慢性高眼压SD大鼠视网膜小胶质细胞CD11b表达研究

目的 探讨慢性高眼压SD大鼠在不同眼压下视网膜小胶质细胞CD11b表达情况及视网膜损害程度与小胶质细胞功能的相关性.方法 实验研究.采用532-激光建立SD大鼠慢性高眼压模型,对大鼠前房角进行90～110个点的光凝固,分别在光凝后2周、1…2 3 5及6个月测量大鼠眼压,在相应的时间点,以免疫组织化学方法检测大鼠视网膜小胶质细胞膜表面抗原CD11b表达阳性率.四甲基葡聚糖罗丹明标记视网膜神经节细胞(RGC)并计数.应用SPSS 13.0统计学软件进行数据处理,采用组间对比t检验,比较对照组与实验组不同时间点的眼压值.回归分析判断眼压升高率与RGC损失率及小胶质细胞CD11b表达阳性率的相关性.结果 造模后2周,实验组SD大鼠眼压开始升高,但与对照组相比差异无统计学意义(t=1.124,P=0.287);1个月时实验组眼压升高达到峰值为(24.156±2.704)mm(1 mmHg=0.133 kPa),与对照组(15.930±3.278)mm Hg比较,差异有统计学意义(t=2.487,P=0.036);其后眼压逐渐下降,6个月时眼压恢复至对照组水平(t=1.103,P=0.290).造模后2周,实验组视网膜小胶质细胞CD11b表达阳性;1个月时,CD11b表达阳性细胞明显增多,与对照组相比差异有统计学意义(t=3.333,P=0.008);1个月后,小胶质细胞表达CD11b仅限于视网膜内丛状层和内颗粒层;CD11b表达水平与眼压的升高峰值时间一致(r=0.891,P=0.014).实验组RGC呈持续性损害,至6个月时,RGC数量降至最低值,与对照组比较差异有统计学意义(t=2.316,P=0.045).RGC密度下降率与眼压升高率呈显著相关性(r=0.757,P=0.021).结论 慢性高眼压SD大鼠在造模后不同时段视网膜小胶质细胞CD11b表达水平与眼压升高程度具有明显的相关性,提示小胶质细胞有可能在眼压导致的损伤中发挥呈递损伤抗原作用,从而导致自体抗原产生,启动免疫过程.     

新生大鼠视网膜神经元及节细胞体外短期培养方法

目的　建立新生大鼠视网膜神经元原代培养体系 ,观察视网膜神经元和神经节细胞 (retinalganglioncells,RGC)在体外短期培养的生长特点。方法　将新生大鼠视网膜细胞悬液接种于预先用鼠尾胶原包被的 96孔细胞培养板中 ,按 4 0 0× 10 3 ·cm-2 (高密度 )及 2 0 0× 10 3 ·cm-2 (低密度 ) 2种密度接种 ,抑制非神经元生长 ,MTT比色法评价细胞活力 ;上述细胞悬液按高密度接种于 2 4孔细胞培养板中 ,进行HE染色和Thy1单克隆抗体的免疫化学染色 ,测量视网膜神经元和RGC轴突的长度。结果　视网膜神经细胞有聚集成簇生长的倾向 ,细胞活力在高密度培养时明显高于低密度培养 ;第 3天细胞活力最高 ;视网膜神经元在体外形态多样 ,最初 2d轴突生长速度最快 ,超过 12 .0 μm·d-1;大多数RGC从第 1天就再生出 2个或 2个以上的突起 ,第 1天的平均轴突长度为 12 .5 μm·d-1,从第 2天起保持在8 0 μm·d-1。第 4天的平均轴突长度为 2 9.4 5 μm。结论　以鼠尾胶原为支持物 ,经过酶消化法得到的新生大鼠视网膜神经元 ,包括RGC ,能够在短期内表现出较高的细胞活力并再生出较长的轴突 ;高密度培养 ( 4 0 0× 10 3 ·cm-2 )更有利于视网膜神经元在体外生长存活。     

GAP-43与受损后视网膜神经节细胞存活和再生关系的研究进展

生长相关蛋白-43(growth-associated protein-43,GAP-43)作为神经细胞膜上的一种特异性磷酸蛋白质,主要表达于生长、分化和再生的轴突末端及突触前膜,与视网膜神经节细胞( retinal ganglion ceils,RGC)的发育、突触可塑性、受损后细胞存活和轴突再生有密切的关系,但其促进RGC存活和轴突再生的具体机制却并未完全阐明.深入了解其生理作用和表达调控机制,将有助于理解RGC存活和轴突再生的全过程,在促进视神经再生的研究及临床治疗中起到重要作用.     

米诺环素在L-谷氨酸诱导的视网膜神经节细胞损伤中的保护作用及分子机制

目的 探讨米诺环素在L-谷氨酸诱导的视网膜神经节细胞(RGC)毒性中的保护作用和分子机制.方法 实验研究.原代小鼠RGCs体外培养24 h后,随机分为3组:对照组,L-谷氨酸组(100 μmol/L、500 μmol/L、1 mmol/L和2 mmol/L)及L-谷氨酸+米诺环素组(30 μmol),观察不同浓度L-谷氨酸对RGC的存活率与轴突生长的损伤作用及米诺环素的保护作用.体内实验,将雌性B6小鼠随机分为实验组(30只)和对照组(30只).两组小鼠腹腔内分别注射米诺环素(实验组,60 mg/kg)或生理盐水(对照组),每天1次,连续7 d.第2天时,两组小鼠玻璃体腔内注射2μl L-谷氨酸(2 mmol/L),诱导RGC损伤.免疫组化染色分析β-Ⅲ-tubulin阳性细胞数目变化及视网膜神经胶质酸性蛋白(GFAP)表达情况,Real-time PCR和免疫印迹法分别检测小鼠视网膜组织中干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、GFAP与波形蛋白(Vimentin)的mRNA及蛋白表达水平.结果 体外实验显示,与对照组相比,L-谷氨酸降低RGC的存活率,与剂量和干预时间呈负相关.同时L-谷氨酸可明显抑制RGC轴突的生长,RGC轴突长度>2BL、1～2 BL、<1 BL占总细胞数比例分别从50.38%、7.83%和3.72%降至31.43%、5.05%和1.29%.而米诺环素能明显减轻L-谷氨酸对RGC的毒性作用,改善RGC轴突生长,各组细胞比例回升至51.00%、8.10%和2.43%,谷氨酸与对照组相比、米诺环素组与谷氨酸相比,差异有统计学意义(F=18.87,P<0.01).体内实验结果显示,与对照组相比,L-谷氨酸组小鼠RGC数目显著减少(45.00±10.21和68.50±2.86),而米诺环素治疗后可明显改善L-谷氨酸诱导的RGC损伤,RGC数目恢复至62.00±11.65,(F=7.6,P<0.01).谷氨酸处理后视网膜组织中GFAP的表达水平明显增高,而米诺环素明显降低视网膜组织中GFAP的表达.同时,L-谷氨酸显著提高小鼠视网膜组织中炎症相关因子IFN-γ、IL-1、TNF-α及胶质细胞相关蛋白Vimentin和GFAP的基因及蛋白表达水平,而米诺环素可显著抑制这些因子的表达.结论 L-谷氨酸损伤可诱导RGC凋亡、抑制RGC轴突生长,并上调炎症因子及视网膜相关胶质蛋白的基因与蛋白表达水平,米诺环素对L-谷氨酸所导致的视网膜神经节细胞损伤具有明显的保护作用.     

肌苷调节视网膜节细胞轴突再生

目的　探讨肌苷对中枢神经再生的影响。方法　分离并制作均匀的视网膜神经节细胞 (RGC)悬液 ,采用 2 4孔培养皿培养 ,观察嘌呤类物质对RGC轴突生长及细胞存活的影响。结果　 ( 1)肌苷促使RGC轴突生长 ;腺苷只有水解脱氨生成肌苷才能促使轴突生长。 ( 2 )肌苷与 6 硫鸟嘌呤 ( 6 TG)可能竞争性作用于蛋白激酶N(PKN)调节轴突生长。( 3 )肌苷刺激RGC致GAP 43表达增强。 ( 4 )肌苷的细胞内信息传递通路可能通过有丝分裂原激活蛋白激酶 (MAPK)、磷脂酰肌醇激酶 (PI3K)两条途径起作用。结论　肌苷在RGC神经再生中起积极的调节作用。     

依托咪酯对成年大鼠视神经切断后视网膜神经节细胞的保护作用

目的:观察依托咪酯(ET)对成年大鼠视神经切断后视网膜神经节细胞(RGC)存活的作用.方法:成年雌性SD大鼠42只,眶内距视神经根部1mm处切断左侧视神经,残端留置浸有荧光金(50g/L)的明胶海绵逆行标记RGC.术后大鼠随机分为ET(4mg/kg,ip,1次/d)治疗组、1,2-丙二醇(PG)溶剂对照组、生理盐水对照组和正常对照组.再根据术后不同存活时间将前3组动物分为7d和14d两个亚组,正常对照组动物则存活2d.于相应存活时间点处死动物,取出各组大鼠左侧视网膜平铺后计数存活RGC并得出RGC的平均密度.结果:术后7dET治疗组存活RGC平均密度为1 307±55/mm2,显著高于PG对照组(1 128±75/mm2)和生理盐水对照组(1 068±75/mm2,P＜0.001).然而,未能在术后14d观察到ET的这种保护作用,因为ET治疗组存活RGC平均密度(210±36/mm2)与PG对照组(215±20/mm2)和生理盐水对照(208±19/mm2)间无显著差异(P＞0.05).结论:ET在视神经切断后一定时期内对RGC具有神经保护作用.     

氯离子通道2对压力应激状态下人眼小梁细胞功能的影响

目的 探讨分布于小梁细胞上的氯离子通道2(ClC-2)与小梁细胞数量及功能之间的关系,以进一步了解原发性开角型青光眼的形成机制.方法 首先分别利用反转录聚合酶链反应、台盼蓝染色、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法检测不同压力,以及不同压力作用时间下小梁细胞C1C-2 mRNA表达、小梁细胞活力及凋亡情况的变化;再利用RNAi技术抑制CIC-2 mRNA的表达,观察一定压力及作用时间下小梁细胞活力、凋亡情况的变化.结果 与0 mm Hg(1 mm Hg =0.133 kPa)、20 mm Hg相比,30 mm Hg及40mm Hg时,随压力作用时间的增加,CIC-2 mRNA的表达明显增高,差异有统计学意义;表达最高点为24 h;60mm Hg时,各时间点下C1C-2 mRNA的表达较30 mm Hg、40 mm Hg时明显降低,差异有统计学意义,且随时间延长,C1C-2 mRNA的表达逐渐下降.当40 mm Hg及60 mm Hg的压力持续作用一段时间后,小梁细胞活力明显降低,凋亡指数明显增加,差异有统计学意义.抑制C1C-2 mRNA表达后,压力应激状态下小梁细胞活力下降及凋亡增加更显著,差异有统计学意义.结论 压力应激条件下,C1C-2表达的变化与小梁细胞的活力及凋亡有一定的相关性,提示C1C-2对小梁细胞存在保护作用.(中国眼耳鼻喉科杂志,2012,12:26-29)     

川芎嗪对慢性高眼压大鼠视网膜神经节细胞凋亡的影响

目的 研究川芎嗪对慢性高眼压大鼠视网膜神经节细胞(retina ganglion cells,RGC)凋亡的保护作用.方法 健康SD大鼠30只,随机分为正常组、高眼压组和川芎嗪治疗组,每组10只.高眼压组和治疗组分别采用上巩膜静脉烧灼法制作高眼压模型,正常对照组不做处理.造模成功后7d治疗组给予川芎嗪腹腔注射,正常组与高眼压组给予等量的生理盐水腹腔注射.造模3周后取三组大鼠眼球,行视网膜HE染色、TUNEL原位细胞凋亡检测和Bcl-2免疫组织化学检测.结果 造模后高眼压组、川芎嗪治疗组各时间点眼压与正常组比较,差异均有统计学意义(均为P ＜0.05),而两组间各时间点比较,差异均无统计学意义(均为P＞0.05).正常组、高眼压组、川芎嗪治疗组大鼠视网膜RGC层TUNEL阳性细胞数分别为0、9.00±0.89、3.50±1.89,三组间差异有统计学意义(F =86.160,P=0.000);三组间两两比较,差异均有统计学意义(均为P =0.000).三组大鼠RGC层Bcl-2阳性表达光密度值分别为0.373±0.090、0.375±0.146、0.390±0.268,三组差异有统计学意义(F=84.658,P=0.000);三间组两两比较,差异均有显著统计学意义(均为P=0.000).结论 川芎嗪通过上调Bcl-2蛋白的表达可明显抑制慢性高眼压大鼠RGC凋亡,从而发挥RGC保护作用.     

巨噬细胞激活促进视神经损伤后修复的研究

目的研究巨噬细胞激活状态与视神经损伤后视网膜节细胞(retinal ganglion cell,RGC)存活及神经轴突再生的关系。设计实验性研究。研究对象费希尔大鼠23只。方法在费希尔大鼠上建立视神经损伤及自体外周神经嫁接模型,在玻璃体腔分别注射巨噬细胞激活剂酵母多糖(zymosan,ZYM)或联合巨噬细胞抑制因子(macrophage inhibitory factor,MIF)。大鼠存活3周后灌流固定取视网膜,灌流之前3天进行荧光金标记。对取出的视网膜进行免疫荧光染色,平铺视网膜后在荧光显微镜下分别计数存活RGC、轴突再生性RGC和巨噬细胞的数量。实验分为生理盐水对照组、ZYM组、MIF组及ZYM联合MIF组。主要指标巨噬细胞、存活RGC及轴突再生性RGC的数量。结果对照组巨噬细胞、存活及轴突再生性RGC数量分别为91±6.1/mm~2、185±9.0/mm~2及35±2.9/mm~2,与对照组相比,ZYM组可使眼内巨噬细胞(883±93.9/mm~2)的数量增至近十倍,同时可明显促进RGC存活(299±13.1/mm~2)及神经轴突再生(99±13.5/mm~2);MIF组本身对RGC的存活及轴突再生情况无明显影响。当巨噬细胞被激活后,联合应用MIF虽未能减少眼内巨噬细胞的数量(828±72.9/mm~2),但可有效降低这些巨噬细胞对RGC轴突再生(67±2.2/mm~2)的促进作用。结论巨噬细胞被酵母多糖激活后具有促进RGC的存活及神经轴突的再生,而巨噬细胞抑制因子对巨噬细胞的抑制作用可使其促神经再生的作用明显降低。     

壳聚糖对分层及纯化培养的视网膜神经节细胞生长的促进作用

目的 研究壳聚糖对体外培养的鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGC)生长的影响.方法 取SD乳鼠视网膜,将视网膜分为内层、外层及全层后,分别制成细胞悬液,各自进行培养.实验组加入含100g· L-1壳聚糖的培养基,对照组不加壳聚糖.每天观察细胞生长状态,用MTT比色法检测细胞存活率(OD值).各层细胞分别用Thy1.1抗体鉴定RGC,计算各层细胞的RGC率.两步法提纯RGC,提纯后分别加入含体积分数10％血清、100g· L-1壳聚糖及鼠神经生长因子的培养基,观察细胞生长状态.结果 分层培养细胞的存活率:各层细胞培养后1d、2d存活率最高,MTT比色法结果显示:培养1d后外层OD值为1.189±0.158,内层为1.084±0.150,全层为1.381±0.089;随着培养时间的延长,细胞存活率逐渐降低(P＜0.05):外层OD值3d为0.835±0.120、4d为0.805±0.116、5d为0.782±0.107;内层OD值:3d为0.388±0.095、4d为0.371±0.084、5d为0.347±0.052;全层OD值:3d为0.523±0.047、4d为0.340±0.084、5d为0.227±0.057;相同时间点实验组(壳聚糖组)比对照组(不含壳聚糖)的存活率高,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).经细胞免疫组化鉴定,内层RGC％最高(19.248±0.999)％,其次为全层(4.986±0.635)％,外层最低(0.748±0.177)％.两步法提纯神经节细胞:提纯率可达95％以上.纯化的神经节细胞培养2d后测量最大轴突长度,壳聚糖组:62.5 μm、NGF组:37.5 μm、空白对照组:12.5μm,壳聚糖组及NGF组轴突均比对照组长.结论 混合培养的各层细胞中,内层细胞的节细胞率最高.在混合培养的各层细胞中加入壳聚糖,能促进其生长并提高存活率.加入壳聚糖或鼠神经营养因子后,能促进纯化的RGC的生长.     

压力对大鼠纯化视网膜神经节细胞诱导型一氧化氮合酶mRNA及其蛋白表达的影响

目的 研究不同压力下纯化培养的大鼠视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells,RGCs)中诱导一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS)mRNA及其蛋白质的表达,探讨青光眼患者RGCs损伤的机制。方法 将纯化培养的Sprague-Dawley大鼠RGCs随机分成对照组A,B,C,及D组,分别在0,20,40,60及80mmHg(1mmHg=0.133KPa)的压力下培养48h后,用原位杂交,RTPCR及Western blot法检测RGCs中iNOSmRNA及其蛋白质的表达,并用全自动图像分析系统测定其吸光度值。结果 纯化培养的RGCs纯度为98％。原位杂交,RT－PCR及Western blot法检测RGCs中iNOS mRNA及其蛋白表达结果变化均呈平行关系;对照组无表达,A组有较弱的表达信号,B,C及D组表达逐渐增强;3项检测结果用全自动图像分析显示;A组iNOSmRNA均弱表达,与对照组比较差异有显著意义（P＜0．05）;B,C及D组均为强表达,各组与对照组比较差异有非常显著意义（P＜0．01）。结论 压力可激活RGCs中iNOSmRNA及其蛋白质的表达,由此产生过量的NO损伤RGCs成为青光眼的发病因素之一。     

压力对大鼠纯化视网膜神经节细胞中Fas/FasL mRNA表达的影响

目的：通过检测不同压力及时间纯化培养的大鼠视网膜神经节细胞（retinal gangal ,Cells,RGCs)中Fas/FasL mRNA的表达，探讨Fas/FasL在RGCs凋亡中的作用，方法：用SD系大鼠脑源性星型胶质细胞同化培养液双界面法培养羊抗鼠Thy1.1单克隆抗体纯化的SD系大鼠RGCs，分别在0mmHg(对照组）和20，40，60and 80mmHg(1kPa=7.5mmHg)的压力下培养24h及48h后,用免疫组化和原位杂交对RGCs中Fas/FasL及其mRNA的变化进行定性及半定量观察，TUNEL法检测各组织细胞的凋亡，结果：纯化的RGCs培养24h用羊抗鼠FITC－Thy-1.1单克隆抗体进行鉴定阳性，纯度为97％，免疫组化和原位杂交检测Fas/FasL及其mRNA，结果培养24h对照组无表达，20mmHg组有较弱的表达信号，40，60及80mmHg组表达逐渐增强，与对照组比较差异均有显著性（P＜0．05），培养48h对照组弱表达，压力≥20mmHg各组较相同压力培养24h各组表达增强，差异有显著性（P＜0．05），TUNEL法检测细胞凋亡，培养24h对照组未见细胞凋亡。20mmHg见少量细胞凋亡，随着压力的增高细胞凋亡数增多，凋亡指数增高，与对照组相比均有显著性差异，培养48h组压力≥20mmHg各组较相同压力培养24h组凋亡指数增高，差异有显著性（P＜0．05），结论：压力可激活视网膜神经节细胞Fas/FasL mRNA表达，Fas/FasL系统活化参与了青光眼高眼压下视网膜神经节细胞的凋亡。     

Molecular and cellular reactions of retinal ganglion cells and retinal glial cells under centrifugal force loading

PURPOSE: To investigate changes in retinal ganglion cell (RGC) survival and morphology, retinal glial cell effects on RGC survival, and changes in mRNA expression during centrifugal force loading using a newly developed device. METHODS: Changes in RGC survival and morphology were examined when isolated RGCs from 2-day-old rats were loaded with centrifugal force equivalent to 16, 28, or 33 mm Hg. The effects of cocultured retinal glial cells on RGC survival were studied in the presence of centrifugal force equivalent to 16 and 28 mm Hg for 48 hours. The microarray method and real-time polymerase chain reaction confirmed changes in mRNA expression when RGCs and retinal glial cells were loaded with centrifugal force equivalent to 28 mm Hg for 24 hours. RESULTS: The survival of isolated RGCs and the number of neurites were significantly decreased by centrifugal force loading. Conversely, there was no significant change in the survival of isolated retinal glial cells. The survival of cocultured RGCs was significantly better than that of isolated RGCs. In contrast to the numerous changes in the mRNA expression of retinal glial cells subjected to centrifugal force loading, there was no significant change in the mRNA expression of RGCs. CONCLUSIONS: The developed device may have potential for use as an in vitro model of RGC damage. The response to centrifugal force loading varies according to cell type, and the marked changes in the mRNA expression of retinal glial cells may be involved in the improvement of RGC survival.     

压力对牛眼小梁细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨压力对牛眼小梁细胞的增殖周期及凋亡相关基因bcl-2和bax mRNA表达的影响。方法：体外培养牛眼小梁细胞。按照施加压力的大小分为实验组和对照组,对照组不施加压力,实验组分别给予20、40、60及80mm Hg(1mm Hg=0.133kPa）的压力,培养时间分别为24及48h。通过末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法、流式细胞仪和原位杂交技术,检测不同压力和持续时间下小梁细胞的增殖和凋亡指数,及在此条件下凋亡相关基因bcl-2和bax mRNA的表达。结果：≤40mm Hg的压力持续24h,小梁细胞凋亡率与对照组比较差异无显著意义（P＞0．05）;≥60mm Hg的压力使小梁细胞凋亡率显著增高。40mm Hg的压力持续24h后,细胞的凋亡指数虽未显著增高,但增殖指数已显著下降,bax基因表达有明显改变。≥40mmHg的压力持续48h后,细胞的凋亡率、增殖指数及bcl-2家庭基因表达量与对照组相比,差异均有显著意义（（均P＜0．01）。结论：≥40mm Hg的压力持续一段时间后,可通过影响bcl-2家族基因抑制小梁细胞的增殖并导致细胞凋亡。     

雷帕霉素对缺氧损伤视网膜神经节细胞的保护作用及其机制

背景 研究表明雷帕霉素(Rapa)可延缓人大脑细胞的衰老,改善大鼠局灶性脑缺血时脑组织代谢活动,对中枢神经细胞具有保护作用.视神经和视网膜神经节细胞(RGCs)属于中枢神经组织,但Rapa是否可对外伤后RGCs具有保护作用尚不清楚. 目的 探讨Rapa对氯化钴(CoCl2)诱导的缺氧损伤大鼠RGCs的保护作用,并探讨其可能的作用机制,为外伤性视神经病变(TON)的治疗提供新的思路.方法 用含体积分数10％胎牛血清的DMEM培养基培养大鼠RGC-5细胞,倒置相差显微镜下观察培养细胞的形态学变化.将细胞分为正常对照组及50、100、200、400和600 μmol/L CoCl2组,于细胞培养后24 h和48 h采用细胞生长分析系统检测各组细胞存活率.采用200 μmol/L CoCl2处理细胞以诱导建立RGC-5细胞缺氧损伤模型,然后将培养的细胞分为正常对照组、模型对照组和不同浓度Rapa干预组,Rapa干预组在缺氧模型细胞培养液中添加Rapa使其终浓度分别为0.1、0.4、1.6和6.4μmol/L,处理细胞24 h.采用细胞生长分析系统检测各组细胞的存活率;采用AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术检测各组细胞凋亡率;采用JC-1染色技术检测各组细胞线粒体跨膜电位(△ψm)的变化;采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞促凋亡基因bax mRNA的相对表达量. 结果 200 μmol/L CoC12作用RGC-5细胞后24 h细胞相对存活率为(70.51±5.00)％,与正常对照组的(100.00±3.29)％比较,差异有统计学意义(P＜0.01),成功构建细胞缺氧损伤模型.正常对照组、模型对照组和0.1、0.4、1.6、6.4 μmol/L Rapa干预组细胞存活率的总体比较差异有统计学意义(F=167.904,P=0.000),其中0.1μmol/L Rapa干预组细胞存活率明显高于模型对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).正常对照组、模型对照组和0.1μmol/L Rapa干预组细胞凋亡率分别为25.4％、37.7％和25.3％,细胞线粒体膜电位分别下降了0.4％、6.3％和1.4％.正常对照组、模型对照组和0.1 μmol/L Rapa干预组细胞中baxmRNA相对表达量分别为1.01±0.21、3.52±0.30和1.66±0.20,总体比较差异有统计学意义(F=88.034,P=0.000),其中模型对照组细胞中bax mRNA相对表达量均明显高于正常对照组和0.1μmol/L Rapa干预组,差异均有统计学意义(均P＜0.05). 结论 Rapa可对CoC12诱导的缺氧RGC-5细胞发挥保护作用,其主要作用机制是下调细胞中促凋亡分子bax的表达,并提高RGC-5细胞存活率.     

压力对牛眼小梁细胞诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达及蛋白质合成的影响

目的　研究牛眼小梁细胞中诱导型一氧化氮合酶 (induciblenitricoxidesynthase,iNOS)在不同压力下的mRNA表达及蛋白质合成的变化 ,探讨一氧化氮 (nitricoxide,NO)在青光眼发病中的作用。方法　培养新生牛眼小梁细胞 ,并分别给予 2 0、40、6 0及 80mmHg(1mmHg =0 133kPa)的压力 ,以不加压组为对照组 ,用原位杂交和还原型辅酶Ⅱ硫辛酰胺脱氢酶 (nicotinamide adeninedinucleotidephosphate ,NADPH)组织化学染色技术对小梁细胞iNOS的mRNA和蛋白质含量变化进行定性及定量观察。结果　牛眼小梁细胞中iNOSmRNA及蛋白质含量均随压力增高而增高。对照组与压力 2 0mmHg组比较 ,两组iNOSmRNA均为弱表达 ,组间差异无显著性 (t=0 95 0 1,P >0 0 5 ) ;压力 40mmHg和 6 0mmHg组与对照组相比差异有显著性 (t值分别为 0 0 381和 0 0 32 4,P <0 0 5 ) ;压力 80mmHg组与对照组相比差异有非常显著性 (t=0 0 0 0 16 ,P <0 0 1) ;压力 40mmHg组与 6 0mmHg组相比 ,组间差异无显著性 (t=0 112 3,P >0 0 5 ) ,而与 80mmHg组相比差异有非常显著性 (t值分别为 0 0 0 2 9和 0 0 0 45 ,P <0 0 1)。NADPH组织化学染色结果与原位杂交结果基本相同 ,仅显示 40mmHg组与6 0mmHg组的组间差异有显著性 (t=0 0 42 0 ,P <0 0 5     

Interleukin-6 protects retinal ganglion cells from pressure-induced death

PURPOSE: The response of retinal ganglion cells (RGCs) to ocular pressure in glaucoma likely involves signals from astrocytes and microglia. How glia-derived factors influence RGC survival at ambient and elevated pressure and whether the inflammatory cytokine interleukin-6 (IL-6) is a contributing factor were investigated. METHODS: Primary cultures of retinal astrocytes, microglia, and RGCs were prepared using immunomagnetic separation. Comparisons were made of RGC survival at ambient and elevated pressure (+70 mm Hg) and with pressure-conditioned medium from glia with, and depleted of, IL-6. RESULTS: Pressure elevated for 24 to 48 hours reduced RGC density, increased TUNEL labeling, and upregulated several apoptotic genes, including the early immediate genes c-jun and jun-B. Pressure-conditioned medium from astrocytes reduced RGC survival another 38%, while microglia medium returned RGC survival to ambient levels. These effects were unrelated to IL-6 in microglia medium. Neither astrocyte- nor microglia-conditioned medium affected ambient RGC survival unless depleted of IL-6, which induced a 63% and a 18% decrease in RGCs, respectively. Recombinant IL-6 equivalent to levels in glia-conditioned medium doubled RGC survival at elevated pressure. CONCLUSIONS: For RGCs at ambient pressure, IL-6 secreted from astrocytes and microglia under pressure is adequate to abate other proapoptotic signals from these glia. For RGCs challenged by elevated pressure, decreased IL-6 in astrocyte medium is insufficient to counteract these signals. Increased IL-6 in microglia medium counters not only proapoptotic signals from these cells but also the pressure-induced apoptotic cascade intrinsic to RGCs.     

TiO2纳米光催化剂薄膜对牛晶状体上皮细胞黏附及移行的影响

目的观察经光激发后TiO2纳米光催化剂薄膜对体外培养的牛晶状体上皮细胞（LECs）黏附及移行的影响。方法采用溶胶-凝胶法在载玻片表面制备TiO2光催化剂薄膜,对载玻片行接触角测量。体外培养牛LECs爬片生长于此薄膜上。未经TiO2纳米光催化剂薄膜修饰的载玻片设为对照。进行细胞黏附和迁移实验,测定并比较牛LECs在TiO2薄膜修饰载玻片与对照载玻片表面的生长、移行情况。结果对TiO2薄膜组和对照组载玻片行接触角测量：对照组载玻片接触角为18.825°±2.342°,TiO2镀膜组载玻片接触角为0°±2°,TiO2镀膜组载玻片的接触角明显小于对照组。通过细胞黏附实验,TiO2镀膜组载玻片表面细胞黏附数平均为36.60±11.20,对照组细胞黏附数平均为96.40±19.67,差异有统计学意义（P=0.000）。细胞迁移实验（划痕法）中,对照组细胞移行距离平均为0.951mm,TiO2镀膜组细胞平均移行距离为0.640mm,差异有统计学意义（P=0.000）。结论TiO2纳米光催化剂薄膜具有超亲水性,能够明显抑制牛LECs在其表面的黏附和移行。     

雪旺细胞源性神经营养活性物质对培养视网膜节细胞正常及缺气损伤环境中存活及生长的作用

目的：探讨雪旺细胞（Schwann cells,SC)源营养神经活性物质（SC derived neurotrophic activity,SCNA)对体外培养视网膜节细胞正常及缺血损伤环境中存活及生长相关蛋白（GAP）43表达的作用。方法：培养乳鼠SC，制备不同蛋白浓度的SCNA，加入原代培养的视网膜细胞中，MTT法检测SCNA活性培养荧光金逆行标记的新生3d的SD乳鼠视网膜细胞，接种于24孔板中。培养第2d时SCNA作用组培养液中加入300mg/L SCNA,对照组不加；培养第5d缺气损伤组在培养液表面加入液体石蜡造成缺气损伤。12h后去除液体石蜡，观察细胞形态和计数荧光金逆行标记的视网膜节细胞（retinal ganglion cell,RGC).Western Blot法分析SCNA对视网膜细胞GAP43表达的影响。结果：SCNA能促进培养视网膜细胞的存活，并有蛋白浓度依赖关系。加SCNA后，视网膜细胞生长明显旺盛，悬浮的死细胞较少，RGC数量明显多于视网膜细胞单纯培养组（F＝62．89，P＜0．01）。缺气损伤组视网膜细胞出现肿胀改变，加有SCNA缺气损伤组细胞形态大致正常，RGC数与对照组相比有显著性差异（F＝49．27，P＜0．01）。GAP43的表达在视网膜细胞正常及缺气损伤SCNA作用组上调。结论：SCNA对培养RGC具有明显营养作用，并上调GAP43的表达。在培养液中加入SCNA，可以减轻“缺气”造成的损伤，提高体外培养RGC在损伤环境中的存活。     

银杏叶提取物对培养的人眼视网膜神经节细胞的保护作用

目的 探讨银杏叶提取物（EGb761）对培养的人眼视网膜神经节细胞(RGC)的保护作用。方法 对照实验研究。将培养的人眼视网膜细胞分为对照组、谷氨酸组、EGb761组及谷氨酸+EGb761组,用Thy-1作为RGC特异性荧光抗体,以免疫流式细胞技术评价EGb761对人眼RGC的保护作用。多组间细胞存活率比较采用重复测量的方差分析,组间两两比较采用LSD t检验。结果 在不同干预因素作用下,RGC存活率呈现不同变化,对照组为(61.94±7.75)％,谷氨酸组为(44.59 +4.19)％,EGb761组为(75.05 +3.90)％,EGb761+谷氨酸组为(63.19±9.44)％;各组间RGC存活率比较差异有统计学意义(F=13.329,P＜0.01)。各组与对照组RGC存活率两两比较,显示谷氨酸组RGC存活率降低(P =0.010),EGb761组RGC存活率升高(P=0.019),EGb761+谷氨酸组与对照组RGC存活率差异无统计学意义(P =0.801);与谷氨酸组相比EGb761组和EGb761+谷氨酸组RGC存活率明显升高(P=0.000,0.020)。死亡RGC中大RGC所占百分比,EGb761组为(24.63+7.21)％,EGb761+谷氨酸组为(25.99±5.05)％,与对照组(36.69±2.92)％比较,两组死亡RGC中大RGC所占百分比均降低(P=0.001,0.002);与谷氨酸组(40.78±3.34)％相比,两组大RGC死亡百分比亦降低(P =0.000,0.000)。结论 EGb761可对抗谷氨酸兴奋性毒性造成的RGC损伤,对体外培养的人眼RGC具有明显的保护作用。