纸片法保存临床常见菌种的分析

目的介绍一种简便易行的菌种保存方法。方法临床分离非苛养菌246株分别用纸片法和半固体琼脂法进行保存,并比较1m、12m、36m两种方法的菌种存活率。结果菌株经保存1m、12m和36m后,纸片法的平均存活率分别为100%、95.1%和88.2%,半固体琼脂法分别为98.0%、76.0%和42.7%。纸片法保存铜绿假单胞菌、白色假丝酵母菌36m后,菌株存活达100%,临床常见菌金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、大肠艾希氏菌、肺炎克雷伯菌保存36m后,菌株存活率均>88%。化脓性链球菌的保存效果不佳。结论纸片法适用于非苛养菌的保存,方法简便易行,不需特殊设备,值得推广应用。     

三种简易菌种保藏方法的效果比较

目的:寻找一种即简便又经济实用的菌种保存方法。方法:将菌种分别用采用鲜牛奶法、滤纸片法和CRYOBANK菌种保存管保存3、6、9、12个月后,进行复苏鉴定,比较保藏质量。结果:苛氧菌的长期保存应选用CRYOBANK菌种保藏管或鲜牛奶法,苛氧菌的短期保存及非苛氧菌的保存采用三种方法效果一致。结论:从经济实用的角度出发,鲜牛奶法和滤纸片法尤其适合于基层实验室,具有推广应用价值。     

三种传统的菌种保藏法之改进

一种好的菌种保藏方法 ,应能长期保持菌种原有的生物学特性不变。除用冷冻真空干燥法保藏教学菌种外 ,我们还对传统惯用的菌种保藏法进行了改良。经反复实验 ,证明改良后的方法简便、易行 ,成本低 ,保存时间长 ,存活率高 ,适用于各类教学菌种长期稳定保存。1　材料与方法1 1　材料　 ① 菌种 :选出本实验室保存的教学菌种 10种 (肠道杆菌 7种 ,化脓球菌 3种 ) (卫生部药品生物制品检定所菌种保藏中心 )。② 改良的保藏培养基血水肉汤半固体基 :0 1%葡萄糖肉汤 (ｐＨ7 4 )和等量加脱纤维羊血煮沸滤液混合加 0 5%琼脂 10磅 2 0ｍｉｎ高压后…     

三种简易菌种保藏方法的效果比较

目的：寻找一种即简便又经济实用的菌种保存方法。方法：将菌种分别用采用鲜牛奶法、滤纸片法和CRYOBANK菌种保存管保存3、6、9、12个月后,进行复苏鉴定,比较保藏质量。结果：苛氧菌的长期保存应选用CRYOBANK菌种保藏管或鲜牛奶法,苛氧菌的短期保存及非苛氧菌的保存采用三种方法效果一致。结论：从经济实用的角度出发,鲜牛奶法和滤纸片法尤其适合于基层实验室,具有推广应用价值。     

棉棒吸附法保存菌种方法探讨

在微生物实验室中,菌种的保存是一项不可缺少的重要工作.在日常工作中从样品中分离出的有价值菌株需要进行分析研究,诊断用品的制备,菌苗的生产,药物的抑菌试验等都需要保存一套比较完整的菌种.现在常用的菌种保存方法有培养基保存法、真空冷冻干燥法等,不论哪种方法均以保存时间长、菌种不变异,操作简便为最佳标准.由于工作的需要于2000年8月-2005年 2月,经多次试验摸索出以棉棒为载体的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌等棉棒菌种保存法,同时与冷冻真空干燥法进行了比较,通过不同保存时间对细菌存活率菌落形态、染色、生物反应的观察比较,证实棉棒保存法与真空冷冻干燥法结果相同令人满意,该方法简便,且易于掌握,适用于基层疾病预防控制中心的菌种保存工作,有实际推广应用价值.     

致病性奈瑟氏球菌快速低温保存法的建立

致病性奈瑟氏菌脑膜炎球菌，淋球菌在自然环境中抵抗力极低，在外界环境中不易存活，由于脑膜炎球菌能产生自溶酶，在培养转种时超过481。则不易生长，常用保存这类细菌的有效方法是冷冻真空干燥法。在经常性教学科研中用巧克力培养基、血清半固体培养基菌种保存期短（2～10d），给经常性教学、科研带来不便，而冷冻真空干燥法需特殊设备，为保证教学科研工作的需要，本文介绍一种致病性奈瑟菌简易保存法，报道如下。1材料与方法1．1标准菌株脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌1．2培养基及保存没培养基为巧克力培养基，按中国菌种目录处方制备，…     

一种短期保存肺炎双球菌的简单方法

目的寻求一种简单易行的保存肺炎双球菌的方法. 方法在-20℃和-80℃条件下,用体积分数为10%的甘油新鲜兔脱纤维血(新鲜兔血)、体积分数为10%的甘油陈旧兔脱纤维血(陈旧兔血)和脱脂鲜奶作为保存剂,观察保存一定时间后肺炎双球菌存活百分率和其生物学性状的变化. 结果在-80℃保存18个月其存活率均达100%,且生物学性状保存前后无明显变化;在-20℃该菌株保藏12个月以上时,用新鲜兔血、陈旧兔血和脱脂鲜奶保存剂保存该菌,其存活率分别为70%、30%和55%,差异有显著性(P<0.01);而用新鲜兔血方法保存的菌株,其菌形、胆汁溶解和荚膜试验与保存前菌株相似,生化反应与保存前菌株相比稍有改变,而其它生物学性状无变化. 结论在-80℃保存该菌,上述3种保存剂均可使用;在-20℃保存该菌,应使用新鲜兔血作为保存剂.     

菌种保藏管法和冷冻真空干燥保藏法对金黄色葡萄球菌抗力的影响

目的探讨菌种保藏管法和冷冻真空干燥保藏法对金黄色葡萄球菌抗力的影响。方法分别采用菌种保藏管法(-80℃)和冷冻真空干燥保藏法(4℃)对金黄色葡萄球菌菌种进行保存,后观察菌落存活情况及84消毒液对两种菌种保藏方法保藏的金黄色葡萄球菌的杀菌情况。结果冷冻真空干燥保藏0.5年、1年、2年、3年后消毒液对金黄色葡萄球菌杀菌率依次为99.031%、99.038%、99.052%、99.060%且差异无统计学意义(H=0.659,P=0.703);菌种保藏管法保藏0.5年、1年、2年、3年后消毒液对金黄色葡萄球菌杀菌率依次为99.075%、99.195%、99.489%、99.971%且差异有统计学意义(H=11.465,P=0.003);保藏0.5年时,两种保藏方法对金黄色葡萄球菌存活率[(99.94±2.45)%、(98.94±2.37)%]影响差异无统计学意义(t=0.656,P=0.533),保藏1年、2年、3年后,冷冻真空干燥保藏法保藏的金黄色葡萄球菌存活率[(96.47±3.61)%、(94.08±5.98)%、(90.14±7.40)%]明显高于菌种保藏管法(t=11.700,6.891,5.045;P=0.000,0.000,0.002)。结论相比于菌种保藏管法,利用冷冻真空干燥保藏法长时间保存的金黄色葡萄球菌对消毒液的抗力影响更小且存活率更高。     

介绍一种保存菌种的方法——明胶圆片干燥菌种保存法

目的寻找一种不突变、传代少、衰退慢、菌种保存时间长的菌种保存方法。方法将纯菌株接种在：葡萄糖奶粉明胶保存液中，混匀，用无菌吸管吸取该液，滴注在无菌的塑料平皿中，以每毫升菌液约30滴，每塑料平皿装30滴为佳，完后，放入备好的内盛有五氧化二磷的干燥器内，加盖后抽气。待明胶菌液滴上的水分减少、干燥成圆片后，以尖子镊将明胶片从石蜡滤纸上剥脱，取出放入底部装有0．5g硅胶并垫一棉花的小试管内，每管加入10～20片，加塞封住管口，放4℃或20℃下保存即可。结果该方法保存菌株3年以上，经生理生化学试验检测表明：菌株不变异、不衰退、仍保存了原菌种的特性。结论该方法是一种保存菌种的好方法，它操作简单、方便、菌种保存时间长，无污染、不变异、是医院自制制剂质量监控检测工作准确、可靠的保证。     

4℃与-196℃保存胸腺细胞的比较

目的探讨4℃与-196℃保存胸腺细胞的存活率。方法 取大白鼠,无菌条件下制备成胸腺细胞悬液,分别于4℃与-196℃保存,保存36h和35d后,用Trypanblue染色、观察胸腺细胞的回收率。结果 胸腺细胞4℃保存36h,回收率为28％;-196℃冻存35d,细胞回收率为2318／μl。结论 -196℃冻存胸腺细胞其存活率高于4℃保存,-196℃保存胸腺细胞是一种有效的中长期保存方法。     

标本采集管与保存方式对超氧化物歧化酶测定结果的影响

目的：探讨标本采集管与保存方式对超氧化物歧化酶（SOD）测定结果的影响。方法：随机选取湖北科技学院附二医院80例体检者,前40例体检者同时分别用分离胶促凝真空管（标记为A组）和无抗凝真空管（标记为B组）采集血液标本,离心分离血清,两组都放室温,A组分别于0、4、6、8、10 h测定SOD活性,B组于0 h检测SOD活性;后40例体检者用分离胶促凝真空管（标记为C组）采集血液标本,离心分离血清,置于2-8℃冰箱下保存,分别于0、10、14、21 h测定SOD活性。采用配对t检验分析各组结果差异性。结果：分离胶促凝真空管和无抗凝真空管血清的SOD比较（0 h）,差异无统计学意义（P〉0.05）;室温下保存的分离胶促凝真空管血清（A组）的SOD于4、6、8、10 h检测,与0 h比较差异具有统计学意义（P〈0.01）,与0 h比较相对偏倚分别为3.719%、5.341%、6.807%、8.306%;2-8℃冰箱保存的分离胶促凝真空管血清（C组）的SOD于10、14、21 h检测,与0 h比较差异具有统计学意义（P〈0.01）,与0 h比较相对偏倚分别为3.213%、4.552%、5.816%。结论：可采用分离胶促凝真空管采集标本;室温下放置10 h及2-8℃冰箱放置21 h对结果的影响均在临床可接受范围内,与产品说明书上要求的时间相比,室温与冰箱中放置时间都能延长1倍以上。     

新鲜血小板与新鲜冰冻血小板膜活化糖蛋白的研究

目的通过对机采新鲜血小板与新鲜冰冻血小板在制备和贮存过程中血小板活化的状况来了解评估血小板输注的有效性。方法采用流式细胞技术观察有效期内新鲜血小板（22℃震荡保存7天内）与新鲜冰冻血小板（-80℃以下保存1年内）不同时段的膜糖化蛋白GPⅡb/Ⅲa和CD62P进行流式细胞分析。结果在-80℃保存12个月,其GPⅡb/Ⅲa和CD62P的表达差异无显著性,新鲜冰冻血小板CD62p的表达受到良好抑制,可与22℃振荡保存24 h的新鲜血小板质量相近;新鲜血小板在22℃条件下随保存时间的延长GPⅡb/Ⅲa和CD62P的表达迅速升高,与新鲜血小板相比48 h差异有显著性（P〈0.05）,72 h差异有极显著性（P〈0.01）。结论新鲜血小板冰冻期间发生的代谢损伤较常温条件下低。选择≤24 h的新鲜血小板用于一80℃冻存至少可以保存1年。     

Fertilizing capacity of human sperm preserved in cold electrolyte-free solution.

OBJECTIVE: To assess the fertilizing capacity of human sperm preserved in electrolyte-free (EF) solution at 4 degrees Celsius. METHODS: The motility, acrosome status and fertility index of human sperm were respectively assessed before and after preservation in cold EF solution. RESULTS: The motility of human sperm so preserved for one week was significantly higher than that of the sperm preserved in modified human tubal fluid (43.4+/-7.9% vs 9.5+/-2.5%, P<0.01). Although acrosome status of human sperm in EF solution before reinitiation differed little from that of fresh sperm (capacitated sperm: 7.6+/-1.8% vs 6.4+/-1.8%; acrosome-reacted sperm: 3.0+/-1.7% vs 2.4+/-1.1%, P>0.05), the percentage of capacitated and acrosome-reacted sperm in the EF solution significantly increased after reinitiation (16.0+/-2.3% vs 7.6+/-1.8% and 9.4+/-2.1% vs 3.0+/-1.7% respectively, P<0.01). The penetration rate and fertility index of the sperm in EF solution were comparable with those of fresh sperm (48.1% vs 50.9%; 1.38+/-0.16 vs 1.29+/-0.13, respectively). CONCLUSIONS: Preservation in cold EF solution does not induce human sperm to undergo capacitation and acrosome reaction, and the sperm so preserved for one week possesses comparable fertilizing capacity as fresh sperm does.     

器官培养保存猪角膜

目的建立器官培养保存角膜的方法。方法按照已有配方配制器官培养保存液和运输液。将24只新鲜猪角膜随机分成A、B、C三组,悬浮于上述保存液中,DIN瓶密闭保存于37℃恒温孵箱。分别将A、B、C三组角膜放入保存液中保存4、11、18d,再转到含5%葡聚糖T500的运输液中脱水3d。保存后的每个角膜都从中央平分成两半,其中一半常规测厚度、做台盼蓝-茜素红染色观察内皮细胞形态、计算内皮细胞数量和台盼蓝阳性细胞数;另一半撕取后弹力膜,4%多聚甲醛固定后TUNEL法测定内皮细胞凋亡。采取上述实验方法,分别测定并比较保存前和保存后第7、14、21d时猪角膜的水肿程度、内皮细胞数量及丢失率、台盼蓝阳性率、内皮细胞凋亡情况。结果三组猪角膜均透明。随保存时间的延长而出现内皮细胞形态欠规则、细胞丢失率升高、台盼蓝阳性细胞数增多、TUNEL阳性细胞数量增加。结论实验室建立了器官培养保存猪角膜的方法。按此配方配制的保存液可维持猪角膜活性达3周。     

人甲胎蛋白时间分辨免疫荧光分析试剂盒的研制

目的 研制人甲胎蛋白(hAFP)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)试剂盒。方法 采用双抗体夹心法建立AFP TRFIA试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价。结果 试剂盒的可测范围为1~1 000U/ml, 灵敏度为0.17U/ml,精密度良好,批内和批间的精密度分别为3.3%~5.9%,3.7%~ 6.5%。与CEA、CA12-5、CA19-9、CA15-3、白蛋白无交叉反应。稳定性试验表明试剂可以在4℃稳定1年,37℃稳定7d。426份正常血清标本测试该试剂盒的正常参考值范围是0~12U/ml。用本试剂盒与国外同类试剂盒同时检测60份血清标本,其相关系数为0.995。结论 试剂盒各项指标(灵敏度、精密度、特异性、稳定性、准确度)均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒。     

4℃冰箱保存骨髓及外周血造血干细胞

目的　为骨髓造血干细胞 (BMSC)及外周血造血干细胞 (PBSC)的短期保存建立简便有效的方法。方法　采用自体血浆为骨髓单个核细胞 (BMMCs)及外周血单个核细胞 (PBMCs)冷藏营养液 ,直接置BMMCs及PBMCs于 4℃冰箱中保存 ,分别在当天至第 7d选择性测其细胞活力 ,CD+ 3 4 细胞阳性率及粒 -单系造血祖细胞 (CFU -GM )集落形成能力。结果　BMMCs及PBMCs置 4℃冰箱保存 3d后 ,台盼兰拒染率、CD+ 3 4 细胞回收率和CFU -GM回收率分别达 80 %以上 ;保存 4d后 ,上述三项指标仍达 70 %以上。结论　当患者接受高剂量化疗时用此方法能在 4d内安全地保存BMSC或PBSC。     

灭活法研制乙肝表面抗原室内质控血清

目的：用灭活法研制乙肝表面抗原（HBsAg）室内质控血清。方法：筛选HBsAg阳性血清,60℃加热1h进行灭活,同时与卫生部临床检验中心提供的HBsAg质控品比较,选取合适浓度的阳性血清作为ELISA法检测HBsAg的室内质控品。结果：该质控品定值为2 IU/ml和10 IU/ml。其稳定性实验表明：2-8℃3个月及-20℃保存6个月的含量无明显变化。均一性检测结果：瓶间不精密度为7.15%和8.97%。结论：60℃加热1h灭活法制备的质控品可以作为用于ELISA法检测HBsAg的室内质控。     

Establishment of an axenic culture of Giardia lamblia through preliminary passage in suckling gerbil.

Cysts of Giardia lamblia from fresh stool specimens of a 13-year-old boy, who lived in suburban Beijing and had suffered from recurrent diarrheas for years, were concentrated, purified and suspended in physiological saline. Six suckling gerbils (Meriones unguiculatus) were each inoculated with 0.2 ml of this suspension which contained 20,000 cysts/ml. On day 8 after inoculation, the infected animals were sacrificed and trophozoites of G. lamblia which appeared numerous in the upper small intestines were isolated aseptically. The trophozoites were inoculated into modified TYI-S-33 medium and cultivated at 37 C. On day 14 of cultivation, the organism grew luxuriantly and formed a cellular monolayer on the inner wall of the culture tube. The organism replicated every 15 +/- 2 hours and the peak growth occurred 120 hours after seeding. No bacterial growth was detected by repeatedly transferring the culture onto blood agar plates and into beef broths. Several lots of the culture have been subjected to cryopreservation in liquid nitrogen and the viability of the thawed organism ranged from 50% to 80% 1-10 weeks after being cryopreserved. The thawed parasites grew well in subcultures. This axenic culture has been maintained for one year and 4 months, and more than 150 subcultures have been made.

     

冻干工艺及助溶剂聚乙二醇对盐酸椒苯酮胺冻干制剂的影响

目的 建立适合盐酸椒苯酮胺的冻干工艺,并考察助溶剂聚乙二醇对盐酸椒苯酮胺制剂性状的影响.方法 采用真空冷冻干燥速冻法-30℃预冻3h和慢冻法-30℃预冻5h制备盐酸椒苯酮胺冻干制剂,考察其性状,并观察加入不同相对分子质量的聚乙二醇后.冻干样品及其复溶后溶液的外观性状、颜色、澄清度和pH值.结果 2种冻干工艺获得的样...     

液氮保存对人主动脉瓣组织细胞活力的影响

目的　主要观察液氮 (- 196℃ )保存 1～ 2 4mo不同时间段的瓣膜组织细胞活力及组织培养细胞生长情况的变化 ,为临床适用的人同种主动脉瓣的适宜保存期限提供实验依据 .方法　选取 (18～ 35 )岁健康成年男性脑死亡 30 min内取材的主动脉瓣膜 2 0个 .依据保存时间分为 10组 , 组为新鲜对照组 ,取材后直接供实验用 , ～ 组为冷冻保存组 ,分别为冷冻保存 1,3,6 ,9,12 ,15 ,18,2 1,2 4m o的瓣膜 ,每组 2个瓣膜共 6个瓣叶 .冷冻保存组各组瓣膜缓慢降温 (1℃·min- 1 ) ,液氮中保存 ,实验时进行快速复温 .瓣叶剪为细小组织块 ,一半置入培养瓶中做组织培养 ,相差显微镜下观察其组织细胞生长情况 ;另一半组织块用胰酶消化 ,光镜下做细胞计数并计算其细胞活力 .结果　 组的组织细胞活力最高(93.8% ) , ～ 组细胞活力均较 组明显减低 (6 7.3% vs93.8% P<0 .0 5 ) ; , , 组细胞活力较 ～ 组瓣膜各组明显减低 (5 2 .4% vs76 .5 % P<0 .0 5 ) . 组组织细胞 1wk镜下可见 ,生长较快 ,4wk时镜下细胞数较多 ; ～ 组组织细胞 2 wk镜下可见 ,生长较 组稍缓慢 ,4wk时镜下细胞数减少 ; , , 组细胞 3wk镜下可见 ,生长较慢 ,4wk时镜下细胞数较 组明显减少 .结论　液氮保存对人同种瓣膜组织细胞活力有显著影响 ,其程度