诱导分化的骨髓间充质干细胞不同途径移植治疗慢性肝损伤的研究

目的 探讨诱导分化的骨髓间充质干细胞(MSC)不同途径移植治疗慢性肝损伤的可行性.方法 密度梯度离心法联合贴壁培养分离、扩增骨髓MSC,体外诱导向肝系细胞分化,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫细胞化学法检测肝系细胞标志,电镜观察超微结构的变化.清洁级Wistar大鼠120只,其中114只建立慢性肝损伤模型(实验组),另6只作为正常对照组.实验组8周内自然死亡12只,将剩余96只根据三种移植途径及体质量分层随机均分为门静脉移植实验组、门静脉移植对照组、脾脏移植实验组、脾脏移植对照组、尾静脉移植实验组和尾静脉移植对照组,各移植实验组移植4',6-二脒基-2'-苯基吲哚(DAPI)标记诱导分化14 d的MSC,观察移植后细胞的迁徙、定位,血清肝功能指标,肝脏组织病理学及移植效果.结果 诱导后第7、14天均检测到甲胎蛋白(AFP)mRNA表达,第14、21天检测到白蛋白(ALB)mRNA、兔抗鼠细胞角蛋白18(CK18)和肝细胞抗原表达.诱导后MSC胞体增大,胞质中含有较多线粒体、粗面内质网、高尔基体、溶酶体和糖原颗粒等.各移植实验组大鼠均发现DAPI标记细胞且丙氨酸转氨酶等肝功能指标及肝脏病变程度均较其移植对照组改善,以脾内移植途径更为显著[(98.13±8.22)U/L比(145.85±15.88)U/L,P＜0.05].结论 诱导分化的骨髓MSC通过三种移植途径均对慢性肝损伤具有修复作用,且脾内移植优于门静脉及尾静脉移植.     

大鼠骨髓间充质干细胞在急性肝损伤环境中的分化

骨髓中除造血干细胞（HSCs）外，还存在着另外一类干细胞，即间充质干细胞（MSCs）。目前研究表明，MSCs具有横向分化能力，尤其能诱导分化为肝细胞，成了肝干细胞研究的热点，也为临床治疗终末期肝病提供了新思路。目前报道肝脏疾病影响17．5％的人群，终末期肝病的治疗在临床尚没有可行的办法。因此，迫切需要建立一种更有效的治疗方法。本研究探讨了骨髓MSCs在急性肝损伤环境中的分化。     

骨髓来源干细胞门静脉移植治疗肝纤维化的实验研究

目的研究骨髓间充质千细胞（MSCs）诱导分化的肝样细胞对大鼠肝纤维化的治疗作用。方法在体外分离培养MSCs中加入细胞因子,诱导其分化成为肝样细胞,通过门静脉移植入肝纤维化模型大鼠体内后,观察病理组织学变化、评价纤维化分期并监测肝功能的变化。结果肝纤维化模型大鼠经门静脉移植诱导肝样细胞4周后,其肝脏纤维化明显改善。结论肝样细胞移植对肝纤维化模型大鼠的纤维化有明显的治疗作用。     

脐血干细胞与骨髓干细胞联合移植治疗大鼠急性肝衰竭实验研究

目的：观察脐血干细胞和自体骨髓干细胞共同移植治疗D-半乳糖苷所致急性肝衰竭大鼠的疗效。方法采集大鼠脐血和骨髓中单个核细胞,以促肝细胞生长因子和干细胞因子培养3w,采用免疫细胞化学法检测白蛋白和甲胎蛋白表达情况;以D-半乳糖苷腹腔注射法建立大鼠急性肝衰竭模型,24 h后每日经鼠尾静脉分别注入脐血干细胞,或骨髓干细胞,或混合的脐血干细胞和骨髓干细胞,对照组注射等量生理盐水,治疗7d,观察4组大鼠存活率、肝功能和肝组织病理学变化。结果在促肝细胞生长因子及干细胞因子的诱导下,脐血干细胞和骨髓干细胞可以在体外扩增并分化为肝细胞;脐血干细胞移植、骨髓干细胞移植和联合细胞移植组大鼠9d 存活率分别为55.6%、50.0%和77.8%,均明显高于生理盐水对照组（16.7%,P〈0.01）;联合移植组存活率高于任何一种单纯干细胞移植（P〈0.01）。结论脐血干细胞和骨髓干细胞移植对大鼠急性肝损伤有一定的保护作用,两者联合移植有协同作用。     

兔骨髓间充质干细胞移植后移植细胞凋亡的实验研究

目的利用TUNEL法检测5-氮胞苷体外诱导骨髓间充质干细胞（MSCs）移植后的凋亡情况。方法5-氮胞苷体外诱导骨髓间充质干细胞MSCs向肌源性心肌细胞分化,通过免疫组化,鉴定诱导后的MSCs是否向类心肌细胞转化。建立兔心肌梗死模型,将细胞移植于心梗区域。移值2周后,利用TUNEL法检测植入细胞的凋亡率。结果移植2周后,可见DAPI标记带蓝色荧光的供体细胞核,分布比较广泛,形态呈椭圆形类似心肌细胞核,并与心肌纤维排列方向一致,证明移植细胞已存活。移值细胞表达troponinT,证明移植的MSCs分化为类心肌细胞。移植细胞均出现不同程度细胞凋亡。结论移植的MSCs细胞可在缺血的心肌组织存活,并分化为类心肌细胞,但移植细胞均出现不同程度凋亡。     

门脉移植骨髓间充质干细胞后肝内定居的实验研究

目的探讨同种异体大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)门脉移植后在受体大鼠模型肝内定居分布情况。方法利用密度梯度法和贴壁法纯化大鼠骨髓间充质干细胞。取第3代MSCs经CFSE标记后从门静脉植入同种异体正常组和肝损伤组大鼠体内,10d后取出受体大鼠肝脏,通过冰冻切片行荧光计数法,比较MSCs在大鼠肝脏内定居分布情况。结果门静脉移植后的MSCs均能在正常组和肝损伤组的肝脏内定居；在细胞数量上,肝损伤组明显多于正常组。结论经门静脉移植的MSCs可以定居于肝脏内,定于肝脏的细胞数量与肝脏是否损伤密切相关。     

大鼠骨髓源性肝干细胞肝内移植后定居状况

目的 探索大鼠骨髓源性肝干细胞同种异体移植后在受体大鼠模型肝内定居情况.方法 采用全骨髓培养法体外培养细胞,贴壁筛选纯化骨髓间充质干细胞并进行体外培养、扩增,应用肝细胞生长因子(HGF)诱导分化出肝干细胞,鉴定后,经肝脏中叶注射入同种异体正常组和暴发性肝衰竭组大鼠体内,于移植后的第1、2、4周取受体肝脏移植原位(注射部位)、邻位(距注射部位0.5 cm)组织,应用PCR技术检测性别决定因子基因片段,研究肝干细胞在大鼠肝脏内定居情况.结果 经肝脏注射移植的肝干细胞在正常组和肝损伤组的肝脏内均能定居,且定居的细胞数量上肝损伤组明显多于正常组.结论 经肝脏注射移植的骨髓源性肝干细胞可以定居于肝脏内,且定于肝脏的干细胞数量与肝脏是否损伤密切相关.     

脐带间充质干细胞移植对急性肝功能衰竭的修复及移植途径的优化

目的：探讨脐带间充质干细胞（hUCMSC）移植对急性肝功能衰竭大鼠的治疗作用,并优化移植治疗途径。方法采用组织块贴壁法收集 hUCMSC,流式细胞术检测细胞表面标志物。将 SD 大鼠随机分为经尾静脉注射移植治疗组,经肝叶注射移植治疗组,模型对照组,空白对照组。急性肝衰竭动物模型采用一次性腹腔注射2．5 mL／kg CCl4橄榄油（1∶1）混合溶液建立,24 h 后移植治疗组分别经尾静脉和肝叶注射 hUCMSC 细胞悬液;治疗后0 h、24 h、48 h、72 h、96 h和1周收集血清分析肝功能恢复情况;治疗后3 d、1周、2周留取肝脏标本,观察病理学恢复情况,用 Real-time PCR 检测鼠肝中人 CK8、CK18和 AFP 基因 mRNA 转录水平,免疫组化法检测人 CK18的表达。结果移植治疗组 TBil 和 ALT 含量较模型对照组有明显恢复（P ＜0．05）,肝细胞再生程度提高,炎细胞减少,肝脏病理学修复作用增强。在造模后1周、2周时,经尾静脉移植治疗组和经肝叶注射移植治疗组的肝组织中,CK8、CK18和 AFP 基因 mRNA 的相对转录量与模型对照组相比差异有统计学意义（P ＜0．05）。经尾静脉注射移植治疗组和经肝叶移植治疗组中,移植后的 hUCMSC 在鼠肝中诱导分化后表达人肝细胞相关蛋白 CK18。经尾静脉和经肝叶注射移植治疗组的肝功能、移植细胞分化程度比较差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论采用 hUCMSC 移植治疗急性肝衰竭大鼠模型后,能促进肝功能和肝脏病理学修复。移植后的 hUCMSC 自身能分化为具有肝细胞功能的类肝样细胞。经尾静脉与经肝叶注射移植疗效相似。     

肝再生大鼠血清诱导骨髓干细胞向肝细胞分化的实验研究

目的观察肝大部切除大鼠再生血清和肝细胞生长因子(HGF)诱导骨髓干细胞向肝实质细胞分化的作用；探讨骨髓干细胞向肝细胞分化和增殖的体外培养条件和方法，为患者应用自身骨髓细胞修复损伤肝脏提供实验依据。方法制作肝大部切除大鼠肝再生动物模型，收集术后24h血清；分别应用鼠肝再生血清和HGF对大鼠骨髓细胞进行定向诱导分化培养；以免疫组化、RTPCR和western blot等方法对分化不同阶段细胞进行检测。将分化细胞经尾静脉输入同系大鼠，观察输注细胞在肝、脾内的生长情况。结果活体移植分化细胞能定向迁移至肝和脾；体外及体内分化细胞在mRNA水平和蛋白质水平均表达白蛋白，并在一定时期内表达甲胎蛋白。结论大鼠骨髓干细胞在肝大部切除再生血清或HGF的诱导下能横向分化为肝实质样细胞。     

损伤肝脏条件培养液体外诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为肝细胞

目的探索损伤肝脏条件培养液体外诱导小鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）分化为肝细胞的可行性及方法。方法培养注射CCl4所致的损伤小鼠肝脏组织块,收集条件培养液,进行MSCs诱导分化。通过形态学观察、RT-PCR、免疫荧光反应和过碘酸Schiff反应鉴定分化细胞。结果诱导组细胞呈肝细胞样变化。RT-PCR检测显示：AFP基因第5天开始表达,第10天表达增强,此后表达减弱；细胞角蛋白18和Alb基因第10天开始表达,持续到第20天；第20天检测到酪氨酸氨基转移酶基因表达。免疫荧光反应显示诱导20 d的细胞AFP、细胞角蛋白18、Alb表达阳性,诱导20 d细胞过碘酸Schiff反应呈阳性。结论MSCs在损伤肝脏条件培养液诱导下可分化为肝细胞。     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.     

高血压降压治疗目标的再认识

根据传统的高血压水平的定义,1993年WHO高血压治疗指南提出血压控制目标为<140/90mm Hg(1mm Hg=0.133kPa),但是并非所有患者都必须将血压降至同一水平,而应根据患者情况进行个体化治疗。Framingham进行的一项长达10～12年的心血管事件研究发现,第5年后,正常上限血压[收缩压(SBP     

Lack of correlation of degree of villous atrophy with severity of clinical presentation of coeliac disease

BACKGROUND AND AIM: Both the clinical presentation and the degree of mucosal damage in coeliac disease vary greatly. In view of conflicting information as to whether the mode of presentation correlates with the degree of villous atrophy, we reviewed a large cohort of patients with coeliac disease. PATIENTS AND METHODS: We correlated mode of presentation (classical, diarrhoea predominant or atypical/silent) with histology of duodenal biopsies and examined their trends over time. RESULTS: The cohort consisted of 499 adults, mean age 44.1 years, 68% females. The majority had silent coeliac disease (56%) and total villous atrophy (65%). There was no correlation of mode of presentation with the degree of villous atrophy (p=0.25). Sixty-eight percent of females and 58% of males had a severe villous atrophy (p=0.052). There was a significant trend over time for a greater proportion of patients presenting as atypical/silent coeliac disease and having partial villous atrophy, though the majority still had total villous atrophy. CONCLUSIONS: Among our patients the degree of villous atrophy in duodenal biopsies did not correlate with the mode of presentation, indicating that factors other than the degree of villous atrophy must account for diarrhoea in coeliac disease.