丹参酮ⅡA对慢性肾衰竭大鼠肾组织内质网应激相关分子GRP78、CHOP和Caspase-12表达的影响

目的:探究丹参酮ⅡA对慢性肾衰竭大鼠肾功能的保护作用机制。方法:60只SD雄性大鼠,随机分成5组,分别为:A正常组,B假手术组,C模型组,D模型+丹参酮ⅡA低剂量组,E模型+丹参酮ⅡA高剂量组。4周、8周、12周检测各组肌酐、尿素氮水平。12周时Tunel法检测细胞凋亡,Western blot法检测GRP78、CHOP和Caspase-12表达。结果:(1)C组较A组4周、8周、12周时肌酐、尿素氮升高(P0.05);D组、E组分别与C组比较:8周、12周时较模型组肌酐、尿素氮水平下降(P0.05);E组较D组12周时肌酐、尿素氮水平下降(P0.05)。(2)C组凋亡细胞较A组、B组增多(P0.05)。D组、E组凋亡细胞较C组减少(P0.05),E组较D组凋亡细胞减少(P0.05)。(3)C组与A组相比,GRP78、CHOP和Caspase-12表达均明显升高(P0.05);D组、E组与C组相比:GRP78、CHOP和Caspase-12表达均下降(P0.05);E组与D组比较:GRP78、CHOP和Caspase-12表达进一步下降(P0.05)。结论:TanⅡA能够改善CRF大鼠肾功能,抑制细胞凋亡,其机制可能是通过调节内质网应激相关分子GRP78、CHOP和Caspase-12表达水平实现。     

内质网应激对吸烟诱导的髓核细胞凋亡与炎性反应的影响研究

目的探讨内质网应激对吸烟诱导的髓核细胞凋亡与炎性反应的影响。方法以2016年10月—2018年10月25例接受椎间盘摘除术的颈椎间盘突出症患者为研究对象,分为吸烟组(14例)和非吸烟组(11例)。两组患者年龄、性别、突出节段、Pfirrmann分级比较,差异均无统计学意义(P0.05)。将术中获取的髓核组织,行TUNEL染色和Western blot检测,观察细胞凋亡情况。然后,采用酶序贯消化法分离培养髓核细胞并传代,取第3代细胞行ELISA检测炎性因子IL-1β和TNF-α含量,免疫荧光染色观察细胞中P65核转移情况,Western blot检测内质网应激相关蛋白GRP78和CHOP表达,透射电镜观察细胞内质网超微结构。最后,为验证内质网调控作用,采用特异性抑制剂4-PBA处理吸烟组髓核细胞后,Western blot检测GRP78、CHOP、IL-1β、TNF-α及P65蛋白相对表达量,流式细胞术检测细胞凋亡率;并以吸烟组未作处理的髓核细胞作对照。结果髓核组织观测显示,吸烟组细胞凋亡率及凋亡相关蛋白Caspase-3和PARP相对表达量均明显高于非吸烟组(P0.05)。髓核细胞观测显示,吸烟组髓核细胞分泌IL-1β、TNF-α水平以及GRP78、CHOP蛋白相对表达量均明显高于非吸烟组(P0.05);免疫荧光染色示吸烟组细胞P65主要表达在细胞核,而非吸烟组在细胞质;透射电镜观察显示,与非吸烟组相比,吸烟组内质网处于应激损伤状态。吸烟组髓核细胞经4-PBA处理后,GRP78、CHOP、IL-1β、TNF-α及P65蛋白相对表达量以及细胞凋亡率均较处理前明显降低(P0.05)。结论吸烟可通过内质网应激导致髓核细胞凋亡和炎性反应加剧,抑制内质网应激有望成为延缓吸烟导致椎间盘退变的新靶点。     

内质网应激在白蛋白诱导肾小管上皮细胞凋亡中的作用

目的 探讨内质网应激在白蛋白超负荷诱导肾小管上皮细胞凋亡中的作用和分子机制。 方法 Western印迹法检测肾小管上皮细胞（HKC）内质网伴侣蛋白糖调节蛋白78（GRP78）和内质网应激蛋白CHOP（CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白,也称为GADD153）表达与人血清白蛋白（HSA）作用时间和浓度的关系。实时荧光定量PCR法检测CHOP siRNA对CHOP基因转录的抑制情况。Western印迹法检测CHOP siRNA转染后CHOP蛋白水平的变化。膜联蛋白V和碘化丙锭（Annexin V-FITC和PI）双染的流式细胞术检测白蛋白诱导HKC凋亡的变化以及CHOP siRNA对HKC凋亡的影响。 结果 （1）分别以0、5、10、20 g/L白蛋白作用于HKC 24 h,GRP78、CHOP蛋白表达及细胞凋亡均随白蛋白浓度的增加而上调,各组间差异有统计学意义（P ＜ 0.01）;以20 g/L白蛋白分别作用于HKC 0、6、12、24、36 h,GRP78蛋白表达在6 h即显著增加,CHOP蛋白表达及HKC凋亡则在12 h显著增加,各组间差异有统计学意义（P ＜ 0.01）。（2）CHOP siRNA显著抑制白蛋白诱导的CHOP 基因转录及蛋白表达（P ＜ 0.01）,对白蛋白诱导的HKC凋亡有显著抑制作用（P ＜ 0.01）。 结论 白蛋白超负荷可诱导肾小管上皮细胞发生内质网应激,并通过上调促凋亡因子CHOP表达引起肾小管上皮细胞内质网相关的细胞凋亡,这可能是蛋白尿引起肾小管间质病变的重要机制。     

增强子结合蛋白同源蛋白在糖尿病大鼠膀胱内质网应激中的作用

目的观察增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)在糖尿病大鼠DSM细胞内质网应激中的表达变化,探讨内质网应激与糖尿病膀胱的关系。方法通过注射链脲菌素诱导1型糖尿病大鼠模型,于不同的时点(造模成功后4、8、12、16周),电镜下观察内质网超微结构,应用TUNEL技术检测糖尿病大鼠膀胱逼尿肌细胞的凋亡水平,RT-PCR技术和Western-blotting技术分别测定DSM细胞内质网应激标志性因子CHOP mRNA和蛋白的表达水平。结果电镜下内质网肿胀、融合,逼尿肌细胞核变形;逼尿肌细胞凋亡水平、CHOP mRNA和蛋白水平随着时间的延长明显升高。结论内质网应激参与了糖尿病大鼠DSM细胞凋亡过程,CHOP与糖尿病膀胱病程进展呈正相关。     

祛痰通络汤对糖尿病大鼠肾组织内质网应激相关分子GRP78和CHOP表达的影响

目的:观察祛痰通络汤对糖尿病大鼠肾组织中内质网应激相关分子GRP78和CHOP表达的影响。方法:高糖高脂饲料联合腹腔注射STZ制备糖尿病模型,随机分为4组,分别为正常对照组、模型组、祛痰通络汤组、四苯基丁酸组,治疗8周。观察各组24 h尿蛋白定量、肾脏病理学变化;免疫组化和western-blot检测肾组织内质网应激相关蛋白GRP78,CHOP的表达。结果:祛痰通络汤降低尿蛋白,减轻病理改变;模型组肾组织的GRP78、CHOP表达明显升高(P0.05),祛痰通络汤组GRP78、CHOP表达明显低于模型组(P0.05)。结论:糖尿病大鼠肾脏中GRP78、CHOP表达明显增强,祛痰通络汤降低内质网应激,可能是其肾脏保护作用的重要机制。     

内质网应激在高糖培养加重神经细胞缺氧-复氧损伤中的作用

目的研究内质网应激在高糖培养加重神经细胞缺氧-复氧损伤中的作用。方法在含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中培养小鼠神经瘤母细胞N2a,按照接种密度每毫升105个将细胞接种于培养板中。采用随机数字分组法将细胞分为四组:正常糖对照组(NC组)、正常糖缺氧-复氧组(NH组)、高糖对照组(HC组)、高糖缺氧-复氧组(HH组)。待细胞贴壁后,将DMEM/F12培养基更换为高糖培养基,孵育48h,造高糖孵育模型。在缺氧小室中缺氧3h后,再转入正常氧孵育箱中复氧2h,造缺氧-复氧损伤模型。NC组未作处理;NH组行缺氧-复氧处理;HC组行高糖孵育处理;HH组先行高糖孵育48h后,再作缺氧-复氧处理。采用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot法检测细胞GRP78、CHOP蛋白含量。结果与NC组和HC组比较,NH组和HH组细胞活力明显减弱,凋亡率明显升高,GRP78、CHOP蛋白含量明显增多(P0.01);与NH组比较,HH组细胞活力明显减弱,凋亡率明显升高,GRP78、CHOP蛋白含量明显增多(P0.05)。结论高糖培养加重神经细胞缺氧-复氧损伤,可能与内质网应激标志性蛋白GRP78蛋白含量增多和促凋亡转录因子CHOP介导的细胞凋亡相关。     

内质网应激在酸诱导的人椎间盘髓核细胞损伤中的作用机制研究

目的 :模拟人椎间盘髓核(nucleus pulposus,NP)酸性环境,研究酸诱导的内质网应激活化以及内质网应激在酸诱导的髓核细胞损伤中的作用机制。方法:体外单层培养人正常髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)系,以p H值7.4为对照,p H值7.0和6.5分别模拟正常和退变椎间盘酸性环境,培养12~72h,建立酸诱导的髓核细胞损伤模型。采用CCK8法检测髓核细胞增殖情况,透射电镜检测髓核细胞中内质网应激活化情况,免疫荧光检测内质网应激特异性标志物糖调节蛋白78(78 k Da glucose-regulated protein,GRP78)和C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)表达。应用4-PBA(内质网应激阻断剂)阻断内质网应激后,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;β半乳糖苷酶染色检测细胞老化。Western blot检测LC3、GATA4、p53、p21、p16、Bax、Bcl-2和Caspase3蛋白变化情况。结果 :与对照组相比,酸刺激下(p H6.5组)髓核细胞整体增殖力较对照组明显下降;透射电镜下可见内质网扩张明显,膜表面积增加,内质网线粒体膜结构形成,伴线粒体肿胀;细胞免疫荧光检测提示GRP78和CHOP表达明显增加(P0.05)。应用4-PBA后,细胞凋亡率增加,且能够显著增加酸诱导的G1期停滞及β半乳糖苷酶阳性染色率(P0.05)。Western blot检测发现,酸刺激下,髓核细胞LC3、GATA4、p53、p21、p16、Bax和Caspase3表达增高(P0.05),Bcl-2表达降低(P0.05);应用4-PBA后可降低LC3比值和Bcl-2表达水平,并显著升高GATA4、p53、p21、p16、Bax和Caspase3(P0.05)。结论:酸性微环境能够活化内质网应激,在酸诱导的人髓核细胞急性损伤中起保护作用。     

孤儿核受体Nur77在衣霉素诱导小鼠海马神经元损伤中的作用：与内质网应激的关系

目的评价孤儿核受体Nur77在衣霉素(TM)诱导小鼠海马神经元损伤中的作用及其与内质网应激的关系。方法小鼠HT22细胞, 采用随机数字表法分为4组(n=10):对照组(C组)、Nur77特异性激动剂Csn-B组(Csn-B组)、内质网应激诱导剂TM组(TM组)和TM+Csn-B组。C组细胞正常培养24 h;Csn-B组培养基中加入Csn-B(终浓度为10 μg/ml)培养细胞24 h;TM组培养基中加入TM(终浓度为200 ng/ml)培养24 h诱导细胞内质网应激损伤;TM+Csn-B组培养基中加入Csn-B(终浓度为10 μg/ml)预处理细胞15 min后, 给予TM(终浓度为200 ng/ml)共同培养24 h。各组细胞处理结束后采用CCK-8试剂盒检测细胞活力, Western blot法检测内质网应激相关蛋白CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3和活化的caspase-3(cleaved-caspase-3)的表达。结果与C组比较, TM组细胞活力下降, CHOP、GRP78、Ba...     

阿托伐他汀调控PERK/eIF2α/CHOP通路减轻造影剂诱导的大鼠肾小管上皮细胞凋亡

目的研究造影剂肾病大鼠肾脏中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、内质网调节激酶(PERK)、真核起始因子2α(eIF2α)及C/EBP同源蛋白质(CHOP)的表达情况,探讨内质网应激在造影剂肾病发病中的作用及阿托伐他汀的干预作用。 方法60只大鼠随机分为4组：对照组、模型组和高、低剂量阿托伐他汀组(80 mg,40 mg),每组15只。分别于注射造影剂后24、48、72 h留取血清;检测各组大鼠的血清尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr);TUNEL法及Western印迹法测casepase-3的表达检测肾小管上皮细胞凋亡;免疫组化和Western印迹法检测各组大鼠肾组织GRP78、p-eIF2α、p-PERK及CHOP的表达。 结果与对照组相比,模型组大鼠BUN、Scr显著升高,细胞凋亡严重,GRP78、p-eIF2α、p-PERK及CHOP的表达均显著升高(P< 0.05);与模型组相比,高、低剂量阿托伐他汀组,BUN、Scr显著下降,凋亡指数降低,GRP78、p-eIF2α、p-PERK及CHOP的表达显著下调,但仍高于对照组,差异均达到统计学意义(P<0.05);高、低剂量阿托伐他汀组之间上述各指标差异均不显著。 结论PERK/eIF2α/CHOP通路介导的内质网应激可能参与大鼠造影剂肾病的发生发展;阿托伐他汀在造影剂诱导的肾脏损伤中发挥保护作用,这可能与其调节PERK/eIF2α/CHOP通路,从而减轻内质网应激有关。     

乳化异氟醚对大鼠肺缺血-再灌注内质网应激的影响

目的探索乳化异氟醚预处理对大鼠肺缺血-再灌注损伤诱导内质网应激的影响。方法雄性SD大鼠32只随机分成四组:假手术组(S组)、缺血-再灌注组(IR组)、乳化异氟醚预处理(EI组)、脂肪乳组(IL组)。S组腹腔注射生理盐水10.5ml/kg,24h后仅开胸游离左肺门,不进行阻断左肺门;IR组、EI组和IL组分别腹腔注射生理盐水、8%乳化异氟醚10.5 ml/kg、30%脂肪乳10.5ml/kg,24h后通过阻断左肺门1h后再灌注2h建立大鼠原位肺缺血-再灌注损伤模型。于再灌注2h即刻经左心室采集血样检测PaO2、PaCO2值;取左肺组织测湿重/干重比(W/D),通过HE染色评估肺组织病理损伤程度;通过RT-PCR和Western blot检测肺组织中GRP78和CHOP的表达水平。结果与S组比较,IR组、EI组和IL组PaCO2、肺组织GRP78、CHOP mRNA和CHOP蛋白表达明显升高,PaO2明显降低(P0.05),GRP78蛋白表达水平差异无统计学意义;与IR组比较,EI组、IL组PaCO2、肺组织GRP78mRNA、CHOP mRNA和CHOP蛋白表达明显降低、PaO2明显升高(P0.05),GRP78蛋白表达水平差异无统计学意义。与IL组比较,EI组PaCO2、肺组织W/D、GRP78、CHOP mRNA和CHOP蛋白表达明显降低、PaO2明显升高(P0.05),GRP78蛋白表达水平差异无统计学意义。病理显示EI组和IL组肺损伤轻于IR组,EI组肺损伤轻于IL组。结论乳化异氟醚和脂肪乳预处理均可减轻大鼠术后肺缺血-再灌注损伤引起的过度内质网应激,并且乳化异氟醚的保护效果更显著。     

氧化苦参碱诱导胃癌BGC-823细胞发生caspase-12依赖性内质网应激凋亡的机制研究

目的研究氧化苦参碱对胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡的影响,并探讨内质网应激参与氧化苦参碱诱导胃癌细胞的凋亡情况并阐明其机制。方法将对数生长期的胃癌BGC-823细胞分为对照组、单药组(用10、30、60和90μmol/L浓度的氧化苦参碱处理)和联合组(各浓度的氧化苦参碱联合2μmol/L内质网应激抑制剂salubrinal处理)。用MTT法观察氧化苦参碱对胃癌BGC-823细胞生长的抑制作用,用流式细胞仪分析氧化苦参碱诱导胃癌BGC-823细胞凋亡及其对细胞周期的影响,用Western blot和RT-PCR法分别检测内质网应激标志分子GRP78/Bip和内质网应激介导凋亡分子caspase-12蛋白和基因的表达情况。结果 (1)与对照组比较,氧化苦参碱能明显抑制胃癌BGC-823细胞生长且呈浓度-时间依赖性(P0.05),其IC_(50)(48 h)值为(59.5±0.5)μmol/L;与相应浓度单药组比较,30、60和90μmol/L氧化苦参碱联合作用对细胞的抑制作用明显减弱(P0.05)。(2)与对照组比较,随着氧化苦参碱浓度的增加,G2/M期细胞数和细胞凋亡率呈增加(或增高)趋势(P0.05);与60μmol/L氧化苦参碱单药组比较,60μmol/L氧化苦参碱联合组处理胃癌BGC-823细胞48 h后明显降低细胞凋亡率和减少G_2/M期细胞数(P0.05)。(3)与对照组比较,随着氧化苦参碱浓度的增加(除外10μmol/L氧化苦参碱组caspase-12蛋白及基因),单药组GRP78/Bip和caspase-12蛋白及基因表达水平呈明显增高趋势(P0.05);与相应浓度单药组比较,60及90μmol/L氧化苦参碱联合作用时胃癌BGC-823细胞中GRP78/Bip和caspase-12蛋白及基因表达水平均明显降低(P0.05)。结论氧化苦参碱对人胃癌BGC-823细胞有明显的生长抑制作用,该作用可能与caspase-12依赖性诱导凋亡及上调GRP78/Bip表达水平有关,该结论需要进一步实验验证。     

4-苯基丁酸对重症急性胰腺炎大鼠肝损伤的保护作用

目的探讨4-苯基丁酸(4-phenylbutyric acid,PBA)对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠肝损伤的影响及可能的分子机制。方法采用逆行胰胆管注射5%牛磺胆酸钠溶液(1 mL/kg)建立大鼠SAP肝损伤模型,将24只成年雄性SPF级SD大鼠随机分为假手术组(SO组)、SAP组和PBA组,每组8只。PBA组在SAP造模前3 d经腹腔注射PBA生理盐水溶液(50 mg/kg),SAP组及SO组则经腹腔注射等体积的生理盐水。造模后12 h处死大鼠,采集各组大鼠的血液、胰腺及肝组织,采用全自动多功能生化分析仪检测大鼠血清淀粉酶(amylase,AMY)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)及谷草转氨酶(aspartate transaminase,AST)的含量变化;苏木精-伊红(HE)染色光镜下观察大鼠胰腺及肝脏的形态学变化;免疫组织化学法检测各组大鼠肝脏葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer binding protein homologous protein,CHOP)及Caspase-3的表达。结果 SAP组血AMY、ALT和AST水平,胰腺病理学评分,肝脏病理学评级以及肝脏GRP78、CHOP和Caspase-3蛋白的表达均高于SO组(P0.05),除AMY水平外(P0.05),PBA组上述各项指标与SAP组相比均降低(P0.05)。结论 PBA有减轻SAP肝损伤的作用,其机制可能与抑制内质网应激(ERS)并减少细胞凋亡有关。     

miR-567在胰腺癌细胞中的表达及其作用机制

目的:探讨miR-567在胰腺癌细胞中的表达及其作用。方法:采用qRT-PCR检测正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6-C7及胰腺癌细胞系Panc-1、AsPC-1、HPAC、BxPC-3中miR-567表达。Panc-1细胞转染miR-567过表达慢病毒载体后,分别用CCK-8法、流式细胞术、划痕愈合实验、qRT-PCR、Western blot法检测细胞增殖、凋亡及迁移能力,以及KPNA4 mRNA与蛋白的表达、凋亡相关蛋白表达的变化。结果:miR-567在胰腺癌细胞系Panc-1、AsPC-1、HPAC、BxPC-3中的表达水平均明显低于正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6-C7(均P0.05);miR-567慢病毒转染Panc-1细胞后,增殖能力明显减弱,凋亡率明显增加,划痕愈合率明显降低、KPNA4 mRNA与蛋白表达明显下调、而caspase-3及Bax蛋白表达明显上调(均P0.05)。结论:miR-567在胰腺癌细胞中表达降低,升高其表达可抑制胰腺癌细胞的生长与迁移能力,其机制可能与下调KPNA4并上调凋亡相关蛋白表达有关。     

USP14抑制对肾缺血再灌注诱导的急性肾损伤及IRE1/JNK信号通路的影响

目的 研究USP14的抑制是否可以减轻缺血再灌注（ischemia-reperfusion,IR）诱导的急性肾损伤以及潜在机制。方法 通过对小鼠进行左侧肾动脉夹闭45 min和再通建立体内肾IR模型;HE染色观察各组肾组织损伤情况;生化试剂盒检测血尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）、肌酐（serum creatinine,Scr）水平;Western blot检测内质网（endoplasmic reticulum,ER）应激相关蛋白（GRP78、CHOP、IRE1和JNK）和凋亡相关蛋白（cleaved capase-3和Bcl-2）的表达;通过TUNEL检测肾组织细胞的凋亡水平。结果 与模型组比较,IR组中小鼠肾损伤和肾功能障碍在再灌注期呈时间依赖性逐渐加重,肾组织中USP14的表达和BUN及Scr的水平增加（P<0.05）;与IR+sh-NC组比较,IR+sh-USP14组中小鼠肾病理损伤及肾组织中USP14、BUN、Scr的水平降低（P<0.05）。此外,与模型组比较,IR组小鼠肾组织中肾细胞凋亡,cleaved caspase-3和ER应激相关...     

对比剂肾病大鼠肾脏GRP78与caspase-12表达及胰激肽原酶干预研究

目的:研究对比剂肾病大鼠肾脏中葡萄糖调节蛋白(glucose-regulated protein 78,GRP78)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(caspase-12)的表达情况,探讨内质网应激在对比剂肾病发生发展中的作用,及胰激肽原酶的干预效果。方法:将84只大鼠随机分为3组:假手术组(D组),模型组(Z组),胰激肽原酶干预组(Y组)。自造模前3 d至处死日当天,Y组每天给予胰激肽原酶(15 U/kg)灌胃,D组及Z组每天给予等量生理盐水灌胃。分别于造模后12 h,24 h,48 h,72 h处死部分大鼠,观察各组大鼠血清尿素氮、肌酐水平变化;HE染色观察肾脏病理改变;原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测肾脏细胞凋亡情况;RT-PCR检测肾脏GRP78 mRNA及caspase-12 mRNA的表达情况;免疫组化和Western-blot观察各组大鼠肾脏GRP78及caspase-12蛋白表达情况。结果:D组GRP78 mRNA、caspase-12 mRNA及GRP78、caspase-12几乎无表达,且肾组织无明显病理损伤及细胞凋亡;Z组病理变化明显,细胞凋亡较重,且以上指标均明显升高;Y组病理变化、细胞凋亡及GRP78 mRNA、caspase-12 mRNA、GRP78、caspase-12升高均较Z组明显减轻(P0.05),但仍高于D组(P0.05)。结论:内质网应激参与大鼠对比剂肾病的发生发展,胰激肽原酶可能通过减少caspase-12表达减轻内质网应激,发挥肾脏保护作用。     

miR-195对胃癌BCG823细胞株增殖与凋亡的影响

目的 观察miR-195对胃癌细胞BCG823增殖与凋亡的影响。方法 利用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将miR-195的模拟物转染入BCG823细胞中。Real-time聚合酶链反应(PCR)法测定BCG823内miR-195的表达。CCK8法测定细胞生长曲线观察细胞增殖的抑制。流式细胞仪测定细胞凋亡率的变化。JC-1染色检测线粒体膜电位变化。Caspase活性检测试剂盒检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性。结果 对照组24、48、72h吸光值分别为0.214、0.236、0.510、0.702,而转染组24、48、72 h吸光值分别为0.222、0.224、0.330、0.504,转染组凋亡率为21.84％,较对照组(4.24％)显著增加,转染组线粒体电位4.3,较对照组(13.8)显著降低(P＜0.05)。对照组Caspase-3、Caspase-9、Caspase-8活性分别为0.265±0.029、0.652±0.042、0.244±0.047,而转染组Caspase-3、Caspase-9、Caspase-8活性分别为0.504±0.039、0.214±0.037、0.262±0.032。miR-195能使Caspase-3、Caspase-9的活性增加,Caspase-8的活性无显著变化。结论 体外实验初步证明miR-195基因可抑制胃癌细胞株BCG823增殖并诱导其凋亡。     

不同浓度右美托咪定对糖氧剥夺/再灌注诱导神经细胞凋亡的影响

目的研究不同浓度右美托咪定对糖氧剥夺/再灌注(OGD/R)诱导神经细胞凋亡的保护作用。方法应用全反式维甲酸(ATRA)和十四烷酰佛波醇乙酯酸(TPA)序贯诱导人源性神经母细胞瘤(SH-SY5Y)分化为神经细胞,均分为六组。选择OGD12h/R12h构建OGD/R模型。D0、D1、D2、D3、D4、D5组在OGD开始即刻分别加入右美托咪定0、0.1、1、10、100、1 000μmol/L。于再灌注12h后,采用MTT法检测细胞存活率,流式细胞凋亡法检测细胞凋亡水平,以观察不同浓度右美托咪定对OGD/R诱导神经细胞凋亡的保护作用。随后选择保护效果确切组,应用Westernblot法检测内质网(endoplasmic reticulum,ER)应激特异性蛋白-中脑星形胶质细胞源性神经营养因子(mesencephalic astrocyte-derived neurotrophic factor,MANF)含量以及促凋亡蛋白Caspase-3活性和CHOP含量。结果与D0组比较,D1、D2组细胞存活率和细胞凋亡率差异无统计学意义;D4、D5组细胞存活率明显下降,细胞凋亡率明显升高(P0.01或P0.05);D3组则显著改善并提高了OGD/R诱导后神经细胞的存活率,抑制了细胞凋亡(P0.01)。Westernblot结果显示,D3组细胞MANF含量明显高于D0组(P0.01),Caspase-3活性和CHOP含量明显低于D0组(P0.01)。结论右美托咪定在10μmol/L终浓度时对OGD/R诱导的神经细胞凋亡具有保护作用,并显著提高了细胞存活率。右美托咪定神经保护作用的机制可能与上调ER应激特异性蛋白MANF,抑制凋亡蛋白caspase-3和CHOP的表达相关。     

LncRNA FGD5-AS1靶向miR-103a-3p对IL-1β诱导的关节软骨细胞凋亡的机制研究

目的探讨LncRNA FGD5-AS1靶向miR-103a-3p对IL-1β诱导的关节软骨细胞损伤及细胞凋亡的影响与分子机制。方法体外培养大鼠关节软骨细胞,分为NC组、IL-1β组(IL-1β浓度为10 ng/m L)。采用qRT-PCR检测细胞中FGD5-AS1、miR-103a-3p的表达水平。分别将pc DNA-FGD5-AS1、miR-103a-3p mimics转染至软骨细胞,随后使用IL-1β处理48 h。采用ELISA检测IL-6、TNF-α、IL-8水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证FGD5-AS1与miR-103a-3p的靶向关系; Western blot检测Bax、Cyt C、Cleaved Caspase-3、p-NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达量。结果与NC组相比,IL-1β组软骨细胞中FGD5-AS1的表达水平显著降低(P0.05),miR-103a-3p、Bax、Cyt C、Cleaved Caspase-3的表达水平显著升高(P0.05),IL-6、TNF-α、IL-8水平显著升高(P0.05),细胞凋亡率显著升高(P0.05); FGD5-AS1过表达后可明显降低IL-6、TNF-α、IL-8、p-NF-κB p65、p-IκBα水平(P0.05),降低细胞凋亡率(P0.05),抑制Bax、Cyt C、Cleaved Caspase-3表达(P0.05);双荧光素酶报告实验证实FGD5-AS1靶向结合miR-103a-3p并可负向调控miR-103a-3p的表达(P0.05); miR-103a-3p过表达可明显逆转FGD5-AS1过表达对细胞凋亡及炎症反应的抑制作用(P0.05)。结论 LncRNA FGD5-AS1可通过靶向负调控miR-103a-3p的表达从而抑制IL-1β诱导的关节软骨细胞炎症反应及细胞凋亡,其作用机制可能通过抑制NF-κB信号通路激活有关。     

miR-133a对滋养层细胞系HTR8-SVneo的粘附及侵袭功能的影响

目的研究体外上调及下调miR-133a对滋养层细胞系HTR8-SVneo的粘附及侵袭功能的影响。方法将培养的HTR8-SVneo细胞根据脂质体转染因素分为对照组(转染空质粒)、上调组(转染mimics)、下调组(转染inhibitor),通过荧光定量PCR法检测各组miR-133a的表达水平,采用MTT法检测细胞粘附能力的变化,同时运用Transwell实验观察细胞侵袭能力的变化。结果与对照组比较,miR-133a上调组细胞黏附能力显著下降,miR-133a下调组细胞黏附力显著升高(P均0.05);与对照组比较,miR-133a上调组细胞侵袭力显著降低,miR-133a下调组细胞侵袭力显著升高(P均0.01)。结论 miR-133a在调控滋养层细胞粘附能力和侵袭能力方面起着重要作用。     

MiR-490-3p靶向HMGA2在骨肉瘤细胞凋亡中的作用

目的以人骨肉瘤MG-63细胞为研究对象,探讨miR-490-3p诱导MG-63细胞凋亡的作用及其分子机制。方法分别设立miR-490-3p mimics组(对照组)、慢病毒lenti-sh miR-490-3p组(药物组),每组设6个复孔。采用MTT法检测miR-490-3p对细胞生长抑制作用;采用AnnexinV-FITC/PI双染法检测不同实验条件下miR-490-3p对MG-63细胞凋亡率的影响;Western blot检测miR-490-3p对HMGA2、Bcl-2、BAX和Caspase-3蛋白表达的影响。结果 MiR-490-3p能抑制MG-63细胞增殖,药物组与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。经3次实验结果,药物组的早期凋亡的细胞比例为58.90%±0.89%,明显高于对照组的5.34%±0.34%,差异有统计学意义(P0.05)。通过Western blot检测MG-63细胞中HMGA2、Bcl-2、Bax、Caspase-3、Survivin蛋白表达,结果显示miR-490-3p转染后,促进凋亡蛋白Bax表达增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,Bax或Bcl-2比率增高,而线粒体凋亡途径下游的Caspase-3蛋白被激活,表达量降低。结论 MiR-490-3p能显著抑制肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用机制可能与靶向HMGA2的表达、上调Bax/Bcl-2蛋白表达比例、激活Caspase-3蛋白级联反应和调控Survivin蛋白表达有关。