姜黄素减轻小鼠深部组织压力性损伤

目的评价姜黄素(Cur)对缺血-再灌注所致小鼠深部组织压力性损伤(DTPI)创面愈合的影响。方法将小鼠随机分为对照组(Con)、模型组(Mod)、姜黄素4和8 mg/kg干预组(Cur 4,Cur 8),每组10只。磁铁压迫法构建深部组织损伤模型,每隔48 h于创面注射姜黄素,拍照观察伤口愈合情况。HE染色观察伤口愈合病理改变,realtime PCR检测肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)、血管内皮生长因子(VEGF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)的mRNA表达;Western blot检测VEGF-α、TGF-β、Stat3、p-Stat3蛋白的表达。结果与对照组相比,模型组伤口逐渐恶化,病理学改变明显。与模型组相比,Cur 8组伤口愈合明显加快(P<0.05);Cur 8组炎性细胞浸润减少,新生血管密度增多。Cur 8组TNF-α、IL-6的mRNA表达量均低于模型组,IL-10、VEGF-α和TGF-β表达量均高于模型组(P<0.05);Cur 8组VEGF-α、TGF-β、p-Stat3蛋白表达水平均高于模型组(P<0.05)。结论姜黄素可减轻小鼠缺血-再灌注所致的DTPI,其机制可能与抑制炎性反应及促进血管再生有关。     

苏拉明通过抑制纤维增生和炎症反应减轻小鼠的瘢痕增生

目的:探讨苏拉明对增生性瘢痕(HPS)的治疗作用及其机制。方法:使用机械牵拉的方法制造小鼠HPS模型后,分别在瘢痕部位涂抹低剂量(5 mg/kg)和高剂量(10 mg/kg)苏拉明溶液,每天1次,持续10 d。宏观观察瘢痕增生的程度;苏木精-伊红(HE)染色评价HPS组织中瘢痕横截面积与瘢痕抬高指数;然后通过免疫组化法检测HPS组织中转化生长因子β1(TGF-β1)和白细胞介素6(IL-6)的表达水平;免疫荧光、RT-qPCR和Wes-tern blot法分别检测HPS组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平; ELISA检测HPS组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6、IL-10和TGF-β1的含量。结果:大体观察可见,低、高剂量苏拉明治疗后HPS小鼠瘢痕表面积均显著减少(P0.01);HE染色下可见低、高剂量苏拉明治疗后HPS小鼠瘢痕横截面积和瘢痕抬高指数均显著减少(P0.05或P0.01);免疫荧光染色、RT-qPCR和Western blot结果显示,低、高剂量苏拉明治疗后HPS小鼠瘢痕组织中α-SMA阳性细胞数及α-SMA mRNA表达和蛋白表达均显著降低(P0.05或P0.01);免疫组化结果显示,低、高剂量苏拉明治疗后HPS小鼠瘢痕组织中TGF-β1和IL-6表达均显著降低(P0.01);ELISA结果显示,低、高剂量苏拉明治疗后HPS小鼠瘢痕组织中TNF-α、IL-6、IL-10和TGF-β1水平均显著降低(P0.01)。结论:苏拉明具有抑制HPS形成的作用,这一作用可能与其抑制纤维增生和减轻局部炎症反应有关。     

改良保存液处理红细胞对糖尿病小鼠创面愈合的影响

目的研究改良处理红细胞回输对糖尿病小鼠伤口愈合的影响,并探讨其可能的作用机制。方法建立糖尿病小鼠模型,随机分为献血组和实验组。采集献血组小鼠血液,分别用标准和改良保存液保存,在7、14、21和28 d检测红细胞(RBC)携氧能力及变形能力。在实验组小鼠背部制作伤口愈合模型,并将保存7 d的血液回输给实验组小鼠,再分为标准组及改良组,每组6只,在0、1、4、7和14 d观察小鼠伤口愈合情况,第14天处死小鼠,取创面皮肤组织进行HE、Masson染色,免疫组化方法对伤口组织的纤维化程度进行分析,Western blot检测伤口组织PI3K/AKT、MEK/ERK及其磷酸化蛋白水平。结果与标准组比较,改良组游离血红蛋白(fHb)含量降低,而P50、pH、2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)和红细胞变形性(RCD)升高(P0.05);改良组创面面积显著减小、皮肤组织和血管面积增加、胶原纤维的表达和纤维化程度升高(P0.05)。小鼠伤口组织中HIF-1α、VEGF和EGF浓度水平增加(P0.05)。PI3K/AKT、MEK/ERK表达增加,PI3K/AKT和MEK/ERK磷酸化显著增强(P0.05)。结论改良保存液处理的红细胞可能通过激活HIF-1α信号通路促进糖尿病小鼠的伤口愈合。     

改良VSD方案对烧伤早期创面修复基质金属蛋白及相关细胞因子表达的影响

目的探讨改良负压封闭引流(VSD)方案对烧伤早期创面修复基质金属蛋白和相关细胞因子表达的影响,进一步探讨其对创面修复的影响。方法选取开州区人民医院2018年1月至2019年12月收治的深Ⅱ度烧伤患者80例,按照随机数字表法将其分为对照组和观察组,每组40例。对照组给予常规VSD+生理盐水持续冲洗,观察组给予改良VSD+含rh-bFGF的生理盐水持续冲洗进行治疗。用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定不同阶段深Ⅱ度烧伤创面肉芽组织中MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TGF-β1、VEGF、TNF-α和IL-6的含量变化,比较2组患者创面愈合率、创面愈合时间和住院总时间。结果治疗前,2组患者创面MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TGF-β1、VEGF、TNF-α和IL-6的表达水平比较,差异无统计学意义(P 0.05)。治疗后第3天,2组患者MMP-2、MMP-9表达水平均上升;而第7、14天后,2组患者MMP-2和MMP-9的表达水平逐渐下降,差异存在统计学意义(P 0.05)。在各时间点,观察组MMP-2和MMP-9的表达水平均低于对照组(P 0.05)。治疗后第3、7、14天,2组患者TIMP-1、TGF-β1和VEGF的表达水平均呈上升趋势,观察组在各时间点的表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P 0.05)。治疗后,2组患者TNF-α和IL-6的表达水平均呈下降趋势,且观察组表达水平明显低于对照组(P 0.05)。观察组创面愈合率高于对照组(P 0.05),创面愈合时间、住院总时间短于对照组(P 0.05)。结论对于深Ⅱ度烧伤患者,改良VSD方案能显著影响早期MMPs、TIMP、TGF-β1和VEGF的表达,减少炎症因子TNF-α、IL-6的产生,促进创面愈合,缩短创面愈合时间和患者住院时间。     

选择不同水平阻断TGF-β信号通路的研究进展

转化生长因子TGF-β是创伤愈合过程中，导致瘢痕增生和组织纤维化最至关重要的一个细胞因子。它引起的损伤部位成纤维细胞的异常增殖和胶原纤维的大量合成与沉积，是通过其细胞内特有的信号转导通路，调控相应靶基因的表达来实现的。已有研究表明，阻断TGF-β的信号转导就能有效抑制TGF-β的生物学效应并促进伤口愈合。近些年来，选择在不同水平上阻断或抑制此信号转导通路的实验研究有不少的报道，在此综述如下。[第一段]     

TGF-β3基因转染成纤维细胞促进大鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合的实验研究

目的观察TGF-β3基因转染的成纤维细胞对深Ⅱ度大鼠烫伤模型创面愈合的影响。方法将90只Wistar成年大鼠随机分为模型对照组(C组)、表皮转化生长因子组(EGF组)和TGF-β3转基因成纤维细胞组(TGF-β3组),制作10% TBSA烫伤模型,各组给予对应治疗,检测各组大鼠的创面愈合率,HE染色观察烫伤创面组织变化,SP法观察烫伤皮肤组织中TGF-β3蛋白表达情况。结果烫伤后14d、21d,创面愈合率TGF-β3组最高,与EGF组及C组之间的差异有统计学意义(分别为P0.05,P0.01);烫伤后14d及21d,C组、EGF组与TGF-β3组之间TGF-β1及TGF-β2蛋白表达差异有统计学意义(分别为P0.05,P0.01);烫伤后1d到21d,TGF-β3组与C及EGF组之间的TGF-β3蛋白表达的差异均有统计学意义(P0.01)。结论 TGF-β3转基因转染成纤维细胞可能通过在创面上持续分泌TGF-β3蛋白,降低TGF-β1及TGF-β2的水平,从而促进创面的愈合。     

病理性瘢痕组织中转化生长因子β1的表达及其临床病理学意义

目的 研究病理性瘢痕组织中转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的表达,探讨其在病理性瘢痕组织的形成过程中所起的作用,为瘢痕的治疗提供理论依据.方法 采用免疫组织化学SP法,检测增生性瘢痕组织、瘢痕疙瘩组织及正常皮肤组织各32例中TGF-β1的表达.结果 增生性瘢痕组和瘢痕疙瘩组患者TGF-β1阳性表达率分别为84.4%和90.6%,与正常对照组TGF-β1表达阳性率28.1%比较,差异有显著性(P<0.05).增生性瘢痕组与瘢痕疙瘩组患者TGF-β1阳性表达之间差异无统计学意义(P>0.05).结论 TGF-β1在病理性瘢痕组织的形成过程中起着重要作用.     

Pyrin重组蛋白对支气管哮喘小鼠气道炎症的影响

目的 探讨Pyrin重组蛋白对支气管哮喘小鼠气道炎症的抑制作用及机制的研究.方法 40只雄性清洁级BALB/c小鼠,随机分为4组,每组10只.分别为生理盐水对照组、卵蛋白(OVA)哮喘组、Pyrin重组蛋白治疗3d组和Pyrin重组蛋白治疗7d组.在末次激发24h后所有小鼠取左肺组织行苏木精-伊红(HE)染色,Masson三色染色;用图像分析软件测定支气管壁厚度(WAt/Pbm)、支气管平滑肌厚度(WAm/Pbm)及胶原纤维面积;用酶联免疫吸附法( ELISA)检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中IL-4、IL-5、TNF-α及IFN-γ含量;用RT-PCR检测肺组织中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的mRNA表达;用Western blot方法检测核转录因子(nuclear factor kappa B,NF-kB)的表达.结果 哮喘模型组小鼠BALF中细胞总数、IL-4、IL-5、TNF-α水平增高和IFN-γ水平降低;肺组织支气管管壁厚度、气道平滑肌厚度、胶原纤维面积,CTGF、TGF-β1的转录和表达水平以及NF-kB表达水平均显著高于生理盐水对照组(P＜0.05).Pyrin重组蛋白3d和7d干预组小鼠BALF中细胞总数、IL-4、IL-5、TNF-α水平和肺组织支气管管壁厚度、气道平滑肌厚度、胶原纤维面积、NF-kB表达水平显著降低,与哮喘模型组比较差异均具有统计学意义(P＜0.05),而BALF中IFN-γ水平明显上升,与哮喘模型组比较,差异均具有统计学意义(P＜0.05);Pyrin重组蛋白7d干预组CTGF、TGF-β1的转录和表达水平显著低于哮喘组(P＜0.05).结论 我们推测Pyrin重组蛋白可能部分是通过抑制NF-kB信号途径来阻断TGF-β1和CTGF的过度表达而实现抑制气道炎症,进而抑制气道重构的发生.     

ARA290增强巨噬细胞胞葬功能促进小鼠皮肤创面愈合

目的 探讨促红细胞生成素（erythropoietin, EPO）衍生肽ARA290对小鼠皮肤创面愈合的作用及机制。方法 选用C57BL/6小鼠（SPF级）,在背部皮肤切创造模,分为PBS组,ARA290低剂量组（100μg/kg）和ARA290高剂量组（200μg/kg）,造模后每日创面周缘皮下注射100μl PBS或ARA290。每日创面拍照,记录创面愈合率。RT-PCR检测创面TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10及TGF-β1表达,并用Tunel染色计算创面凋亡细胞数目。体外共培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7(RAW)和凋亡Jurkat细胞,流式细胞术检测巨噬细胞吞噬凋亡细胞的吞噬率;RT-PCR检测巨噬细胞TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10及TGF-β1的表达。结果 ARA290高剂量组创面愈合快于ARA290低剂量组和PBS组,ARA290低剂量组创面愈合快于PBS组;ARA290高剂量组创面TNF-α、IL-6及IL-1β表达低于PBS组,而IL-10和TGF-β1表达高于PBS组,且凋亡细胞数目少于PBS组。ARA290组巨噬细胞吞噬凋亡细胞的吞噬率高...     

负极性驻极体5氟尿嘧啶贴剂抑制兔耳增生性瘢痕的生长

目的 :探讨不同干预手段对兔耳增生性瘢痕的生长影响。方法 :负极性驻极体、5-氟尿嘧啶(5-Fu)以及联合负极性驻极体与5-Fu分别作用于兔耳创面,4周后检测瘢痕增生指数,H-E染色和免疫组织化学显色检测转化生长因子-β(TGF-β)、Ⅰ型和Ⅲ型胶原的平均光密度。结果 :负极性驻极体、负极性驻极体与5-Fu联合均可通过抑制TGF-β的表达抑制Ⅰ型和Ⅲ型胶原的合成;且均可通过影响成纤维细胞的密度、胶原的合成和胶原纤维束的排布,抑制创面形成增生性瘢痕。结论 :负极性驻极体可影响胶原束的排布,且通过抑制TGF-β的表达抑制胶原的合成。驻极体和5-Fu联用作用机制与驻极体类似,但抑制瘢痕形成的效果更佳。     

珠香散对阿霉素攻击大鼠伤口愈合过程中局部细胞因子的调节

目的和方法细胞因子在伤口愈合过程中有重要的影响,本研究主要观察中药珠香散对阿霉素攻击后大鼠皮肤伤口愈合过程中多种细胞因子的影响.实验分为4组,(1)对照组;(2)模型组;(3)模型+珠香散组;(4)模型+bFGF组.除对照组外其它3组于实验前4d尾静脉注射8mg/kg体重阿霉素,在第5d时背部做一直径为1.5cm的全厚皮切口,分别给予生理盐水、珠香散和bFGF.观察各组大鼠伤口愈合时间、伤口抗断裂强度、创面组织学观察、伤口TNFα、PGF2水平和局部TGFβ1mRNA的表达.结果对照组平均愈合时间为(17.18±1.72)d、组织抗断裂强度(TBS)为(8.68±1.56)kg/cm2,阿霉素攻击后愈合时间延长为(19.80±3.19)d、TBS为(6.36±1.36)kg/cm2,与对照组相比分别P＜0.05;珠香散和bFGF治疗后愈合时间则分别为(17.36±2.29)d和(18.60±2.31)d,接近对照组;TBS分别为(8.22±1.82)kg/cm2,和(7.56±1.72)kg/cm2,有较大的提高,珠香散治疗后TBS明显高于模型组,P＜0.05.这些结果证实珠香散可促进伤口的愈合.局部TNFα水平表明创面第3d时模型组TNFα水平明显低于对照组,分别为(9.95±2.16)ng/g和(4.62±1.86)ng/g,P＜0.05;在第7d时,对照组TNFα升高为(11.09±3.87)ng/g,而模型组为(7.17±1.92)ng/g,明显低于对照组,P＜0.05;珠香散治疗后TNFα水平明显升高(11.23±3.23)ng/g,明显高于创面第3d时(5.53±2.50)ng/g和同期模型组的水平,分别P＜0.05.各组创面的PGE2在第3d、7d时无明显差异.伤口TGFβ1mRNA表达结果显示珠香散治疗后3dTGFβ1mRNA表达为(++),高于模型组(+),在创面第7d成纤维细胞表达增强至(+++);bFGF组在伤口3dTGFβ1表达也明显增加为(++);伤口7d创面表达(+++),持续到伤口第15d,肉芽组织仍有表达至(++).组织学观察显示模型组在伤口的第3d时,创面内嗜中性粒细胞(PMN)数量少,而模型+珠香散组在伤口的第3d创面有大量的嗜中性白细胞,创面细胞数量增多,主要为单核巨噬细胞和成纤维细胞,表皮细胞向伤口区延伸较多;模型+bFGF组在伤口3d创面也有大量的PMN,创面成纤维细胞和单核巨噬细胞数量明显增多.结论提示珠香散可能通过吸引白细胞,激活吞噬细胞释放细胞因子,并通过增加内源性细胞因子的表达,促进伤口细胞增殖和胶原合成,从而加快伤口的愈合.     

基于ILK信号通路探究马桑水提取物影响大鼠烧伤创面愈合和瘢痕增生的机制

目的:基于整合素连接激酶(ILK)调控的转化生长因子β1(TGF-β1)和PI3K/AKT调控的ILK等互通信号通路,探究马桑水提取物(CSME)促进大鼠烧伤创面早期愈合和抑制后期瘢痕过度增生的机制。方法:随机将180只SD雌性大鼠(180~200 g)分成正常对照(NC)组、凡士林(VL)组、磺胺嘧啶银(SS)组及CSME低、中和高剂量(CSME-L、CSME-M和CSME-H)组,每组各30只。大鼠以水合氯醛麻醉,腰背部II°烫伤造模后,每天分别在创面涂擦VL、SS和3种剂量的CSME烧伤软膏,计算创面愈合率(HR),于第7、14和21天随机选取各组动物10只,水合氯醛麻醉,切取创面皮肤,病理学观查,Western blot检测相关蛋白表达,RT-qPCR检测相关mRNA表达,培养成纤维细胞检测其胶原收缩率(SK)。结果:在第7天,CSME各组创面中ILK、纤维连接蛋白(FN)、TGF-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和整合素β1(integrin-β1,ITG-β1)的蛋白与mRNA表达呈现剂量依赖性强于VL和SS组,第21天,弱于VL和SS组(P<0.05);第14天,CSME各组组织中I型胶原蛋白(Col I)的蛋白与mRNA表达呈剂量依赖性强于VL和SS组,第21天则弱于VL和SS组(P<0.05),而III型胶原蛋白(Col III)的蛋白与mRNA表达呈剂量依赖性弱于VL和SS组,第21天则强于VL和SS组(P<0.05);随时间推移,VL和SS组成纤维细胞的SK持续升高,96 h达高峰,而CSME各组在24 h和48 h呈剂量依赖性高于VL和SS组,在96 h呈剂量依赖性低于VL和SS组(P<0.05)。结论:CSME早期促进烧伤创面愈合,后期抑制创面瘢痕过度增生,其机制与其多成分多靶点影响ILK调控的TGF-β1和PI3K/AKT调控的ILK信号通路及ColⅠ与Col III表达比的调控相关。     

MG132抑制TGF-β1诱导的人肺成纤维细胞活化

目的探讨泛素-蛋白酶体抑制剂MG132对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肺成纤维细胞活化的影响及机制。方法体外培养人胚肺成纤维细胞(MRC-5),随机分为对照组、TGF-β1组(10μg/L)和MG132(0.5μmol/L)处理组。Western blot法检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原α1(COL1A1)的表达;RT-PCR和Western blot法分别检测细胞Smad7、核转录共抑制因子SnoN、TGF-βI型受体(TβRI)、Smad2和Smad3 mRNA及蛋白的表达。结果与对照组比较,TGF-β1促进了α-SMA和COL1A1蛋白表达(P0.05),MG132抑制了TGF-β1的上述作用(P0.05)。TGF-β1组Smad7和SnoN mRNA表达较对照组增加(P0.05)。TGF-β1组Smad7和SnoN蛋白表达较对照组减少(P0.05),而MG132组Smad7和SnoN蛋白水平较TGF-β1组增加(P0.05)。结论 MG132可能通过阻止Smad7和SnoN蛋白泛素化降解,抑制TGF-β1诱导人肺成纤维细胞活化。     

姜黄素对SiO_2诱导小鼠矽肺模型TNF-α、TGF-β1表达的影响

目的:研究姜黄素对SiO2所致小鼠矽肺模型血清及肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响.方法:将实验小鼠随机分为5组, 即假手术组、模型组、姜黄素干预组(高、中、低剂量).于姜黄素干预第14天、 42天后分别每组各处死6、 9只, 采用ELISA法测定肺组织和血清中TNF-α、 TGF-β1的含量.结果:模型组的肺组织炎症反应、纤维化程度较明显;与假手术组比较, 肺组织匀浆、血清中TGF-β1、 TNF-α含量均明显升高( P < 0.01).给予姜黄素干预后, 可以不同程度地降低肺组织匀浆及血清中TGF-β1、 TNF-α的含量( P <0.05), 同时纤维化程度减轻.结论:姜黄素能降低SiO2致小鼠矽肺模型肺组织和血清中TNF-α、 TGF-β1水平, 可能通过下调上述细胞因子水平而发挥抗肺纤维化作用.     

生物止血材料医用胶黏合儿童额面部开放性伤口创面的可行性

背景：生物止血材料医用胶在体液、血液作用下的扩散性好,可迅速发生聚合反应,产生较理想的止血、促进愈合等作用。 目的：观察医用胶作为止血材料在儿童额面部开放性伤口创面中的临床应用价值。 方法：选择以生物材料医用胶黏合额面部开放性伤口的1 218例儿童为观察组,以常规丝线缝合额面部开放性伤口的600例儿童为对照组,比较两组伤口愈合时间、术后伤口出血情况、缝线反应、色素沉着情况及瘢痕增生程度。 结果与结论：观察组手术时间、出血量及伤口愈合时间均少于对照组(P < 0.05),有效止血率高于对照组(P < 0.05);观察组中1 215例伤口Ⅰ期愈合,对照组中586例伤口Ⅰ期愈合。随访12个月,观察组瘢痕愈合平整,无线结瘢痕及针眼瘢痕,与临近皮肤肤色相近,美容效果良好;对照组瘢痕较明显,可见线结瘢痕及针眼瘢痕,大部分伤口周围出现红斑、硬结及瘢痕增生。使用生物止血材料医用胶黏合儿童额面部开放性伤口具有良好的生物相容性及美容效果,且使用安全、方便。中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程      

Pyrin重组蛋白通过TGF-β1/SMAD及Jagged1/Notch1信号通路减轻慢性支气管哮喘小鼠气道炎症及气道重塑

目的探讨pyrin重组蛋白是否通过抑制转化生长因子β1(TGF-β1)/SMAD及Jagged1/Notch1信号通路缓解卵清蛋白(OVA)诱导的慢性哮喘小鼠气道炎症及气道重塑。方法选取雄性BALB/c小鼠32只,分为4组,每组8只。分别为对照组、 OVA模型组、 pyrin重组蛋白治疗组(100μg/kg)、地塞米松(DEX)治疗组(1 mg/kg)。ELISA测定各组小鼠肺泡灌洗液(BALF)中炎症因子的表达, HE染色观察小鼠支气管炎症浸润情况,过碘酸雪夫反应(PAS)染色观察杯状细胞数量变化, Masson染色观察胶原纤维沉积,免疫组织化学染色法观察α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、 TGF-β1和Notch1蛋白在肺组织中表达分布情况, Western blot法检测肺组织中α-SMA、上皮钙黏素(E-cadherin)、 TGF-β1、 SMAD2/3、 SMAD7、 Jagged1、 Notch1、 Hes1蛋白水平。结果 Pyrin重组蛋白能够改善OVA诱导的支气管哮喘小鼠气道炎症反应,抑制杯状细胞的增生及胶原纤维沉积,降低BALF中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、 IL-4、 IL-13含量,抑制肺组织中TGF-β1、 SMAD2/3、 Jagged1、 Notch1、 Hes1、α-SMA的蛋白表达。结论 Pyrin重组蛋白通过下调TGF-β1/SMAD及Jagged1/Notch1信号通路减轻哮喘小鼠气道炎症及气道重塑。     

重组人内抑素对兔耳创面瘢痕组织血管内皮生长因子、转化生长因子-β_1和碱性成纤维细胞生长因子表达的影响

目的观察重组人内抑素(rh Endostatin)对兔耳创面瘢痕增生及血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子β1(TGF-β1)和碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)表达的影响,探讨rh Endostatin抑制瘢痕增生的分子机制。方法健康新西兰大耳白兔20只,均分为正常对照组、模型组、生理盐水(NS)对照组、rh Endostatin(5 g/L)治疗组和醋酸曲安奈德(TA,40 g/L)对照组;除正常对照组外其余各组均进行增生性瘢痕动物模型的复制,在兔耳腹侧面制作1cm×1cm大小创面。术后第28天,rh Endostatin治疗组瘢痕皮内注射相应浓度rh Endostatin(100μl),NS对照组注射等量生理盐水,隔日1次,共6次;TA对照组瘢痕块内注入相应浓度曲安奈德(100μl),每周1次,共2次;模型组术后不接受处理。术后第47天摄片并收集瘢痕及正常皮肤标本,应用免疫组织化学方法检测VEGF、TGF-β1和b FGF的表达。结果形态学观察结果显示,术后第47天rh Endostatin治疗组瘢痕皮肤色泽变浅,变软变平,体积减小,与模型组和NS对照组比较有明显差异;免疫组织化学检测结果可见,与模型组和NS对照组相比,rh Endostatin治疗组VEGF和TGF-β1蛋白表达减少,b FGF表达增加,差异均具有统计学意义(P0.01)。结论 rh Endostatin能有效抑制兔耳创面瘢痕增生,其机制可能与rh Endostatin影响VEGF、TGF-β1和b FGF蛋白的表达有关。     

Smad交互蛋白1在增生性瘢痕组织中的表达及其对纤维化相关因子的影响

目的研究Smad交互蛋白1（SIP1）在人增生性瘢痕组织中的表达及其对纤维化相关因子的影响。方法收集临床整形手术切取的9例患者增生性瘢痕标本及其自体正常皮肤标本。分离培养原代人增生性瘢痕成纤维细胞（HSFBs）,取第3-5代细胞用于实验。（1）免疫组织化学法检测增生性瘢痕组织标本及其自体正常皮肤组织标本中SIP1的表达情况。（2）真核表达质粒pcDNA3.1（＋）/SIP1转染HSFBs。按照随机数字表法将细胞分为6组：对照组;pcDNA3.1（＋）组（空载体组）;pcDNA3.1（＋）/SIP1组;对照＋TGF-β1组;pcDNA3.1（＋）＋TGF-β1组;pcDNA3.1（＋）/SIP1＋TGF-β1组。于转染后第48 h和72 h分别提取细胞总RNA和细胞总蛋白。应用实时荧光定量PCR法检测各组细胞α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及结缔组织生长因子（CTGF）的mRNA表达水平;采用Western-blotting检测α-SMA的蛋白表达水平。结果 （1）免疫组织化学染色结果显示：增生性瘢痕组织中SIP1表达明显低于自体正常皮肤组织。（2）pcDNA3.1（＋）/SIP1转染HSFBs后纤维化相关因子的表达：①α-SMA的mRNA和蛋白表达水平：与对照组和pcDNA3.1（＋）组相比,pcDNA3.1（＋）/SIP1组在mRNA和蛋白表达水平均显著下调,差异有统计学意义（P〈0.05）。当细胞给予TGF-β1刺激后,各组α-SMA表达均上调,但pcDNA3.1（＋）/SIP1＋TGF-β1组mRNA和蛋白表达水仍低于对照＋TGF-β1组,差异有统计学意义（P〈0.05）。②CTGF的mRNA表达水平：与对照组和pcDNA3.1（＋）组相比,pcDNA3.1（＋）/SIP1组在mRNA表达水平显著下调,差异有统计学意义（P〈0.05）。当细胞给予TGF-β1刺激后,各组CTGF表达均显著上调,但pcDNA3.1（＋）/SIP1＋TGF-β1组mRNA表达水仍低于对照＋TGF-β1组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论与正常皮肤组织相比较,SIP1在增生性瘢痕组织中低表达。SIP1基因转染HSFBs可降低纤维化相关因?     

5-氟尿嘧啶抑制TGF-β1诱导人肝内胆管上皮细胞间质化

目的探讨5-氟尿嘧啶对TGF-β1诱导人肝内胆管上皮细胞间质化的抑制作用,并探讨其作用机制。方法原代培养人肝内胆管上皮细胞,角蛋白19荧光染色鉴定;细胞分为:对照(normal)组,TGF-β1(TGF-β1)组,5-氟尿嘧啶(TGF-β1+5-FU)组;免疫荧光染色观察CK-19、E-cadherin、vimentin和α-SMA标记蛋白;Western blot检测细胞标记蛋白及TGF-β1表达量;Real-time PCR检测细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1 mRNA含量。结果原代培养的人肝内胆管上皮细胞呈多边形或者锥形,CK-19荧光染色为胞质着色;TGF-β1诱导72 h后,胆管上皮出现间质化表现,与正常组比较,vimentin、α-SMA和TGF-β1表达明显增强(P0.05),CK-19和E-cadherin表达显著减弱(P0.05),Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1 mRNA含量显著升高(P0.05);5-FU抑制胆管上皮间质化,与TGF-β1组比较,CK-19和E-cadherin表达增强(P0.05),vimentin、α-SMA和TGF-β1表达明显减弱(P0.05),TGF-β1 mRNA和Ⅲ型胶原mRNA含量明显降低(P0.05)。结论 5-FU通过下调TGF-β1的表达抑制胆管上皮细胞间质化。     

硫化氢在ob/ob小鼠皮肤创面愈合中的作用与调控机制

目的:观察硫化氢(H2S)对ob/ob小鼠皮肤创面愈合的影响并探讨其作用机制。方法:将ob/ob小鼠随机分为生理盐水组、胰岛素组和NaHS(H2S供体)组,C57BL/6小鼠作为对照组,构建小鼠背部皮肤创面模型。干预后检测各组H2S释放量;用Western blot检测胱硫醚γ-裂解酶(CSE)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达差异;用RT-qPCR检测CSE的mRNA表达变化;使用免疫组织化学法检测中性粒细胞及单核/巨噬细胞的浸润数量;使用ELISA检测肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6的水平;用Masson染色检测胶原沉积情况。结果:ob/ob小鼠皮肤创面肉芽组织中H2S释放及CSE蛋白、mRNA的表达水平以及胶原沉积显著低于C57BL/6小鼠(P0.05)。外源性H2S可加速ob/ob小鼠皮肤创面愈合(P0.05),增加胶原沉积。ob/ob小鼠创面中性粒细胞及单核/巨噬细胞浸润数量,TNF-α、IL-6的水平及MMP-9蛋白表达水平显著增加(P0.05),NaHS组显著降低。结论:H2S可显著改善糖尿病难愈性溃疡的愈合,作用机制可能与其抗炎作用有关。