骨及钙化组织脱钙法的比较

目的：探讨骨及钙化组织的脱钙方法。方法采用三种不同方法处理相同的骨及钙化组织,甲组先将骨及钙化组织切成薄片,用甲酸氯化铝脱钙固定液彻底脱钙,流水冲洗,碳酸铝饱和溶液中和酸;乙组先用甲酸氯化铝脱钙固定液处理大块骨及钙化组织至彻底脱钙,再将骨及钙化组织切成薄片,碳酸铝饱和溶液中和酸;丙组按传统方法脱钙。三组组织脱钙后均常规制作HE切片,并行CD68和TTF-1免疫组化检测,比较三种方法的脱钙时间、HE染色和免疫组化检测结果。结果甲组脱钙时间短、切片完整、组织结构清晰、染色对比鲜明、长期保存不易褪色、免疫组化阳性信号正常,各项结果均优于乙组和丙组。结论甲酸氯化铝脱钙固定液处理骨及钙化组织,脱钙时间短,切片质量、染色质量、免疫组化质量好,切片长期保存不易褪色,值得推广。     

人工骨成骨模型免疫组织化学染色方法的构建

目的以大鼠单纯胫骨骨折后加入骨粉复合物为模型,观察乙二胺四乙酸(EDTA)-2Na脱钙和混合酸脱钙后免疫组织化学检测的效果。方法将骨粉复合物放置于大鼠左侧胫骨的骨块缺损中建立人工骨成骨模型,将模型分为两组(每组标本10例),实验组用EDTA-2Na脱钙,对照组采取混合酸脱钙后分别观察两组的免疫组织化学检测效果。结果EDTA脱钙组骨小梁结构保存完整,阳性表达较多。混合酸脱钙后,骨结构破坏较多,抗原破坏较严重,阳性表达明显减少。结论EDTA脱钙优于传统的脱钙方法,更适合于骨组织脱钙和免疫组织学化制片。     

脱钙骨植入修复桡骨缺损的动物实验

在54只兔的108例桡骨上分别造成1cm的骨缺损,将其平分为三组,分别植入脱钙同种异体骨、新鲜自体骨和新鲜同种异体骨。并于第1、3、5、7、10和13周,每组杀3只兔,用X线照片及组织学切片观察骨的愈合情况。结果发现新鲜异体骨植入后有排斥反应,而脱钙异体骨植入无此反应。实验证明脱钙同种异体骨是一种较好的植入物。彼优于新鲜异体骨,与新鲜自体骨植入无显著差异。新骨及软骨出现在植入物中而不在邻近宿主骨处,表明新骨形成可能是骨诱导作用的结果。     

骨电镜标本微波快速脱钙终点的测定

骨电镜标本微波快速脱钙终点的测定杨传红，赖晃文，唐庚云，姜秀英广州军区广州总医院医学实验科，广州市，５１００１０关键词骨；脱钙，微波；电子显微镜目前骨常规脱钙方法时间太长，超微结构保存不良，不利于临床病理的快速诊断。我们用微波（Ｍｉｃｒｏｗａｖｅ，Ｍ...     

脱钙骨制片与传统骨磨片技术的比较

①目的 比较脱钙骨切片法与骨磨片法显示骨组织结构的效果。②方法 应用硫堇-苦味酸染色显示脱钙骨组织结构，甲紫染色显示骨磨片的骨组织结构。③结果 传统的骨磨片较厚而不均匀，骨小管稀少，其结构不够清晰；脱钙骨切片薄而组织结构典型。④结论 采用硫堇-苦味酸染色制作骨组织切片标本其组织结构清晰可辨，易于提高学生对骨组织结构的辨认能力。     

脱钙骨免疫组化染色方法的构建

在对骨骼生理和病理的研究过程中，经常需要制备脱钙的骨免疫组化标本，然而由于骨骼组织的特殊性，制备好的骨组化标本也并不是一件容易的事。由于骨组织中60％以上为钙盐组成的羟基磷灰石结晶，脱钙是标本制备中至关重要的过程。一些强酸如盐酸，硝酸等虽能快速有效除去骨组织中钙盐，但对其中的抗原蛋白也产生了致命性破坏，使接下来的工作无法进行；我们仿照目前国外方法：EDTA低温脱钙^[1]，得到的结果比较满意，现总结如下。     

间充质干细胞复合同种异体脱钙骨的形态学观察

目的：探讨以间质干细胞（MSC）与同种异体脱钙骨复合培养法构建组织工程化生物衍生骨的可行性。方法：预先制备同种异体脱钙骨，取健康成人骨髓，用单核细胞分离液分离MSC，间充质干细胞基础培养基原代和传代培养。倒置显微镜下观察细胞生物学特性，用FITC标记的抗CD105对第3例细胞进行流式细胞鉴定，并与同种异体脱钙骨复合培养1周后行扫描电镜观察。结果：原代及传代培养的MSC增殖迅速，第3代CD105阳性细胞占64．1％，复合同种异体脱钙骨培养1周后细胞生长状态良好，增殖迅速，在材料表面形成细胞层。结论：未诱导的MSC是骨组织工程适宜的种子细胞，与同种异体脱钙骨复合可作为骨组织工程的载体。     

异体脱钙骨基质复合bBMP修复兔桡骨骨缺损

目的：探讨异体脱钙骨基质复合BMP修复节段性骨缺损的能力。方法：64只新西兰大白兔采用桡骨15mm节段性骨缺损模型，随机分为4组，A组植入异体脱钙骨基质(Demineralized Bone Matrix,DBM)与牛骨形态发生蛋白(Bovine Bone Morphogentic Protein,bBMP)复合材料，B组植入异体DBIM，C组植入异体骨粒，D组为空白对照组。术后4、8、12、16w，进行放射学检查、病理组织学检查和计算机图像分析新生骨面积。结果：异体DBM与bBMP复合材料组骨生成、新骨面积和骨连接情况明显优于异体DBM组、异体骨粒组和空白对照组。结论：异体DBM复合BMP材料通过骨诱导和骨传导两种方式修复骨缺损，是一种较为理想、具有高效成骨活性的植骨材料。     

"低温微波-硝酸快速脱钙"技术研究及应用

目的 探讨低温微波-硝酸快速脱钙技术对骨及软组织抗原活性的影响。方法 根据实验条件分为4组：①低温(10℃)微波硝酸；②室温(20℃)微波硝酸；③室温(20℃)硝酸，硝酸脱钙液的浓度分别是5％、8％、10％和13％；④10％乙烯二胺四乙酸钠(EDTA)脱钙液。应用免疫组织化学LSAB染色，光镜观察免疫组化染色结果。结果 以硝酸作为脱钙剂时，①组和④组的阳性细胞相近，均显著高于②、③组，经8％和10％硝酸脱钙的免疫组化染色阳性细胞明显多于5％和13％的硝酸。低温微波硝酸快速脱钙技术能显著缩短脱钙时间。结论 低温微波．硝酸快速脱钙能在短时间内获得满意的染色效果。     

人骨髓基质干细胞体外三维立体培养的实验研究

目的：探讨人骨髓基质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells, hBMSCs)在部分脱钙骨三维支架上立体培养的可行性。方法：将自人骨髓中分离出的骨髓基质干细胞进行培养、扩增,接种于多孔的部分脱钙骨支架上,通过荧光活性染料DiI标记和扫描电镜观察骨髓基质干细胞在部分脱钙骨上的生长和粘附情况,并测量hBMSCs在部分脱钙骨上的粘附率。结果：hBMSCs在部分脱钙骨上的粘附率为(99.1±1)%;DiI标记的细胞于接种后第2、4、7天激光共聚焦检测,见支架空隙中细胞逐渐增多;电镜观察,接种7天后,电镜下见细胞覆盖了部分脱钙骨表面;自部分脱钙骨中份切开,横断面电镜观察见断面中充满细胞。结论：hBMSCs在部分脱钙骨支架的三维立体环境中生长良好,是一种较好的体外培养方法。     

Experimental Observation on Osteogenetic Effects of Allogenic Decalcified Bone Matrix

This experiment was designed to evaluate the osteogenetic effects ofdifferent forms of allogenic decalcified bone matrix.39 rabbits were em-ployed and a bony defect of 1cm in length was made on the shaft of theulnas of the animals.They were divided into 4 groups.In the first group,the bony defects were filled with allogenic decalcified bone powder,in thesecond group,with decalcified bone blocks,in the third group,with unde-calcified bone blocks,and in the fourth group,nothing was filled into thebony defects.Roentgenological and histological studies were made regularly.It was found that after 8-10weeks,70-80% of the bony defects filledwith DBM showed firm union between the host bone and the graftedmaterial and no difference of the osteogenecity could be found between thetwo kinds of DBM,incomplete union occurred in the third group,andnonunion was seen in the fourth group.It is suggested that allogenic decalcified bone powder be used as a graftma-terial to fill up bony defects or cavities because it is easily preparedand used,has good plasticity,and can be stored in room temperature.     

超声波辅助脱钙技术用于猪脱钙骨基质制备的效果评价

目的以猪后腿骨干骺端为对象,考察超声波技术在脱钙骨基质制备过程中的作用。方法 6月龄公猪后腿骨清洗切片,分别用传统脱钙制备法和超声波辅助脱钙制备法进行脱钙骨基质的制备,超声波功率:220 W,频率:25 kHz。超声波处理时间:0～6h。以脱钙骨的脱钙率考察超声波对脱钙效果的影响;利用Micro-CT和显微镜观察脱钙骨的大体三维结构;测量其孔隙率和孔径大小;利用物性测试仪测量脱钙骨的压缩模量以表征其力学性能。结果脱钙骨脱钙率的测量结果显示,与传统脱钙法相比,超声波辅助脱钙制备法仅需6 h就可使脱钙率达到100%,脱钙时间可缩短45.5%;且制备的脱钙骨具有良好的孔隙率和互相连通的孔径结构,孔隙率达到85%以上,孔径大小为(348.18±64.86)μm,与传统制备方法无显著差异;并具有良好的力学性能,在脱除90%以上的钙后脱钙骨的压缩模量仍可达到(6.42±0.83)N/mm2。结论超声波辅助脱钙技术可以有效提高脱钙骨基质的制备效率,且制备效果良好。     

表面脱钙骨基质明胶诱导成骨修复颅骨大面积缺损的实验研究

目的:寻找替代自体骨移植修复颅骨大面积缺损的理想材料。方法:用表面脱钙骨基质明胶修复大鼠颅骨8 mm的圆形缺损,术后不同时间行x线、组织学检查。结果:表面脱钙骨基质明胶具有诱导成骨能力,保留骨的部分生物力学特性,但完全被新骨替代时间较长。结论:表面脱钙骨基质明胶是修复大面积颅骨缺损的理想材料。     

犬脱钙骨基质骨粒骨水泥复合材料的扫描电镜观察

目的：探讨不同复合比例的犬脱钙骨基质骨粒骨水泥复合材料扫描电镜下的结构特征,为临床应用该复合材料修复骨缺损提供理论依据。方法：铵Urist等的方法制备犬脱钙骨基质骨粒,将脱钙骨基质骨粒与骨水泥均匀混合制备成含脱钙骨基质骨粒质量比为400mg/g、500mg/g、600mg/g的复合材料标本,扫描电镜下观察不同质量比的复合材料的结构特征,利用计算机图像处理系统计算其孔隙率。结果：扫描电镜下,复合材料内部脱钙骨基质骨粒与骨水泥呈均匀混合分布多点面状结合,其中存在较多的300－600μm的不规则相互连通的自然孔浊。随骨粒所占质量比的增加,骨粒间相互接触联接及存在的自然孔隙增多,其复合材料的孔隙率也增大。骨粒质量比为400mg/g、500mg/g、600mg/g复合材料的孔隙率分别为35．34％、48．07％和56．85％。结论：犬脱钙骨基质骨粒骨水泥复合材料具有良好的赋形性,其间存在足够有利于新骨长入的相互连通的自然孔隙及潜在的骨粒通道,骨粒质量比越高,自然孔隙及骨粒通道越多,更有利限移植后新骨组织的长入,能作为支架材料有效地修复承重骨及大块骨的骨缺损。     

脱钙骨基质骨粒骨水泥复合自体红骨髓修复犬股骨缺损的实验研究

目的　探讨异体脱钙骨基质骨粒 (DBM)、骨水泥 (BC)、自体红骨髓 (RM)复合移植修复犬股骨骨缺损的疗效。方法　 30只家犬双侧股骨做成长×宽为 2 5mm× 10mm的骨缺损 ,将犬的自体红骨髓与异体DBM复合后再与BC混合成复合材料 ,植入犬的右侧股骨骨缺损处 ,左侧单纯植入骨水泥做对照。术后不同时期进行X线、组织形态学及生物力学研究。结果　X线观察 :骨缺损部位 1个月开始形成骨痂 ,3个月骨痂最丰富 ,6个月时复合材料与宿主骨边缘模糊。组织学观察 :3个月时复合材料内部有新生骨形成 ,6个月时边缘部分的DBM被新生骨替代 ,并与宿主骨融合。生物力学测定 :骨缺损部位的生物力学强度 3个月和 6个月分别接近正常骨的 60 %和80 %。结论　DBM、RM、BC复合材料极易塑形 ,具有明显的促进骨缺损修复作用 ,能用于修复各种形态的骨缺损并能满足早期负重的需要。     

同种异体表面脱钙骨基质明胶诱导成骨能力的实验研究

目的 :观察表面脱钙骨基质明胶诱导成骨能力 ,寻找自体骨移植的理想替代材料。方法 :用表面脱钙骨基质明胶修复大鼠颅骨 8mm的圆形缺损 ,同自体骨、骨基质明胶移植对比 ,术后不同时间行X线、组织学检查。结果 :表面脱钙骨基质明胶同骨基质明胶诱导成骨能力相似 ,但完全被新骨替代时间较长。结论 :表面脱钙骨基质明胶是修复大面积或节段性骨缺损的理想材料。     

复合材料修复骨缺损血管化及结构特征变化

目的：观察骨水泥、脱钙骨基质骨粒、骨形态发生蛋白生物性复合材料修复兔尺骨骨缺损血管化及结构特征变化。方法复合材料植入实验性骨缺损部位不同时间组行印度墨汁动脉血管灌注及材料自然断面扫描电镜观察,分析其血管生成及结构特征变化。结果材料植入第２周即见材料外周及两端血管形成密集,开始向材料中长入;第４,８,１２周新生血管明显逐渐增多,且深入至材料中央,第４周原自然裂隙部分即骨水泥与骨粒间多点面状结合后其间     

Experimental Study on Allogenic Decalcified Bone Matrix as Carrier for Bone Tissue Engineering

The biocompatibility and osteogenic activity of allogenic decalcified bone matrix (DBM) used as a carrier for bone tissue engineering were studied. Following the method described by Urist, allogenic DBM was made. In vitro, DBM and bone marrow stromal cell (BMSC) from rab-bits were co-cultured for 3-7 days and subjected to HE staining, and a series of histomorphological observations were performed under phase-contrast microscopy and scanning electron microscopy (SEM). In vivo the mixture of DBM/BMSC co-cultured for 3 days was planted into one side of muscules sacrospinalis of rabbits, and the DBM without BMSC was planted into other side as con-trol. Specimens were collected at postoperative week 1, 2 and 4, and subjected to HE staining, and observed under SEM. The results showed during culture in vitro, the BMSCs adherent to the wall of DBM grew, proliferated and had secretive activity. The in vivo experiment revealed that BMSCs and undifferentiated mesenchymal cells in the perivascular region invaded gradually and proliferated together in DBM/BMSC group, and colony-forming units of chondrocytes were found. Osteoblasts,trabecular bone and medullary cavity appeared. The inflammatory reaction around muscles almost disappeared at the second weeks. In pure DBM group, the similar changes appeared from the sur-face of the DBM to center, and the volume of total regenerate bones was less than the DBM/BMSC group at the same time. The results indicated that the mixture of DBM and BMSC had good bio-compatibility and ectopic induced osteogentic activty.     

人股骨头制作的脱钙骨基质和脱蛋白骨成骨诱导活性比较

目的比较人无菌性坏死股骨头制作的脱钙骨基质（DBM）和脱蛋白骨（DPB）的体外成骨诱导活性。方法将人股骨头制作成的DBM和DPB与人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）复合培养,并以单层细胞为对照组。检测碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素（OC）和钙离子（Ca2＋）的浓度。结果两种材料均表现出成骨诱导活性,DBM材料组的ALP、OC和Ca2＋浓度均明显高于DPB组和对照组,差异均有统计学意义（均P〈0.05）。结论DBM和DPB均具有成骨诱导活性,且DBM的成骨诱导活性更强。     

异种脱钙骨基质加释放系统诱导成骨的~3H-TdR、~(45)Ca示踪研究

采用Wistar大白鼠105只,于双侧股四头肌内随机植入异种脱钙骨基质(简称HDBM)。HDBM+CaCl_2+Na_2HPO_4+KH_2PO_4、HDBM+CaSO_4+Na_2HPO_4+KH_2PO_4、HDBM+NaCl。通过示踪剂~3H-TdR、~(45)Ca连续检测,结果证明CaSO_4+Na_2HPO_4+KH_2PO_4或CaCl_2+Na_2HPO_4+KH_2PO_4均是HDBM诱导成骨的良好促进剂,用其处理的HDBM具有很好的诱导成骨作用,但前者比后者更优。