胃癌组织中高表达的 miR-504 通过 TP53INP1 调控胃癌细胞 BGC-823 的生物学行为

目的：探究微小 RNA-504（miRNA-504）在胃癌（GC）组织中的表达水平及其对GC细胞生物学行为的调控机制。方法：收集2020年6月至2020年12月期间三亚中心医院外科收治的48例胃癌患者的肿瘤组织及癌旁组织标本,qPCR检测组织中 miR-504、肿瘤蛋白 53 诱导型核蛋白 1（tumor protein 53-induced nuclear protein 1,TP53INP1）mRNA 的水平 ,WB 法检测TP53INP1水平。体外培养人胃癌细胞 BGC-823,分为对照组（正常培养的 BGC-823细胞）、miR-504 mimic组、mimic-NC组、miR-504 inhibitor组、inhibitor-NC组、miR-504 inhibitor+si-NC组、miR-504 inhibitor+si-TP53INP1组,qPCR检测细胞中miR-504和TP53INP1 mRNA的表达,MTT法、流式细胞术、划痕实验和Transwell侵袭实验分别检测各组细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭能力,WB法检测各组细胞中增殖、迁移和侵袭相关蛋白（Cyclin D1、E-cadherin、MMP-2、MMP-9）以及TP53INP1的表达。双荧光素酶报告基因实验进一步验证miR-504与TP53INP1 mRNA的靶向关系。结果：与癌旁组织相比,胃癌组织中miR-504的表达显著升高（P<0.05）,而TP53INP1 mRNA 和蛋白表达水平显著降低（P<0.05 或P<0.01）,miR-504和TP53INP mRNA 两者的表达呈负相关（P<0.01）。与对照组相比,miR-504 mimic组BGC-823细胞中miR-504的表达显著升高（P<0.05）、TP53INP1 mRNA和蛋白的表达显著降低（均P<0.05）,且细胞增殖率、划痕愈合率、侵袭入Transwell小室下层的细胞数量,Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达均显著增加,细胞凋亡率和E-cadherin蛋白表达均显著降低（均P<0.05）。转染miR-504 inhibitor能显著下调BGC-823中miR-504的表达、上调TP53INP1 mRNA和蛋白的表达,抑制细胞的增殖、迁移与侵袭能力而促进细胞凋亡（均P<0.05）;而下调TP53INP1的表达可明显减弱miR-504下调对BGC-823细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用（P<0.01）。miR-504高表达能明显抑制野生型TP53INP1质粒的荧光素酶活性（P<0.05）。结论：miR-504在胃癌组织中呈高表达,下调miR-504可抑制胃癌BGC-823细胞的恶性生物学行为而促进其凋亡,其作用机制可能与靶向调控TP53INP1的表达有关。     

miR-421在胃癌中的表达及对BGC-823细胞增殖的作用

目的探讨miR-421在胃癌细胞中的表达水平及对BGC-823胃癌细胞增殖的作用。方法利用PCR方法分析miR-421在胃癌组织细胞及多种胃癌细胞株中的表达水平,并通过RNA转染技术将miR-421 mimics与miR-421 inhibitors转染BGC-823胃癌细胞;通过CKK-8试剂盒检测转染后BGC-823细胞的增殖情况。结果 miR-421在胃癌组织细胞及多种胃癌细胞株中均表达增强（P〈0.05）;miR-421 mimics转染BGC-823后,癌细胞增殖能力增强（P〈0.05）,而miR-421 inhibitors转染的BGC-823细胞则增殖力受到明显抑制（P〈0.05）。结论 miR-421在胃癌组织细胞及多种胃癌细胞株中均过表达,而miR-421可能直接或间接参与调控BGC-823胃癌细胞的增殖。     

lncRNA HOTTIP通过miR⁃637/KLK4轴促进肺癌SPC⁃A⁃1细胞的恶性 生物学行为

目的：探讨 lncRNA HOTTIP 对肺癌细胞增殖、凋亡及 EMT 的影响及其作用机制。方法：利用 qPCR 检测 lncRNAHOTTIP、miR-637和KLK4在肺癌SPC-A-1、正常肺上皮BEAS-2B细胞中的表达量;siRNA干扰SPC-A-1细胞中lncRNA HOTTIP的表达后,分别通过CCK-8、Transwell、流式细胞术和WB法检测SPC-A-1细胞增殖、侵袭、凋亡和EMT能力的变化。miRanda软件和双荧光素酶报告基因实验分析 lncRNA HOTTIP 和 miR-637 之间的靶向关系,RNA pull-down 实验检测 lncRNA HOTTIP 和miR-637的吸附作用,检测lncRNA HOTTIP通过miR-637对SPC-A-1细胞增殖、侵袭、凋亡和EMT的调控。利用TargetScan软件分析 miR-637 与 KLK4 的相关性,双荧光素酶报告基因实验检测 miR-637 与 KLK4 mRNA 之间的相互作用;检测 miR-637 通过KLK4 mRNA对SPC-A-1细胞增殖、侵袭、凋亡和EMT的调控。下调lncRNA HOTTIP和miR-637表达后,利用qPCR和WB检测KLK4 mRNA 和蛋白表达水平的变化。结果：与 BEAS-2B 细胞比,在 SPC-A-1 细胞中 lncRNA HOTTIP 呈高表达（P<0.01）,miR-637呈低表达（P<0.01）,KLK4呈高表达（P<0.01）。下调lncRNA HOTTIP后,SPC-A-1细胞增殖、侵袭与EMT能力显著减弱,细胞凋亡率显著上升（P<0.01）;lncRNA HOTTIP与miR-637具有靶向关系;下调miR-637表达后,SPC-A-1细胞增殖、侵袭与EMT能力显著上升,细胞凋亡率显著降低（P<0.01）。miR-637与 KLK4 3''UTR特异性结合。miR-637通过 KLK4显著促进了 SPC-A-1细胞增殖、侵袭与 EMT,细胞凋亡率显著上升（P<0.01）。下调 lncRNA HOTTIP 使 KLK4 表达显著降低,而下调 miR-637 可促进KLK4表达（P<0.05）。结论：上调lncRNA HOTTIP可通过miR-637/KLK4轴促进肺癌SPC-A-1细胞的增殖、侵袭与EMT而抑制癌细胞凋亡。     

肝肠-钙黏连蛋白过表达对胃癌细胞BGC-823增殖、侵袭及迁移能力的影响

目的:探讨肝肠-钙黏连蛋白(liver-intestine cadherin,CDH17)过表达对胃癌BGC-823细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法:采用脂质体转染法建立CDH17基因过表达的BGC-823细胞株;分别采用实时荧光定量-PCR(real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQ-PCR)和蛋白质印迹法检测转染重组表达载体pcDNA3.1(-)/CDH17后,BGC-823细胞中CDH17mRNA和蛋白的表达水平。MTT法检测CDH17基因过表达对BGC-823细胞增殖的影响;体外侵袭实验及划痕实验检测CDH17基因过表达对BGC-823细胞迁移及侵袭能力的改变。结果:RFQ-PCR及蛋白质印迹法检测结果显示,转染重组表达载体pcDNA3.1(-)/CDH17的BGC-823细胞中CDH17mRNA及蛋白均过表达;CDH17过表达能明显提高BGC-823细胞的增殖、侵袭及迁移能力(P<0.05)。结论:CDH17基因在BGC-823细胞中过表达能提高胃腺癌的增殖、侵袭及迁移能力,并促进胃腺癌的发生及发展。     

miR-6775-3p在乳腺癌细胞中的表达及其对乳腺癌细胞生物学行为的影响

背景与目的：微小RNA（microRNA,miRNA）与肿瘤的发生、发展过程密切相关。探讨miR-6775-3p在乳腺癌细胞系中的表达及其对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法：通过实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）检测4种乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-453、MDA-MB-468和BT-549中miR-6775-3p的表达水平,选取miR-6775-3p表达水平最低的乳腺癌细胞系过表达miR-6775-3p后,采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）法检测细胞的增殖情况,同时采用transwell迁移和侵袭实验分别检测细胞迁移和侵袭能力的变化。通过RTFQ-PCR和蛋白［质］印迹法（Western blot）检测miR-6775-3p过表达的乳腺癌细胞系中细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶4（cyclin-dependent protein kinase 4,CDK4）和CDK6,以及侵袭转移标志物基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）17和MMP24 mRNA以及蛋白的表达变化。结果：RTFQ-PCR结果显示,乳腺癌细胞系MDA-MB-453中miR-6775-3p的表达最低,在MDA-MB-453细胞中转染miR-6775-3p mimics后,miR-6775-3p的表达水平明显升高（P<0.001）。CCK-8实验结果显示,MDA-MB-453细胞过表达miR-6775-3p后,细胞的增殖能力明显降低（P<0.01）。Transwell迁移和侵袭实验结果显示,MDA-MB-453细胞过表达miR-6775-3p后,细胞的迁移（P<0.001）和侵袭能力（P<0.01）明显降低。RTFQ-PCR和Western blot实验结果显示,CDK4、CDK6及MMP17、MMP24的mRNA表达和蛋白水平均显著降低（P<0.01）。结论：miR-6775-3p可能抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

miR-1207-5p通过靶向LIMD1调控乳腺癌T47D干细胞的增殖、迁移和 侵袭

目的：探讨 miR-1207-5p 对乳腺癌 T47D 干细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其可能的机制。方法: 以 IGF-1、EGF、 bFGF诱导、富集乳腺癌T47D干细胞并进行成球培养,流式细胞术分离干细胞,采用WB法检测干细胞分子标志物。采用qPCR 检测干细胞中miR-1207-5p的表达水平,双荧光素酶报告基因实验分析miR-1207-5p和LIMD1的靶向关系。CCK-8、Transwell和 划痕实验检测T47D干细胞的增殖、迁移和侵袭能力。WB法检测干细胞中LIMD1蛋白的表达水平。结果: 分离的T47D干细胞 能够形成细胞球,细胞球体积随培养天数的增加而增加;干细胞分子标志物 ALDH1、ESA 和 OCT4 的表达水平较亲本 T47D细 胞显著升高（P<0.05或P<0.01）,miR-1207-5p在干细胞中高表达（P<0.01）,敲降miR-1207-5p显著抑制T47D干细胞的增殖、迁移和侵袭（均 P<0.01）。miR-1207-5p靶向下调LIMD1 的表达（PP<0.01）,miR-1207-5p通过靶向下调LIMD1 促进乳腺癌 T47D 干细胞的增殖、迁 移 和 侵袭能力（P<0.05或 P<0.01）。结论：miR-1207-5p通过靶向下调LIMD1的表达来促进乳腺癌T47D干细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

miR-377-5p 通过下调HIF-1α 及其相关VEGF 信号通路抑制肝细胞癌HepG2 细胞的增殖和侵袭

目的：探讨miR-377-5p 与缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1,HIF-1α）的靶向关系以及通过控血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）信号通路对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）细胞增殖、侵袭和EMT的调控作用。方法：qPCR检测35 例人HCC组织及癌旁组织标本中miR-377-5p 的表达水平。将HepG2 细胞分为对照组、mimic NC组、miR-377-5p mimic 组,qPCR 检测转染效率;EdU染色、Transwell 和Western blotting（WB）检测miR-377-5p 过表达对HepG2 细胞增殖、侵袭及其增殖相关蛋白Ki-67、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）及上皮间质转化（epithelial-mesenchymaltransition,EMT）标志蛋白E-cadherin、N-cadherin 表达的影响;qPCR、WB检测miR-377-5p 过表达对HepG2 细胞中,缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）表达的影响。荧光素酶报告基因实验验证miR-377-5p 与HIF-1α 基因的靶向关系。结果：HCC 组织中miR-377-5p 表达水平较癌旁组织降低（P<0.01）。与对照组相比,miR-377-5p mimic 组HepG2细胞中miR-377-5p 水平明显升高,细胞的增殖、侵袭能力降低（均P<0.01）,EMT、N-cadherin 表达水平降低（均P<0.01）而E-cadherin 表达水平显著升高（P<0.01）;miR-377-5p mimic 组中HIF-1α mRNA 和蛋白表达水平均降低（P<0.01 或P<0.05）。miR-377-5p 靶向抑制HIF-1α 基因表达,并抑制VEGF通路的激活（均P<0.05）。结论：miR-377-5p 通过靶向抑制HIF-1α 基因表达和下调VEGF信号通路从而抑制HepG2 细胞的增殖、侵袭和EMT。     

circ_0001821靶向miR-203调控皮肤鳞状细胞癌A431细胞的增殖、凋 亡、迁移和侵袭

目的：探讨circ_0001821通过靶向miR-203调控皮肤鳞状细胞癌（cutaneous squamous cell carcinoma,CSCC）A431细胞 增殖、凋亡、迁移及侵袭的分子机制。方法：选取2018年2月至2019年8月海南医学院第二附属医院收治的39例CSCC患者的癌 及配对癌旁组织,以及人CSCC细胞系A431,用qPCR法检测CSCC癌和癌旁组织中circ_0001821的表达水平。利用脂质体转染技 术,分别将si-circ_0001821、si-NC、miR-203 mimic、miR-NC、si-circ_0001821与anti-miR-NC、si-circ_0001821与anti-miR-203转染至 A431细胞,用qPCR法检测转染细胞中circ_0001821和miR-203的表达水平,MTT法、流式细胞术和Transwell实验分别检测A431 细胞的增殖、凋亡、迁移及侵袭能力,WB法检测细胞中增殖、凋亡、迁移及侵袭相关蛋白的表达水平。通过Circinteractome数据库 预测circ_0001821与miR-203存在结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证circ_0001821与miR-203的靶向关系。结果：CSCC组 织中circ_0001821的表达水平显著高于癌旁组织（P<0.01）。转染 si-circ_0001821 可显著降低细胞中circ_0001821的表达水平（P<0.01）,降低细胞增殖、迁移和侵袭能力（均P<0.01）,提高细胞凋亡率（P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验证实,circ_0001821可 靶向结合miR-203。转染miR-203 mimic可显著降低A431细胞的增殖、迁移和侵袭能力（均P<0.01）,提高细胞凋亡率（P<0.01）。共转染si-circ_0001821与anti-miR-203 可明显逆转下调circ_0001821 表达对 A431 细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的调控作用。结论： circ_0001821通过靶向miR-203调控CSCC细胞A431的增殖、迁移、侵袭能力及细胞凋亡。     

人参皂苷Rg3 通过PI3K/AKT 信号系统调控CaM 基因表达促进胃癌BGC-823 细胞的凋亡

[摘要] 目的：探讨人参皂甙Rg3 通过PI3K/AKT信号通路干扰CaM基因的表达及对胃癌BGC-823 细胞凋亡的影响。方法:胃癌BGC-823 细胞的培养与传代完成后,Western blotting 检测胰岛素样生长因子-1 (insulin-like growth factor-1,IGF-1)和/或Rg3分别作用胃癌BGC-823 细胞后p-AKT和CaM 蛋白表达水平,MTT法检测IGF-1 和/或Rg3 对胃癌BGC-823 细胞增殖的影响,Transwell 法检测IGF-1 和/或Rg3 对胃癌BGC-823 细胞侵袭的影响,流式细胞术检测IGF-1 和/或Rg3 对胃癌BGC-823 细胞凋亡的影响。结果：随着IGF-1 作用时间延长,胃癌BGC-823 细胞中p-AKT蛋白和CaM蛋白的表达水平均明显提高（均P<0.05）;与空白对照组比较,Rg3 组明显抑制胃癌BGC-823 细胞增殖,而IGF-1 组和IGF-1+Rg3 组明显促进胃癌BGC-823 细胞增殖（均P<0.05）;与空白对照组比较,Rg3 组明显降低胃癌BGC-823 细胞侵袭,而IGF-1 组和IGF-1+Rg3 组明显促进胃癌BGC-823 细胞侵袭能力（均P<0.05）;流式细胞术检测显示,与空白对照组比较,Rg3 组明显促进胃癌BGC-823 细胞凋亡,而IGF-1 组和IGF-1+Rg3 组明显抑制胃癌BGC-823 细胞凋亡（均P<0.05）。结论:人参皂甙Rg3 通过阻断PI3K/AKT信号通路来抑制CaM的表达,进而促进胃癌BGC-823细胞的凋亡。     

miR-195 靶向TLR4 并阻断NF-κB通路抑制肝癌细胞HepG2 增殖和转移

[摘要] 目的：探讨miR-195/Toll样受体4（TLR4）分子轴通过调控NF-κB通路对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法：收集2016 年3 月至2017 年1 月昆明医科大学第二附属医院外科手术切除的25 例肝癌组织以及对应的癌旁组织标本;肝癌HepG2 细胞培养完成后分为4 组,即对照组（NC）、miR-195 mimic组(miR-195组)、TLR4 敲降组(si-TLR4 组)和miR-195 inhibitor 联合TLR4 敲降组（si-TLR4+miR-195 inhibitor 组）。采用qPCR检测miR-195 在肝癌组织和细胞系中的表达水平;采用CCK-8 法检测上述各组细胞的增殖活力,Transwell法检测各组细胞的侵袭能力,划痕愈合实验检测细胞迁移能力,双荧光素酶报告基因验证miR-195和TLR4的靶向调控关系,WB检测TLR4 和NF-κB p65 蛋白的表达。结果：miR-195 在肝癌组织中低表达（P<0.01）。相比于人肝上皮细胞（THLE-3）,miR-193 在肝癌细胞系（HepG2 和Huh-7）中低表达（P<0.01）,且HepG2 细胞中的表达水平最低。过表达miR-195 后HepG2 细胞增殖活力明显低于对照组（P<0.01）,穿膜细胞明显减少（P<0.01）,HepG2 细胞迁移能力明显下调（P<0.01）。过表达miR-195可明显抑制TLR4蛋白的表达水平（P<0.05）,且TLR4与miR-195的表达呈负相关（R2=0.602,P<0.0001）。过表达miR-195可靶向下调TLR4 并阻断NF-κB通路抑制HepG2 细胞增殖、侵袭和迁移能力（P<0.05 或P<0.01）。结论：miR-195 能够抑制HepG2 细胞增殖、侵袭及迁移能力,其机制可能与靶向调控TLR4 并阻断NF-κB 通路影响细胞生物学行为有关。     

miiRNA-186上调Diicer1的表达影响胃癌细胞侵袭和迁移的作用机制研究

目的 探讨miRNA-186上调Dicer1的表达影响胃癌细胞侵袭和迁移的作用机制.方法 取40例胃癌患者的胃癌组织及相应的癌旁组织;将转染pLVTHM-mimic-miRNA-186和pLVTHM-mimic-NC的慢病毒感染液分别转染BGC-823细胞,得到过表达BGC-823-mimics-miRNA-186细胞、阴性对照BGC-823-mimics-NC细胞.定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测不同组织和细胞中miRNA-186的相对表达量;Transwell小室检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力;间接免疫荧光法(IFA)检测Dicer1相关分子神经型钙黏蛋白(N-cad-herin)的阳性表达情况,双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-186和Dicer1的靶向关系,Western blot检测各细胞Dicer1的相对表达量.结果 胃癌组织中miRNA-186的相对表达量明显低于癌旁组织(P﹤0.01).胃癌细胞BGC-823和BGC-823-mimics-NC中miRNA-186的相对表达量均明显低于正常胃黏膜上皮细胞RGM-1,且BGC-823-mimics-miRNA-186细胞中miRNA-186的相对表达量明显高于胃癌细胞BGC-823及BGC-823-mimics-NC,差异均有统计学意义(P﹤0.01).BGC-823-mimics-miRNA-186细胞侵袭数目少于胃癌细胞BGC-823和BGC-823-mimics-NC,细胞迁移率低于胃癌细胞BGC-823和BGC-823-mimics-NC,差异均有统计学意义(P﹤0.05).过表达miRNA-186的BGC-823-mimics-miRNA-186细胞中N-cadherin阳性表达率低于胃癌细胞BGC-823和BGC-823-mimics-NC(P﹤0.05).mimics-miRNA-186能明显抑制野生型psi-CHECK-Dicer1-wild的荧光素酶活性,而对突变型psi-CHECK-Dicer1-mutant的荧光素酶活性无明显影响.胃癌细胞BGC-823和BGC-823-mimics-NC中Dicer1蛋白的相对表达量均明显低于正常胃黏膜上皮细胞RGM-1,且BGC-823-mimics-miRNA-186细胞中Dicer1的相对表达量明显高于胃癌细胞BGC-823和BGC-823-mimics-NC,差异均有统计学意义(P﹤0.01).结论 miRNA-186通过靶向正调控Dicer1的表达,下调N-cadherin的表达可抑制胃癌细胞的侵袭和迁移能力.     

miR-383-5p通过下调MSH6抑制小儿髓母细胞瘤的增殖和侵袭

目的：探究miR-383-5p通过调控DNA错配修复基因MSH6对小儿髓母细胞瘤（medulloblastoma,MB）增殖和侵袭的影响。方法：选取2014年7月至2017年5月于我院肿瘤外科手术切除并经病理确诊为MB的15例患者癌组织及相应的癌旁组织标本,qPCR检测MB组织和细胞系中miR-383-5p的表达水平。将实验分为对照组（NC组）、miR-383-5p过表达组（miR-383-5p组）、MSH6 敲降组（si-MSH6 组）及 MSH6+miR-383-5p 同时敲降组（miR-383-5p inhibitor+si-MSH6）,采用 CCK-8 法检测 UW473细胞的增殖活性,Transwell法检测UW473细胞侵袭和迁移能力,双荧光素酶报告基因验证miR-383-5p与MSH6的靶向关系,Western blotting（WB）法检测 MSH6 的表达水平。结果：miR-383-5p 在 MB 组织和细胞系中表达水平显著低于癌旁组织（均P<0.05或P<0.01）;过表达miR-383-5p显著抑制UW473细胞增殖、迁移和侵袭（均P<0.05或P<0.01）,且下调MSH6在UW473细胞中的表达水平（P<0.01）。双荧光素酶报告基因结果证实 miR-383-5p 靶向结合 MSH6 的 3''UTR,敲降 MSH6 可抑制UW473 细胞增殖、侵袭和迁移（均P<0.01）。进一步实验证明,同时敲降miR-383-5p和MSH6能够恢复敲降MSH6对UW473细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用（均P<0.01）。结论：miR-383-5p在MB组织和细胞系中低表达,其通过靶向下调MSH6表达水平进而抑制UW473细胞的增殖、迁移及侵袭。     

miR-361-5p对肾细胞癌ACHN细胞恶性生物学行为的影响

目的：探讨miR-361-5p对肾细胞癌ACHN细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡及其细胞周期的影响。方法：将miR-361-5p mimics和miR-361-5p inhibitor分别转染至肾癌ACHN细胞中,用qPCR检测转染细胞中miR-361-5p的表达水平,用MTT法、划痕愈合实验、Transwell实验、流式细胞术分别检测细胞的增殖、迁移、侵袭、细胞周期和凋亡水平。结果：与空白对照组和 Mimics-NC组比较,miR-361-5p mimics组ACHN细胞中miR-361-5p表达水平显著升高（P<0.01）,细胞的增殖、侵袭和迁移能力均显著减弱（均P<0.01）,而凋亡率升高（P<0.01）。与空白对照组或Inhibitor-NC组比较,miR-361-5p inhibitor组细胞中miR-361-5p表达水平显著下降（P<0.01）,细胞的增殖、侵袭和迁移能力均增强（均P<0.01）,细胞周期运转加速（P<0.01）,凋亡率降低（P<0.05）。结论：miR-361-5p可抑制肾癌ACHN细胞的增殖、侵袭和迁移,并诱导细胞凋亡,其在肾癌发生发展过程中发挥重要的抑制作用。     

miR-192-5p通过靶向ZEB2调控胰腺癌PANC-1细胞的恶性生物学行为

目的：探讨miR-192-5p靶向E盒锌指结合同源框2（ZEB2）对胰腺癌PANC-1细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化（EMT）的影响及其作用机制。方法：利用TCGA数据库数据分析miR-192-5p和ZEB2在胰腺癌组织中的表达及两者的相关性。采用qPCR法和WB法分别检测人正常胰腺上皮细胞HPNE和胰腺癌PANC-1细胞中miR-192-5p和ZEB2的表达水平。利用脂质体转染技术转染PANC-1细胞,实验分为miR-192-5p mimic组、Mimic NC组、miR-192-5p inhibitor组、Inhibitor NC组、Mimic NC+pcDNA3.1 组 、miR-192-5p mimic+pcDNA3.1 组 、miR-192-5p mimic+pcDNA3.1-ZEB2 组。CCK-8 法 、克隆形成 、划痕愈合 、Transwell实验分别检测转染PANC-1细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力。qPCR法、WB法、双重免疫荧光实验检测PANC-1细胞中ZEB2、E-cadherin、vimentin的表达水平。通过生物信息学网站预测miR-192-5p的靶基因,并利用双荧光素酶报告基因实验验证miR-192-5p对靶基因的调控作用。结果：胰腺癌组织中ZEB2的表达显著高于正常胰腺组织（P<0.01）,且胰腺癌组织中miR-192-5p和ZEB2表达呈负相关（r=-0.419,P<0.01）。与HPNE细胞比较,PANC-1细胞中miR-192-5p低表达、ZEB2蛋白高表达（均P<0.01）。miR-192-5p过表达后,PANC-1细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力均显著降低,E-cadherin的mRNA和蛋白表达均上调、vimentin和ZEB2 mRNA和蛋白表达均下调;而抑制miR-192-5p后得到了相反的结果（P<0.05或P<0.01）。miR-192-5p靶向调控ZEB2的表达,过表达ZEB2可部分逆转上调miR-192-5p对PANC-1细胞增殖、迁移、侵袭和EMT进程的抑制作用。结论：miR-192-5p通过靶向ZEB2调控胰腺癌PANC-1细胞的恶性生物学行为。     

miR-106a靶向调控TIMP2对人胃癌细胞增殖、转移及EMT的影响

目的 探讨微小RNA-106a(miR-106a)在人胃癌组织中的表达及其与癌细胞增殖、转移的关系。方法 收集人胃癌和配对癌旁福尔马林固定-石蜡包埋样本共50对,Real-time PCR法检测miR-106a在人胃癌组织中的表达;培养人低分化胃癌细胞系SGC-7901、BGC-823、MKN-45和永生化人胃黏膜上皮细胞GES-1,Real-time PCR法检测miR-106a在人胃癌细胞中的表达;MTT法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞迁移和侵袭,生物信息学和双荧光素酶法鉴定miR-106a靶基因,Western blot检测靶蛋白TIMP2、MMP2、MMP9、E-cadherin、N-cadherin表达。结果 Real-time PCR检测显示,与癌旁组织比较,miR-106a在人胃癌组织中高表达,差异有统计学意义(P＜0.001);与GES-1细胞比较,miR-106a在人胃癌细胞SGC-7901、BGC-823、MKN-45中普遍高表达,差异有统计学意义(P＜0.001)。MTT检测显示抑制miR-106a后胃癌细胞SGC-7901、BGC-823增殖能力下降(P＜0.01)。Transwell显示胃癌细胞BGC-823迁移、侵袭能力下降(P＜0.001)。双荧光素酶法显示TIMP2野生型报告基因与miR-106a mimic共转后,其荧光素酶活性较miR-106a NC组明显下降(P＜0.001),但TIMP2突变型报告基因无明显变化。Western blot显示抑制miR-106a后TIMP2表达升高,MMP2、MMP9表达下降,E-cadherin表达升高,N-cadherin表达下降。结论 miR-106a在人胃癌中的高表达可能通过靶向TIMP2而影响癌细胞的增殖、转移和上皮-间质转化。     

miR-515-5p通过靶向HDAC2影响食管癌发生发展的分子机制

目的：探讨miR-515-5p对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法：选取2020年6月至2020年12月在河北医科大学第四医院手术切除的60例食管癌患者的癌组织标本和20例健康成人的食管上皮组织标本,以及食管癌细胞TE1、Eca109、KYSE30和KYSE170,用 qPCR 法检测食管癌组织和细胞中 miR-515-5p 的表达水平。在Eca109细胞中转染miR-515-5p模拟物以及其阴性对照物、在TE1细胞中转染miR-515-5p抑制剂以及其阴性对照物,qPCR法检测转染效率,用CCK-8法、Transwell实验分别检测转染细胞的增殖、迁移及侵袭能力。采用生物信息学方法分析预测miR-515-5p的下游靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证组蛋白去乙酰化酶2（histone deacetylase 2,HDAC2）为miR-515-5p的靶基因。应用GEPIA和TCGA数据集分析HDAC2在食管癌组织中的表达及其与患者临床特征的关系。结果：miR-515-5p在食管癌组织及细胞中表达降低（均P<0.01）。过表达miR-515-5p抑制食管癌Eca109细胞的增殖、迁移和侵袭能力（P<0.05或P<0.01）,而敲低miR-515-5p 表达则可增强食管癌 TE1 细胞的增殖、侵袭和迁移能力（均P<0.05）。双荧光素酶报告基因分析证明,HDAC2是miR-515-5p的靶基因。qPCR和WB实验结果显示,miR-515-5p对HDAC2 mRNA和蛋白表达具有负调控作用。挽救实验证实miR-515-5P通过靶向HDAC2抑制食管癌Eca109细胞的增殖、迁移和侵袭能力（P<0.05或P<0.01）。结论：miR-515-5p通过靶向HDAC2影响食管癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

miR-204 过表达抑制成视网膜细胞瘤细胞的增殖与侵袭及其可能的机制

目的:观察miR-204 对成视网膜细胞瘤（retinoblastoma,RB）细胞增殖与侵袭的影响,探讨其可能的调控机制。方法:应用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测RB细胞系Y79、SO-RB50、HXO-Rb44 和人正常视网膜色素上皮细胞系hTERT RPE-1 中miR-204 的表达水平。将Y79 细胞系分成阴性对照组和miR-204 组,分别应用脂质体转染法转染NC-mimics 和miR-204 mimics,CCK-8 增殖实验检测miR-204 表达对Y79 细胞增殖的影响,细胞划痕实验和Transwell 小室法检测miR-204 对Y79 细胞迁移和侵袭的影响,应用生物学信息法预测miR-204 的可能作用靶基因,应用qRT-PCR 和Western blotting 检测miR-204 对靶基因高迁移率族蛋白A2（high mobility group AT-hook 2,HMGA2）mRNA和蛋白表达的影响。结果: miR-204 在RB 细胞系Y79、SO-RB50、HXO-Rb44 中的表达较人正常视网膜色素上皮细胞系hTERT RPE-1 明显降低（P<0.01）。转染miR-204 mimics 后,Y79 细胞中miR-204 表达明显升高（P<0.01）、细胞增殖能力明显下降（P<0.01）、迁移及侵袭能力明显降低（P<0.01）,miR-204 的靶基因HMGA2 mRNA和蛋白的表达明显下降（P<0.01）。结论: miR-204 在RB细胞系中低表达,过表达miR-204 能够抑制RB细胞的增殖、迁移及侵袭能力,其机制可能与下调HMGA2 基因的表达有关。     

miR-101通过靶向FGF2抑制非小细胞肺癌的迁移和侵袭

目的：探究microRNA-101 (miR-101)通过靶向成纤维细胞生长因子2（fibroblast growth factor 2,FGF2）抑制非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞迁移和侵袭的分子机制。方法：采用qPCR法检测人正常肺上皮细胞BEAS-2B和NSCLC细胞系A549、H661和SK-MES-1,以及转染后A549细胞miR-101和FGF2的表达水平。分别将miR-NC、miR-101 mimics、miR-IN-NC、miR-101 inhibitor或pcDNA-3.1空质粒、pcDNA-FGF2转染至A549细胞,运用划痕愈合实验和Transwell小室实验,检测A549细胞中过表达miR-101和FGF2对NSCLC细胞迁移和侵袭能力的影响,采用Western blotting（WB）法检测各组A549细胞中FGF2、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、ERK1/2和p-ERK1/2的表达水平。结果：miR-101在NSCLC细胞系中的表达水平明显低于正常肺上皮细胞（均P<0.05）,而以A549细胞中表达水平为最低。过表达miR-101可明显抑制A549细胞的迁移（P<0.05）和侵袭（P<0.01）,且使细胞中E-cadherin的表达增多（P<0.05）而Vimentin（P<0.05）、N-cadherin（P<0.01）和p-ERK1/2（P<0.05）的表达水平降低。抑制miR-101表达后,可以显著增强A549细胞的迁移和侵袭能力（均P<0.05）,引起细胞中E-cadherin表达明显降低而 Vimentin、N-cadherin 和 p-ERK1/2 表达水平增高（均 P<0.05）。采用 WB 法和双荧光素酶报告基因实验验证了 FGF2 是miR-101的直接靶基因,且过表达FGF2后显著增强A549细胞的迁移和侵袭能力（均P<0.01）,以及减少细胞中E-cadherin的表达（P<0.01）而增加Vimentin（P<0.01）、N-cadherin（P<0.05）和p-ERK1/2（P<0.05）表达水平。与单独过表达FGF2组相比,共同过表达miR-101和FGF2组A549细胞迁移和侵袭能力明显减弱（均P<0.01）,其E-cadherin的表达增多（P<0.01）而Vimentin（P<0.01）、N-cadherin（P<0.05）和p-ERK1/2表达水平下降（P<0.01）。结论：miR-101通过调控靶基因FGF2抑制NSCLC A549细胞的上皮间质转化（EMT）过程及ERK信号通路,进而抑制NSCLC细胞的迁移和侵袭。     

miRNA-26b-3p通过靶向STAT3调控食管鳞状细胞癌细胞的增殖和迁移

目的：观察miR-26b-3p在食管鳞状细胞癌（ESCC）组织中的表达水平及其对ESCC细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响,并探讨其分子调控机制。方法: 选取河北医科大学第四医院2018年4月1日至2018年12月25日手术切除的ESCC组织及相应癌旁组织各60例,利用qPCR法检测ESCC组织、癌旁组织和ESCC细胞中miR-26b-3p的表达。选取miR-26b-3p表达水平较低的ESCC细胞TE1和KYSE150,转染miR-26b-3p mimic,并设立阴性对照。利用细胞增殖实验、划痕愈合实验和Transwell实验检测过表达miR-26b-3p对TE1和KYSE150细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。荧光素酶报告基因实验检测miR-26b-3p与STAT3的 3''UTR 靶点部位的结合情况。随后同时转染 miR-26b-3p mimic 和 pcDNA3.0-STAT3,利用细胞增殖实验、划痕愈合实验和Transwell实验检测STAT3是否可逆转过表达miR-26b-3p对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。qPCR 和 WB法检测甲基化酶抑制剂5-Aza-DC对ESCC细胞甲基化的影响和miR-26b-3p与STAT3表达的影响。结果: miR-26b-3p在ESCC组织中的表达低于癌旁组织（P<0.01）,其在 ESCC 细胞TE1、KYSE150和LYSE170中表达水平显著低于人正常食管上皮细胞HEEC（均P<0.01）。与miR-26b-3p NC组相比,miR-26b-3p mimic转染可明显上调TE1和KYSE150细胞中miR-26b-3p的表达（均P<0.01）,但可明显抑制两种细胞的增殖、迁移和侵袭能力（P<0.05或P<0.01）。荧光素酶报告基因实验结果表明,在TE1和KYSE150细胞中,miR-26b-3p明显抑制了野生型STAT3载体的荧光素酶活性（P<0.05或P<0.01）,而突变型的荧光素酶活性不受影响。同时转染miR-26b-3pmimic和pcDNA3.0-STAT3可部分逆转miR-26b-3p mimic对TE1 和 KYSE150 细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用（P<0.05或P<0.01）。5-Aza-DC 处理后 ,TE1 和 KYSE150 细胞中 miR-26b-3p 表达上调（均 P<0.01）、STAT3 mRNA 和蛋白水平降低（P<0.05）,miR-26b-3p呈现去甲基化状态。结论: miR-26b-3p的启动子高甲基化导致其在ESCC组织和细胞中的表达下调,其作为抑癌因子可通过靶向STAT3而抑制ESCC细胞的增殖、侵袭和迁移能力。     

miR-760 在宫颈鳞状细胞癌组织和细胞中的表达及其对SiHa 细胞恶性 生物学行为的作用

[摘要] 目的: 探讨微小RNA（miR）-760 在人宫颈鳞状细胞癌（CSCC）组织和细胞中的表达及其对SiHa 细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移、EMT影响的分子机制。方法: 选用2015 年4 月至2018 年8 月山东省聊城市妇幼保健院妇科手术切除、经病理确诊的80 例CSCC组织及相应的癌旁组织标本和40 例子宫肌瘤切除术获取的正常宫颈组织标本,应用qPCR检测CSCC组织、癌旁组织和正常宫颈组织、人CSCC细胞系SiHa、HCC94 和人宫颈鳞状上皮永生化细胞株H8 中miR-760 的表达水平,分析miR-760 表达与CSCC患者临床病理特征的相关性。用脂质体转染法,将miR-760 mimics 和NC-mimics 质粒分别转染至SiHa 细胞,用qPCR检测SiHa 细胞中miR-760 的表达,用CCK-8 实验和流式细胞术分别检测SiHa 细胞增殖能力和凋亡水平,用Transwell 实验检测SiHa 细胞的侵袭和迁移能力,WB检测SiHa 细胞EMT相关蛋白上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（vimentin）和神经型钙黏蛋白（N-cadherin）的表达变化。用生物学信息法预测FOXA1 与miR-760 的靶向关系,用双荧光素酶报告基因验证miR-760 对FOXA1的直接靶向调控作用。结果：CSCC组织中miR-760 表达明显低于癌旁组织及正常宫颈组织（均P<0.01）,miR-760 表达与患者淋巴结转移和临床分期密切相关（均P<0.01）。SiHa、HCC94 细胞中miR-760 的表达明显低于H8 细胞（均P<0.01）。通过转染miR-760 mimics 上调miR-760 表达,能够显著抑制SiHa 细胞的增殖能力和侵袭、迁移能力（均P<0.01）、促进其凋亡（P<0.01）,并上调Ecadherin的表达（P<0.01）、下调vimentin 和N-cadherin 的表达（均P<0.01）。FOXA1 是miR-760 的直接靶基因（P<0.01）,上调miR-760 表达显著抑制SiHa 细胞中FOXA1 mRNA和蛋白的表达（均P<0.05）。结论：在CSCC组织和细胞中miR-760 低表达,其通过靶向作用FOXA1 基因调控SiHa细胞的增殖、侵袭、迁移并促进凋亡,同时影响癌细胞的EMT进程。