭和迁移（P<0.05 或P<0.01）,同时高表达SOX6 后,miR-1269a 的促进作用出现部分逆转。结论：miR-1269a 在食管癌组织和细胞系中表达上调,能够促进KYSE30 细胞的增殖、迁移、侵袭和克隆形成等恶性生物学行为,其机制可能是通过抑制靶基因SOX6 实现的。     

丹参酮IIA 通过调控上皮间质转化抑制食管癌EC9706 和KYSE70 细胞的凋亡、侵袭和迁移

目的:探讨丹参酮IIA 对食管癌EC9706 和KYSE70 细胞侵袭和迁移的影响及其调控机制。方法:食管癌细胞系EC9706 和KYSE70 培养完成后分为4 组：对照组（加DMSO）和2、4、6 μg/ml 丹参酮组。采用CCK-8 法检测EC9706 和KYSE70 细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell 实验检测细胞侵袭能力,划痕愈合实验检测细胞迁移能力,qRT-PCR和Western blotting 实验检测EMT相关蛋白E-cadherin、Snail-2、Vimentin 和N-cadherin mRNA和蛋白表达水平。结果：小于6 μg/ml的丹参酮IIA 不影响食管癌EC9706 和KYSE70 细胞增殖活力;4、6 μg/ml 丹参酮IIA 组细胞凋亡率明显高于对照组（均P<0.01）;2、4、6 μg/ml 丹参酮组每个视野下的侵袭细胞数及划痕愈合率明显低于对照组（均P<0.01）,且EC9706 和KYSE70 细胞形态由纺锤状的间充质形态转变为上皮形态。与对照组相比,2、4、6 μg/ml 丹参酮组E-cadherin 表达明显升高,Snail-2、Vimentin 和N-cadherin表达明显下降（均P<0.01）。结论：丹参酮IIA 通过抑制EMT促进食管癌EC9706 和KYSE70 细胞凋亡,并减弱其侵袭和迁移能力。     

RACK1对食管鳞癌细胞侵袭转移能力的抑制作用

目的:探讨RACK1表达水平与食管鳞状细胞癌不同转移潜能细胞侵袭转移能力的关系.方法:Transwell实验检测食管鳞癌EC9706-H、EC9706-L和EC109-H、EC109-L细胞的转移潜能;利用RT-PCR和Western blot方法,检测食管鳞癌高低转移细胞系EC9706-H、EC9706-L和EC109-H、EC109-L中RACK1的mRNA和蛋白表达水平.利用慢病毒转染技术上调RACK1低表达细胞中RACK1的表达后,采用Transwell实验检测其侵袭和迁移能力的变化.结果:EC9706-H细胞和EC109-H细胞的体外侵袭和迁移能力显著高于EC9706-L和EC109-L细胞系.RT-PCR和Western blot实验结果显示,RACK1在EC9706-H细胞和EC109-H细胞中呈低表达;而在EC9706-L细胞和EC109-L细胞中呈高表达.通过慢病毒转染技术上调EC9706-H和EC109-H细胞系中RACK1的表达,二者的侵袭转移能力明显降低.结论:RACK1表达水平与食管鳞癌细胞的侵袭转移能力负相关,过表达RACK1能够抑制食管鳞癌细胞的侵袭转移能力.这提示,RACK1在食管鳞癌的侵袭转移中发挥重要作用,有可能成为其诊断、治疗及预后评估的新靶点.     

miR-1246通过靶向GSK3β促进食管癌转移的机制

目的:探讨miRNA-1246(miR-1246)促进食管癌细胞转移的作用及其机制.方法:Realtime-PCR法检测miR-1246在癌旁组织、食管癌组织、正常食管上皮和食管癌细胞系中的表达差异.Transwell侵袭实验观察转染miR-1246 mimics或inhibitors对食管癌细胞EC109转移能力的影响;裸鼠尾静脉转移实验观察稳定表达miR-1246对食管癌转移能力的影响;生物信息学分析miR-1246的候选靶基因为GSK3β,荧光素酶报告基因实验检测过表达miR-1246后EC109细胞中野生型和突变型GSK3β的荧光素酶活性.Westernblot检测miR-1246对GSK3β蛋白表达的影响.结果:食管癌组织中的miR-1246表达显著高于癌旁组织（P<0.05);多个食管癌细胞中miR-1246的表达比正常食管上皮细胞Het-1A明显增高（P<0.05).与阴性对照相比,miR-1246 mimics显著促进EC109细胞的侵袭能力（P<0.05).反之,miR-1246 inhibitors明显抑制EC109细胞的侵袭能力（P<0.05);体内实验发现稳定过表达miR-1246明显升高EC109细胞的肺转移能力.荧光素酶报告基因结果证实miR-1246能够抑制GSK3β的3'-UTR区荧光素酶活性;转染miR-1246后,EC109细胞中的GSK3β蛋白水平明显低于对照组;miR-1246过表达显著抑制GSK3β-wt,而不能抑制GSK3β-mut的蛋白表达.结论:miR-1246能够通过靶向GSK3β促进食管癌转移,抑制miR-1246的表达或增加GSK3β的表达可能是抑制食管癌转移的有效手段.     

下调PRDX6对食管癌EC9706细胞增殖、迁移、侵袭及放射敏感性的影响

目的:探讨PRDX6表达水平对食管癌细胞增殖、迁移、侵袭及放射敏感性的影响。方法:应用GEPIA数据库分析食管癌组织PRDX6表达情况;将抑制基因PRDX6表达的“PRDX6-shRNA”质粒转染到EC9706细胞(sh-PRDX6组)。qRT-PCR和Western Blot检测转染效果。CCK8法检测增殖活力。划痕实验检测迁移能力。Transwell实验检测侵袭能力。克隆形成实验检测克隆形成能力。Western Blot检测AKT、p-AKT的蛋白表达量。结果:食管癌组织中PRDX6表达水平明显高于癌旁组织。qRT-PCR和Western Blot证实“PRDX6-shRNA”质粒有效抑制PRDX6基因表达。与对照组相比,sh-PRDX6组的细胞增殖、迁移、侵袭能力显著下降,放射敏感性增强。sh-PRDX6组细胞中AKT的表达水平无明显变化,而p-AKT表达水平明显下降。结论:PRDX6促进食管癌细胞EC9706的增殖、迁移、侵袭及放射抵抗。     

miR-623在膀胱癌中的表达及靶向Fascin1抑制膀胱癌细胞迁移和侵袭

目的:探讨miR-623在膀胱癌中的表达及通过靶向Fascin1对膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的影响。方法:采用实时荧光定量PCR检测正常膀胱上皮组织、膀胱癌组织、正常永生化膀胱上皮细胞系(SV-HUC-1)和膀胱癌细胞系（T24、UMUC3）中miR-623的表达量;采用脂质体瞬时转染miR-623 mimics,划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-623过表达后膀胱癌细胞迁移、侵袭能力的改变;生物信息学预测miR-623的作用靶蛋白。miR-623过表达后Western blot及双荧光素酶报告基因检测其靶点的表达及结合情况;使用Fascin1特异性siRNA观察膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的变化,并同时转染miR-623 inhibitor进行恢复实验。结果:miR-623在膀胱癌中的表达水平显著低于在正常膀胱组织中的表达（P＜0.05）,在膀胱癌细胞系（T24、UMUC3）中的表达水平显著低于正常膀胱细胞系(SV-HUC-1)（P＜0.05）;miR-623过表达显著抑制T24和UMUC3细胞的迁移和侵袭能力。生物信息学预测Fascin1为miR-623的靶基因,在T24和UMUC3细胞中过表达miR-623,能够显著降低Fascin1的蛋白水平;荧光素酶报告基因分析结果证实miR-623作用于Fascin1的3'-UTR。下调Fascin1表达能够抑制膀胱癌T24和UMUC3细胞的迁移和侵袭能力,同时抑制miR-623的表达能够提高细胞的迁移和侵袭能力。结论:miR-623在膀胱癌中表达水平降低,是一个抑癌因子;并可能通过靶向Fascin1调节膀胱癌的侵袭和转移能力。     

miR-19b对卵巢癌细胞侵袭和迁移的作用探讨

目的:探讨微小RNA-19b（microRNA-19b,miR-19b）在卵巢癌细胞侵袭和迁移中的作用机制。方法:应用qRT-PCR方法检测正常卵巢组织、卵巢癌组织及卵巢癌细胞系(SKOV-3、OVCAR-3)中miR-19b的表达情况。将miR-19b抑制剂或阴性对照寡核苷酸转染到OVCAR-3细胞中,Transwell实验检测miR-19b的表达对卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的影响。免疫印迹分析（Western blot）技术检测miR-19b对第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白基因（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN）的表达及对PTEN/AKT信号通路相关蛋白表达水平的影响。双报告基因实验用于检测miR-19b与PTEN的 3’-UTR区之间的相互作用。结果:与正常卵巢组织比较,卵巢癌组织及卵巢癌细胞系 SKOV-3和OVCAR-3中miR-19b高表达,其相对表达水平分别为3.56±0.68、3.01±0.02、3.78±0.04（P均<0.05）。Transwell 实验表明,抑制miR-19b 的表达可降低OVCAR-3细胞的侵袭和迁移能力。上调miR-19b的表达可抑制OVCAR-3细胞中PTEN蛋白的表达水平,并使磷酸化的AKT蛋白的表达水平显著升高。双报告基因检测结果显示,与对照组相比,miR-19b可与PTEN的3’-UTR区结合使其重组载体的荧光素酶活性下降。结论:miR-19b在卵巢癌细胞中存在异常高表达,可促进卵巢癌细胞的侵袭和迁移能力,有望作为卵巢癌患者潜在的生物标志物和治疗靶点。     

miR-92b 通过调控EZH2 基因的表达抑制食管癌细胞Eca109 的增殖和侵袭

目的：探讨食管癌（esophageal carcinoma,EC）细胞中miR-92b 对组蛋白甲基转移酶zeste 同源物增强子2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)基因表达的调控作用,以及对EC细胞增殖和侵袭能力的影响。方法：选取河北医科大学第四医院科研中心保存的2016 年1 月至2017 年1 月15 例EC患者手术癌组织标本,通过生物信息学软件预测分析对EZH2 可能调控的miRNAs,将预测的miRNAs mimic 分别转染人EC细胞Eca109 后,采用实时荧光定量PCR、Western blotting 和双荧光素酶报告基因实验验证miRNAs对EZH2 基因的靶向调控作用。同时将EZH2 过表达质粒共转染至Eca109,然后采用CCK-8 法、流式细胞术和Transwell 细胞侵袭及迁移实验分别检测miRNAs 和EZH2 表达变化对EC 细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。结果：转染miR-92b 的Eca109 细胞中EZH2 mRNA与mimic-NC相比明显降低(P<0.01),转染miR-92b 的Eca109 细胞中EZH2 蛋白表达水平明显低于转染mimic-NC组(0.525±0.052 vs 0.689±0.026,P<0.01）。生物信息学软件分析显示,miR-92b、let-7a 及miR-25 可与EZH2 基因3’端非翻译区的结合位点相结合,但仅有miR-92b 可以调控EZH2 基因的表达,且miR-92b 表达与EZH2 mRNA表达成负相关(P<0.01)。miR-92b mimic 转染后EZH2 mRNA、蛋白及荧光素酶报告基因活性均明显下调（均P<0.01）,对Eca109 细胞凋亡无明显影响(P>0.05);miR-92b mimic 转染能抑制ECa109 细胞的增殖和侵袭及迁移能力(P<0.01)。而EC细胞转染EZH2 过表达质粒后,miR-92b mimic 对ECa109 细胞增殖和侵袭及迁移能力的抑制作用明显减弱(P<0.01)。结论：miR-92b 可抑制ECa109细胞的增殖和侵袭及迁移能力,其作用机制可能与靶向调控抑癌基因EZH2 的表达有关。     

LncRNA AFAP1-AS1对食管鳞癌细胞株EC9706转移潜能影响机制探讨

目的 食管癌是常见的消化道肿瘤,其细胞侵袭与迁移机制尚不清楚.本研究旨在探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA) AFAP1-AS1对食管鳞癌细胞株EC9706侵袭及迁移能力的影响及可能的作用机制.方法 构建AFAP1-AS1真核表达载体,用脂质体2000将pcDNA3.1-AFAP1-AS1表达载体及pcDNA3.1空载体转染食管癌细胞EC9706.通过G418筛选,建立稳定表达AFAP1-AS1 RNA的EC9706-AFAP1-AS1细胞系.Millicell小室检测2株细胞侵袭及迁移能力的变化,Real-time PCR法检测2株细胞中血管内皮生长因子C(vascular endothelialgrowth factor C,VEGF-C)及Artemin的mRNA表达情况,蛋白质印迹法检测2株细胞中VEGF-C及Artemin蛋白表达的变化.结果 成功构建稳定表达AFAP1-AS1的EC9706细胞系,过表达AFAP1-AS1后,EC9706细胞的迁移(数据分布符合正态分布,SW1=0.912,SW2=0.878,均P＞0.05;两组间均值差异有统计学意义,t=0.002,P＜0.001)及侵袭(数据分布符合正态分布,SW1=0.945,SW2=0.972,均P＞0.05;两组间均值差异有统计学意义,t=0.02,P＜0.001)能力均增加,VEGF-C(数据分布符合正态分布,SW1=0.931,SW2=0.922,均P＞0.05;两组间均值差异无统计学意义,t=0.14,P＞0.05)和Artemin(数据分布符合正态分布,SW1 =0.964,SW2=0.981,均P＞0.05;两组间均值差异无统计学意义,t=0.29,P＞0.05)的mRNA表达差异无统计学意义,但VEGF-C(数据分布符合正态分布,SW1=0.762,SW2=0.82,均P＞0.05;两组间均值差异有统计学意义,t=0.005,P＜0.001)及Artemin(数据分布符合正态分布,SW1 =0.892,SW2=0.853,均P＞0.05;两组间均值差异有统计学意义,￡=0.004,P＜0.001)的蛋白表达明显增加.结论 AFAP1-AS1可能通过增加EC9706细胞中VEGF-C及Artemin的蛋白表达来增强其侵袭及迁移能力,在食管癌侵袭及进展中发挥作用.     

siRNA抑制食管癌EC9706细胞CXCR4基因表达的实验

目的运用RNAi技术沉默食管癌EC9706细胞CXCR4（chemokine receptor4）基因表达,观察其对肿瘤细胞的生长和转移影响。方法设计CXCR4 基因为靶向的siRNA ,构建siRNA表达载体,通过脂质体将siRNA表达载体转入EC9706细胞。荧光定量PCR法检测细胞CXCR4 mRNA表达水平;流式细胞术检测细胞周期; MTT法检测细胞侵袭和增殖的情况。结果构建出CXCR4 基因为靶向的siRNA表达载体pRNAT-U6.2/Lenti-siCX1和pRNAT-U6.2/Lenti -siCX2;荧光定量PCR结果显示,转染pRNAT-U6.2/Lenti-siCX1的EC9706细胞和转染pRNAT-U6.2/Lenti-siCX2的EC9706细胞与对照组相比CXCR4 mRNA的表达水平明显降低（P＜0.01）;细胞生长速度较对照组明显减慢（P＜0.01）;流式细胞仪检测结果显示：转染pRNAT-U6.2/Lenti-siCX1的EC9706S期细胞比例低于对照组(P＜0.05)。结论沉默CXCR4基因表达对食管癌EC9706细胞的生长和侵袭、转移有明显的抑制作用。     

miRNA-335基因启动子区甲基化与胃癌细胞不良生物学行为的关系

目的:探讨miR-335基因启动子区异常甲基化状态对胃癌细胞系中miR-335表达水平的影响,以及miR-335基因启动子区甲基化状态对胃癌细胞侵袭,迁移,以及增殖能力的影响。方法:1株永生化胃黏膜上皮细胞系(GES-1)和4株胃癌细胞系(SGC-7901,MKN-45,BGC-823和AGS)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测胃癌细胞株miR-335及CRKL的表达水平。甲基化特异性PCR(MSP)方法检测胃癌细胞株miR-335的基因启动子区甲基化状态。应用MTT方法检测恢复miR-335表达对胃癌细胞增殖能力的影响,Transwell侵袭迁移实验及划痕愈合实验分析恢复miR-335表达对胃癌细胞系侵袭及迁移能力的影响。结果:MSP实验结果表明,MKN-45、SGC-7901和BGC-823细胞系均存在基因启动子区异常的高甲基化状态,AGS细胞系基因启动子区亦呈部分高甲基化状态。去甲基药物5-aza-2′-deoxycytidine处理后胃癌细胞miR-335的表达水平可升高2~3倍。Transwell侵袭迁移实验及划痕愈合实验表明miR-335表达水平恢复后SGC-7901细胞的侵袭和迁移能力明显降低。MTT实验结果表明5-aza-2′-deoxycytidine处理后的SGC-7901细胞系与对照组相比,增殖能力显著降低。结论:miR-335启动子区的异常高甲基化状态抑制了miR-335在胃癌细胞系中的表达,恢复miR-335的表达水平可以抑制胃癌细胞的增殖,迁移和侵袭能力。miR-335为胃癌的肿瘤抑制因子。     

miR-153-3p靶向KLF7基因调控IL-6/STAT3通路抑制食管癌细胞的增殖和转移的机制研究

目的 探讨miR-153-3p对食管癌细胞增殖和转移的影响及其作用机制。方法 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-153-3p和Kruppel样因子7(KLF7)mRNA表达水平；蛋白质印迹(Western Blot)法检测KLF7、磷酸化信号转导与转录激活因子3(p-STAT3)、信号转导与转录激活因子3(STAT3)的表达；四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性；Transwell检测细胞迁移和侵袭；ELISA检测白细胞介素(IL-6)的表达；双荧光素酶报告基因检测KLF7和miR-153-3p的靶向。结果 与正常食管上皮细胞HEEC相比，食管癌细胞EC9706、Eca-109、EC-1、TE-1中KLF7表达水平升高，miR-153-3p表达水平下降。过表达miR-153-3p和沉默KLF7可降低细胞活性和迁移、侵袭数量，降低p-STAT3表达水平，抑制IL-6的分泌。miR-153-3p靶向KLF7,上调KLF7能部分恢复miR-153-3p对EC9706细胞增殖、迁移、侵袭的作用。结论 上调miR-153-3p可以靶向KLF7参与调节IL-6/STAT3通路抑...     

miR-181a对人食管癌TE11细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的:通过构建miR-181a的真核表达载体,研究其对人食管癌TE11细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:以95C细胞基因组DNA为模板,扩增得到miR-181a前体序列,插入表达载体pcDNA3.1(+)克隆获得pcDNA3.1(+)-miR-181a。将真核表达载体pcDNA3.1(+)-miR-181a转染到TE11细胞中,并采用实时荧光定量-PCR(real-time fluorogentic quantitative-PCR,RFQ-PCR)对其表达情况进行验证。分别采用MTT法、细胞划痕法和Boyden小室法检测转染重组质粒pcDNA3.1(+)-miR-181a对TE11细胞增殖能力、迁移能力和侵袭能力的影响。结果:成功构建了插入miR-181a基因片段的真核表达载体pcDNA3.1(+)-miR-181a;RFQ-PCR检测结果表明,转染pcDNA3.1(+)-miR-181a的TE11细胞能够过表达成熟的miR-181a(P<0.05)。过表达miR-181a的TE11细胞增殖能力、迁移能力和细胞侵袭能力均明显增强。结论:miR-181a在TE11细胞中过表达能够增加细胞的增殖、迁移和侵袭能力,为进一步深入研究miR-181a在肿瘤中的作用机制提供了实验依据。     

miR-137 通过靶向Wnt5a 调控宫颈癌细胞的增殖、迁移及侵袭

[摘要] 目的: 探讨miR-137 在宫颈癌组织和细胞中的表达及其对宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭的作用及其机制。方法: 选用2017 年1 月至2018 年3 月东莞市人民医院妇产科32 例手术切除的宫颈癌组织及对应的癌旁组织标本,以及宫颈癌细胞系C33A、HeLa、SiHa 及宫颈上皮永生化细胞株H8,用RT-PCR 法检测宫颈癌组织和细胞系中miR-137 的表达水平。将miR-137mimics、miR-137 NC质粒转染到C33A和HeLa 细胞,用CCK-8 法、Transwell 迁移及侵袭实验观察上调miR-137 表达对C33A和HeLa 细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。用荧光素酶报告基因及WB实验检测miR-137 和Wnt5a 在宫颈癌中的靶向调控关系。构建Wnt5a 过表达载体,观察同时过表达Wnt5a 和miR-137 对宫颈癌细胞系C33A和HeLa增殖、迁移和侵袭的影响。结果: 在宫颈癌组织和细胞系中miR-137 表达水平明显低于癌旁组织和H8 细胞（均P<0.05）。上调miR-137 表达能够显著抑制C33A和HeLa 细胞的增殖、迁移和侵袭能力（均P<0.05）。萤光素酶报告基因实验确定Wnt5a 与miR-137 的靶向关系。过表达Wnt5a 后,可以在一定程度上逆转miR-137 对宫颈癌细胞系C33A和HeLa 的增殖、迁移和侵袭能力。结论: miR-137 通过靶向Wnt5a 抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移、侵袭,其可能是宫颈癌治疗的潜在靶点。     

miR-886-5p抑制肝细胞癌细胞侵袭与迁移

目的:探讨miR-886-5p在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达水平及其与临床病理特征的关系,并分析miR-886-5p对HCC细胞侵袭与迁移能力的影响.方法:应用Real-time PCR技术检测HCC组织和细胞系中miR-886-5p的表达水平;分析miR-886-5p的表达水平与HCC临床病理特征的关系;应用Transwell实验探究miR-886-5p对HCC细胞侵袭与迁移能力的影响.结果:miR-886-5p在HCC组织中的表达水平较癌旁组织明显降低(P＜0.05),miR-886-5p在HCC细胞系中(Hep3B、MHCC-97L、HepG2、SMMC-7721)的表达水平较正常肝细胞LO2显著下调(P＜0.05);miR-886-5p的表达水平与肿瘤数目、静脉侵犯、Edmondson病理分级及TNM分期显著相关(P＜0.05);Transwell小室实验表明miR-886-5p能够显著抑制HCC细胞的侵袭与迁移能力.结论:miR-886-5p在HCC中表达下调,其能够抑制HCC细胞的侵袭与迁移.     

miR-944靶向调控 S100PBP基因促进宫颈癌细胞迁移和侵袭的机制探讨

目的:探讨微小RNA-944（microRNA-944,miR-944）对宫颈癌细胞迁移和侵袭的影响,并对其作用机制进行初步研究。方法:收集90例宫颈癌组织和40例正常宫颈组织,采用实时定量荧光PCR（Real-time PCR）试验检测宫颈组织样本和宫颈癌细胞中miR-944表达水平;在CaSki和HeLa细胞中,采用脂质体转染技术,抑制或者增加miR-944表达后,利用细胞增殖试验、细胞划痕试验和细胞侵袭试验分别检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力的变化情况;采用双荧光素酶报告基因试验检测miR-944对S100PBP基因的调控作用。结果:在宫颈癌组织中,miR-944表达水平显著高于正常宫颈组织（P<0.05）;miR-944在不同宫颈癌细胞中的表达水平,存在显著差异（P<0.05）。在CaSki细胞中,降低miR-944表达显著抑制了细胞迁移和侵袭能力（P均<0.05）;在HeLa细胞中,增加miR-944表达显著增强了细胞迁移和侵袭能力（P均<0.05）;miR-944表达对宫颈癌细胞增殖无影响（P>0.05）。抑制miR-944表达能够显著增强含有S100PBP基因3'-非翻译区（3'-UTR）的报告质粒的荧光素酶活性（P<0.05）,增加miR-944表达能够显著降低含有S100PBP基因3'-UTR的报告质粒的荧光素酶活性（P<0.05）。结论:在宫颈癌组织中,miR-944呈高表达状态;miR-944能够促进宫颈癌细胞的迁移和侵袭;miR-944可靶向调节S100PBP基因表达,这可能是miR-944促进宫颈癌细胞迁移和侵袭的内在机制。     

microRNA-133b对胶质母细胞瘤细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨microRNA(miR)-133b对胶质母细胞瘤(GBM)细胞的作用,并分析其作用的分子机制。方法应用实时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测20例人GBM标本及正常人脑胶质细胞系HEB中miR-133b的表达水平。Transwell侵袭实验评估miR-133b对GBM细胞迁移和侵袭的影响。Western blotting和荧光素酶报告实验来确定miR-133b的靶基因。结果与正常人脑胶质细胞系HEB比较,miR-133b在GBM标本中的相对表达量明显降低(1.0±0.17 vs.2.42±0.69,P<0.05);转染miR-133b mimic后GBM迁移和侵袭跨膜细胞数分别为66±17和60±14,均低于转染NC组(P<0.05);与转染NC组比较,转染miR-133b mimic后MMP-14蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。荧光素酶报告基因分析实验进一步验证mir-133b靶向调节MMP-14。结论 miR-133b通过直接靶向调节MMP-14抑制GBM的迁移和侵袭能力,可作为GBM诊断和治疗的候选靶点。