RIP1介导的坏死性凋亡通过NF-κB通路调节肾小管上皮细胞炎症反应

目的:探讨受体相互作用蛋白1(RIP1)介导的坏死性凋亡对肾小管上皮细胞炎症的影响及其机制。方法:体外培养人肾小管上皮HK-2细胞,应用肿瘤坏死因子α(TNF-α)联合Z-VAD-FMK刺激24 h。乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性实验检测细胞坏死百分比,Western blot检测观察RIP1、IKK-α和NF-κB p65的表达,Western blot和ELISA测定白细胞介素1β(IL-1β)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的水平,real-time PCR检测NF-κB p65的mRNA表达水平。进一步应用RIP1抑制剂necrostatin-1(Nec-1)和NF-κB特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸铵(PDTC)进行干预,检测上述指标。结果:与对照组比较,TNF-α联合Z-VAD-FMK刺激组(T/Z组)的HK-2细胞中cleaved RIP1蛋白水平明显升高,IKK-α和NF-κB p65的蛋白水平明显增高,LDH释放明显增多(P<0. 01)。Western blot和ELISA检测炎症相关指标IL-1β和MCP-1的水平均有明显升高,real-time PCR检...     

氧化型低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞凋亡及Fas抗原表达

目的:探讨氧化型低密度脂蛋白(OX-LDL)对血管内皮细胞凋亡的影响及其可能的调控机制。方法:以0.1 μg/L和0.3 μg/L的OX-LDL作用培养的人脐静脉血管内皮细胞(EC)4 h,采用流式细胞仪碘化丙啶染色法检测细胞凋亡;提取细胞DNA,采用琼脂糖凝胶电泳,观察凋亡细胞DNA梯形带;提取细胞RNA,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测Fas抗原基因表达。结果:OX-LDL处理能诱导EC凋亡,并存在一定的剂量效应关系,DNA电泳亦显示高剂量OX-LDL处理能产生的DNA片断比低剂量时更明显,而对照组无明显DNA梯形带出现。基础状态下FEC表达Fas抗原基因甚微,OX-LDL处理诱导其表达,并存在剂量依赖关系。结论:OX-LDL诱导EC凋亡,Fas抗原基因表达上调可能是调控机制之一。     

氧化低密度脂蛋白受体在人血管内皮细胞上的表达及其调控

采用放射配基结合及竞争抑制实验和反转录 聚合酶链反应检测人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)上血凝素样的氧化低密度脂蛋白受体 (LOX1)的表达 ,表明HUVECs存在LOX1的基因表达和高亲和力位点Bmax (5 4 5±2 0 3)ng/ 10 6cell,Kd (2 0 1± 0 6 )× 10 -8mol/L ,氧化低密度脂蛋白对其自身受体LOX1的基因表达为正反馈调节 ,应用LOX1抑制剂可抑制此作用。     

氧化低密度脂蛋白对人血管内皮细胞ECV-304促增殖及诱导凋亡的作用

目的:探讨氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对血管内皮细胞损伤作用的多样性。方法: 通过细胞形态学、台盼蓝活细胞计数、细胞毒四唑盐(MTT)比色试验、乳酸脱氢酶(LDH)、流式细胞凋亡和细胞凋亡小分子量DNA片段凝胶电泳测定法, 观察(0.1、1、10、100、150和200)mg/L的ox-LDL的条件培养液对人血管脐静脉内皮细胞ECV-304的影响。结果:(0.1-10)mg/L的ox-LDL对ECV-304细胞具有促增殖作用, 而增加浓度达100mg/L及以上时, 其表现则主要是对ECV-304的细胞毒性;而且, 这种细胞毒性以当ox-LDL的浓度达到150和200mg/L时, 在12h开始诱导ECV-304细胞出现凋亡, 分别达15.86%和21.89%。而当ox-LDL作用ECV-304细胞18h后, 则出现伴随凋亡的细胞坏死。结论:ox-LDL具有很强的细胞毒性, 其对内皮细胞的细胞毒性经历了促细胞增殖、凋亡前期、细胞凋亡和凋亡后的坏死等过程。     

下调牛磺酸调节基因1减轻氧化低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞氧化损伤

目的研究牛磺酸调节基因1(TUG1)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化损伤的影响。方法将HUVECs分为:对照组、ox-LDL组(含有100 g/mL的ox-LDL细胞培养液)、si-NC+干预组(转染siRNA阴性对照)和si-TUG1+干预组(转染TUG1 siRNA)。实时定量PCR检测HUVECs中TUG1表达;DCFH-DA法检测细胞活性氧(ROS)水平;WST法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性;TBA比色法检测培养液中丙二醛(MDA)含量;LD-P法检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;硝酸还原酶法检测培养液中一氧化氮(NO)含量;流式细胞计量术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中c-caspase-3蛋白水平。结果 ox-LDL组HUVECs中TUG1表达水平较对照组升高(P0.05)。TUG1 siRNA转染可下调TUG1的表达(P0.05)。ox-LDL组HUVECs中的ROS水平升高(P0.05),SOD活性降低(P0.05),培养液中MDA含量升高(P0.05),LDH活性升高(P0.05),NO含量降低(P0.05),细胞凋亡率升高(P0.05),细胞中c-caspase-3蛋白水平升高(P0.05)。si-TUG1+干预组显著减轻ox-LDL组的上述变化(P0.05)。结论下调TUG1减轻ox-LDL诱导的HUVECs氧化损伤,减少HUVECs凋亡。     

双重特异性磷酸酶5介导地塞米松对血管内皮细胞炎症反应的抑制作用

<正>目的:探讨双重特异性磷酸酶5(dual specificity phosphatase 5,DUSP5)在糖皮质激素抑制血管内皮细胞炎症反应中的作用。方法:体外培养人血管内皮细胞,观察糖皮质激素受体激动剂地塞米松对内皮细胞DUSP5表达的影响;运用siRNA技术降低内皮细胞中DUSP5的表达,观察肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)刺激引起的炎性因子和黏附分子表     

血管紧张素-(1-7)通过抑制GSK-3β通路对抗高糖引起的血管内皮细胞凋亡及炎症

目的探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]能否通过抑制糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)通路对抗高糖引起的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡及炎症。方法应用高糖(HG,40 mmol/L葡萄糖)处理HUVECs 24 h建立HG损伤细胞模型。应用CCK-8法测定细胞存活率;Western blot法检测蛋白的表达水平;ELISA法检测白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果应用HG处理HUVECs 24 h能引起细胞存活率降低,cleaved caspase-3表达水平和炎症因子(包括IL-1β和TNF-α)分泌水平升高及激活GSK-3β;20μmol/L Ang-(1-7)与HG共处理HUVECs 24 h能抑制HG引起的细胞毒性、cleaved caspase-3表达和炎症因子分泌增多及GSK-3β激活。Mas受体[为Ang-(1-7)受体]抑制剂A-779能减弱上述的Ang-(1-7)的抗细胞凋亡、抗炎症及对GSK-3β的抑制作用;GSK-3β抑制剂能减轻HG引起的HUVECs凋亡及炎症因子分泌增多。结论 Ang-(1-7)/Mas受体轴可通过抑制GSK-3β通路保护HUVECs对抗HG引起的细胞凋亡及炎症反应。     

氧化低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞凋亡的泡沫化

目的 :动脉粥样硬化 (ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ,Ａｓ)发生的细胞学基础是内皮细胞的受损以及血液单核 -巨噬细胞、血管平滑肌细胞 (ｖａｓｃｕｌａｒｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｌｓ,ＶＳＭＣ)的迁移和增殖。增生的ＶＳＭＣ和巨噬细胞 ,表面受体的表达发生改变 ,清道夫受体吞噬化学修饰的低密度脂蛋白 (例如 ,氧化低密度脂蛋白 ) ,因其缺乏下行调节机制 ,致使胆固醇酯在细胞内大量积聚 ,从而转化为泡沫细胞 ,是Ａｓ斑块的主要成分。细胞凋亡的异常是许多疾病的原因之一 ,Ａｓ的发生直接与凋亡有关 ,Ｈａｎ等观查了 35例直接取自…     

血管紧张素1-7通过Mas受体减轻血管紧张素Ⅱ所致人肾小球内皮细胞损伤

目的:研究血管紧张素1-7(Ang1-7)对血管紧张素II(Ang II)所致人肾小球内皮细胞(HGECs)损伤的作用及可能机制。方法:体外培养HGECs,随机分为6组:对照组,Ang Ⅱ组,Ang1-7组,Ang II+Ang1-7组,Ang Ⅱ+Ang1-7+Mas受体阻断剂(A779)组及A779组,分别给予相应处理后,采用流式细胞术检测细胞凋亡率和活性氧簇(ROS)含量,荧光显微镜观察ROS的变化;同时检测HGECs培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β),单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的含量。结果:与对照组比较,Ang II组的细胞凋亡率及ROS平均荧光强度增加(P0.05),上清液中IL-6、TNF-α、TGF-β、MCP-1及ICAM-1的含量增加(P0.05);与Ang Ⅱ组比较,Ang Ⅱ+Ang1-7组的细胞凋亡率及ROS水平降低,上清液中上述炎症因子含量减少(P0.05);与Ang Ⅱ+Ang1-7组比较,A779的加入增加了细胞凋亡率、ROS生成和上清液中炎症因子的含量(P0.05);与Ang Ⅱ组比较,加入Ang1-7可呈剂量依赖性抑制LDH漏出和ET-1分泌、并促进NO的释放(P0.05)。结论:Ang1-7可能通过抑制Mas受体减轻Ang II所致HGECs的损伤。     

蜂胶醇提物通过抑制C/EBP同源蛋白表达减轻氧化低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞凋亡

目的:研究蜂胶醇提物(ethanol extract of propolis,EEP)对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的血管内皮细胞凋亡的抑制作用,并探讨可能的分子机制。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),给予EEP(7.5、15和30 mg/L)、4-苯丁酸(4-phenylbutyric acid,PBA;4 mmol/L)预处理1 h,再加入ox-LDL(100 mg/L)或衣霉素(tunicamycin,TM;4 mg/L)继续培养24 h。分别采用MTT法和Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞活力和凋亡情况;试剂盒测定培养液乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)和细胞内caspase-3活性。分别采用Western blot和real-time PCR技术检测内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)凋亡途径关键蛋白C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)和Bcl-2的表达变化。结果:与ERS抑制剂PBA相似,EEP呈剂量依赖性地减轻ox-LDL所诱导的HUVECs损伤,表现为细胞活力增加(P0.01或P0.05),LDH漏出、凋亡率和caspase-3活性降低(P0.05或P0.01),且可抑制ERS诱导剂TM所致的HUVECs活力下降(P0.05),以及LDH漏出、细胞凋亡率和caspase-3活性增加(P0.05或P0.01);与PBA相似,EEP可抑制ox-LDL所诱导的CHOP上调和Bcl-2下调(P0.05或P0.01);另外,与TM组比较,EEP预处理组CHOP蛋白和mRNA表达上调也受到明显抑制(P0.05或P0.01)。结论:EEP可减轻oxLDL所诱导的HUVECs凋亡,其机制可能与抑制CHOP介导的ERS凋亡途径有关。     

不同剪切力对内皮细胞表面凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1表达的影响

目的 研究不同剪切力对内皮细胞表面凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)表达的影响.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,将其种植于载玻片上,放入流室系统分别施加以不同的剪切力.按施加剪切力的不同分为实验组和对照组:实验组分为低剪切力组(4.2 dyne/cm2,n=5)、中等剪切力组(8.4 dyne/cm2,n=5)和高剪切力组(15.0 dyne/cm2,n=5);对照组(n=5)静态条件下培养,不施加剪切力.剪切力加载1、2、4、8 h后RT-PCR测定各组内皮细胞LOX-1 mRNA的表达.结果 低剪切力(4.2 dyne/cm2)作用下,内皮细胞LOX-1表达随时间延长而增加.与对照组比较,中等剪切力(8.4dyne/cm2)作用2、4、8 h内皮细胞LOX-1的表达水平均降低[2 h:0.2346±0.0397比0.2948±0.0128,4 h:0.1747±0.0585比0.2985±0.0204,8 h:0.0256±0.0067比0.2968±0.0175,均P＜0.05].高剪切力(15.0dyne/cm2)作用下,血管内皮细胞LOX-1表达一直维持在极低水平.结论 不同剪切力可以影响内皮细胞的LOX-1表达水平.     

内质网应激介导细胞凋亡及免疫炎症反应的研究进展

内质网是一种细胞器,可以使新合成的蛋白质通过甲基化、羟基化、脂化或形成二硫键正确折叠。内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)是由内腔中未折叠蛋白的积累引起的细胞应激反应。为应对ERS,细胞建立了一种进化保守的机制,称为未折叠蛋白反应(unfolded protein respon...     

免疫细胞介导炎症反应对糖尿病大鼠动脉内皮细胞凋亡的影响机制研究北大核心CSCD

目的:探究T辅助细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)介导炎症反应对糖尿病(DM)大鼠动脉内皮细胞凋亡影响机制。方法:腹腔注射链脲佐菌素建立大鼠DM模型,将DM大鼠分为DM组和治疗组(n=12),另取12只健康大鼠作为对照组。比较各组大鼠的血糖、主动脉损伤情况、血清IL-6、TNF-α和动脉内皮细胞中凋亡标志蛋白Caspase3和Bcl-2水平。并通过流式细胞术检测外周血中Th17/Treg水平。结果:建模后大鼠血糖均高于16.7 mmol/L,干预后治疗组的空腹血糖水平显著低于DM组(P<0.05)。DM组的主动脉血管壁厚度(54.47±2.61)μm、血清IL-6(19.24±2.21)pg/mg和TNF-α(39.46±3.56)pg/mg水平、动脉内皮细胞中Caspase3 mRNA和Bcl-2 mRNA和蛋白表达量、Th17水平(2.72±0.38)%和Th17/Treg比例(1.23±0.19)显著高于对照组,Treg水平(2.21±0.38)%显著低于对照组(P<0.05)。治疗组动脉壁厚度(46.82±2.72)μm、IL-6(13.86±1.87 pg/mg、TNF-α(22.35±3.04)pg/mg、Caspase3 mRNA和Bcl-2 mRNA和蛋白表达量、Th17水平(1.50±0.20)%和Th17/Treg比例(0.46±0.07)显著低于DM组,Treg(3.26±0.52)%水平显著高于DM组(P<0.05)。结论:Th17/Treg免疫细胞介导炎症反应可能参与了DM引起的动脉内皮细胞凋亡。     

坏死性凋亡介导高糖引起的人脐静脉内皮细胞损伤

目的:研究坏死性凋亡是否介导高糖(HG)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤。方法:CCK-8法检测细胞存活率;Western blot法测定受体相互作用蛋白3(RIP3)、cleaved caspase-3的蛋白水平;罗丹明123染色荧光显微镜照相法检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP);双氯荧光素(DCFH-DA)染色荧光显微镜照相法测定胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)的水平。结果:应用不同浓度葡萄糖(10、20和40 mmol/L)处理HUVECs 24 h,RIP3的蛋白水平随葡萄糖剂量增加而升高,40 mmol/L时达高峰;应用40 mmol/L葡萄糖处理HUVECs 3 h、6 h、9 h、12 h和24 h能上调RIP3的蛋白水平,于9 h达最高峰;应用20μmol/L凋亡蛋白酶抑制剂Z-VAD-FMK预处理HUVECs 30 min促进RIP3表达;应用100μmol/L坏死性凋亡抑制剂necrostatin-1预处理HUVECs 1 h能抑制HG诱导HUVECs的细胞存活率降低,ROS过度生成及MMP丢失,但能升高cleaved caspase-3的蛋白水平。结论:坏死性凋亡介导高糖引起的人脐静脉内皮细胞损伤,但与内皮细胞凋亡存在负相关。     

血管紧张素II对巨噬细胞(THP-1细胞)凝集素样氧化低密度脂蛋白受体表达的影响

目的:研究AngII对人单核/巨噬细胞(THP-1细胞)凝集素样氧化低密度脂蛋白受体(LOX-1)蛋白表达和基因转录的影响,从细胞蛋白、分子水平探讨AngII和巨噬细胞LOX-1相互之间的关系,以进一步了解两者在动脉粥样硬化中的地位。方法:将不同浓度AngII(1×10^-9-1×10^-5mol/L)与经0.1μmol/L佛波酯(PMA)诱导分化后的THP-1细胞共孵育24h,以及将1×10^-6mol/L浓度的AngII与诱导分化后的THP-1细胞作用不同时间0、3、6、12、24、48h后,用细胞酶联免疫法和半定量RT-PCR分别检测LOX-1蛋白和mRNA表达的情况。结果:未经诱导的THP-1细胞不表达LOX-1mRNA;而经PMA诱导后,THP-1细胞停止增殖,由单核细胞分化成为巨噬细胞,并表达LOX-1mRNA。不同浓度的AngII作用诱导分化后的THP-1细胞24h,细胞LOX-1蛋白和mRNA的表达呈浓度依赖性显著增加。同一浓度的AngII作用THP-1细胞,可呈时间依赖性诱导LOX-1蛋白和mRNA表达,其趋势是3h左右开始增加,24h左右至最高峰,之后逐渐减低。结论:经PMA诱导分化后的THP-1细胞表达LOX-1;AngII能明显增强分化后的THP-1细胞表达LOX-1蛋白和mRNA,并呈浓度和时间依赖性。AngII这种作用可能是促进动脉粥样硬化发生、发展的机制之一。     

硫化氢通过下调NLRP3/caspase-1信号通路抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞焦亡

目的:探讨缓释型硫化氢(H2S)供体GYY4137对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的血管内皮细胞焦亡的抑制作用及其分子机制。方法:以人脐静脉内皮细胞(HUVECs)为研究对象,将其分为空白对照组、GYY4137干预组、oxLDL刺激组和oxLDL+GYY4137干预组。各组HUVECs经不同药物干预指定时间后,采用CCK-8法检测各组细胞活力;使用乳酸脱氢酶(LDH)释放测定和Hoechst 33342/碘化丙啶(PI)双荧光标记检测各组细胞死亡情况;采用亚甲基蓝比色法检测各组细胞中的H2S含量;采用Western blot实验观察各组细胞中细胞焦亡信号通路标志蛋白的表达。结果:oxLDL(50和100 mg/L)可使HUVECs活力显著降低(P0.05或P0.01),LDH释放及PI阳性细胞比例显著增加(P0.05或P0.01),且细胞中NLRP3、caspase-1(p20亚单位)、gasdermin D(GSDMD)、GSDMD-N及白细胞介素18(IL-18)蛋白水平显著升高(P0.05或P0.01),即HUVECs发生焦亡。而GYY4137干预则可降低HUVECs中NLRP3、caspase-1(p20)、GSDMD、GSDMD-N及IL-18蛋白水平(P0.05),抑制oxLDL诱导的细胞焦亡(P0.05),并使细胞活力增强(P0.05)。结论:H2S供体GYY4137可通过下调NLRP3/caspase-1细胞焦亡信号通路而抑制oxLDL诱导的血管内皮细胞焦亡。     

Toll样受体4介导的自噬减轻糖基化高密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞凋亡

目的:探讨自噬对糖基化高密度脂蛋白(glycosylated high-density lipoprotein,gly-HDL)所致的血管内皮细胞凋亡的影响及其分子机制。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),分别与100 mg/L HDL和不同浓度(25、50和100 mg/L)gly-HDL共同孵育24 h;另再培养HUVECs给予1μmol/L自噬诱导剂雷帕霉素或2 mmol/L自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)预处理1 h,或5 mg/L抗Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)单克隆中和抗体预处理30 min,再与gly-HDL(100 mg/L)共同孵育24 h。采用MTT法检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况,试剂盒测定培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,采用Western blot技术检测自噬标志分子beclin-1和微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(microtubule-associated protein 1 light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)、内质网应激凋亡途径关键分子caspase-12及TLR4的表达变化,采用激光共聚焦显微镜观测细胞内LC3的变化。结果:经gly-HDL处理的HUVECs活力下降,LDH漏出和细胞凋亡显著增加(P<0.01),且caspase-12被激活(P<0.05);雷帕霉素预处理HUVECs后,gly-HDL对细胞的损伤作用和对caspase-12的活化作用减弱(P<0.05);而3-MA预处理HUVECs后,gly-HDL对细胞的损伤作用和对caspase-12的活化作用则进一步加强(P<0.05)。gly-HDL显著上调TLR4的表达,并触发自噬反应,表现为beclin-1和LC3-Ⅱ表达上调及LC3显著颗粒化,且呈浓度依赖性(P<0.05);而抗TLR4单克隆中和抗体预处理可显著抑制gly-HDL所诱导的beclin-1上调和LC3颗粒化(P<0.01)。结论:TLR4介导gly-HDL对HUVECs自噬的诱导作用,而一定程度的自噬可通过抑制caspase-12活化减轻gly-HDL所诱导的HUVECs凋亡。     

氧化低密度脂蛋白通过CD36介导的氧化应激诱导巨噬细胞自噬

目的:研究氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)对巨噬细胞自噬的诱导作用,并探讨可能的分子机制。方法:体外培养RAW264.7巨噬细胞,给予抗CD36单克隆抗体(2 mg/L)、二亚苯基碘鎓(diphenyleneiodonium,DPI;5μmol/L)、3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA;3 mmol/L)或雷帕霉素(1μmol/L)预处理1 h,再加入ox-LDL(100 mg/L)继续培养12 h。采用MTT法检测细胞活力,采用相应试剂盒测定培养液乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)、细胞内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性以及活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平,以评价细胞膜完整性和氧化应激反应。采用免疫印迹技术检测自噬标志分子beclin-1和微管相关蛋白1轻链3-II(microtubule-associated protein 1 light chain 3-II,LC3-II)表达变化。结果:ox-LDL诱导巨噬细胞自噬反应,表现为beclin-1和LC3-II上调;与自噬抑制剂3-MA相似,抗CD36单抗可显著抑制ox-LDL所诱导的LC3-II和beclin-1表达。抗CD36单抗明显抑制ox-LDL所诱导的氧化应激,包括抑制NADPH氧化酶活性和ROS、MDA水平以及升高SOD活性,其作用与NADPH氧化酶抑制剂DPI相似。另外,DPI显著抑制ox-LDL所诱导的beclin-1和LC3-II表达,且ox-LDL所诱导的细胞活力降低和LDH漏出可被3-MA促进并可被自噬诱导剂雷帕霉素拮抗。结论:ox-LDL可诱导巨噬细胞自噬,其机制可能与CD36介导ox-LDL摄取进而触发的氧化应激有关,且一定程度的自噬可减轻ox-LDL所诱导的巨噬细胞损伤。