血管内皮生长因子C反义脱氧寡核苷酸对肺癌细胞的作用

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCC)中血管内皮生长因子C(VEGF-C)信使核糖核酸(mRNA)的表达及其反义脱氧寡核苷酸(antisense oligodeoxyribonucleotide,ASODN)对人肺癌细胞的作用.方法 应用原位杂交技术检测48例新鲜肺癌标本中VEGF-C mRNA的表达,将脂质体介导的VEGF-C ASODN转染人肺癌细胞株A-549,用Western印迹法检测肺癌细胞VEGF-C蛋白的表达.结果 VEGF-C mRNA在肺鳞癌和腺癌细胞中的表达阳性率分别为65.4%(17/26)和59.1%(13/22),经VEGF-C ASODN转染的细胞株A-549中,VEGF-C蛋白表达水平明显下降(P＜0.01).结论 VEGF-C mRNA在NSCC中有一定程度的表达,体外实验VEGF-C ASODN通过下调VEGF-C蛋白的表达抑制肺癌细胞的侵袭作用.     

反义寡核苷酸抑制肝癌血管内皮生长因子表达

目的 探讨不同序列的反义寡核苷酸对肝癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的抑制效果。 方法 SMMC7721细胞于正常氧和缺氧条件下培养24 h,观察缺氧对VEGF mRNA表达的影响;SMMC7721细胞接种于6孔板后,各加入不同的反义寡核苷酸(反帽子结构A06513、反翻译起始部位A06514、反第三外显子A06515、反翻译终止部位A06516和空白组),缺氧培养24 h,然后收集细胞提取总RNA并作逆转录聚合酶链反应分析,同时以管家基因GAPDH(3-磷酸甘油醛脱氢酶)表达为内对照。 结果 缺氧条件下,SMMC7721细胞VEGF mRNA表达明显增强,而有氧条件下未见表达;反义寡核苷酸具有明显抑制VEGF mRNA表达,和空白对照组相比,A06513、A06514、A06515及A06516的VEGF/GAPDH值分别为0.49±0.08、0.71±0.12、0.72±0.11及0.86±0.12(F=12.21,P<0.05)。帽子结构的反义基因表现最强的抑制作用(P<0.0 1)。 结论 与VEGF帽子结构作用的反义寡核苷酸,有望成为肝癌反义基因治疗的新选择。     

沉默血管内皮生长因子C对非小细胞肺癌A549细胞增殖和侵袭能力的影响

目的探讨沉默血管内皮生长因子(VEGF-C)基因对人非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞增殖和侵袭能力的影响。方法构建靶向VEGF-C基因的重组慢病毒Lv-siRNA-VEGF-C,将其感染A549细胞,建立VEGF-C基因低表达的A549细胞。Western印迹检测Lv-siRNA-VEGF-C细胞组、空载体Lv-Ctrl对照组及空白A549细胞中VEGF-C蛋白的表达噻唑蓝(MTT)法、Transwell侵袭实验和裸鼠移植瘤模型分别检测各组细胞的增殖和迁移能力。结果与对照相比,VEGF-C基因低表达组细胞中VEGF-C蛋白的表达显著降低,细胞体内、体外增殖活性也明显下降,细胞侵袭能力亦显著降低。结论成功构建的慢病毒介导的针对VEGF-C的干扰载体可有效抑制A549细胞表达VEGF-C蛋白表达,沉默VEGF-C能抑制人NSCLC A549细胞的增殖和侵袭能力。     

血管内皮生长因子反义脱氧寡核苷酶对实体瘤血管生成的抑制

血管新生是恶性肿瘤细胞生长、增殖、转移不可或缺的重要条件之一。血管内皮生长因子(VEGF)为促进血管内皮细胞有丝分裂的细胞因子，是血管新生的正调控因子，在肿瘤血管新生中起重要作用。VEGF反义脱氧寡核苷酸(ASODN)可抑制实体瘤的血管生成，是治疗实体瘤的一种新策略。近年来有关研究表明VEGF ASODN也．可抑制血液系统恶性肿瘤的血管生成。现将近几年的研究进展综述如下。     

血管内皮生长因子反义寡核苷酸抑制甲状腺癌血管生成的效应

目的探讨反义寡核苷酸(ASODN)抑制甲状腺癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达及内皮细胞生长的效应。方法设计合成靶向VEGF的ASODN转染人髓状甲状腺癌细胞系(TT)细胞,并制备相应条件培养基作用内皮细胞ECV304,设正义寡核苷酸(SODN)和空白对照组进行比较。观察细胞生长状态,RT PCR、免疫细胞化学法检测TT细胞VEGFmRNA和蛋白表达,四氮唑蓝法检测TT和ECV304细胞生长抑制率(IR),流式细胞仪、吖啶橙/溴化乙锭染色法检测ECV304细胞凋亡状态。结果ASODN组TT细胞VEGFmRNA和蛋白表达显著低于SODN和对照组(P<0.01),但IR差异无统计学意义(P>0.05);各转染组ECV304细胞IR差异亦无统计学意义(P>0.05);而经各ASODN组TT细胞条件培养基作用的ECV304细胞生长明显受抑,IR(分别为0.21±0.03、0.31±0.01、0.42±0.22)显著高于SODN组(0.05±0.03,P<0.01),并伴明显细胞凋亡,上述效应呈浓度依赖性。结论ASODN可通过特异性封闭甲状腺癌细胞VEGF表达,抑制内皮细胞生长,干扰肿瘤血管生成。     

乙酰肝素酶反义寡核苷酸对肺癌A-549细胞侵袭力的抑制作用

目的 探讨乙酰肝素酶(heparanase,HPSE )反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对人肺癌A-549细胞侵袭力的抑制作用.方法 设计合成互补于HPSE mRNA起始密码区的HPSE ASODN,以阳离子脂质体Lipofectin包埋后转染人肺癌A-549细胞进行培养,采用流式细胞分析技术和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肺癌A-549细胞HPSE蛋白及其mRNA表达的变化;以Matrigel细胞侵袭试验对HPSE AS-ODN对肺癌A-549细胞侵袭的抑制进行检测.结果 ASODN各组与正常对照组和脂质体组比较及ASODN各组间比较HPSE mRNA和蛋白的表达及细胞侵袭力均受到明显抑制 (P<0.01);ASODN在终浓度为100、200、400 nmol/L时对肺癌A-549细胞侵袭力的抑制率分别为55.6%、82.3%和91.2%.结论 HPSE ASODN通过下调HPSE mRNA和蛋白的表达可显著抑制肺癌A-549细胞的侵袭力,并呈剂量依赖性.     

血管内皮细胞生长因子反义寡核苷酸对小鼠Lewis肺癌生长和转移的抑制作用

目的探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)反义寡核苷酸对小鼠Lewis肺癌生长和转移的抑制作用。方法复制小鼠Lewis肺癌模型24只,随机分为对照组、VEGF反义寡核苷酸(ASODN)组、VEGF错义寡核苷酸(MSODN)组,每组8只,接种肿瘤细胞24h内分别给予生理盐水、VEGF-ASODN、VEGF-MSODN皮下注射,隔日一次,共15次。检测皮下移植瘤的变化和肺转移率,并用免疫组织化学的方法检测肿瘤组织微血管密度(MVD),及用Western blot的方法检测肿瘤组织VEGF蛋白表达。结果ASODN组和MSODN组的抑瘤率分别为47.34%和7.28%,具有显著差异(P<0.01);ASODN组肺转移率为37.5%,低于MSODN组(75.0%)和对照组(87.5%);ASODN组MVD为12.29±2.06,低于MSODN组(17.38±3.24)和对照组(20.14±3.90)(P<0.05);且ASODN组VEGF蛋白表达亦明显减弱。结论VEGF-ASODN可抑制小鼠Lewis肺癌的生长和转移,为肺癌的治疗提供新的方法。     

存活素与血管内皮生长因子反义寡核苷酸对人甲状腺髓样癌裸鼠模型的作用

目的探讨存活素与血管内皮生长因子（VEGF）反义寡核苷酸（ASODN）对人甲状腺髓样癌（MTC）裸鼠模型的作用。方法构建的28只人甲状腺髓样癌裸鼠模型，随机分配到对照组和治疗组。对照组包括未处理组，正义寡核苷酸（SODN）组（VEGF SODN组和存活素SODN组）和SODN联合组；治疗组包括ASODN组（VEGF ASODN组和存活素ASODN组）和ASODN联合组。各组每日一次瘤内注射相应处理液，连续7d。治疗结束后l周末，杀死全部瘤鼠，切取瘤体，测算瘤重和抑瘤率以评价肿瘤生长情况，瘤组织石腊切片分别行HE、免疫组化和DNA末端原位标记法（TUNEL法）染色以评价组织病理构造、VEGF与存活素蛋白表达和细胞凋亡的变化。结果HE染色显示，治疗组血管生成明显降低。此外，相对于对照组，治疗组具有显著的VEGF和存活素低表达、高凋亡、低瘤重和高抑瘤率特点（均P〈0．01），并且ASODN联合组较ASODN组更为显著（均P〈0．05），而对照组间和SODN组间未见上述各特点的统计学差异。结论在裸鼠MTC模型，人甲状腺髓样癌存活素和VEGF的单或双靶向基因沉默治疗能够达到明显抑瘤效果。并且联合治疗更为突出。这为发展甲状腺髓样癌的基因治疗提供了实验依据。     

VEGF反义寡核苷酸对淋巴瘤新生血管生成的抑制作用

目的研究硫代磷酸化修饰的血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸(ASODN)对裸鼠淋巴瘤血管生成的作用。方法将终浓度为20μmol/L的VEGFASODN、错义序列及PBS分别与人淋巴瘤细胞系Namal-wa细胞孵育24h,裸鼠随机分为VEGFASODN组、错义序列组和对照组,将上述处理的Namalwa细胞(5×106溶于PBS液20μl)接种于裸鼠皮下,4周后处死全部裸鼠,测定肿瘤大小,标本采用链酶菌抗生素蛋白-过氧化酶免疫组化法(SP法)检测肿瘤组织微血管密度(MVD)。结果第28天VEGFASODN组、错义序列组和PBS组肿瘤体积的大小分别为(212.6±196.5)、(468.2±161.3)和(473.1±166.7)mm3。VEGFASODN组微血管密度(12.26±0.78)较对照组(24.13±1.21)显著减少。结论VEGFASODN对裸鼠淋巴瘤的生长及其新生血管的生成有明显的抑制作用。     

反义寡核苷酸抑制Namalwa细胞血管内皮生长因子表达

研究表明非霍奇金淋巴瘤(NHL)累及骨髓的患者，其血管内皮生长因子(VEGF)与淋巴瘤的恶性度相关，亦与淋巴瘤从低度恶性向高度恶性的转换相关。另有研究认为：靶向于VEGF信号转导的抑制剂治疗外套细胞淋巴瘤可能具有一定作用。我们采用VEGF反义寡核苷酸(ASODN)和错义序列(SCODN)作用于高表达VEGF的Namalwa细胞，观察VEGF ASODN对该细胞VEGF表达的影响。     

血小板源生长因子β受体反义寡核苷酸对血小板源生长因子诱导大鼠血管平滑肌细胞迁移的影响

为研究血小板源生长因子β受体反义寡核苷酸对血小板源生长因子诱导的大鼠血管平滑肌细胞迁移的影响和作用机制,利用激光共聚集显微镜观察平滑肌细胞对异硫氰酸荧光素标记的反义寡核苷酸的摄取和细胞内定位,改良Boden's小室法观察平滑肌细胞迁移。结果发现,加入反义寡核苷酸培养24h及48h后荧光分别位于细胞浆内和细胞核内,5umol/L以上浓度反义寡核苷酸作用36h后,被血小板源生长因子诱导迁移通过Boyden's小室碳纤维素膜的细胞数量小于空白对照组;正义,错义寡核苷酸和5umol/L以下浓度反义寡核苷酸迁移抑制不明显,提示血小板源生长因子β受体反义寡核苷酸在细胞核内呈时间和浓度依赖性抑制血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞迁移。     

环氧化酶2、血管内皮生长因子C/血管内皮生长因子受体3与肺癌淋巴转移

淋巴转移是肺癌转移途径之一.在肺癌淋巴转移过程中,血管内皮生长因子及其受体家族发挥了重要的作用.尤其是淋巴内皮特异性受体血管内皮生长因子受体3及其配体血管内皮生长因子C对促进淋巴管生长具有关键的作用.同时近年研究表明环氧化酶2与肺癌淋巴转移呈正相关.环氧化酶2、血管内皮生长因子C/血管内皮生长因子受体3有望成为肺癌淋巴管转移靶向治疗的新靶点.     

血管内皮生长因子和肺癌

肿瘤血管生成在肺癌的生长和转移中发挥着重要的作用,众多肿瘤血管生成因子和抑制因子参与了肿瘤血管生成的调控,其中,血管内皮生长因子(VEGF)是己知最重要的血管内皮细胞有丝分裂素.本文就肺癌血管生成中血管内皮生长因子的作用机制、诱导因素及其抗血管生成治疗作一简要综述.     

血管内皮生长因子C与肺癌关系的研究进展

包括肺癌在内的恶性肿瘤是严重危害人民健康的疾病。近年，血管内皮生长因子（VEGF）家族与肿瘤关系的研究成为热点。血管内皮生长因子C（VEGF—C）是VEGF家族的新成员，作为第一个被发现的促淋巴管生成因子，由于其强大、特异的促淋巴管生成作用，在与肿瘤、特别是肿瘤淋巴转移的相关研究中备受关注。现就近年VEGF—C与肺癌关系的研究进展作一综述。     

HIF-1α反义寡核苷酸体外对缺氧时视网膜血管内皮细胞HIF-1α和VEGF表达的影响

目的探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）反义寡核苷酸（ASODN）治疗视网膜新生血管性疾病的可行性及机制。方法将体外培养的牛眼视网膜微血管内皮细胞（BREC）分为转染组和未转染组,转染组体外转染HIF-1α ASODN（根据GenBank提供的HIF-1αcDNA序列设计）,两组均予125μmol/L的CoCl2行缺氧处理。采用免疫荧光法检测细胞HIF-1α的表达;ELISA法检测细胞培养上清液中VEGF蛋白水平。结果脂质体介导的HIF-1α ASODN可成功转染BREC细胞。未转染组缺氧开始时HIF-1α有极低表达,缺氧1h时表达量显著升高,4h达到高峰,16h后下降。而转染组HIF-1α的表达始终在极低水平,两组间有显著性差异（P〈0.01）。转染组从缺氧1h开始VEGF表达明显低于未转染组（P〈0.01）。结论脂质体介导的HIF-1α ASODN能有效抑制BREC细胞HIF-1α的表达,从而降低细胞VEGF的表达。     

PDGFR-β反义寡核苷酸防治血管再狭窄的作用机制

目的 :观察血小板衍化生长因子 -β受体 （PDGFR-β）反义寡核苷酸 （AODN）对血管平滑肌细胞 （VSMC）的增殖、迁移、凋亡和细胞周期的影响以及 AODN的摄取和细胞内定位 ,以期从细胞和分子水平上探讨其防治血管再狭窄的作用机制。方法 :建立大鼠胸主动脉 VSMC体外增殖模型 ,实验选用 5～ 10代 VSMC并将之分为 4组 :空白组、反义组、正义组及错义组。改良的 Boyden’s小室观察细胞迁移 ;MTT比色法测定细胞增殖活力 ;TUNEL及流式细胞仪观察细胞凋亡及周期 ;激光共聚焦显微镜观察 FITC标记 AODN摄取及细胞内定位。结果 :1反义组对VSMC的增殖和迁移抑制作用均高于空白、正义及错义组 （P<0 .0 5 ） ;2 AODN干预后 48h,TUNEL染色呈阳性结果 ,且凋亡率为 30 .8%,而空白组仅为 10 .3%,两组间有显著性差异 （P0 .0 5 ） ;3反义组细胞 G1 期数量明显增多 ;4加药后 2 4h AODN位于胞浆内 ,48h位于胞核内。结论 :PDGFR-β反义寡核苷酸可抑制体外 VSMC增殖和迁移 ,使 VSMC停留于 G1 期 ,并促进细胞凋亡 ,初步阐明了 PDGFR-β反义寡核苷酸防治血管再狭窄的作用机制。     

反义EGFR寡核苷酸对AngⅡ促血管平滑肌细胞增殖效应的影响

目的探讨脂质体介导的反义表皮生长因子受体（EGFR）寡核苷酸基因转染对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）促大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响。方法用EGFR寡核苷酸脂质体复合物转染Sprague-Dawley大鼠VSMC,通过RT-PCR、Western-Bloting分别检测转染后EGFR mRNA及蛋白的表达情况,用3H-Tdr掺入法检测经EGFR寡核苷酸转染再用AngⅡ刺激VSMC的增殖情况。结果反义EGFR寡核苷酸转染大鼠VSMC后,EGFR mRNA及蛋白的表达较正义组及对照组显著减少（P<0.01）;用AngⅡ刺激后,反义组细胞的3H-Tdr掺入较正义组及对照组显著降低（P<0.01）。结论脂质体介导的反义EGFR寡核苷酸转染可以减弱AngⅡ的促VSMC增殖效应。     

放射性PDGFR-β反义寡核苷酸对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究32P标记血小板衍化生长因子β受体（PDGFR-β）的反义寡核苷酸（AON）对血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响,为抑制血管术后再狭窄的形成提供可能的干预。方法体外进行大鼠VSMC的培养,以510代细胞为实验对象,人工合成PDGFR-βAON,并进行32P标记,按实验目的分组。MTT法分析细胞增殖活力,以流式细胞仪测定细胞周期,用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡。结果32P标记PDGFR-βAON作用后,VSMC的增殖强度明显弱于空白对照组（P<0.01）,而处于DNA合成前期（G0/G1）细胞百分比高于空白对照组（P<0.01）;32P标记AON组细胞凋亡率明显高于空白组（P<0.01）。结论32P-PDGFR-βAON可以诱导VSMC凋亡,抑制其增殖。     

VEGF反义寡核苷酸抑制人膀胱癌细胞VEGF表达的作用和效果

目的　观察 VEGF反义寡核苷酸对膀胱癌细胞 VEGF表达的抑制情况。方法　采用免疫组化法观察反义寡核苷酸对膀胱癌细胞VEGF表达的影响 ,并观察条件培养液对内皮细胞生长的抑制作用。结果　 VEGF反义寡核苷酸对膀胱癌细胞的 VEGF表达有明显的抑制作用。结论　 VEGF反义寡核苷酸能够抑制膀胱癌细胞的 VEGF表达 ,故对临床膀胱癌抗血管生成的治疗极具潜力和应用前景。