黄芩甙诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的实验研究

目的　黄芩甙体外定向诱导SD大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞。方法　通过贴壁法分离大鼠骨髓间充质干细胞 ,体外扩增培养。中药黄芩甙定向诱导分化为类神经元样细胞。光镜下观察细胞形态 ,免疫细胞化学检测神经细胞特异性抗原标志物神经元烯醇酶 (NSE)、巢蛋白 (Nestin)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达。结果　大鼠骨髓间充质干细胞可通过贴壁法成功分离并可在体外大量扩增。黄芩甙诱导 5h后大部分骨髓间充质干细胞转变为神经元样细胞 ,出现胞体和突起 ,免疫细胞化学染色NSE及Nestin呈阳性 ,GFAP阴性。结论黄芩甙可在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞。     

一贯煎促进骨髓间充质干细胞逆转肝纤维化的实验研究

目的：该研究观察骨髓间充质干细胞对肝纤维化的逆转作用,了解一贯煎对该过程的作用,阐释一贯煎逆转肝纤维化的机制。方法60只雄性Sprague-Dawlay大鼠随机分为5组,即正常对照组、模型组、阳性对照组、骨髓间充质干细胞组、一贯煎加骨髓间充质干细胞组,每组12只。除正常对照组外,均建立肝纤维化恢复模型,分离、培养和标记骨髓间充质干细胞,在CCl4停止注射后3天,骨髓间充质干细胞组每只动物经尾静脉注射5×10^6 mmol/L浓度1 mol骨髓间充质干细胞;一贯煎加骨髓间充质干细胞组每只大鼠尾静脉注射等量的骨髓间充质干细胞外,给予一贯煎浓缩液2 ml/200 g灌胃,每天1次。阳性对照组给予秋水仙碱灌胃,0．25 mg/kg,每天1次。正常对照组和模型组按相同方法灌服等量生理盐水。阳性对照组、正常对照组和模型组经尾静脉注射等量生理盐水。4周后,检测各组大鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶等肝功能指标;通过HE染色评价肝脏炎症活动度（G）和纤维化程度（S）;荧光显微镜下示踪肝组织中骨髓间充质干细胞。结果（1）骨髓间充质干细胞组和一贯煎加骨髓间充质干细胞组较模型组和阳性组在改善肝功能、减轻炎症、逆转肝纤维化的作用较好,P〈0．05。一贯煎加骨髓间充质干细胞组较骨髓间充质干细胞组在改善肝功能、逆转纤维化的作用更明显,P〈0．05。（2）骨髓间充质干细胞组和一贯煎加骨髓间充质干细胞组骨髓间充质干细胞在肝脏分布面积较模型组增大,P〈0．05;一贯煎加骨髓间充质干细胞组较其他组差异显著,P〈0．05。结论骨髓间充质干细胞具有逆转肝纤维化的作用,一贯煎对该过程具有促进作用;一贯煎能够促进骨髓间充质干细胞募集到肝脏,从而发挥逆转肝纤维化的作用。     

骨髓间充质干细胞诱导分化为肝样细胞的研究进展

owen[1]首先将其命名为间充质干细胞（BM—MSCs）,最初认为它只能分化为同胚层的细胞,后来研究证实其分化潜能是超越胚层界限的。BM—MSCs属于多能干细胞,来源于中胚层,具有很强的多向分化潜能,具有干细胞的共性。对BM—MSCs分化潜能的研究已成为国内外研究机构的热点。目前BM—MSCs向肝细胞的分化已有研究,但仍处于初步阶段。本文就BM—MSCs体外诱导分化为肝细胞的研究进展作一综述。     

小鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为神经元样细胞的实验研究

目的:探讨体外诱导小鼠骨髓间充质干细胞(mouse marrow mesenchymal stem cells,mMSCs)分化为神经元样细胞的条件.方法:密度梯度离心结合差异贴壁法分离、纯化mMSCs,胰蛋白酶消化传代扩增mMSCs.用最适浓度的β-疏基乙醇(BME) 神经生长因子(NGF)、NGF 全反式维甲酸(ATRA)、NGF BME ATRA作为诱导剂,观察诱导期间细胞的形态变化,并用免疫细胞化学法鉴定神经元烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)的表达,行甲苯胺蓝染色显示尼氏小体.结果:(1)免疫细胞化学显示NGF BME ATRA诱导组诱导效率最高,78%细胞表达NSE,80%细胞表达NF;(2)各诱导组尼氏染色均出现尼氏小体.结论:NGF、BME、ATRA能诱导mMSCs分化为神经元样细胞,其中以NGF(10μg/L) BME(2.5mM/L) ATRA(2.5M/L)组效率最高.     

骨髓间充质干细胞体内定向分化为神经元样细胞的研究

虽然骨髓MSC具有广阔的应用前景,但是还有许多问题没有解决。进一步探索决定其分化的关键基因,发现影响其向其他谱系细胞分化的细胞、免疫、分子学机制,找到调控移植细胞迁移和整和的方法等,是在真正临床应用之前所必须要做的工作     

阿魏酸钠诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的初步研究

目的 探讨阿魏酸钠诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的可能作用。方法 分离培养大鼠骨髓间充质干细胞，采用阿魏酸钠对其进行诱导培养，倒置显微镜下观察诱导培养不同时间后细胞的形态变化，并应用免疫细胞化学方法鉴定诱导培养后细胞表面神经细胞特异性标志物神经丝蛋白(NF)及神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达。结果 阿魏酸钠诱导培养6h后即可见细胞形态发生明显变化，24h后表现为典型的神经细胞样形态，NF和NSE神经细胞特异性标志物呈阳性表达。结论 初步证实阿魏酸钠具有诱导体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的作用。     

骨髓间充质干细胞诱导分化成骨细胞的研究现状

归纳总结骨髓间充质干细胞的诱导方法和现代应用情况,为骨髓间充质干细胞诱导分化成骨细胞的深人研究提供参考。通过查阅、整理有关骨髓间充质干细胞的文献资料,从骨髓间充质干细胞的生物特性与制备、诱导成骨细胞的方法、在组织工程骨中的应用、所面临的问题以及未来的研究方向等方面进行总结和分析。结果显示骨髓间充质干细胞具有多向分化潜能,体外可诱导分化为成骨细胞,采用组织工程学技术可在体外构建骨组织工程支架。基于骨髓间充质干细胞的特性,使其在创伤修复、细胞替代治疗、支持造血、基因治疗等方面的应用前景也相当广阔。有必要开展骨髓间充质干细胞成骨诱导分化机制的研究,为其诱导分化成骨细胞提供指导意义和借鉴价值。     

姜黄素诱导骨髓间充质干细胞分化成肝细胞

目的研究姜黄素诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为肝细胞的作用。方法贴壁筛选法体外培养骨髓间充质干细胞,流式细胞仪检测其表面抗原。分组诱导培养14 d:1组(空白对照组),2组(10 ng/mL成纤维细胞生长因子-4,FGF-4),3组(10 ng/mL FGF-4+20 ng/mL肝细胞生长因子,HGF),4组(10 ng/mL FGF-4+5μmol/L姜黄素),5组(20μmol/L姜黄素)。观察细胞形态学改变;利用western-blotting分析肝特异性蛋白HNF-3β的表达。结果大鼠骨髓间充质干细胞细胞表面抗原CD34、CD14、CD45阴性表达,CD44、CD73、CD90表达阳性;药物诱导后光镜下观察到骨髓间充质干细胞细胞由梭形渐变成圆形肝细胞;诱导分化后的细胞表达肝特异性蛋白HNF-3β。结论姜黄素具有促进骨髓间充质干细胞分化为肝细胞的作用。     

杜仲含药血清诱导骨髓间充质干细胞定向分化的实验研究

目的 研究补肾中药杜仲含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及定向分化的影响.方法 将第4代MSCs以5×106接种于9块96孔板,3组,每组8孔;2块6孔板,每板3孔,2 d后换液,加入诱导液.分为空白组、地塞米松组、杜仲组.空白组加入含10%胎牛血清(FBS)的 L-DMEM培养基继续培养,地塞米松组在基础培养基加入诱导剂(含β甘油磷酸钠10mmol/L,地塞米松0.1 μmol/L,维生素C 50 mg/L),杜仲组为含10%杜仲含药血清的L-DMEM培养基.分别自加诱导液第1天起,采用MTT法测量96孔板细胞数,每天1块板;在第10天取出1块6孔板做ALP染色;第20天做6孔板茜素红染色.结果 杜仲含药血清组OD值呈现出明显的上升趋势,而空白组和地塞米松组无明显上升趋势;第10天杜仲组及地塞米松组ALP染色阳性,第13天起可见白色钙结节,第20天茜素红染色阳性.结论 杜仲含药血清能促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,并刺激细胞增殖.     

黄芪含药血清诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的实验研究

目的:探索黄芪含药血清诱导骨髓间充质干细胞(MSC)分化为心肌样细胞的作用。方法:采用日本大耳白兔制备黄芪含药血清,分离SD大鼠MSC进行传代培养。用黄芪含药血清和5-Aza进行诱导分化,免疫组化法检测诱导后细胞心肌肌钙蛋白、结蛋白表达,RT-PCR反应测定α-MHC和β-MHC表达。结果:诱导后细胞心肌肌钙蛋白、结蛋白表达阳性,并可以表达心肌特异性的肌球蛋白。结论:黄芪含药血清可诱导MSC分化为心肌样细胞。     

当归红芪超滤膜提取物诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞的实验研究

目的 观察并评价当归红芪超滤膜提取物（简称中药合剂）诱导小鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow derived stroma cells, BMSCs）分化为神经样细胞的效果。方法 体外培养小鼠BMSCs后加入药物并分为5组：空白组、6 g/L中药合剂组（简称低剂量组）、12 g/L中药合剂组（简称高剂量组）及3 g/L中药合剂联合0.5 mmol/L β 巯基乙醇用药组（简称联合组）、β 巯基乙醇阳性对照组（简称对照组）。通过甲苯胺蓝染色观察各组诱导分化为神经样细胞的效果,应用免疫组织化学及免疫荧光技术检测分化后细胞所表达的神经元特异性烯醇化酶（neuron specific enolase, NSE）、巢蛋白（nestin）、神经丝蛋白（neurofilament protein, NFP）、微管结合蛋白2（microtubule associated protein 2, MAP2）及神经胶质原纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein, GFAP） 5种神经特异性蛋白的差异,并应用流式细胞分析技术（flow cytometry, FCM）检测各组细胞生长周期的变化。结果 诱导后细胞形态发生神经样细胞改变,两个中药合剂组的形态特征性均弱于联合组和对照组;除空白组外,上述5种蛋白在各组的表达为阳性,表达程度均为对照组最高（P<0.05）,联合组次之（P<0.05）;经流式细胞术检测细胞增殖率比较：对照组最低（P<0.05）,高、低剂量组较高（P<0.05）,联合组次之（P<0.05）。结论 中药合剂可较为有效地诱导小鼠BMSCs分化为神经样细胞,诱导能力虽弱于对照组,但对于分化后细胞的增殖作用明显。联合组可有效诱导BMSCs分化为神经样细胞并使细胞有较高的增殖能力, 可能是用于临床研究目前较为理想的用药途径。     

骨髓间充质干细胞向肌成纤维细胞转化及一贯煎的影响

目的:观察体外诱导骨髓间充质干细胞向肌成纤维细胞分化及一贯煎的影响。方法:骨髓间充质干细胞分离、培养和鉴定,取第3代细胞加入转化生长因子(TGF-β1 5μg.L-1)诱导定向分化。骨髓间充质干细胞随机分为正常组、TGF-β1诱导组,TGF-β1诱导加一贯煎组,2周后通过免疫荧光、实时定量PCR法检测骨髓间充质干细胞分化情况及一贯煎的影响。结果:骨髓间充质干细胞鉴定结果显示CD44强阳性表达,CD29弱阳性表达。TGF-β1诱导后,免疫荧光及实时定量PCR均显示TGF-β1诱导组细胞α-SMA阳性表达,一贯煎组细胞α-SMA表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:经体外诱导骨髓间充质干细胞可以向肌成纤维细胞分化,一贯煎可阻止骨髓间充质干细胞向肌成纤维细胞分化。     

地黄多糖对大鼠骨髓间充质干细胞向神经样细胞诱导分化作用的研究

目的:探讨地黄多糖体外对大鼠骨髓间充质干细胞( BMSCs)分化为神经样细胞的诱导作用.方法:以大鼠BMSCs为研究对象,采用流式细胞仪检测BMSCs表面标志,MTT法检测细胞生长曲线,当第3代细胞爬片达到80％以上汇合时,分为对照组、化学方法诱导组(5 mmol·L -1,β-mercap toethanol)、脑源性神经生长因子(10 μg·L-1,BDNF)组和地黄多糖组(200 mg·L-1)进行诱导,6h后应用免疫细胞化学染色法检测各实验组神经元巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,RT-PCR检测nestin,NSE,βⅢ-微管蛋白(βⅢ-tubulin)和GFAP mRNA的表达情况.结果:经分离鉴定培养5代以内大鼠BMSCs增殖旺盛、具有较好的细胞活力;免疫细胞化学染色和RT-PCR检测结果显示,对照组不表达神经细胞标志物,各诱导组诱导后有特异性神经细胞标志物表达.其中地黄多糖组Nestin,NSE阳性细胞率分别为( 56.74±1.36)％,(73.37±1.27)％,高于化学诱导组(28.21±2.43)％,(2.31±2.72)％和神经生长因子组(31.3±1.61)％,(28.87±1.65)％,(P＜0.05);GFAP阳性细胞率(20.17±1.27)％低于化学诱导组和神经生长因子组,差异具有统计学意义(P＜0.05);化学诱导组Nestin,NSE和GFAP阳性细胞率与生长因子组比较,差异无统计学意义.结论:地黄多糖具有诱导BMSCs向神经样细胞分化的作用,主要向神经元样细胞方向诱导.     

骨髓间充质干细胞移植对四氯化碳大鼠肝损伤的影响及一贯煎的干预作用

该研究观察BMSCs早期尾静脉移植对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)肝损伤模型大鼠的影响以及一贯煎的干预作用。雌性Wistar大鼠65只,随机分为正常组,模型组,细胞移植组,一贯煎组和一贯煎加细胞移植组。造模各组大鼠按3 mL·kg^-1每周2次腹腔注射50%CCl4橄榄油溶液,共9次;细胞移植组和一贯煎加细胞移植组在首次注射CCl4后立即经尾静脉注入第3代BMSCs 1×10^6个;用药组灌胃一贯煎水煎液。结果可见细胞移植和一贯煎均可降低首次造模48 h的血清ALT和AST。造模4周后,模型组血清ALT,AST,γ-GT活性增高,TBIL含量增高;肝组织SOD活性降低,MDA和TG含量增加;肝组织病理可见大泡型脂肪变性,油红O染色可见大量脂滴,天狼猩红染色未见明显胶原增生,血清TNF-α和IL-6含量升高(P<0.05)。BMSC细胞移植组大鼠肝功能和组织病理较模型组进一步恶化,肝组织可见少量胶原增生,肝组织SOD活性更低,MDA和TG含量进一步增高(P<0.05),血清TNF-α和IL-6含量较模型组升高(P<0.05);经一贯煎干预后,各检测指标均较模型组和细胞移植组有所改善。SRY原位杂交检测显示,BMSC移植后在心、肝、脾、肺、肾均可检测到SRY阳性表达,但以肝脏最多,经一贯煎干预后,SRY阳性细胞在肝脏表达减少。Western blot结果显示正常组高表达Wnt和β-catenin,CCl4造模后表达明显减少,细胞移植后有进一步降低的趋势,一贯煎组干预后则表达增高。该研究表明早期尾静脉BMSCs移植可加重大鼠CCl4肝损伤,促进肝纤维化形成,一贯煎可改善BMSCs移植加重的CCl4肝损伤,其机制与减少BMSCs归巢肝脏,上调Wnt/β-catenin信号通路有关。     

不同浓度地塞米松在体外定向诱导分化兔骨髓间充质干细胞为成骨细胞的实验研究

目的探讨兔骨髓间充质干细胞(MSCs)体外定向诱导分化为成骨细胞所需的地塞米松的最佳浓度。方法抽取兔骨髓,采用全骨髓贴壁培养法体外培养,贴壁细胞进行传代。取第3代细胞,随机分为5组,在培养基中添加成骨分化诱导剂β-甘油磷酸钠、L-抗坏血酸,5组添加的地塞米松的浓度分别为1×10-6mol/L、1×10-7mol/L、1×10-8mol/L、1×10-9mol/L、1×10-10mol/L。培养10 d后,在倒置显微镜观察细胞形态,计算细胞浓度,采用5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸盐(BCIP)/氯化硝基四氮唑蓝(NBT)底物显色试剂检测碱性磷酸酶(ALP),茜素红染色检测钙结节。结果较高浓度(1×10-8mol/L、1×10-7mol/L、1×10-6mol/L)的地塞米松相对于较低浓度(1×10-9mol/L、1×10-10mol/L)的地塞米松可显著增加ALP表达(P均<0.05),并可增加钙结节的形成;1×10-9mol/L及其以下浓度的地塞米松对细胞增殖无明显影响(P均>0.05),1×10-7mol/L以上浓度的地塞米松可明显抑制细胞的增殖(P<0.01)。结论地塞米松在体外定向诱导分化兔骨髓间充质干细胞为成骨细胞,最佳的浓度为1×10-8mol/L。     

中医药干预骨髓间充质干细胞体外定向诱导分化为心肌细胞的研究进展

综述了骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,MSCs)的基本生物学特性及中医药干预MSCs体外诱导分化为心肌细胞的研究状况。中医药既可直接作用于MSCs促进其增殖并向心肌细胞分化,也可影响其微环境,促进其存活与功能的建立,且中医药具有临床应用比较安全和长期有效性的特点,存在着良好而广阔的临床应用前景。积极开展中药诱导MSCs分化为心肌细胞的研究并与干细胞移植结合起来有可能是中医药走向现代化的一个切入点,具有重大的实际意义。     

地黄多糖诱导骨髓间充质干细胞分化为神经细胞最佳浓度探索

目的探讨地黄多糖对骨髓间充质干细胞（MSCs）诱导分化为神经细胞的最佳浓度。方法利用贴壁法分离纯化MSCs，不同浓度地黄多糖诱导其向神经细胞分化，β-巯基乙醇诱导作为对照，光镜下观察细胞形态，采用免疫细胞化学方法计算神经元和胶质细胞阳性数。结果不同浓度地黄多糖诱导培养24h后均可表现为典型的神经细胞样形态，但以中浓度地黄多糖组神经细胞数最多，且神经元比例高于其他两组。结论地黄多糖诱导MSCs分化为神经元以中浓度最佳。     

杜仲含药血清诱导骨髓间充质干细胞定向分化蛋白质组学研究

目的 研究杜仲含药血清诱导骨髓间充质干细胞 (Mesenchymal stem cells,MSCs) 向成骨细胞定向分化过程的蛋白表达差异,分析杜仲诱导MSCs向成骨细胞分化的可能调控机制.方法 对杜仲含药血清干预前、干预后第2天、第7天,第14天的细胞提取总蛋白,通过双向电泳分离、PDQuest-7.3.0胶图分析软件进行分析找出差异蛋白,并进行质谱分析、数据库查询建立功能蛋白质组.结果 双向电泳分离得到641个蛋白点,选取其中75个点进行质谱分析,经数据库查询得到6个功能蛋白.结论 实验认为补肾中药杜仲可能通过上调波形蛋白、核纤层蛋白A的表达促进细胞分化,下调钙网织蛋白表达,释放细胞内钙,参与钙结节的形成,与体内骨矿化过程有关.过氧化物歧化酶、膜联蛋白A6与细胞的活力有关,调节着细胞的分裂增殖与分化,但是否与定向成骨细胞分化有着密切关系尚有待进一步研究.     

三七总皂苷对骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的作用

目的探讨三七总皂苷(PNS)诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外分化为心肌样细胞。方法采用骨髓细胞体外培养技术分离大鼠MSCs,用流式细胞仪检测细胞表面标志,用第8代MSCs进行体外心肌细胞诱导分化,采用相差显微镜、免疫组化及RT-PCR鉴定心肌细胞。结果大鼠MSCs细胞表面抗原CD44阳性,CD34阴性;经PNS体外诱导后细胞形态发生变化,其细胞免疫组化呈结蛋白(Desmin)、肌钙蛋白(cTnI)阳性;RT-PCR显示诱导后细胞转录肌球蛋白重链mRNA水平增加。结论大鼠MSCs体外在PNS诱导下可分化为心肌样细胞,为应用MSCs治疗心肌损伤提供了动物实验方法。     

牛珀至宝微丸诱导成年大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元的研究

牛珀至宝微丸系由中医急症三宝之一的至宝丹化裁而来 ,前期临床研究表明对脑梗死急性期有较好疗效 ,实验研究可减轻脑缺血后神经损伤和病理改变 ,并增强神经干细胞增殖[1～ 3 ] 。本文研究了牛珀至宝微丸对大鼠骨髓间充质干细胞 (MSC)分化的影响。1　材料与方法1 .1　实验材料　纯种SD大鼠 2 0只 ,清洁二级 ,雌雄各半 ,月龄 4～ 7个月 ,体重 2 5 0～ 3 0 0 g,由广州中医药大学实验动物中心提供。牛珀至宝微丸 (1 g/支 )由江西中医学院热病研究室提供 ,主要药物为水牛角、玳瑁、麝香、琥珀、血竭、藏红花、大黄、石菖蒲等 ,将微丸溶于水 ,…