O139群霍乱弧菌Ⅰ类整合子结构分析

O139群霍乱弧菌是一种引起严重腹泻的肠道病原菌。随着对常用抗菌药物耐药的霍乱弧菌出现，研究其耐药机制和传播也变得重要。Ⅰ类整合子是细菌获得和传播耐药基因的重要机制，携带位点特异性的重组酶系统，可特异性识别耐药基因盒结构，并将其整合在其中，形成各种组合的多重耐药整合子，转移到细菌基因组其他位点上或通过质粒等在细菌之间扩散。本科在2005年分离的1株O139群霍乱弧菌NB05030中检出发现携带andA2耐药基因盒的Ⅰ类整合子结构。     

霍乱弧菌O1群和O139群SXT基因扩增及其酶切分型

霍乱是一种烈性传染病，其致病菌为霍乱弧菌。根据菌体（O）抗原的不同，霍乱弧菌已被分为200个以上的O血清群，其中只有O1和O139群能引起霍乱大流行，其他群主要引起散发，因此，关于霍乱弧菌的检测包括O1群和O139群。霍乱弧菌的快速检测对控制霍乱流行及治疗有重要的意义。     

O139群霍乱弧菌ctxAB基因序列分析

目的探讨O130群霍乱JX株的ctxAB基因序列,分析该株基因特点.方法采用PCR扩增技术,检测含O130群霍乱标本,对ctxAB阳性者进行核苷酸序列测定,分析基因变异情况.结果发现阳性标本中,对其中一株进行了ctxAB基因序列测定,该序列与853(O139群)和N16961(Eltor)同源性为100%,与569B(古典型)同源性99.7%.结论该研究证明本株与O1群(EVC)遗传关系最近,可能属于B型.     

O139群霍乱弧菌ctxAB基因序列分析

目的 探讨O130群霍乱JX株的ctxAB基因序列，分析该株基因特点。方法 采用PCR扩增技术，检测含O130群霍乱标本，对ctxAB阳性者进行核苷酸序列测定，分析基因变异情况。结果 发现阳标本中，对其中一株进行了ctxAB基因序列测定，该序列与853（O139群）和N16961（Eltor)同源性为100％，与569B（古典型）同源性99．7％。结论 该研究证明本株与O1群（EVC）遗传关系最近，可能属于B型。     

鲍曼不动杆菌整合子相关耐药基因研究

目的了解我院鲍曼不动杆菌整合子流行情况,证实整合子与鲍曼不动杆菌多重耐药性的关系,建立一种快速简便的整合酶聚合酶链反应（PCR）检测方法。方法收集我院2005年9月至2006年2月临床分离的鲍曼不动杆菌共52株,用纸片扩散法检测鲍曼不动杆菌耐药性及用整合酶PCR检测其整合子基因。结果在52株鲍曼不动杆菌中,整合酶PCR检测出Ⅰ类整合子33株（63％）,未检测出Ⅱ类整合子。统计学分析结果显示,整合子阴性和阳性的鲍曼不动杆菌对各种抗生素的耐药率存在明显差异,前者仅对几种抗生素耐药而后者对多种抗生素耐药。结论我院多重耐药鲍曼不动杆菌中主要为Ⅰ类整合子,整合酶PCR是一种快速、简便、易在临床开展的检测方法,同时也是控制医院感染的有效检测手段。     

1株非O1群非O139群霍乱弧菌的错误鉴定和原因分析

<正>霍乱弧菌(Vibrio cholerae)是弧菌科弧菌属中具有相似生化性状、相同鞭毛抗原、不同菌体抗原的弧菌的统称,按照菌体脂多糖抗原的不同,已分离出200余个血清群[1],除O1群和O139群的产毒株会导致霍乱的大流行外,其他非O1群非O139群霍乱弧菌亦可引起感染性腹泻、败血症等[2]。本研究从我院收治的1例腹泻患者粪便标本中分离培养到1株非O1群非O139群霍乱弧菌,然而布鲁克基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Bruker BioT yperTMMALDI-TOF MS)仪却错误鉴定为易北河弧菌(Vibrio albensis)。报道如下。     

致血流感染非O1群非O139群霍乱弧菌的鉴定及毒力基因检测

目的对襄阳市中心医院分离1株疑似霍乱弧菌进行鉴定及药物敏感性试验,并检测其主要毒力基因。方法利用MicroScan WalkAway 40鉴定仪进行生化鉴定及药物敏感性试验,玻片凝集法确定其血清型别,应用PCR及测序技术分析其16SrRNA基因;PCR检测其6个毒力基因。结果经鉴定,该株疑似霍乱菌株为非O1群非O139群霍乱弧菌,经16SrRNA分析与美国国家生物技术信息中心数据库中霍乱弧菌相似性达100%。药敏试验结果显示该菌对氨苄西林、氯霉素、甲氧苄啶-磺胺甲（口恶）唑、四环素均敏感,毒力基因检测rtxC和toxR阳性,tcpAET、ctxA、hlyA、tcpACL阴性。结论该株疑似霍乱弧菌为非O1群非O139群霍乱弧菌,其致病与rtxC、toxR毒力基因有关。     

34株O139群霍乱弧菌耐药性分析

目的了解0139群霍乱弧菌对常见抗菌药物的耐药性。方法按K—B法对2次疫情中分离的0139群霍乱弧菌分别进行药敏试验。结果34株0139群霍乱弧菌对诺氟沙星、环丙沙星、丁胺卡那霉素等抗菌药物敏感,对氨苄青霉素、链霉素、庆大霉素等高度耐药。结论在传染病疫情控制中应及时开展细菌的药物敏感试验监测工作,为临床提供针对性的指导用药,对疫情控制起到重要作用。     

浙江省非O1、非O139群霍乱弧菌快速检测与毒力基因研究

目的 建立一种快速检测非O1、非O139群霍乱弧菌方法,并对浙江省部分地区海水产品中非O1、非O139 群霍乱弧菌及其携带毒力基因开展快速检测.方法 采用三糖斜面、氧化酶实验、粘丝实验、无盐胨水等简单生化进行初筛,对全部结果阳性的菌株用聚合酶链反应(PCR)方法检测霍乱弧菌外膜蛋白OmpW以及毒力基因ctxA、hl...     

协同凝集试验检测O1群霍乱弧菌

目的建立一种快速简便的O1群霍乱弧菌检测方法。方法将抗O1群霍乱弧菌多价单克隆抗体包被到金黄色葡萄球菌CowanI株上制成SPA菌体试剂,建立起协同凝集试验(COA),检测粪便标本6h培养物中的霍乱弧菌。结果COA检测的敏感性为4×106CFU/ml,检测过程为5min。92份临床标本的测定结果与培养法相比较,COA的特异性、敏感性、诊断符合率分别是100%、95.5%、97.8%。结论COA简便、快速,可作为一种新的霍乱弧菌快速诊断方法。     

2株与霍乱弧菌O139诊断血清发生凝集的麦氏弧菌鉴定

目的对2株疑似O139群霍乱弧菌进一步鉴定,以排除或确诊霍乱。方法以试管凝集和交叉吸收实验复核玻片凝集结果,用生化实验和BIOFOSUN 微生物鉴定系统进行生化鉴定,PCR技术检测O139霍乱弧菌特异性脂多糖基因（LPS）。结果玻片凝集阳性,试管凝集1株菌可达原诊断血清效价的1/4,1株菌达1/2,交叉吸收后均证实为非特异性凝集;未检出LPS基因;系统生化鉴定判定为麦氏弧菌。结论2株菌不是O139霍乱弧菌,而是麦氏弧菌。     

利用脉冲场凝胶电泳及核糖体分型技术对14株上海崇明地区O139群霍乱弧菌分型分析

目的 对14株上海市崇明地区2005年O139群霍乱弧菌菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)及核糖体分型分析。 方法 用PFGE、核糖体分型对霍乱弧菌进行分析。 结果 14株O139群霍乱弧菌产毒株经核糖体分型分析为同一型;而PFGE双酶切分型结果为其中10株为同一型,其余4株为高度同源性。 结论 上海市崇明地区2005年流行的O139群霍乱弧菌核酸指纹分型基本一致。     

产色素O139群霍乱弧菌环境分离株的亲缘关系分析

目的 筛检霍乱弧菌O139血清群产褐色色素的环境分离菌株并分析其遗传近缘关系。 方法 在LBA平板上检测了1992-2010年分离保存的全国1530株O139群霍乱弧菌的色素产生能力,对其中能够产生水溶性褐色色素的菌株的马尿酸氧化酶基因VC1345进行测序,并用脉冲场凝胶电泳(PFGE)、多基因序列分型分析色素产生菌株之间的亲缘关系。 结果 筛选到不同年份不同地区的16株产色素的非产毒O139群菌株。所有的色素产生菌株具有完全一致的VC1345基因、相似的PFGE带型,多基因序列分型显示仅有2种型别。 结论 分离到的O139群产色素菌株来源于近缘的克隆群,而这些菌株之间已存在一定程度的变异。在水体中的持续存在显示其较强的环境生存能力,这些特征提示在霍乱弧菌的环境监测中需提高对这类菌株的关注。     

2005-2014年上海市O139群霍乱弧菌的分子特征和耐药性研究

目的 分析2005-2014年上海市O139群霍乱弧菌的分子特征和耐药性。方法 以聚合酶链反应(PCR)方法检测86株O139群霍乱弧菌的霍乱毒素基因(ctxA)、溶血素基因(hlyA)、毒素协调菌毛基因(tcpA)、调控蛋白基因(toxR)和编码霍乱毒素基因的CTX基因组基因(zot、ace)。采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)方法对O139群霍乱弧菌菌株进行分子分型。采用WHO推荐的改良K-B纸片法,对O139群霍乱弧菌菌株进行11种抗菌药物(头孢曲松、强力霉素、诺氟沙星、环丙沙星、复方新诺明、丁胺卡那霉素、四环素、氯霉素、萘啶酸、氨苄西林、庆大霉素)敏感试验。结果 患者来源O139群霍乱弧菌菌株93.2%(41/44)为产毒株,水产来源菌株58.3%(21/36)为产毒株,6株水体来源菌株均为非产毒株。PFGE分析将O139群霍乱弧菌分为35个型别。MLST分析将O139群霍乱弧菌分为9个ST型,其中流行菌型为ST 69型,非产毒株以ST 162型为主。86株O139群霍乱弧菌经药物敏感试验分析显示O139群霍乱弧菌产毒株的耐药情况比非产毒株严重。O139群霍乱弧菌产毒株对强力霉素、复方新诺明、四环素、萘啶酸、氨苄西林、庆大霉素的耐药率高。O139群霍乱弧菌非产毒株对萘啶酸耐药严重。结论 上海市患者和水产来源O139群霍乱弧菌构成以产毒株为主。PFGE分型提示水产为霍乱疫情的主要传染源。O139群霍乱弧菌产毒株高度克隆化,流行菌型为ST 69型,耐药情况严重。     

O139霍乱弧菌的分子流行病学特征

利用ｃｔｘＡ，Ｚｏｔ，Ａｃｅ，ＲＳ１，ｓｔ和ｉｇａ等基因探针检测５７８株霍乱弧菌，发现其中１株埃尔托型霍乱弧菌和６株Ｏ１３９霍乱弧菌不含ｃｔｘＡ，进一步分析证明这７个菌株中，除１株含ＲＳ１序列外，其他毒力基因检测均为阴性，这为菌苗候选株的筛选提供了依据。用１６ＳｒＲＮＡ基因探针检测不同地区分离的６２株Ｏ１３９菌株和Ｏ－１群埃尔托型菌株，将其分为９个１６ＳｒＲＮＡ基因型。结合ｃｔｘＡ探针检测结果，认为我国流行的Ｏ１３９霍乱弧菌有两种类型，与印度、孟加拉国分离的菌株不尽相同。本文首次报导，通过１６ＳｒＲＮＡ基因检测，可区分Ｏ－１群埃尔托型霍乱弧菌与Ｏ１３９霍乱弧菌，并建议将ｃｔｘＡ、１６ＳｒＲＮＡ两个基因作为确定Ｏ１３９霍乱弧菌分子流行病学特征的指标。     

O139霍乱弧菌生物学特性及药物敏感性分析

为了有效、准确地检测霍乱弧菌，在某地水样泻患者的粪便中分离４株Ｏ１３９霍乱弧菌，经对分离株的生物学特性、血清学及药物敏感性进行研究，并与Ｏ１群霍乱弧菌进行比较。结果表明，Ｏ１３９霍乱弧菌具有Ｏ１群同样的生化特性，但不与Ｏ１群霍乱弧菌抗血清凝集，仅与Ｏ１３９霍乱弧菌抗血清在玻片上呈强凝集，试管凝集滴度为１：６４０～１：２５６０，所有菌株都使鸡红细胞凝集，对羊红细胞溶血的作用可变。所有菌株对霍乱Ｏ１群特异的ｍｕｋｈｅｒｊｅｅ＇ｓ噬菌体有抗性，对Ｏ／１２９多粘菌素Ｂ等药物耐药；而对红霉素、环丙氟哌酸等抗生素敏感。Ｏ１３９与Ｏ１群霍乱弧菌的不同特征，可作为鉴别的参考依据，但由于观察的菌株尚少，有待进一步研究。     

广州市一起非O1/O139群霍乱弧菌食物中毒分离株的病原特征分析

目的 了解2014年广州市某工厂发生的一起非O1/O139群霍乱弧菌食物中毒分离株的耐药特性及分子特征。方法 对分离到的6株非O1/O139群分离株进行生化鉴定、血清学鉴定、药物敏感性实验、毒力相关基因检测和脉冲场凝胶电泳（PFGE）分子分型分析。结果 6株分离株经生化鉴定、血清学鉴定为非O1/O139群。药物敏感性分析显示,6株分离株均对氨苄西林、头孢克肟、头孢拉定、阿米卡星、妥布霉素、庆大霉素和多粘菌素B耐药,对诺氟沙星、环丙沙星、复方新诺明、呋喃唑酮、四环素、吡哌酸、红霉素和氯霉素敏感。毒力基因聚合酶链反应检测结果显示,所有菌株均携带毒力表达调控基因（toxR）和溶血素基因（hlyA）,未检出霍乱肠毒素基因（ctxA）、毒力协同调节菌毛基因（tcpA）和肠毒素基因（ST）;5株病例分离株和1株冷柜内壁分离株经限制性内切酶NotⅠ消化后的PFGE图谱为同一型别。结论 此次食物中毒的病原体为非O1/O139群霍乱弧菌,具有共同的遗传特征,菌株出现了多重耐药,提示应加强该类菌株的监测,防止大范围扩散或暴发流行。     

江苏省环境来源的O139群霍乱弧菌的核酸特征分析

目的 分析江苏省2003-2005年之间从环境样本中分离到的霍乱弧菌的核酸特征,及其差异的程度.方法 将11株目的菌株的表型特征(包括血清型,耐药谱,生化特征以及El Tor霍乱弧菌的噬菌体分型)和核酸特征(包括霍乱毒素基因ctx-A、zot、ace、tcp-A的分布情况和脉冲场凝胶电泳指纹图谱)结合起来进行比较和分析.结果 11株菌株中有10株O139群霍乱弧菌,1株El Tor小川;其中6株O139同时对5种以上抗生素耐受,2株O139对4种抗生素耐受,1株0139对2种抗生素耐受,另外1株O139(属于PFGE-C型)和1株小川分别只对一种抗生素耐受;11株霍乱弧菌的生化特征没有明显差异;8株O139同时携带4种毒力相关基因,1株0139只携带zot和ace,另外1株O139(05052)和1株小川未携带这4种基因;9株O139的脉冲场凝胶电泳指纹图谱聚为一类,另外1株O139和小川各自聚为一类.结论 10株O139中有1株(属于PFGE-C型)的耐药谱、毒力相关基因分布及PFGE指纹图谱与其他9株不同,而与分离地点相同的小川相似,提示自然环境中的O139群霍乱弧菌存在着差异.