稳定型心绞痛患者血清microRNA的表达差异

目的:在稳定型心绞痛患者血清中筛选出表达差异的microRNA(miRNA),寻找稳定型心绞痛的血清诊断学生物标记物。方法:采集150例稳定型心绞痛患者及50例对照的血清样本,提取血清中的miRNA,用microarray基因芯片方法在病例组20例及对照组10例混合样本中筛选出差异的血清miRNA,分析结果并采用实时荧光定量PCR对差异性显著的miRNA进行验证。结果:Microarray检测结果显示,部分miRNA在稳定型心绞痛患者血清中表达异常,稳定型心绞痛患者miR-215、miR-502、miR-208和miR-487a表达量上升,miR-29b表达量下降,与对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。5种miRNA的ROC曲线下面积分别为0.992、0.807、0.836、0.991和0.893。其中部分miRNA表达量与冠状动脉粥样硬化程度相关。结论:稳定型心绞痛患者血清中存在miRNA表达差异,miR-215、miR-502、miR-208、miR-487a和miR-29b是潜在的稳定型心绞痛患者血清诊断学标记物。其中部分miRNA可能参与冠状动脉粥样硬化的形成。     

心绞痛患者CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋调节性T细胞检测及意义

目的 探讨不稳定型心绞痛患者外周血CD+4CD+25Foxp3+T细胞的水平及意义.方法 采用流式细胞分析法,检测26例不稳定型心绞痛(观察组)和36例健康对照者(对照组)外周血CD+4CD+25Foxp3+T细胞比例.结果 观察组的CD+4CD+25T细胞与CD+4T细胞比例为(7.18±2.37)%显著低于对照组的(8.81 ±1.50)%(P<0.05);观察组的CD+4CD+25Foxp3+T细胞与CD+4T细胞比例为(1.43±0.55)%也显著低于对照组的(1.75 ±0.58)%(P<0.05).结论 CD+4CD+25Foxp3+调节性T细胞比例降低可能打破了外周免疫耐受,参与了不稳定型心绞痛患者动脉粥样硬化的发生发展.     

CD4＋T淋巴细胞异常表达程序性细胞死亡因子4在不稳定型心绞痛患者PCI围术期的作用及意义

目的探讨CD4+T淋巴细胞异常表达程序性细胞死亡因子4(PDCD4)在不稳定型心绞痛患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)围术期的作用及意义。方法入选住院并行择期PCI的不稳定型心绞痛患者33例,同时选取29例只行冠状动脉造影检查而不行PCI的不稳定型心绞痛患者为对照组。分别于冠状动脉造影前或PCI术前、冠状动脉造影后或PCI术后18 h~24 h抽取新鲜外周血,免疫磁珠法分选出CD4+T淋巴细胞,荧光定量PCR检测PDCD4 mRNA表达,免疫印迹法检测PDCD4蛋白表达,酶联免疫吸附法检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度。结果与对照组相比,PCI组术后PDCD4 mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05)。PCI组术后血清TNF-α浓度较术前进一步升高(16.11±1.45 ng/L比7.60±0.75 ng/L;P<0.05),对照组无明显变化(P>0.05)。结论不稳定型心绞痛患者PCI术后CD4+T淋巴细胞PDCD4表达上调,从而增加PCI术后心肌的炎症反应。     

冠心病外周血IL-7表达变化对机体免疫应答的影响及可能机制

目的探讨冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)外周血白细胞介素(IL)-7表达变化对机体免疫应答的影响及可能机制。方法选取稳定型心绞痛患者44例、不稳定型心绞痛患者78例、急性心肌梗死患者42例;另取体检的健康人群40例为正常对照组。流式细胞术检测T细胞表面黏蛋白结构域的分子(Tim)3水平,酶联免疫吸附试验检测血清IL-7水平。体外培养外周血单核细胞,重组IL-7刺激12 h后检测T细胞表面Tim3水平;通过Western印迹法检测IL-7信号通路相关分子的表达水平。结果稳定型心绞痛组、不稳定型心绞痛组、急性心肌梗死组外周血Tim3阳性细胞占CD4^+T细胞的比例明显高于正常对照组,急性心肌梗死组外周血Tim3阳性细胞占CD4^+T细胞的比例明显高于稳定型心绞痛组、不稳定型心绞痛组(P<0.05)。不稳定型心绞痛组、急性心肌梗死组外周血Tim3阳性细胞占CD8+T细胞的比例明显高于正常对照组,急性心肌梗死组外周血Tim3阳性细胞占CD8+T细胞的比例明显高于稳定型心绞痛组、不稳定型心绞痛组(P<0.05)。急性心肌梗死组血清IL-7水平明显高于正常对照组(P<0.01);稳定型心绞痛组和不稳定型心绞痛组血清IL-7水平与正常对照组之间差异无统计学意义(P>0.05);血清IL-7浓度与Tim3+CD4^+T、CD8+T细胞比例均无相关性。急性心肌梗死组重组IL-7刺激12 h的CD4^+T细胞表面Tim3表达水平较未刺激者明显升高(P<0.05)。正常对照组、急性心肌梗死组重组IL-7刺激12 h的CD8^+T细胞表面Tim3表达水平较未刺激者明显升高(P<0.05)。重组IL-7刺激后p-STAT-5蛋白相对表达量明显高于未刺激的细胞(P<0.01);重组IL-7刺激后SOCS3蛋白相对表达量明显高于未刺激的细胞(P<0.05)。结论IL-7可上调Tim3表达,在冠心病发生、发展中发挥抑制炎症应答的作用。     

外周血T细胞亚群构成比例与冠状动脉粥样硬化的关系

目的探讨冠心病患者外周血T细胞亚群构成比例与冠状动脉粥样硬化病变程度的关系,为T淋巴细胞介导的免疫炎症反应诱导斑块进展提供依据。方法选择2012年6月至2012年12月在南方医科大学珠江医院心内科住院经冠状动脉造影术检查及治疗患者57例,其中造影检查正常13例(对照组),稳定型心绞痛14例,不稳定型心绞痛15例,急性心肌梗死15例。采用流式细胞仪检测外周血CD3+细胞占淋巴细胞比例,CD4+、CD8+细胞占T淋巴细胞比例,以及CD4+CD25+Treg和CD4+CD28-T细胞占CD4+T细胞比例,评价各组间差异,并对外周血T淋巴细胞亚群与冠状动脉粥样硬化病变程度(改良Gensini评分)进行相关性分析。结果稳定型心绞痛组、不稳定型心绞痛组以及急性心肌梗死组患者CD3+细胞占淋巴细胞比例明显高于对照组(均P<0.05);与对照组和稳定型心绞痛组相比,不稳定型心绞痛组以及急性心肌梗死组CD4+及CD8+细胞占CD3+细胞比例差异有统计学意义(均P<0.05);CD4+CD25+Treg及CD4+CD28-T细胞占CD4+细胞比例差异也有统计学意义(均P<0.05)。外周血CD3+T细胞与Gensini评分呈显著正相关(r=0.608,P<0.01);CD4+T细胞与Gensini评分呈显著正相关(r=0.624,P<0.01);CD8+T细胞与Gensini评分呈显著负相关(r=-0.548,P<0.01);CD4+CD25+Treg细胞与Gensini评分呈显著负相关(r=-0.617,P<0.01);CD4+CD28-T细胞与Gensini评分呈正相关,但相关关系不大(r=0.399,P<0.01)。结论 T淋巴细胞亚群广泛参与了动脉粥样硬化的发生发展,对冠心病临床危险分层有一定的预测价值。     

T淋巴细胞亚群的早期活化对乙型肝炎疫苗接种后免疫应答的影响

目的 探讨乙型肝炎疫苗接种后免疫应答与T淋巴细胞亚群活化的关系.方法 采集18例乙型肝炎疫苗接种应答者、22例乙型肝炎疫苗接种无应答者、10例未接受乙型肝炎疫苗接种的健康对照者全血.用流式细胞术对其外周血单个核细胞的表面标志物CD69、CD4、CD8、CD3等进行检测.计算不同T淋巴细胞亚群百分比.并经t检验比较不同T淋巴细胞亚群CD69表达的差异.结果 在应答者中,外周血激活型T辅助淋巴细胞(CD69~+ CD4~+ T淋巴细胞)数明显升高,而CD69~+ CD8~+ T淋巴细胞数则明显减少.应答者、无应答者、对照者外周血CD69~+ CD4~+ T淋巴细胞分别占CD4~+ T淋巴细胞的(1.81±1.33)%、(0.64±0.48)%和(0.56±0.39)%,应答者分别与无应答者和对照者比较.差异均有统计学意义(t=3.444、3.940,均P<0.01).应答者、无应答者、对照者外周血CD69~+ CD8~+ T淋巴细胞分别占CD8~+ T淋巴细胞的(0.43±0.25)%、(3.05±1.69)%和(3.11±2.41)%,应答者分别与无应答者和对照者比较,差异均有统计学意义(t=7.997、5.944,均P<0.01).应答者、无应答者、对照者CD3~+ CD4~+ T淋巴细胞占CD3~+ T淋巴细胞的百分比和CD3~+ CD8~+ T淋巴细胞占CD3~+ T淋巴细胞的百分比比较差异均无统计学意义.结论 乙型肝炎疫苗接种后无应答与Th细胞早期活化不足有关.     

支气管哮喘患者记忆CD+4T淋巴细胞活化相关基因的研究

目的 筛选及鉴定支气管哮喘(简称哮喘)患者记忆CD+4 T淋巴细胞活化相关基因.方法 使用差异显示聚合酶链反应(DDPCR)方法筛选哮喘患者和健康人记忆CD+4 T淋巴细胞差异表达基因,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测差异表达基因的mRNA表达水平.统计学处理采用SPSS 10.0软件.计量资料采用-x±s表示,组间比较采用双因素方差分析,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 经DDPCR克隆获得了19条差异片段,经同源性分析显示其中2条片段分别与白细胞介素-7(IL-7)和MM-1基因高度同源,采用RT-PCR检测进一步证实了这2个基因在哮喘患者激活的记忆CD+4 T淋巴细胞中表达白细胞介素-7和MMI基因激活后分别为0.390±0.029、0.629±0.047(F值分别为983、1264,P均＜0.05).结论 哮喘患者激活的记忆CD+4 T淋巴细胞中IL-7和MM-1基因的上调表达可能是哮喘患者与健康人对于变应原出现不同反应的分子机制之一.     

胃癌患者血清中微小RNA分子的特异性表达及其临床意义

目的 探讨胃癌患者血清中微小RNA(miRNA,miR)的表达差异及其与胃癌发生发展的可能关系.方法 用miRNA芯片分析24例胃癌患者及24例健康人血清样本中miRNA表达谱,并采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)对差异表达的miRNA在99例胃癌患者及89例健康人血清中进行大样本验证.最后用TargetScan等生物信息学软件分析所筛选miRNA的靶基因.结果 miRNA表达谱芯片分析发现胃癌患者血清中有29条miRNA的表达水平呈现明显变化.qRT-PCR结果表明在胃癌患者血清中miR-27a、miR-370、miR-491-5p和miR-516-3p的表达水平明显下调.生物信息学分析及文献检索发现miR-27a、miR-370、miR-491-5p和miR-516-3p具有肿瘤抑制因子功能,其表达下调与消化道肿瘤的发生发展密切相关.结论 胃癌患者血清中具有特异性miRNA表达谱,miR-27a、miR-370、miR-491-5p和miR-516-3p的表达下调可能在胃癌发生发展中起着重要作用.     

慢性阻塞性肺疾病患者T淋巴细胞氧运输相关基因的初步研究

目的利用基因芯片研究慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者T淋巴细胞氧运输相关基因。方法采集COPD患者和健康人的外周血作为实验血样和对照血样。用Ficoll技术分离外周血淋巴细胞,用分选式流式细胞仪分选并纯化T淋巴细胞,并采用一步法提取总RNA,逆转录合成双链cDNA后,体外转录合成生物素标记的cRNA,片断化后,采用人类全基因表达谱芯片进行芯片杂交,扫描后筛选出差异表达基因。结果初步筛选出COPD／健康人外周血T淋巴细胞氧运输相关高表达差异基因3条。结论基因芯片技术能有效地研究基因的表达谱,筛查出COPD患者T淋巴细胞氧运输相关差异表达基因。     

不稳定型心绞痛患者CD4~+T淋巴细胞微小核糖核酸155水平与冠状动脉病变的相关性

目的:研究外周血CD4+T淋巴细胞微小核糖核酸-155(miRNA-155)表达与血清干扰素-γ(IFN-γ)浓度和冠状动脉(冠脉)病变严重程度的相关性。方法:经冠脉造影检查后,将64例疑似不稳定型心绞痛(UAP)患者分为UAP组(经造影确诊冠心病者32例)和对照组(经造影排除冠心病者32例)。分别于冠脉造影前18~24h采集新鲜外周血,免疫磁珠法分选出CD4+T淋巴细胞,荧光定量PCR检测miRNA-155表达,酶联免疫法检测血清IFN-γ表达。并根据造影结果对冠脉病变进行Gensini评分,分析外周血CD4+T淋巴细胞miRNA-155、血清IFN-γ水平与冠脉病变Gemini评分的相关性。结果:UAP组miRNA-155、IFN-γ水平较对照组明显升高,差异有统计学意义(均P0.05),miRNA-155和IFN-γ与冠脉病变Gensini评分呈正相关关系(r=0.534、0.713,均P0.05)。miRNA-155和IFN-γ呈明显正相关关系(r=0.686,P0.05)。结论:外周血CD4+T淋巴细胞miRNA-155和血清IFN-γ水平与冠脉病变程度密切相关。